Содержание к диссертации
ВВЕДЕНИЕ 5
Глава 1. ОБЗОР ДАННЫХ ЛИТЕРАТУРЫ. НОРМАЛЬНАЯ МИКРОФЛОРА
КИШЕЧНИКА И ДИСБИОТИЧЕСКИЕ НАРУШЕНИЯ 11
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 38
Общая характеристика материала 39
Методы исследования 39
Правила отбора проб 40
Подготовка к посеву исследуемого материала и приготовление разведений 40
Посев исследуемого материала 40
Ход исследований и учет результатов 41
2.3. Дополнительные методы, не входящие в стандартную схему
исследования на дисбиоз кишечника 44
2.3.1. Определение р-галактозидазной активности Е. coli 44
Определение антибиотикочувствительности выделенных культур 44
Определение чувствительности выделенных культур к специфическим бактериофагам 45
Выявление капсулы у Klebsiella spp 47
Изучение свойств лактобактерий 47
Определение адгезивной активности лактобактерий 48
Определение антагонистической активности лактобактерий.... 49
Определение антибиотикорезистентности лактобактерий 50
Определение концентрации биокультур, входящих в состав кисло молочных продуктов 50
2.4. Статистические методы 51
Глава 3. ОСОБЕННОСТИ МИКРОБИОЦЕНОЗА КИШЕЧНИКА
У РАЗЛИЧНЫХ ВОЗРАСТНЫХ ГРУПП ЖИТЕЛЕЙ Г. СУРГУТА 53
3.1. Частота выявления дисбиотических нарушений 53
3.2. Особенности количественного состава облигатной микрофлоры. 55
3.3. Качественные изменения в составе облигатной флоры
кишечника 57
3.3.1. Типичные и атипичные свойства лактобактерий 57
3.3.2. Биологические особенности микроорганизмов рода
Escherichia 60
3.3.3. Изменения в составе микроорганизмов рода Enterococcus 63
Дисбиотические нарушения качественного и количественного состава факультативной микрофлоры 65
Дисбиотические состояния, связанные с избыточным содержанием микроорганизмов рода Staphylococcus 68
3.5.1. Характеристика случаев обнаружения повышенных
концентраций стафилококков 68
3.5.2. Штаммовые характеристики выделенных культур рода
Staphylococcus 71
Обнаружение возбудителей кишечных инфекций при обследовании на дисбиоз кишечника ' 73
Гемолитические свойства отдельных представителей облигатной, факультативной и не типичной микрофлоры 77
Глава 4. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА МИКРОБИОЦЕНОЗОВ
КИШЕЧНИКА ЖИТЕЛЕЙ ГОРОДОВ СУРГУТА И ПЕРМИ 83
Глава 5. НЕКОТОРЫЕ ПОДХОДЫ К КОРРЕКЦИИ ДИСБИОЗА 99
Использование антибиотиков для коррекции дисбиозов 99
Использование бактериофагов для коррекции дисбиозов 103
Применение пробиотиков 112
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 119
ВЫВОДЫ 132
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 133
ПРИЛОЖЕНИЯ 164
Список терминологических сокращений
УПМ - условно-патогенные микроорганизмы
ЖКТ - желудочно-кишечный тракт
СПА - средний показатель адгезии
ГЖХ - газо-жидкостная хроматография
ЛЖК - летучие жирные кислоты
ОСТ - отраслевой стандарт
МПА - мясопептонный агар
МПБ - мясопептонный бульон
ВСА - висмут-сульфит агар
АГВ - агар Гевинталя - Ведьминой
МРС - среда Мозера-Рогоза-Шарп
УПЭ - условно-патогенные энтеробактерии
ЭПЭ - энтеропатогенные эшерихии
MRSA - метициллин - резистентный S. aureus
Введение к работе
В процессах сохранения и поддержания гомеостаза существенную роль играет нормальная микрофлора организма. Нормальная микрофлора человека полифункциональна, она обеспечивает колонизационную резистентность, участвует в гидролизе основной массы клетчатки, деконъюгации желчных кислот, поддержании газового состава и интракишечного уровня активной кислотности, в , разрушении недоиспользованных пищеварительных ферментов и т.д. [85, 136, 137, 244]. Метаболическая функция нормофлоры связана со способностью синтезировать витамины, аминокислоты, с участием в процессах всасывания, иммуностимулирующая - направлена на синтез иммуноглобулинов и неспецифических факторов резистентности [25, 44, 99].
