Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 9
1.1. Особенности иммунологической реактивности человека в условиях Севера 9
1.2. Особенности иммунологической реактивности при инфекционных заболеваниях 13
1.3. Особенности инфекционного иммунного ответа на Севере 25
Глава 2. Материалы и методы исследования 30
2.1. Общая характеристика обследованных лиц -. 30
2.2. Методы исследования 32
2.2.1. Иммунологические методы исследования 32
2.2.2. Цитологические методы исследования 38
2.2.3. Бактериологические методы исследования 38
2.2.4. Статистическая обработка 39
Глава 3. Результаты исследования и их обсуждение 40
3.1. Этиологическая структура воспалительных процессов на Севере .40
3.2. Зависимость активности местных иммунных реакций от специфики антигенного воздействия 51
3.3. Зависимость активности общих иммунных реакций от специфики антигенного воздействия 65
Заключение 83
Выводы 96
Практические рекомендации 97
Список литературы
- Особенности иммунологической реактивности человека в условиях Севера
- Особенности иммунологической реактивности при инфекционных заболеваниях
- Общая характеристика обследованных лиц
- Этиологическая структура воспалительных процессов на Севере
Введение к работе
Актуальность исследования. Противоинфекционный иммунитет отличается более высоким уровнем поликлон ал ьной активизации, реакции IgM неспецифического характера, аутосенсибилизации, концентраций циркулирующих иммунных комплексов, а также формированием анергии и конкуренции антигенов [118]. Каждая из этих особенностей представляет собой проблему. Поликлональная активизация и аутосенсибилизация истощают резервные возможности регуляции иммунной системы; повышение концентрации аутоантигенов, IgM, циркулирующих иммунных комплексов обеспечивают торможение развития иммунной реакции по типу обратной связи; формирование анергии и конкуренции антигенов блокируют на более или менее длительное время пролиферативную способность лимфоцитов в ответ на иные антигены. Кроме того, воспалительный процесс, развивающийся на инфекционный антиген, обеспечивает более высокую концентрацию провоспалительных цитокинов, эндотоксинов, продуктов распада микроорганизмов, С-реактивного белка. Вмешательство этих биологических субстанций в развитие иммунной реакции является сложным и нередко противоречивым процессом, но в окончательном итоге имеющим иммунодепрессивное влияние.
Известно, что на Севере иммунологическая реактивность имеет свои особенности, отличаясь короткими периодами антителообразования и резистентности, сокращением резервных возможностей регуляции иммунного ответа и высокой степенью распространенности дефектов иммунной защиты. В то же время на Севере, в условиях высокого распространения иммунодефицитных состояний, повышен уровень хронических воспалительных процессов, постинфекционных осложнений [35, 36].
В соответствии с выше сказанным, представляет интерес выяснение механизмов формирования у человека иммунных реакций на антигены
5 инфекционной природы и влияния характера возбудителя воспаления на эти
процессы. Особый интерес в этом отношении представляет сопоставление
особенностей иммунного ответа на изменение концентрации нормальной
микрофлоры и инфицирование. Выяснение этих вопросов особенно важно в
настоящее время, когда произошли значительные изменения в
этиологической структуре возбудителей, и на первое место выдвинулась
проблема роли нарушения биоценоза в формировании иммунодефицитов.
Цель и задачи исследования. Цель работы - выявить физиологические особенности формирования иммунных реакций у человека на Севере в зависимости от типа антигена инфекционного профиля.
Для достижения поставленной цели определены следующие задачи:
Изучить соотношение состояния фагоцитарной защиты, сорбционную активность клеток эпителия слизистых и содержания IgA в зависимости от специфики антигенного воздействия.
Выявить механизм взаимосвязи интенсивности фагоцитоза с активностью фагоцитарной защиты, сорбционной способностью клеток эпителия слизистых и содержанием секреторного IgA.
3. Установить роль провоспалительных цитокинов в регуляции
иммунной реакции процессов лимфопролиферации и дифференцировки.
4. Выяснить зависимость регуляции антител ообразования и
формирования циркулирующих иммунных комплексов от специфики
антигенного воздействия.
5. Изучить частоту развития аутоиммунных реакций, сопровождающих
формирование иммунного ответа на антиген.
