Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 11
1.1. Нормальная микрофлора кишечника и ее нарушения 11
1.2. Современные представления об этиопатогенезе язвенной болезни желудка - 20
1. 3. Роль бластоцист в патологии человека 29
1. 4. Характеристика биологических свойств В. hominis 38
ГЛАВА 2. Экспериментальная часть 46
2. 1. Материалы и методы исследований 46
2.2. Результаты исследований 59
2.2. 1. Характеристика клинических изолятов В. hominis 59
2. 2. 1. 1. Результаты выделения клинических изолятов B.hominis... 59
2.2. 1.2. Морфологическая организация бластоцист 65
2. 2. 1. 3. Культуральные свойства В.hominis 74
2.2. 1.4. Патогенные свойства штаммов B.hominis 76
2. 2. 2. Экспериментальная модель кишечного бластоцистоза 79
2.2.2. 1. Воспроизведение кишечного бластоцистоза 79
2. 2. 2. 2. Кишечная микрофлора при экспериментальном бластоцистозе 83
2. 2. 2. 3. Количество лейкоцитов периферической крови 90
2. 2. 2.4. Морфологическая картина толстой кишки 93
2. 2. 3. Изучение состояния микрофлоры кишечника при экспериментальной язве желудка на фоне инвазии B.hominis - 96
2.2.3. 1. Воспроизведение экспериментальной язвы желудка 96
2. 2. 3. 2. Изменение облигатной микрофлоры кишечника 103
2. 2. 3. 3. Динамика транзиторной кишечной микрофлоры 109
2. 2. 3. 4. Микробиоценоз кишечника при перфоративных формах язвы желудка 114
2.2.3.5. Состояние пораженных тканей желудка в динамике 116
2.3. Обсуждение результатов... 119
Выводы 133
Список использованных источников 134
- Нормальная микрофлора кишечника и ее нарушения
- Современные представления об этиопатогенезе язвенной болезни желудка
- Характеристика клинических изолятов В. hominis
- Изучение состояния микрофлоры кишечника при экспериментальной язве желудка на фоне инвазии B.hominis
Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Человек, являясь участником биоценоза нашей планеты, в свою очередь, представляет собой среду обитания для огромного количества видов микроорганизмов. При этом он представляется открытой системой, в которую постоянно извне поступают разнообразные микробы, в то же время, он сам служит источником их поступления в окружающую среду (Ардатская, Дубинин, Минушкин, 2001).
При физиологической норме организм человека содержит сотни видов бактерий, а также вирусы и простейшие, составляющие в сумме нормальный микробиоценоз (Бондаренко, 1997; Воробьев и др., 1999).
Под нормальной микрофлорой понимают совокупность множества симбио-ценозов, характеризующихся определенным составом и занимающих тот или иной биотоп в макроорганизме. Учитывая определенное постоянство микробиоценоза в норме и его высокую чувствительность к изменениям внешней и внутренней среды нормальную микрофлору можно рассматривать как индикатор здоровья человека. Основным общепринятым индикаторным микробиоценозом организма человека является нормальная микрофлора кишечника (Шептулин, 1999).
При воздействии дестабилизирующих факторов микрофлора реагирует количественными и качественными сдвигами в популяциях микроорганизмов. Например, микрофлора меняется при недостаточной ферментативной активности, голодании, авитаминозе, развитии патологических процессов, на фоне кишечных инфекций. Состояние нарушения микрофлоры обозначается термином «дисбакте-риоз». (Красноголовец, 1989; Крамарь и др., 1993; Артемова, Яковлев, Кравец, 1999).
Нарушения микробиоценоза кишечника протекает по общим закономерностям: в результате снижения индигенной анаэробной флоры (бифидо-, лактобак-
5 терии), участвующей в обеспечении колонизационной резистентности кишечника, нарушается контроль за количественным и качественным составом всей микрофлоры, что проявляется в повышении содержания лактозонегативных и гемолитических кишечных палочек, доминировании патогенных и условно-патогенных эн-теробактерий, а также стафилококков и грибов (Барановский, Кондрашин, 2000).