Несмотря на то, что изучению состояния нормальной микрофлоры посвящено значительное число работ, целый ряд вопросов остается недостаточно исследованным. Продолжает дискутироваться само понятие «дисбактериоз кишечника», классификация дисбиоза. Более детальной разработки требуют вопросы лабораторной диагностики, определения степени и типов дисбиотических состояний. В связи с этим представляется актуальным проведение комплексных исследований, касающихся изучения различных аспектов дисбиотических состояний. Основными причинами дисбиоза являются длительная антибиотикотерапия, а также стрессовые ситуации и перенесённые заболевания [14, 79]. До сих пор недостаточно изучено влияние неблагоприятных климатических и социально-бытовых факторов на состав микрофлоры организма и, как следствие, особенности дисбиотических проявлений, возникающих на данном фоне.
Известно, что климатические условия, характер питания и образ жизни существенно отражаются на количественном и качественном составе микрофлоры кишечника. Природные условия Крайнего Севера отличаются высокой суровостью [5,7,174]. Климат характеризуется рядом факторов, негативно влияющих на здоровье населения: длительный период низкой
температуры воздуха, чрезвычайно неустойчивая погода, характеризующаяся резкими перепадами атмосферного давления, сильные ветра, значительные колебания весового содержания атмосферного кислорода, близкое расположение от поверхности почвы слоя вечной мерзлоты, отрицательный годовой баланс солнечной радиации. Комплексное воздействие этих специфических природно-климатических факторов снижает функциональную и иммунологическую реактивность организма, способствует развитию простудных и инфекционно-аллергических заболеваний (Adams, Flanders, 1988).
Немаловажное значение для понимания причин дисбиотических состояний в изучаемом регионе имеют и социальные факторы. Население города Сургута и Сургутского района складывается из 2 групп - коренные жители и приезжие из других регионов. Причем коренными жителями считаются не только народы ханты и манси, изначально проживающие на этой территории, но и рождённые в северных условиях дети людей, приехавших осваивать северные территории еще в шестидесятые годы прошлого столетия. Для приезжего населения адаптационный период характеризуется сильным, резко выраженным напряжением компенсаторно-приспособительных механизмов. Это вызвано сочетанным воздействием, как экстремальных факторов внешней среды, так и изменением образа жизни, характера питания, условий работы (вахтовый метод).
По нашему мнению, есть основания оценивать состояние организма человека, прибывшего на Север, как состояние своеобразного, весьма специфического хронического напряжения, что в дальнейшем приводит к развитию сбоев на уровне различных и в первую очередь регуляторных систем (нервной, эндокринной, иммунной системы, включая систему неспецифической резистентности). Затем развиваются вторичные проявления: хронические заболевания различных органов, и в том числе дисбактериоз кишечника.
Такое состояние здоровья родителей откладывает отпечаток на процесс формирования биоценоза у новорожденных. В дальнейшем на формирование
нормофлоры также оказывают воздействие следующие факторы: холодная и неустойчивая погода ограничивает пребывание детей на свежем воздухе; вечная мерзлота, которая обусловливает постоянную влажность и низкую температуру почвы, что способствует возникновению простудных заболеваний детей не только в холодный, но и в теплый период года; дефицит солнечной радиации приводит к недостаточности витамина Д и нарушениям фосфорно-кальциевого обмена; недостаточное употребление свежих фруктов и овощей приводит к развитию гиповитаминозов группы Вь В2, РР, Р, С.
Наряду с этим в условиях Крайнего Севера для населения Крайнего Севера в силу сложившихся традиций характерен своеобразный режим питания, как то: пристрастие к рыбе, в том числе свежемороженой, сбор и употребление в пищу дикорастущих растений. Для поддержания терморегуляции организма на должном уровне северные жители вынуждены питаться высококалорийными продуктами, богатыми белками и жирами. Население практически не получает качественных молочных продуктов, которые готовятся исключительно из порошковых смесей. Всё это не могло не отразиться на составе микрофлоры кишечника у жителей районов Крайнего Севера.
Цель настоящего исследования Изучение особенностей микрофлоры кишечника у жителей районов Крайнего Севера.
Задачи
Определить частоту, степень выраженности и характер изменения нормальной микрофлоры кишечника у жителей различных возрастных групп, проживающих в условиях Крайнего Севера.
Исследовать биологические особенности основных представителей облигатной микрофлоры Lactobacterium spp. и Escherichia coli, выделенных при дисбиозах кишечника различной степени тяжести.