Положения, выносимые на защиту:
1. Установлена зависимость повышения интенсивности фагоцитоза от степени снижения активности фагоцитов, сорбционной способности клеток эпителия слизистых оболочек, а также дефицита slgA; наиболее выраженная активизация данного механизма защиты происходит при резком снижении активности фагоцитов. Увеличение концентрации нормальной микрофлоры
слизистых оболочек происходит при отсутствии компенсации недостаточности фагоцитарной защиты и сорбционной активности эпителия.
2. Уровень пролиферативных реакций иммунокомпетентных клеток и
дифференцировки цитотоксических фенотипов Т-лимфоцитов соразмерен
реакции провоспалительных цитокинов. Полноценный гуморальный
иммунный ответ с нарастанием концентраций IgM, IgG и IgA реализуется
при повышении в крови поздних антителообразующих В-лимфоцитов
фенотипа CD22+.
3. В иммунной реакции на антигены инфекционной природы
регистрируется высокий уровень аутоантитело образования к двухспиральной
ДНК и комплексу рибонуклеопротеидов, в том числе и у детей; активизация
данного типа аутосенсибилизации происходит на фоне повышенных
концентраций Т-клеток с антигенами к комплексу гистосовместимости
класса II.
Научная новизна исследования. Впервые установлены приспособительные реакции, компенсирующие дефицит slgA и сорбционной способности эпителия.
Впервые доказано, что уровни процессов лимфопролиферации и дифференцировки цитотоксических лимфоцитов предопределяют реакции повышения содержания провоспалительных цитокинов.
Впервые выявлено, что реакцию противоинфекционного иммунитета сопровождает повышение содержания аутоантител к двухспиральной ДНК и комплексу рибонуклеопротеидов.
Впервые показано, что повышение концентрации представителей нормальной микрофлоры слизистых оболочек зависит от недостаточной активности сорбционной способности клеток эпителия.
Научно-практическая значимость исследования. Полученные данные о частоте формирования транзиторных иммунодефицитных состояний на фоне инфицирования различными микроорганизмами являются
7 основанием для своевременного назначения иммуномодулирующих
препаратов и сорбционной терапии.
Отсутствие нарастания содержания поздних В-лимфоцитов (CD22+) в динамике иммунной реакции может быть использовано как критерий недостаточности гуморального ответа при оценке эффективности вакцинации и состояния напряженности гуморального иммунитета.
Результаты исследования могут быть использованы в научно-экспериментальных исследованиях в области иммунологии, клинической медицины, эпидемиологии, а также в учебном процессе на кафедрах физиологии, микробиологии с курсом иммунологии, клинической иммунологии, а также клинических кафедрах медицинских университетов.
Результаты исследования используются врачами медицинской компании «Биокор» при проведении дифференциальной диагностики заболеваний и в качестве критерия эффективности лечебно-профилактических мероприятий (акт внедрения от 20.02.2006 г.), а также в работе врачей микробиологической клинической лаборатории ФГУ «Северный медицинский центр им. Н.А. Семашко Росздрава» (акт внедрения от 11.11.2005 г.).
Апробация работы. Основные положения работы представлены и обсуждены на IX Всероссийском научном Форуме с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» - «Молекулярные основы иммунорегуляции, иммунодиагностики и иммунотерапии» (Санкт-Петербург, 2005); на V Сибирском физиологическом съезде (Томск, 2005); на I Съезде физиологов СНГ (Сочи, 2005); на международном конгрессе «Иммунитет и болезни: от теории к терапии» (Москва, 2005); на XIII Международном совещании по эволюционной физиологии (Санкт-Петербург, 2006).
Диссертационное исследование выполнено в Институте физиологии природных адаптации УрО РАН (г. Архангельск) в соответствии с планом НИР (номер государственной регистрации 01.2.00101811).
8 По материалам диссертации опубликовано 12 печатных работ.
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 118 страницах
машинописного текста и состоит из введения, 4 глав (обзор литературы,
материалы и методы исследования, результаты исследований и обсуждение,
заключение), выводов и практических рекомендаций. Работа
иллюстрирована 19 таблицами и 11 рисунками. Библиография включает 228
источников (из них 119 отечественных и 109 зарубежных).