Дисбактериоз отрицательно влияет на течение физиологических процессов и общую реактивность организма. Это создает предрасположенность для развития как инфекционных, так и соматических заболеваний (Шендеров, 1994).
В последние годы в России особенно напряженной стала эпидемиологическая обстановка по паразитарным болезням. В стране ежегодно официально регистрируется более 1,3 миллионов больных различными паразитозами, среди которых отмечается рост заболеваемости кишечными протозоозами (Романенко, 2001). Однако, по мнению Главного санитарного врача Российской Федерации Г.Г. Они-щенко (2002) данные официальной статистики о паразитарной заболеваемости занижены. По его оценкам этот показатель составляет около 20 миллионов человек.
В связи с этим особую актуальность приобретает широко распространенная «новая» протозойная инвазия - бластоцистоз, обусловленная паразитированием преимущественно в толстой кишке простейших Blastocystis hominis (Чайка, 1992; Reinthaler et al., 1988; Zierdt et al., 1988).
Данный возбудитель длительное время не привлекал внимание специалистов как энтеропатоген. Исследованиями C.H.Zierdt et al. (1967, 1978, 1988, 1991) впервые определена протозойная природа В.hominis, установлено их таксономическое положение, получены указания на возможную этиологическую роль этих микроорганизмов в возникновении кишечной инвазии - бластоцистоза у лиц с иммунной недостаточностью, названной болезнью Зиердта-Гаравелли (Чайка, 1992; Silberman et al., 1996). Заболевание развивается по типу энтерита, энтероколита или колита (Garavelli et al., 1991; Jeddy et al., 1991; Cirioni et al., 1999). Находясь в кишечнике, бластоцисты участвуют в формировании микробиоценоза дан- ного биотопа. Нарушая баланс микроорганизмов, данные возбудители способствуют созданию благоприятных условий для развития патологических процессов. В то же время многие аспекты этиопатогенеза этого заболевания до настоящего времени остаются неизученными.
Одним из наиболее распространенных гастроэнтерологических заболеваний, как среди взрослого, так и детского населения нашей страны является язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки (Григорьев, 1998; Калинин, 2001). До недавнего времени специалисты рассматривали несколько теорий патогенеза язвенной болезни, не придавая должного значения микробному фактору.
Вышеизложенное диктует необходимость изучения состояния микрофлоры кишечника при экспериментальной язве желудка на фоне инвазии В. hominis.
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ: Изучить состояние микрофлоры кишечника при экспериментальной язве желудка на фоне инвазии В. hominis.
ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:
Определить характер изменений микрофлоры кишечника при экспериментальном бластоцистозе различной степени тяжести.
Оценить состояние облигатной кишечной микрофлоры при экспериментальной язве желудка на фоне бластоцистной инвазии в динамике.
Исследовать спектр условно-патогенных микроорганизмов в зависимости от показателей интенсивности язвообразования на фоне инвазии В. hominis.
Провести сравнительный анализ инвазированности бластоцистами лиц, страдающих хроническими заболеваниями желудочно-кишечного тракта и практически здоровых людей.
Изучить морфологические особенности клеток В.hominis и выявить частоту встречаемости их форм в исследуемом мaтqэиaлe.
7 НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ
Впервые установлено изменение микрофлоры кишечника при экспериментальном бластоцистозе различной степени тяжести.
Изучены особенности изменений кишечной микрофлоры при экспериментальной язве желудка, развившейся на фоне бластоцистной инвазии. Показано, что степень выраженности дисбиоза находилась в прямой зависимости от тяжести процесса образования язвенного дефекта.
Установлено, что не только цисты, но и вакуолярные формы B.hominis, обладшощих различной патогенностью, вызывали развитие кишечного бластоцистоза. Данная патология сопровождалась дисбиотическими и структурными изменениями кишечника, а так же увеличением общего количества лейкоцитов периферической крови.
Показано, что бластоцисты принимают участие в формировании преморбидного фона, влияющего на развитие и тяжесть течения экспериментальной язвы желудка.