3. Выявить и сравнить микробиологические показатели дисбиотических
проявлений различной степени тяжести у жителей, проживающих в условиях
умеренного и холодного климата.
4. Разработать оптимальные условия проведения реакции фаголизиса на основании изучения фаголизабельности патогенных и условно-патогенных культур, выделенных при дисбиозах кишечника.
Научная новизна работы На большом клиническом материале проведено углубленное исследование качественного и количественного состава микрофлоры кишечника у жителей, проживающих в районах Крайнего Севера. Определены основные микробиологические показатели, характеризующие степень выраженности и типы дисбиотических проявлений у жителей г. Сургута. Установлено, что в отличие от традиционных проявлений дисбиоза, характерных для жителей районов умеренного климата России, у жителей г. Сургута при дисбиотических состояниях обнаруживается, прежде всего, снижение количества лактобактерий, что в ряде случаев сопровождается изменением их морфологических и биологических свойств, в том числе: снижением адгезивной и антагонистической активности, появлением гемолитических форм лактобактерий. Показано, что частота выявления культур, чувствительных к бактериофагу, в значительной степени определяется методическими приёмами выполнения теста с учётом высокой специфичности действия фага. Установлено, что для жителей, проживающих в районах Крайнего Севера, характерны дисбиотические состояния, обусловленные присутствием возбудителей инфекционных кишечных заболеваний. Разработана рациональная схема коррекции дисбиоза с учётом показателей микробиологического обследования.
Теоретическая и практическая значимость работы Полученные данные расширяют представление о влиянии неблагоприятных климатических факторов, специфики питания на развитие и степень выраженности дисбиотических проявлений. Практическая значимость работы заключается в том, что выявлены определённые закономерности в проявлении дисбиотических состояний, характерных для жителей районов Крайнего Севера. Обосновано, что при обследовании
на дисбиоз целесообразно определять не только уровень численности облигатной микрофлоры, но и учитывать её биологические особенности. Разработаны рациональные приемы определения гемолитических свойств и фаголизабельности патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, выделенных при обследовании на дисбиоз. Оптимизированы способы коррекции дисбиоза с использованием кисломолочных продуктов.
Результаты диссертационного исследования внедрены в работу практических лабораторий города Перми: МУЗ «Городская больница № 7» (614600, г. Пермь, ул. Героев Хасана, 24) и МУЗ «Детская городская поликлиника № 10 (614010, г. Пермь, ул. Павла Соловьёва, 9а). Материалы диссертации используются в лекционных курсах и практических занятиях на кафедрах микробиологии, вирусологии и иммунологии, инфекционных болезней и эпидемиологии Пермской государственной медицинской академии (614600, г. Пермь, ул. Куйбышева, 39).
Основные положения, выносимые на защиту
Дисбиоз кишечника у жителей в условиях Крайнего Севера, по сравнению с таковым у жителей районов умеренного климата, характеризуется более выраженными изменениями качественного и количественного состава облигатной и факультативной микрофлоры.
Тяжёлые формы дисбиозов кишечника у жителей в условиях Крайнего Севера характеризуются резким снижением общей численности облигатной микрофлоры, существенным повышением частоты обнаружения патогенных микроорганизмов и ассоциаций условно-патогенных и патогенных микроорганизмов.
3. При коррекции дисбиозов кишечника у жителей районов Крайнего
Севера с использованием бактериофагов высокой штаммовой специ
фичности, пробиотиков и кисломолочных продуктов, обогащенных
биокультурами, необходимо учитывать микробиологические показатели
конкретного дисбиотического состояния.
Апробация работы Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на Межвузовской конференции молодых учёных «Научная молодёжь - XXI веку», Сургут, 2001; Всероссийской научной конференции «Актуальные вопросы вакцинно-сывороточного дела в XXI веке», Пермь, 2003; Итоговой научной сессии Пермской государственной медицинской академии, Пермь, 2004; Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы теоретической и клинической медицины», Пермь, 2005.
Публикации По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ. В процессе выполнения работы разработано и внедрено четыре рационализаторских предложения, принятые к внедрению МУЗ «Городская больница № 7» (614600, г. Пермь, ул. Героев Хасана, 24) и МУЗ «Детская городская поликлиника № 10 (614010, г. Пермь, ул. Павла Соловьёва, 9а).
Объем и структура работы Диссертация изложена на 168 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, заключения и выводов. Работа иллюстрирована 35 таблицами, 12 рисунками. Список литературы включает 302 наименования, из них 196 отечественных и 106 зарубежных авторов.