Особенности иммунологической реактивности человека в условиях Севера
Среди значительного числа жизнеобеспечивающих систем, система иммунитета выполняет защитную роль [93, 95, 102, 120]. Иммунная система обеспечивает защиту организма от веществ или существ, несущих признаки чужеродной генетической информации: вирусов, бактерий, стареющих, больных, злокачественных, трансплантированных клеток, то есть осуществляет иммунологический надзор [43, 46, 102]. Уникальность иммунной системы обеспечена ее функциональным многообразием: многочисленностью механизмов защиты, факторов резистентности, многоликостью реакций. Не компенсируемые изменения в системе -количественные, качественные, нарушения баланса и взаимодействия приводят к истощению резервных возможностей и развитию патологии [118].
Информация об иммунологической реактивности на Севере заслуживает особого внимания в виду дискомфортности климатических условий жизни. Особенно это касается Севера Европейской территории России. В данном регионе с дискомфортным климатом и напряженной иономагнитной обстановкой сконцентрированы крупнейшие целлюлозно-бумажные комбинаты, полигон для ядерных испытаний, космодром, производство атомных судов, отходы ядерной энергетики [37, 38, 99].
Изучение иммунологической реактивности человека, проживающего на Севере, имеет все основания [1, 9, 13, 17, 36]. Дефицит тепла и инсоляции особенно резко влияют на уровень обмена у человека, заставляя его тратить значительно больше энергии на поддержание гомеостаза, в том числе и температурного. Имеются довольно обширные данные об особенностях метаболических, эндокринных реакций, изменениях со стороны системы крови и кроветворения, свидетельствующих в общем о более значительных затратах человека на жизнеобеспечение в условиях дефицита тепла и инсоляции [2, 8, 24, 26, 48, 66, 72, 99].
Проведено немало исследований, подтверждающих факт зависимости состояния здоровья населения от климато - географических особенностей места проживания [27, 28, 49, 69, 77, 112]. Дискомфортный климат формирует своеобразный региональный уровень жизнеобеспечения, целесообразный в данных конкретных условиях. Однако не ко всем условиям можно безболезненно адаптироваться, а долговременные затраты на адаптацию влекут за собой сокращение резервных возможностей [14, 35, 58,68,80,92, 108].
Одним из вариантов северного экологически зависимого иммунодефицита является низкая активность фагоцитов, как местного, так и общего фагоцитоза [3, 35]. К нарушениям фагоцитоза могут привести внешние и внутренние факторы. К внешним относятся дефицит опсонизации, уменьшение числа фагоцитирующих клеток под воздействием иммуносупрессоров, токсинов микроорганизмов, вмешательство в фагоцитоз со стороны корти костер оидов и уменьшение числа циркулирующих нейтрофилов под воздействием аутоантител к антигенам нейтрофилов и макрофагов. Внутренние дефекты связаны с дефицитом таких ферментов, как миелопероксидаза, НАД- и НАДФ-оксидаза или глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа [103, 150].
Аномальные концентрации циркулирующих иммунных комплексов являются индикаторами антителозависимой цитотоксичности, повреждения тканей и цитоплазматических мембран [111]. Высокие концентрации ЦИК у северян выявляются вне патологических процессов в 16,93% случаев [33]. Известно, что ЦИК тормозят развитие антителообразующих клеток, фагоцитоз, нарушают микроциркуляцию, активизируют комплемент, способствуют цитолизу [60].
Имеются литературные сведения, свидетельствующие о влиянии местного и общего охлаждения на снижение содержания в периферической крови Т-лимфоцитов, В-клеток, антител ообразования у практически здоровых людей [3, 18, 39, 66]. Не вызывают сомнения данные о снижении мобильности клеток, фагоцитарной их активности» в том числе и переваривающей, под влиянием общего охлаждения в условиях in vivo и in vitro [67, 79]. Иными словами, есть все основания судить не только об отдельных отклонениях иммунных реакций в условиях Севера, но и о различиях уровней иммунологических параметров у северян с нормативных позиций.
По данным Л.К. Добродеевой [31, 36] наблюдается снижение содержания общего количества лейкоцитов в условиях Севера. Это снижение определяется относительно низким содержанием нейтрофильных лейкоцитов. Относительное же содержание лимфоцитов и моноцитов на Севере, напротив, выше общепринятых пределов, причем сдвиги в структуре лимфоцитограммы и моноцитограммы наблюдаются в сторону увеличения количества молодых форм, соответственно больших лимфоцитов и промоноцитов.