Показана высокая степень инвазированности B.hominis людей с язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ
Выраженные дисбиотические изменения микрофлоры кишечника при экспериментальной язве желудка диктуют необходимость проведения регулярных исследований кишечного микробиоценоза у людей с язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки, с целью снижения риска развития рецидивов данного заболевания.
Высокие показатели выявляемости бластоцист при язвенной болезни позволяет рассматривать бластоцисты как этиопатогенетический ко-фактор развития данной патологии, что предполагает возможную эффективность применения противопротозойных препаратов в ее лечении.
Определение патогенных свойств клинических изолятов B.hominis позволяет использовать данный метод для прогнозирования течения язвенной болезни.
По материалам диссертационной работы написаны практические рекомендации «Микрофлора кишечника при бластоцистной инвазии». Ульяновск, 2003 г., 23 с. (в соавторстве с Н.И. Потатуркиной-Нестеровой, И.Н. Исаевой, Н.А. Квасовой, А.С. Нестеровым, Р.Ф. Бургановой); получена приоритетная справка № 2002114890 от 05.06.2002 г. на полезную модель экспериментального бластоцистоза; получена приоритетная справка № 20022122475 от 19.08.2002 г. на полезную модель воспроизведения экспериментальной язвы желудка.
Результаты исследований диссертационной работы применяются при чтении лекций по курсу микробиология, инфекционные болезни и смежные дисциплины.
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:
Пероральное введение не только цист, но и вакуолярных форм B.hominis лабораторным животным приводит к развитию у них кишечного бластоцистоза, длительность и тяжесть которого находится в прямой зависимости от патогенности инокулированных бластоцист. Дисбиотические изменения микрофлоры кишечника характеризуются снижением уровня представителей нормофлоры и повышением содержания условно-патогенных микроорганизмов.
Экспериментальная язва желудка у опытных животных на фоне бластоцистной инвазии, в отличие от контрольной группы имеет более тяжелое течение: формируется в более раніше сроки; имеет более высокие показатели язвообразования (диаметр, глубина, индекс волокнистого примыкания); в 2,8% случаев язвообразование приводит к гибели животных обусловленной перфорацией язв; образование грануляционной ткани в язвенном дефекте и формирование рубца происходит в более отдаленные сроки.
3. Развитие язвенного дефекта на фоне инвазии B.hominis сопровождается: динамикой изменений количественных и качественных характеристик основных симбионтов кишечника; увеличением частоты встречаемости транзиторной микрофлоры; распространением микрофлоры за пределы ее биотопа - в тонкий отдел кишечника. B.hominis инвазировано 88,61% пациентов с язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки, тогда как у практически здоровых людей этот показатель не превышает 4%. Отмечается рост встречаемости данных возбудителей у лиц старших возрастных групп.
Анализ структуры выделенных изолятов показывает, что в клиническом материале и в культуре преобладают вакуолярные, реже встречаются гранулярные формы, амебоидные клетки обнаружены только в препаратах из культуры.
РАБОТА ВЫПОЛНЕНА Диссертация выполнена в соответствии с комплексным планом научной работы медицинского факультета Ульяновского государственного университета.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ Результаты работы доложены на Международной конференции студентов и аспирантов по фундаментальным наукам (Москва, 2000); Научно-практической конференции «Новые технологии в медицине» (Ульяновск, 2000); XXXVI научно-практической межрегиональной конференции «Проблемы и перспективы здравоохранения» (Ульяновск, 2000); Второй Российской научно-практической конференции «Актуальные проблемы экологии, экспериментальной и клинической медицины» (Орел, 2001); I Всероссийской университетской научно-практической конференции молодых ученых и студентов по медицине (Тула, 2002); Гастроэнтерологической неделе Фальк-симпозиума «GI Inflammation and Disturbed Gut Function: The Challenge of New Concepts» (Фрайбург, 2002); Научной конференции «Проблема инфекции в клинической медицине» и VIII съезде Итало-Российского общества по инфекционным болезням (Санкт-Петербург, 2002).
ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликованы 22 работы.
СТРУКТУРА И ОБЪЁМ ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований, обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка использованных источников литературы. Диссертация изложена на 159 страницах. Список содержит 277 наименований, в том числе 146 зарубежных. Работа иллюстрирована 20 таблицами и 35 рисунками.
