Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 9
1.1. Особенности иммунного статуса у жителей Европейского Севера 9
1.2. Особенности иммунитета у детей 13
1.3. Патология иммунной системы 19
1.4. Компенсаторные механизмы регуляции иммунного гомеостаза 24
1.5. Основные принципы иммунокоррекции 26
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 30
2.1. Краткая характеристика используемых в работе признаков, характеризующих состояние иммунной системы 32
2.2. Методы исследования иммунной системы 38
2.3. Характеристика препаратов, применяемых для иммунокоррекции 42
ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований и их обсуждение 45
3.1. Состояние иммунологической реактивности у детей на Севере 45
3.2. Иммунные взаимосвязи у детей и их родителей 54
3.3. Механизмы компенсации дефектов иммунной защиты 63
3.4. Эффективность иммунокоррекции 69
Заключение 79
Выводы 87
Практические рекомендации 88
Список литературы 89
- Особенности иммунитета у детей
- Основные принципы иммунокоррекции
- Краткая характеристика используемых в работе признаков, характеризующих состояние иммунной системы
- Состояние иммунологической реактивности у детей на Севере
Введение к работе
Актуальность темы. Уровень заболеваемости у детей на Севере в значительной степени превышает таковой у лиц, проживающих в более благоприятных климатических условиях (на 5-16 % в зависимости от нозологии). Возрастное формирование иммунной системы у детей отстает на 2-4 года в зависимости от географической широты места жительства и взаимосвязано с торможением развития ряда других жизнеобеспечивающих систем [37; 39].
Основной причиной повышенного уровня часто и длительно болеющих детей являются дефекты иммунной защиты и формирование различных вариантов экологически зависимых вторичных иммунодефицитов. Сведения об уровне иммунодефицитов у практически здоровых детей единичны [122]. Частота распространенности вторичных иммунодефицитов у детей, проживающих на Севере, велика; формирование их проходит на фоне повышенного уровня лимфопролиферации и сокращения резервных возможностей регуляции иммунного гомеостаза [37; 118]. Напряжение фона иммунного гомеостаза задерживает возрастное формирование иммунной системы у детей и неизвестно, как это отражается на окончательном формировании способности иммунологической защиты. Существует много вопросов о половых различиях становления иммунитета у детей. Фактически нет сведений о возможной взаимосвязи формирования иммунодефицитных состояний у детей и их родителей. Выявление совпадений иммунодефицитов у детей и их родителей создает представление о генетической обусловленности восприимчивости к действию иммуиодепрессшшых факторов. И если указанные факты будут выявлены, проблема взаимосвязей первичных и вторичных иммунодефицитов в последующем может быть решаема изучением относительного вклада наследственных факторов и индукторных воздействий в формирование иммунодефицитного состояния. Научные публикации, касающиеся исследований компенсаторных
механизмов регуляции иммунного гомеостаза у практически здоровых людей, немногочисленны и часто носят предположительный характер. Изучение приспособительных, компенсаторных реакций и условий их реализации дает важную информацию о возможностях иммунной защиты в различных ситуациях, о пределах этих возможностей в разграничении нормы и патологии.
Цель и задачи исследования. Цель работы - выявить механизмы формирования вторичных экологически зависимых иммунодефицитов у детей на севере и обосновать необходимость лечебно-профилактических мероприятий для их профилактики. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи: 1.Сравнить частоту дефектов иммунной защиты у детей и подростков в возрасте 8-16 лет, родившихся и проживающих на Севере. 2.Выявить особенности иммунологической реактивности в зависимости от пола.
3.Изучить соотношение дефицитов иммунной системы у детей и их родителей.
4.Выявить механизмы компенсации дефектов иммунной защиты. 5 .Установить механизмы эффективности иммунокоррекции альгинатом кальция водорослевого происхождения. Положения, выносимые на защиту, 1 .На Севере распространены вторичные иммунодефициты у практически здоровых детей; в подростковом возрасте увеличивается риск развития вторичных иммунодефицитных состояний. 2.Формирование дефицита содержания в крови Т-клеток (CD3+) и дефицита фагоцитарной активности у детей в большинстве случаев совпадает с таковыми у матерей; наличие дефицита фагоцитарной защиты у обоих родителей увеличивает риск появления его у ребенка. 3.Выявлены половые различия в формировании вторичных иммунодефицитов у детей: для девочек выше риск нарушения
f
регуляции реагипового механизма и аутоантител о образования; у мальчиков чаще формируется дефицит нейтрофилов, фагоцитарной активности и Т-клеток.
Научная новизна работы. Впервые установлено, что в подростковом
возрасте по сравнению с периодом второго детства резко снижается
активность фагоцитов, сорбционная способность эпителия слизистых и
эффективность компенсаторно-приспособительного увеличения
интенсивности данных реакций.
Показано, что дефицит активности фагоцитов может быть компенсирован повышением адсорбционной способности эпителия слизистых оболочек.
Впервые выявлено, что дефициты содержания в крови фенотипа CD3+ и
активных фагоцитов у матери практически полностью совпадает с таковыми
у детей. Установлено, что предрасположенность к избирательному
дефициту IgA, аутосенсибилизации и активизации реагипового механизма иммунитета у детей не взаимосвязана с таковой у родителей.