Исследования, проведенные в отделе экологической иммунологии ИФПА УрО РАН проф. Л.К. Добродеевой установили, что у жителей Севера на фоне относительно высокого содержания циркулирующих лимфоцитов регистрируются минимальные концентрации Т-клеток, особенно функционально активных и специализированных. Наиболее резко указанная закономерность выявляется у женщин, для которых характерны более низкие уровни содержания Т-хелперов, носителей антигенов CD4+. У детей, по сравнению со взрослыми, менее выражены процессы пролиферации и соответственно ниже содержание молодых форм лимфоцитов (CD10+), Т-клеток с рецептором к трасферрину (CD71+), лимфоцитов с антигенами II класса главного комплекса гистосовместимости, а также концентраций ЦИК [23,31,35, 114].
Гуморальный ответ характеризуется низкой активностью антителообразования, что подтверждено относительно различных антигенов, в том числе бактерий, патогенных грибов, вирусов и тканевых детерминант, высокой частотой регистрации дефицита сывороточного IgA за счет его перераспределения и активного синтеза в коже и слизистых [19,30].
Основными факторами, влияющими на иммунную систему на Севере, являются дефицит тепла, недостаточная плотность кислорода в атмосфере, влажность, неблагоприятный ветровой режим, повышенное атмосферное давление, напряженный иономагнитный режим, необычный фотопериодизм [23, 31, 86, 87, 96, 114]. Исследования показали, что при дефиците тепла ниже содержание Т-лимфоцитов CD3+, выше концентрации сывороточных IgM. Снижение плотности кислорода в атмосфере и повышенная влажность коррелируют с увеличением содержания Т-клеток CD5+ и низким уровнем IgA. Повышение атмосферного давления сопряжено с увеличением концентрации сывороточных IgG и IgA; обратная зависимость выявляется относительно содержания циркулирующих в крови нейтрофилов, моноцитов и их фагоцитарной активности. Кроме того, одним из необычных, экстремальных факторов, влияющих на состояние иммунной системы человека на Севере, является резкая фотопериодичность. В течение двух месяцев на территории региона биологическая тьма, ноябрь и февраль относятся к биологическим сумеркам. При недостатке ультрафиолетового спектра резко увеличивается колонизация микрофлоры на коже и слизистых, снижается содержание секреторных антител, комплементарных белков, активность фагоцитоза [32, 42].
Особенности иммунологической реактивности при инфекционных заболеваниях
Результаты исследований, посвященных описанию общих иммунных процессов, безусловно, могут быть распространены на механизмы иммунного ответа, вызванного инфекционным агентом, так как одной из основных функций иммунной системы является распознавание и уничтожение тел и веществ, несущих признаки чужеродной генетической информации, включая возбудителей инфекционных болезней [118]. Однако у инфекционного иммунного ответа есть своя специфика, обусловленная в основном особыми свойствами источников- антигенной стимуляции и объектов иммунной атаки - инфекционных агентов [47]. В связи с этим рассмотрим особенности этих агентов, влияющие на характер иммунного ответа.
В нашей работе часто употребляются такие термины, как условно-патогенные микроорганизмы и безусловно-патогенные микроорганизмы, что определяет необходимость разъяснения этих понятий.
Согласно общей характеристике возбудителей, микроорганизмы могут подразделяться на патогенные, условно-патогенные, оппортунисты [29]. Патогенные микроорганизмы способны вызвать клинически выраженные заболевания у здоровых людей. К ним относятся бактерии (золотистые стафилококки, стрептококки группы А, энтеропатогеппые кишечные палочки), многочисленная группа вирусов (ветряной оспы, гриппа, парагриппа, адено-респираторно-синтициальный вирус, краснухи, ротавирусы), грибы (гистоплазмы, кокцидии, криптококки) и простейшие (токсоплазмы).