Нормальная микрофлора кишечника и ее нарушения
Человек, являясь участником биоценоза нашей планеты, в свою очередь, представляет собой среду обитания для огромного количества видов микроорганизмов. При этом он представляется открытой системой, в которую постоянно извне поступают разнообразные микробы, в то же время, он сам служит источником их поступления в окружающую среду (Ардатская, Дубинин, Минушкин, 2001).
Аутомикрофлора определенных биотопов у всех людей в значительной мере одинакова, однако она имеет индивидуальные различия, а также меняется в зависимости от возраста, условий жизни, питания, состояния здоровья и т.д. (Бондаренко, 1997; Воробьев и др., 1999).
При физиологической норме организм человека содержит сотни видов бактерий, а также вирусы и простейшие, составляющие в сумме нормальный микробиоценоз. Он представлен в основном сапрофитами - комменсалами и условно-патогенными микроорганизмами. В условиях эволюционного взрыва, происходящего в последние десятилетия в мире микробов, часто провести четкую грань между сапрофитами и патогенами невозможно (Костюк и др., 1998).
Изучению состава микрофлоры кишечника посвящены многочисленные работы отечественных и зарубежных исследователей (Крамарь и др., 1994; тендеров 1998, 1994; Gibson et al., 1994). Накоплен большой материал о роли микрофлоры в жизнедеятельности человека (Сытник, 1989; Kleessen et al., 1995).
Под нормальной микрофлорой понимают совокупность множества симбио-ценозов, характеризующихся определенным составом и занимающих тот или иной биотоп в организме человека. Учитывая определенное постоянство микробиоценоза в норме и его высокую чувствительность к изменениям внешней и внутренней среды нормальную микрофлору можно рассматривать как индикатор здоровья человека (Савченко, 1999).
Основными биотопами микроорганизмов являются: кожные и слизистые покровы, желудочно-кишечный тракт, дыхательные пути, мочеполовые органы (Бондаренко, Учайкин, Мурашова, 1995).
Известно, что нормальная микрофлора сформировалась у человека в процессе эволюции в результате взаимного влияния многих факторов внешней среды: физических, химических, биологических, климатических, условий питания, жизни, а также состояния макроорганизма (его реактивности, особенностей иммунного статуса, возраста), кроме того взаимоотношений разных видов, входящих в микробиоценоз. Некоторые симбиотические комплексы эволюционизировали до столь высокой степени сложности, что опорой их ассоциации стал обмен информацией (Корнева, 1999). Естественно, что для обмена информацией в системе макроорганизм - микробные ассоциации человека необходимо выполнение следующих условий: 1) обеспечение возможностей для ее существования (оральная толерантность к индигенной микрофлоре); 2) наличие механизмов взаимопользования общими инструктивными молекулами - регуляторными пептидами; 3) способность иммунной системы макроорганизма воспринимать и трансформировать поток генетической информации, представленной микроорганизмами. С участием вышеперечисленных механизмов в процессе эволюции возник симбиоценоз - интеграция микробных ассоциаций с макроорганизмом человека (Бельмер, Гасили-на, 1998). Как следствие всех этих эволюционных преобразований возникли сложные микробные ассоциации на коже и слизистых оболочках полостей и органов, имеющих сообщение с внешней средой. Эволюция отобрала и определила круг видов микробов, заселивших человеческий организм, привела к физиологическому равновесию (Воробьев и др., 1997,1999).
Состав микрофлоры кишечника в состоянии физиологической нормы представляет собой сбалансированную, относительно постоянную микробиологическую систему. Биомасса микроорганизмов, заселяющих кишечник человека, составляет примерно 5% от его общей массы; в 1 г содержимого слепой кишки содержится около 2 млрд. микробных клеток, относящихся к 17 семействам, 45 родам, более 400 видам (Барановский, Кондрашин, 2000).
Различают постоянно встречающиеся виды микроорганизмов (аутохтонная, индигенная, резидентная флора) и добавочные, случайные (транзиторная, аллох-тонная) (Чахава и др., 1982; Шендеров и др., 1994).
