Введение к работе
,і і .
Актуальность темы. Облигатные внутриклеточные бактерии род."'. Chlamydia вызывают широкий спектр патологических процессов у человека и животных.
В настоящее время известны три вида хламидий: С. psittacl - возбудитель разнообразных зоонозных хламидиозов, способных передаваться и человеку; С. orachomatis - возбудитель антропо-нозных хламидийных инфекций, первично поражающих слизистые оболочки человека (тпахона.урогенитальные хламидиозы и др.); и С. pneumoniae - возбудитель респираторных заболезаний человека (Saikku P. ,19S5,Grayston J. ,1989).
Наибольшее распространение имеют актропонозные хламидиозы, вызываемые С. trachomatis. Так, по данным ВОЗ до настоящего времени в мире определяется более 400 млн. случаев трахомы (Levitt D. , Barol J., 1987).
В последние годы С.trachomatis признана самым распространенным возбу*,.ітелем болезней передающихся подовым путем, превышая заболеваемость гонореей в 2-6 раз (Mardh P. A., Taylor-Robinson D., 1984). По данным Европейского общества по изучению хламидий урогенитальными хламидиозами в мире поражено более 50 млн человек (Mardn Р. А. ,1991). В нашей стране, заболеваемость урогенитальными хламидиозами превышает 1,5 млн случа-ев езхегодно (!1!аткин А. А., 1990). Установлено, что более 50 % случаев трубного бесплодия у кенщин и около 20 % инфекционной патологии у новорожденных имеют хламидийную природу (Шаткин А. А., 1990).
Отличительной особенностью урогенитальных хламидиозов яз-тіяется отсутствие выраженной и патогяомоничной симптоматики. Эти заболевания у большей части больных проходят под другими
- 4 -диагнозами или протекают практически бессимптомно, вследствие чего не подвергагася научно-обоснованной этиотропной терапии и профилактике (Шаткий А. А.,Ьїавров И. И. 1963, Schachter J. ,1987).
Отсутствие в практическом здравоохранении надежных и доступных диагностических тест-систем и препаратов затрудняет этиологическую диагностику и эг-'демиологический надзор за хла-мидиозами, что привоя, .г к развитию хронических форм хламидий-ных .лфек"чй, тяжелым осложнениям и дальнейшему росту заболеваемости. Наиболее специфичный и чувствительный метод диагностики - выделение хламидий в куль уре клеток - представляет трудоемі^ую, технически сложную и длительную процедуру, что де-
«
лает его недоступным для большинства клинических лабораторий и затрудняет использование в качестве средства скрининга.
В связи с этим, совершенствование лабораторной диагностики хламидиозов является актуальной задачей научных исследований, направленных на оздоровление населения и обеспечение научно-обоснованной этиотропной терапии.
В последние годы в нашей стране и за рубежом показано, что решение данной проблемы : .жет быть значительно облегчено путем разработки иммунодиагностических тестов, использующих вксокоопецифичкые моноклональные антитела (м-AT); ряд зарубежных фирм ("Abbott", "Syva"."Orion" и др.) выпустили коммерческие наборы, в составе которых используются м-AT, предназначенные для диагностики урогенитальных хламидиозов, вызываемых С. trac'omatis. Аналогичные диагностические тесты на основе m-VT ранее в нашей стране не разрабатывались.
Цель диссертационной работы. Получение м-ЛТ к различным антигенным детерминантам С. rachomatis, изучение некоторых иммуно-химических и биологических свойств, и ИХ ИОПОЛЬЗОВ...ИЄ
- 5 -конструированию* высокочувствительных и специфичных диаг-зстиче^ких препаратов.
Основные задачи исследования.
-
Отработка оптимальних схем иммунизации Baib/c мышей )епарата».м антигенов С. trachomatis и условий для скрининга їбридом непрямым иммунофэрментным и иммунофлуоресцентным ме-)дами.
-
Получение серии гибридом, стабильно продуцирувдих м-АТ различным антигенным детерминантам С. trachomatis.
-
Изучение ряда иммунохимических и биологических свойств лученных м-АТ, характеристика соответствующих им антигенных терминант.
-
Получение в препаративном количестве, выделение и метка м-АТ, направленных к родо- и видоспецифическим антигені С. trachomatis.
-
Конструирование на основе м-АТ, конъюгированных с флу-охромом и г роксидааой, экспериментальных диагностических епаратов для определения хламидий прямым иммунефлуоресиент-м и иммуноферментным методами,
-
Апробация и оценка эффективности полученных диагности-мов в эксперименте и клинике.
Научная новизна Впервые получены оригинальные отечест-иные м-АТ к различным антигенам С. trachomatis, в том числе и особные нейтрализовать инфекционную активность этого микро-ганизма, что позволит их использовать для анализа антигенной руктуры хламидий и углубления знаний об особенностях взаимо-йстзия этого микроорганизма с клеткой-хозяином. Выделение этек^иьных антигенов хламидий с помощью м-АТ может оказаться здуктивным и при создании новых вакцинных препаратов. Уста-
- б -
новлена корреляция между иммунологической специфичностью П( ченных м-АТ и характером их взаимодействия с антигенами С. і chomatis. Разработан первый высокоэффективный отечественны! иымунофлуоресцентный диагностикум для прямого і .ределения г тигенов С. trachomatis в клинических и экспериментальных мат риалах и апробирован в эксперименте иммуноферментный диагностический препарат Установлено значительное увеличение чуі твительности прямого иммуноферментного метода (ИФМ) прі предварительной термообработке исследуемого материала, соде жащего С. trachomatis.
Практическая ценность работы. Получение юноклональнш антител к родоспецифическим и видоопецифическим детерминант С.trachomatis явилось основой для создания отсутствующей в стране современной иммунодиагностики хламидиозов.
Клинические испытания, проведенные в лабораториях ряда НИИ и клиник венерологического и акушерско-гинекологическог профиля, показали, что разработанный экспериментальный имму кофлуоресцентный диагностикум по своей чувствительности и с цифичности не уступает заруб жным аналогам при диагностике урогенитальных хламидиозов, вызываемых С. trachomatis.
В настоящее время производится коммерческий выпуск экс риментальных партий этого диагностикума ч^рез СП "Nearmed при ЮШЭМ им. Е Ф. Гамалеи.
Апробация диссертации состоялась на научной гюнференции отделг медицинской микробиологии НКИЭМ им. К. Ф. Гамалеи 4МН СССР 16 октября 1391 года. Основные положения работы долотге на Советско-французском симпозиуме по хламицчоьами (1989 г. на Всесоюзном Совещании по х імидиозам (1990 г.)
По теме диссертации опубликовано б печатных работ. Ма*
риалы диссертационной работы отражены в 2 методических реко-мендацк х.
Обьем и структура работы. Диссертация изложена на 145 страницах машинописного текста (включая 6 таблиц и 18 рисунков) и состоит из ввэдения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, заключения, выводов и списка литератур; Ш ледний включает 0 отечественных и 150 зарубежных источников.