Условно-патогенные микроорганизмы вызывают заболевания только в присутствии предрасполагающего фактора- Факторами, предрасполагающими к развитию инфекции, вызванной условно-патогенными микроорганизмами, могут быть нерациональное назначение антибиотиков, других антимикробных препаратов, гормонов и ферментов. К группе условно-патогенных бактерий относятся эпидермальные стафилококки и микрококки, стрептококки групп В, С, F ,G, энтерококки, бациллы, энтеробактерии родов протея, клебсиелл, псевдомонад. В данную же группу входят дрожжеподобные грибы рода Кандида [29],
Заболевания, вызванные условно-патогенной микрофлорой, занимают ведущее место в инфекционной заболеваемости. Известно, что возникновение патологии от условно-патогенной микрофлоры возможно при четырех обстоятельствах: -заражение очень большими дозами (пищевые токсикоинфекции , инвазии за счет обильного размножения в экссудате постоянных обитателей слизистых и т.д.); -усиление вирулентности (формирование госпитальных штаммов в стационарах при экзогенном заражении); -ослабление макроорганизма (лучевая болезнь, СПИД, др.иммуннодефицитные состояния); -заражение необычными, эволюиионно не обусловленными путями заражения в ткани, не имеющие достаточно выраженных местных ресурсов защиты (вся гнойно-септическая патология в стационарах хирургического профиля) [119],
Группой исследователей доказано, что оппортунисты генерализованную инфекцию вызывают у лиц с выраженным снижением уровня иммунологической реактивности [4, 6, 7]. Они занимают важное место в структуре гнойно-септических процессов, однако ранее практически не учитывались. Большинство представителей данной группы основной свой жизненный цикл проводили или во внешней среде или в организме других видов. Их называют оппортунистами за то, что размножаются они в организме человека только при наличии явного или скрытого дефицита иммунной системы, К ним относятся из бактерий представители родов Листерий, Микобактерий, Серрациа; из простейших Пневмоцисты, некоторые исследователи к данной группе относят вирусы герпеса и цитомегалии [106, 195]. Роль вирусов в патогенезе гнойных и гнойно-септических процессов двойная: обеспечивают нарушение целостности цитоплазматических мембран клеток и в дальнейшем - возможность внутриклеточного размножения бактерий, грибов и паразитов; угнетают иммунологическую реактивность организма, способствуя распространению инфекции [106].
Известно, что само по себе присутствие микробов в ране еще не делает развитие инфекции обязательным [47, 110, 127], Инфекционный процесс развивается при нарушении равновесия между микробами, загрязняющими рану и защитными силами микроорганизма, что проявляется клиническими симптомами воспаления. Наиболее частым проявлением дисфункции, дисбаланса иммунной системы является нарушение биоценоза кишечника, кожи, слизистой с заселением условно-патогенными микроорганизмами и микробами-оппортунистами [6, 7].
Общая характеристика обследованных лиц
Для анализа этиологической структуры воспалительных процессов проведено обследование 1628 человек в периоды с 1984 по 1988 гг., с 1994 по 1997 тт., с 2002 по 2003 год (табл. 1). В данную группу вошли пациенты ФГУ «Северный медицинский центр им. НА. Семашко Росздрава» с различными воспалительными заболеваниями (пневмонии, ангины, фарингиты, отиты, гнойные синуситы, пиелонефриты, артралгии, ревматизмы, гнойные раны). Бактериологические исследования проводились в лаборатории биологии клетки ИФПА УрО РАН. 1 группа - лица, состав микрофлоры на слизистых которых приближался к нормальному, то есть состоял в основном из представителей условно-патогенной микрофлоры (190 человек). Однако количество микробных клеток на грамм/миллилитр материала существенно превышало физиологический уровень, что дало нам основание обозначить это явление термином "аутоинфекция", и отнести сюда данную группу обследованных. 2 группа - лица, у которых по результатам бактериологического обследования наблюдалось присутствие Str.pyogenes на слизистых (88 человек). 3 группа - лица, с наличием St.aureus в составе микрофлоры слизистых (82 человека), 4 группа - лица, которые на момент обследования были инфицированы Str.pneumoniae (74 человека). 5 группа - лица, на слизистых оболочках которых, кроме условно патогенной микрофлоры были обнаружены также представители рода грибов Candida albigans (214 человек).
С целью изучения цитологической структуры слизистых при воздействии антигенов инфекционного профиля был исследован клеточный состав слизистых у 461 человека, обследованных по поводу изучения иммунного статуса.
В группу сравнения вошла группа практически здоровых взрослых, в составе 100 человек, и группа практически здоровых детей, также состоящая из 100 человек, проживающих в Архангельске и Архангельской области, В группу практически здоровых отбирались лица, у которых на момент клинического обследования не было выявлено никаких хронических или рецидивирующих заболеваний.