По способности утилизировать кислород всю микрофлору кишечника делят на две группы: анаэробную, составляющую 90%, и аэробную - 10% врего эубиоза кишечника (Шептулин, 1999).
Исходя из количественного критерия, микрофлору кишечника, можно подразделить на: 1) главную флору - облигатно-анаэробные микроорганизмы (бифи-добактерии, лактобактерии и бакгероиды), на долю которых приходится 96 - 99% всей микрофлоры кишечника; 2) сопутствующую флору (эшерихии, энтерококки), составляющую 1 - 4% кишечной флоры; 3) остаточную флору (клебсиеллы, цит-робактеры, энтеробактеры, протей, дрожжи, клостридии и др.), которая обнаруживается в 0,1 - 0,001%. По мнению О.В.Чахава и соавт. (1982), наиболее важную роль для макроорганизма играет индигенная часть кишечной микрофлоры, обладающая рядом свойств: способностыо расти в анаэробных условиях, всегда обнаруживаться у здоровых взрослых особей, заселять определенные места ЖКТ взрослых организмов, передаваться от взрослых новорожденным, поддерживать стабильные популяционные уровни у всех представителей здоровых взрослых хозяев, способностыо тесно ассоциироваться с эпителиальным покровом слизистых оболочек.
Современные представления об этиопатогенезе язвенной болезни желудка
По данным эпидемиологических исследований каждый десятый взрослый житель Российской Федерации страдает той или иной патологией органов пищеварения (Ивашкин и др., 2001). В отдельных районах уровень показателей гастро-дуоденалыюй заболеваемости достигает 300-400 человек на 1000 обследованных (Дудникова, 2001). Начинаясь нередко в детском возрасте, болезни желудочно-кишечного тракта приобретают прогредиентное течение, могут осложняться и, как следствие этого, обусловливать раннюю инвалидизацшо в наиболее трудоспособном периоде жизни (Григорьев, 1997).
Особенно широко распространена среди взрослого и детского населения язвенная болезнь, удельный вес которой составляет 13,5% от всех гастроэнтерологических заболеваний (Григорьев, 1998; Калинин, 2001).
В связи с распространенностью данной болезни, трудностями диагностики, тяжестью возможных осложнений, сложностями профилактики и лечения данная патология желудочно-кишечного тракта является одной из наиболее актуальных проблем современной гастроэнтерологии во всем мире (Циммерман, 1997; Аруин, 2000; Рузаева и др., 2001; Бредихина, 2002; Минушкин и др., 2002).
С современных позиций язвенная болезнь рассматривается как полиэтиологическое и полипатогенетическое гастродуоденальное заболевание, которое обусловлено нарушением регулирующих систем организма и имеет наследственные детерминанты (Логунов, 1997; Григорьев, 1998; Хутиев и др., 1999). До сих пор ни одна унитарная теория этиологии и патогенеза язвенной болезни не является единственно верной, изолированной от других этиопатогенетических факторов (Дмитриев и др., 1996; Лапина, 1999; Циммерман, 1999). Для объяснения механизмов возникновения язвенной болезни вообще и язв желудка, в частности, было предложено большое количество теорий. Все они берут за основу признание какого-то одного патогенетического звена решающим фактором язвообразования (Куртяну, Шептулин, 1990).
Среди причин возникновения язв желудка и двенадцатиперстной кишки длительное время ведущее значение придавалось кислотно-пептическому фактору (Бадылькес, 1953; Бурчинский, 1954,1973; Лорие, 1958; Фикель, 1958).
Общепризнанно, что агрессивные свойства желудочного содержимого уравновешиваются защитными возможностями слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки (Demling, Rosch, 1974). Язвенный дефект возникает только при нарушении равновесия взаимодействующих факторов или вследствие усиления кислотно-пептической агрессии, или из-за ослабления защитного барьера слизистой оболочки гастродуоденальной зоны (Жуйковский, 1960; Гукасян, 1964).
Повышение кислотообразующей функции желудка возможно при увеличении количества париетальных клеток, повышении чувствительности париетальных клеток к гормональной стимуляции, повышении тонуса блуждающего нерва, повышении концентрации гастрина в крови, ослаблении механизмов ингибиции секреции соляной кислоты (Фишзон-Рысс, Рысс, 1978). При язвенной болезни происходит активация кислотно-пептического фактора и снижение цитопротек-тивных свойств слизистой оболочки на фоне дезинтеграции процессов возбуждения и торможения в центральной нервной системе (Рысс, Рысс, Рысс, 1975; Левин, 1970; Хомутовский, Дегтярева, 1978). Вместе с тем, соотношение факторов агрессии и защиты в развитии язвенной болезни оказывается неоднозначным. Особенно это видно в патогенетических различиях между желудочными и дуоденальными язвами. Если гиперсекреция соляной кислоты и пепсина в патогенезе язвы двенадцатиперстной кишки занимает ведущее место, то в механизмах развития язвы желудка этот фактор не играет столь важной роли (Рысс, 1966), Более того, при несомненном значении пептического фактора в ульцероге-незе его роль неоднозначна, так как не всегда повышенное кислотообразование в желудке приводит к развитию язвы (Богер, 1986; Василенко, Гребнев, Шептулин, 1987).
Известно, что, несмотря на высокую кислотообразующую функцию желудка и наличие других факторов, способствующих язвообразованию, у больных с так называемым "предъязвенным" состоянием, язвы образуются лишь в 22% случаев (Ильченко, 1994).
Одним из агрессивных факторов язвообразования в желудке считают нарушение гастродуоденальной моторики (Рысс, Рысс, Рысс, 1975). К ним относятся ослабление тонуса и перистальтики желудка, способствующие застою содержимого желудка и увеличению времени контакта соляной кислоты со слизистой оболочкой желудка. Согласно этой концепции замедление эвакуации из желудка ведет к повышению кислотной продукции, что способствует формированшо язвенного дефекта. В то же время многими авторами оспаривается возможная роль нарушения моторной функции желудка в происхождении язвенной болезни. M.I. Grossman (1980), F. Halter (1982) обнаружили, что у больных с язвами желудка, за исключением случаев с развитием рубцово-язвенного стеноза привратника, эвакуаторная функция этого органа не нарушена. Даже сторонники теории расстройства моторной функции желудка признают, что замедление двигательной активности этого органа обнаруживается лишь у пациентов с медиогастральными язвами и не выявляется у больных с язвами пилорического отдела. Более того, показано, что гиперсекреция соляной кислоты, возникающая на фоне растяжения антрального отдела желудка, обычно очень незначительна.
Характеристика клинических изолятов В. hominis
Нами проведено паразитологическое обследование 240 больных с заболеваниями органов пищеварения. Наблюдение проводили с 2000 по 2003 гг. на базах областной клинической больницы №1, больницы скорой медицинской помощи г. Ульяновска.
Контрольную группу составили 100 практически здоровых лиц обоего пола в возрасте от 20 до 60 лет. Все наблюдаемые лица этой группы до начала обследования проходили клинический осмотр и анкетирование. Критерием отбора служило отсутствие хронических и острых заболеваний на момент обследования, длительность проживания в г. Ульяновск не менее 10 лет, отрицание использования антибактериальных препаратов в течение последних 3-х лет. D Инвазированные бластоцистами D Неинвазированные бластоцистами Встречаемость бластоцист среди обследованных больных
Проведенные исследования показали, что из всех обследованных у 147 больных (61,25%) в фекалиях были обнаружены бластоцисты (рис. 1).
Таким образом, инвазированность B.hominis среди лиц, страдающих заболеваниями органов пищеварения, в среднем составила 61,25%. При этом существенных различий в обнаружении бластоцист у мужчин и женщин нами обнаружено не было. Однако с увеличением возраста отмечено увеличение инвазированности этими возбудителями.