Комплекс иммунологического исследования включал : - исследование лимфоцитов: определяли фенотипы Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов: лимфоциты с рецепторами CD5+ (общая популяция Т-лимфоцитов), CD3+ (зрелые Т-лимфоциты), CD4+ (хелперы, индукторы), CD8+ (цитотоксические Т-лимфоциты), CD 10+ (клетки с рецепторами, отражающими лимфопролиферацию), CD16+ (естественные киллеры), HLA DR (Т-лимфоциты, активированные через рецептор к сублокусу главного комплекса гистосовместимости класса II), CD22 (В-лимфоциты); -исследование нейтрофильных лейкоцитов: определяли фагоцитирующую способность нейтрофилов, сюда вошли такие параметры, как процент активных фагоцитов и фагоцитарное число; -исследование сорбционной способности клеток эпителия слизистых оболочек; -определение содержания некоторых цитокинов: интерлейкин-1 (IL-1), интерлейкин-2 (IL-2), фактора некроза опухоли-а (TNF-a); -определение содержания раково- эмбрионального антигена (РЭА); -определение содержания сывороточных иммуноглобулинов А, М, G, Е и циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК); -определение уровней аутоантител к двухспиралыюй ДНК, комплексу рибонуклеопротеидов, Кровь для исследования брали из локтевой вены (10 мл) утром, 9-Ю часов утра, натощак. Содержание в периферической крови лимфоцитов изучали в мазках крови, окрашенных но Романовскому - Гимзе при иммерсионном увеличении объектива 90 и окуляра 7. Для регистрации клеток использовали клавишные лабораторные счетчики. Производили подсчет 100 клеток. Данные анализа лейкоцитарной формулы выражали в процентах [50].
Для получения лейкоцитарной взвеси венозную кровь, взятую в асептических условиях, помещали в пробирку с гепарином в количестве 5-10 мл из расчета 20 ед. на 1 мл крови, выдерживали при комнатной температуре в течение 1,5 часа для оседания эритроцитов, после чего плазму с элементами белой крови отсасывали в стерильную пробирку и центрифугировали 5 минут при 1000 оборотах в минуту. Надосадочнуго жидкость удаляли и вместо нее наливали раствор Хенкса без ионов кальция и магния в том же объеме. После смывания клеток со дна и стенок пробирок проводили дважды дополнительное центрифугирование отмытых форм. Осадок клеток ресуспензировали в среде 199 с 10% бычьей сывороткой. Субпопуляции лимфоцитов определяли методом непрямой иммунопероксидазной реакции с использованием моноклональных антител на препаратах лимфоцитов типа «высушенной капли» (НПЦ МедБиоСпектр г. Москва), Выделение мононуклеаров из периферической крови проводили по методу A, Boymn [138], После выделения в градиенте фикол-верографин 0,5 млн. лейкоцитов наносили каплю на предметное стекло, осторожно помещали его на 20 минут в бытовой холодильник при температуре 4 градуса. Таких капель на стекле может быть несколько. По завершению инкубации остатки жидкости высушивали при комнатной температуре. На высушенную каплю наносили 20 мкл 0,30% раствора перекиси водорода (1мл 3% аптечной перекиси водорода +9 мл дистиллированной воды) на 10 минут при комнатной температуре для блокады эндогенной пероксидазы. Промывали каплю 5 раз на 100 мкл физиологического раствора, стряхивали, вносили 20 мкл хорошо перемешанного раствора моноклонального антитела, инкубировали I час при комнатной температуре под чашкой Петри. Далее наносили 20 мкл хорошо перемешанного пероксидазного конъюгата. Инкубировали 1 час. После окончания инкубации наносили раствор хроматогена; 10 мл физиологического раствора и 1 таблетка диаминобензидина и после полного ее растворения добавляли 100 мкл 0,3% перекиси водорода, по 200 мкл на каплю. Инкубировали от 1 до 10 минут под визуальным контролем до появления окрашивания. Отмывали указанным ранее способом и докрашивали ядра 2% раствором бриллиантовой зелени.