При большинстве хронических заболеваний органов пищеварения бластоци-сты обнаруживались значительно чаще, чем у лиц контрольной группы. Наиболее высокие показатели инвазированности данными простейшими нами установлены при язвенной болезни (88,61%), хроническом гастрите (68,09%) и хроническом холецистите (57,69%). Достаточно часто B.hominis выделяли и у лиц с другими заболеваниями пищеварительного тракта, так, при циррозе печени бластоцисты были обнаружены в 44,0%, при синдроме раздраженного кишечника в 36,84%, при неспецифическом язвенном колите - 31,58%. Вместе с тем, лица контрольной группы инвазированы B.hominis лишь в 4% случаев.
В ходе работы нами была изучена морфология выделенных простейших B.hominis. Исследования показали, что бластоцисты размером менее 6 мкм встречались в 15,65% наблюдений (23 человека), 6-15 мкм - в 80,27% (118 человек) и более 15 мкм - у 4,08% (6 человек) инвазированных (рис. 6).
Изучение соотношения размеров бластоцист, выделенных из фекалий больных обоего пола, показало, что у мужчин и женщин преобладали простейшие размером 6-15 мкм (85,48%, 76,47% соответственно). Клетки размером менее 6 мкм были выделены в 11,29%, 18,82% соответственно и у 3,23% мужчин и 4,71% женщин были выявлены клетки размером более 15 мкм (рис. 7).
Среди выделенных из фекалий B.hominis встречались две формы - вакуо-лярная и гранулярная, имеющие значительные структурные отличия. Вакуолярные формы бластоцист были обнаружены у 85,65%, гранулярные - у 10,05% инвазиро-ванных больных, в 4,3% препаратов встречались обе формы бластоцист (рис. 8а).
Следует отметить, что при культивировании бластоцист на питательны средах соотношение их форм менялось. Так, при культивировании на среде Siiresr в течение 72 часов, количество клеток гранулярной формы увеличивалось дс 27,89%, а простейших, вакуолярной формы, наоборот, уменьшалось до 49,67%. Однако преобладающими формами простейших как в препаратах из фекалий, так и из культуры оставались вакуолярные. Кроме того, при длительном культивировании в 5,44% случаев появлялись амебоидные формы. Одновременно все три формы простейших встречались в 3,4% препаратов, приготовленных из культуры (рис. 86)
При окраске бластоцист по Романовскому-Гимза центральное тело не дифференцировалось. Раствор Люголя придавал простейшим желто-коричневый оттенок, что может указьшать на отсутствие в клетке углеводов. Наилучшие результа ты давало окрашивание железным гематоксилином по Гейденгайну. При этом бластоциста окрашивались с разной интенсивностью - от голубого до интенсивно синего цвета. В некоторых случаях центральное тело прокрашивалось в средней части интенсивнее по сравнению с периферической. Такую изменчивость тинкто-риальных свойств возможно объяснить синтезирующей активностью этой орга-неллы. Центральное тело выглядело гомогенным, реже зернистым. Преобладали клетки с гомогенным центральном телом, в препаратах из фекалий они составили 80,95%, из культуры - 66,67% (рис.11).
Изучение состояния микрофлоры кишечника при экспериментальной язве желудка на фоне инвазии B.hominis
Следующим этапом нашей работы явилось изучение состояния кишечной микрофлоры при экспериментальной язве желудка на фоне инвазии В hominis.
Для оценки участия этих простейших в формировании преморбидного фона, способствующего развитию язвенного процесса, мы использовали такие показатели как, индекс язв, индекс волокнистого примыкания, характер изменений пораженных тканей желудка и результаты изменения микрофлоры толстой кишки. Изучение этих показателей проводили в течение 24-х суток, производя вскрытие по 6 животных всех групп каждые 3-й сутки эксперимента.
В настоящее время для воспроизведения экспериментальной язвы желудка используются различные методики, которые позволяют изучить процесс ульцеро-генеза с учетом различных этиопатогенетических факторов. Для изучения процесса язвообразования нами была выбрана модель S. Okabe et al. (1971), так как она характеризуется стопроцентной воспроизводимостью, длительным течением и по ряду морфологических признаков соответствуют хронической язве человека. Однако указанный способ не учитывает влияния на формирование язвенного поражения такого важного компонента, как микроорганизмы, населяющие желудочно-кишечный тракт, в частности, простейших бластоцист.
С целью решения этой задачи экспериментальных животных предварительно заражали данными паразитами.
Всех крыс разделили на 4 группы (по 50 крыс в каждой). Животных 1-й группы заражали бластоцистами со слабовыраженной патогенностью (lg LD50 3,1+0,5), 2-й группы - с более выраженной патогенностью (lg LD50 4,2±0,9), 3-й группы - бластоцистами с lg LD50 4,9+0,7 и 4-й группы - с наиболее выраженными патогенными свойствами (lg LD50 5,5±0,6). Животным всех групп однократно вводили взвесь бластоцист в количестве 1,0 мл в концентрации 106-107кл/мл через рот при помощи градуированной гашетки.
Животным контрольной группы (50 крыс) вводили per os только стерильную среду Suresh в объеме 1,0 мл, что не приводило ни в одном случае к патологическому состоянию.
В течение первых 12-24 часов у животных развивались симптомы кишечного бластоцистоза. Животные становились вялыми, фекалии приобретали жидкую консистенцию, иногда с примесью крови и слизи.
Затем, всем крысам воспроизводили язвенное поражение желудка. Животные хорошо перенесли процедуру и послеоперационных осложнений не наблюдалось. У всех животных, как показали дальнейшие исследования, отмечалось язво-образование. У 7 крыс формирование язвы привело к прободению желудка в течение первых 10 суток. Данная картина отмечалась у животных, зараженных бластоцистами с наиболее выраженными патогенными свойствами (3-ей и 4-ой групп) (табл. 15).
У крыс 2-ой группы площадь язвенного поражения равнялась 20,97+1,13 мм2, глубина составляла 0,63+0,19 мм, индекс язв - 2, индекс примыкания равнялся 2. В 3-ей группе средняя площадь - 60,22+1,77 мм2, глубина - 1,94+0,38 мм, индекс язв составил 4, индекс примыкания - 3. В группе животных, зараженных изо-лятами с наиболее выраженными патогенными свойствами площадь - 90,55+1,47 мм2, глубина - 2,15+0,29 мм, индекс язв - 5, индекс волокнистого примыкания - 3. В группе контрольных животных площадь язв составила 18,38+1,85 мм2, глубина -0,36+0,11 мм, индекс язв - 2, индекс примыкания составил 2. Динамика изменений показателя индекса язв у различных групп животных на фоне экспериментального бластоцистоза показана на рисунке 24.
На 12 сутки показатели язвообразования у всех групп животных достигли наибольших значений. Так, средняя площадь язв в 1-ой группе животных составила 26,92+1,17 мм2, глубина 0,62+0,1 мм, индекс язв - 3, индекс примыкания составил 2. Во 2-ой группе 28,45+1,55 мм2, 0,91±0,1 мм, 3, 2 соответственно. В 3-ей группе крыс площадь равнялась 79,13+1,84 мм2, глубина составляла 2,32+0,22 мм, индекс образовавшихся язв - 5, индекс примыкания - 3. В 4-ой группе животных отмечены следующие изменения: площадь - 95,37+1,84 мм2, глубина - 2,41+0,26 мм, индекс язв составил 5, индекс волокнистого примыкания - 3. В контрольной группе данные показатели составили 16,17+1,23 мм2, 0,43+0,1 мм, 2, 2 соответственно (р 0,05). Во 2-ой группе - 8,18+1,1 мм2, 0,37+0,1 мм, 2, 1 соответственно. В 3-ей группе крыс средняя площадь язв - 39,12+3,99 мм2, глубина составляла 1,25+0,15 мм, индекс образовавшихся язвенных дефектов - 3, индекс волокнистого примыкания - 3. В 4-ой группе экспериментальных животных данные показатели составили 48,38+3,61 мм2, 1,62+0,19 мм, 4, 3 соответственно. В контрольной группе крыс площадь язв - 3,13+0,71 мм2, глубина 0,13+0,1 мм (р 0,05), индекс язв составил 1, индекс примыкания равнялся 1.