Этиологическая структура воспалительных процессов на Севере
Представляло интерес изучение в сравнительном плане этиологической структуры воспалительных процессов на Севере в динамике. Так как наиболее частым проявлением дисфункции иммунной системы является нарушение биоценоза кишечника, кожи, слизистой с заселением условно-патогенными микроорганизмами и микробами-оппортунистами, нами был изучен характер выделяемой микрофлоры при вышеуказанных процессах, для чего проведен количественный и качественный анализ микрофлоры мочи, гноя, отделяемого зева, мокроты. Исследования проводились по результатам микробиологического анализа 1628 человек, пациентов ФГУ «Северный медицинский центр им. Н.А. Семашко Росздрава». Анализ данных микробиологического исследования проводился в лаборатории биологии клетки ИФПА УрО РАН с 1984 по 2004 годы.
Рассмотрим этиологическую структуру и распространенность воспалительных процессов, вызванных патогенными микроорганизмами на Севере в период 1984—1988ГГ,, 1995-1997гг„ 2002-2003 гг. (табл. 3).
Золотистый стафилококк (Stahpylococcus aureua) в зависимости от года наблюдения и характера исследуемого материала высевается в 4,91—49%, Наиболее часто данный представитель выделяется из зева и гноя (47,65—49,01%), реже всего выделяется с мочой (4,91—25,83%). В среднем из гноя за эти годы частота выделения золотистого стафилококка составила 34,67%, из зева - 31,68%, из мокроты и мочи соответственно 16,15% и 15,80%. Средние данные по этиологической роли золотистого стафилококка в воспалении составили 25,31 % (рис, 2). Анализируя данные за первый период времени (1984—1988 гг.) по разным материалам можно сказать следующее: в гное наиболее часто выделяется St aureus (35,51%). В моче преобладает St epidermidis (45,82%), в мокроте - Е. Coli (49,20%), в отделяемом зева - Str. pyogenes (43,52%). Изучая результаты анализов за 1995—1997 гг. можно установить следующее распределение микроорганизмов: в моче и гное наиболее часто выделяется St epidermidis (соответственно 29,30% и 27,30%), в мокроте Str. faecalis (29,20%), в отделяемом зева- Str pyogenes (33,31%) Анализ распределения возбудителей за 2002—2003гг. показал, что в гное наиболее часто выделяется St, aureus (49,01%), в моче преобладает Е. Coli (45,05%), в мокроте и отделяемом зева - Str» pyogenes (соответственно 50,75% и 83,70%),
Таким образом, выявлена неоднозначность распределения микроорганизмов в рассматриваемые периоды времени. Соотношения и взаимосвязи между ними будут изложены далее.
В следующей таблице 5 обобщены данные по распределению микроорганизмов в исследованных материалах.
Анализируя данные по такому показателю, как вид материала, можно сделать следующие выводы, В гное преобладает St. aureus (34,66%), в моче -Е. Coli (31,33%), St. epidermidis (29,91%), Str. faecalis (21,22%), в мокроте -Str, pneumoniae (39,71%), в зеве - Str. pyogenes (53,50%).
Таким образом, отмечается неравномерное распределение микроорганизмов в зависимости от исследуемого материала, что можно объяснить тропностью возбудителя к определенным органам и тканям организма. В связи с этим дальнейшие расчеты и выявление соотношений исследуемых показателей будут проводится с учетом выявленной зависимости.
На основании полученных данных, учитывая значимость удельного веса микроорганизма в том или ином материале исследования, можно выделить группы возбудителей, преобладающих в определенные промежутки времени (табл. 6).
Наиболее часто высеваемыми микроорганизмами в период 1984—1988гп оказались St. epidermidis (45,82%), Str. pyogenes (43,52%), Str. pneumoniae (41,72%), процент встречаемости Candida составил 25,02%,
С 1995 по 1997 гг. преобладающими микроорганизмами являются Str. pyogenes (33,31%), St epidermidis (29,30%), Str, pneumoniae (23,31%), E. Coli (23,70%), частота выявления Candida составила (27,33%).
Представители безусловнопатогенной микрофлоры, такие как Str, pyogenes (83,71%), Str. pneumoniae (49,10%), St. aureus (49,01%), занимают доминирующую позицию в 2002—2003 годах, грибы рода Candida встречаются в 17,75% случаев.
Обобщая полученные данные, можно заметить, что наиболее распространенными инфекционными агентами, присутствующими на слизистых обследуемых, в период с 1984 по 2003 год являлись представители безусловно-патогенной микрофлоры (42,63%) (рис.3). Это можно объяснить, например, снижением иммунного статуса организма человека на Севере и неблагоприятными экологическими условиями.