Научно-практическая значимость исследования.
Показана распространенность вторичных иммунодефицитов у детей, родившихся и проживающих постоянно на Севере. Выявлен период риска формирования иммунодефицита у подростков. Показана необходимость профилактики экологически зависимых иммунодефицитов у детей на Севере; обоснована эффективность иммунокоррекции. Установленные в работе иммунологические параметры, пределы содержания активированных клеток, иммуноглобулинов, цитокииов могут быть использованы в качестве региональных нормативов оценки резистентности и для лабораторного скрининга донозологических состояний.
Результаты исследования рекомендуются региональным органам здравоохранения для проведения профилактики вторичных экологически-зависимых иммунодефицитов у детей. Материалы диссертации рекомендуются для использования в учебном процессе на кафедрах
физиологии, фармакологии и курсах переподготовки врачей факультета последипломного образования.
Результаты исследования используются врачами медицинской компании «Биокор» при проведении дифференциальной диагностики заболеваний и в качестве критерия эффективности лечебно-профилактических мероприятий (акт внедрения от 12.09.2005 г.).
Диссертационное исследование выполнено в Институте физиологии природных адаптации УрО РАН (Архангельск) в соответствии с планом НИР (номер государственной регистрации 01.2.00101811).
Апробация работы и публикации. Основные положения работы
представлены на IX Всероссийском научном Форуме с международным
участием имени академика В.И.Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-
Петербурге» - «Молекулярные основы иммунорегуляции,
иммунодиагностики и иммунотерапии» (Санкт-Петербург, 2005); на IV
Молодежной научной конференции Института физиологии Коми ІЩ Уро
РАН «Физиология человека и животных: от эксперемента к клинической
практике» (Сыктывкар, 2005); на V Сибирском физиологическом съезде
(Томск, 2005); на I Съезде физиологов СНГ (Сочи, 2005); на международном
конгрессе «Иммунитет и болезни: от теории к терапии» (Москва, 2005); на
Второй Международной научно-практической конференции «Морские
прибрежные экосистемы: водоросли, беспозвоночные и продукты их
переработки» (Архангельск, 2005).
По материалам диссертации опубликовано 13 печатных работ.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 112 страницах машинописного текста и состоит из введения, трех глав (обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты исследований и их обсуждение), заключения, выводов и практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 16 таблицами и 10 рисунками. Библиография включает 225 источников, из них 122 отечественных авторов и 103 зарубежных.
Особенности иммунитета у детей
Особенности иммунитета у детей Иммунная система в организме человека призвана осуществлять иммунологический надзор-контроль над генетическим постоянством внутренней среды организма. Следовательно, иммунитет — это способ защиты организма от живых тел и веществ, несущих в себе признаки статуса, приводит к ослаблению противоинфекционной резистентности, снижению противоопухолевой защиты, увеличению риска аутоиммунных расстройств и заболеваний [43; 55; 87; 94; 102].
Функция иммунологической защиты обеспечивается как песпеци-фическими факторами резистентности, так и специфическими иммунологическими реакциями клеточного (Т-лимфоциты) и гуморального (В-лимфоциты) типов в комплексе с фагоцитарной системой [37; 39; 69; 94].
Неспецифические факторы защиты, являясь филогенетически более древними, созревают и участвуют в защитно-приспособительных реакциях, опережая иммунные факторы и беря на себя основную функцию защиты до окончательного созревания более совершенных иммунных механизмов, что имеет важное значение как у плода, так и у детей первых дней и месяцев жизни.
Неспецифическая защита включает в себя наличие анатомических барьеров для проникновения инфекции — кожа с ее секреторным аппаратом и бактерицидными компонентами секрета потовых и сальных желез, барьеры слизистых оболочек с мукоцилиарным клиренсом в бронхах, моторикой кишечника и мочевыводящих путей. Неспецифическим защитным эффектом обладают очень многие тканевые и циркулирующие клетки-макрофаги. Циркулирующие в крони фагоцитирующие клетки особенно активны в присутствии опсопинов и факторов комплемента. К веществам неспецифической противоинфекционной защиты могут быть также отнесены металлосвязывающие белки сыворотки крови, лизоцим, пропердин, интерфероиы, С-реактивный белок и другие «реактанты острой фазы» [37; 93].
Фагоцитоз филогенетически является одной из наиболее древних реакций защиты организма. Учение о фагоцитозе связано с именем И.И. Мечникова. В процессе эволюции фагоцитарная реакция значительно усложнилась и усовершенствовалась. Фагоцитоз, по-видимому, является ранним защитным механизмом плода. Система неспецифического иммунитета представлена циркулирующими фагоцитами (лейкоциты, полиморфно-ядерные, моноциты, эозинофилы), а также фиксированными в тканях фагоцитами (макрофаги, клетки селезенки, зведчатые ретикулоэндотелиоциты (купферовские клетки) печени, альвеолярные макрофаги легких, макрофаги лимфотических желез, клетки микроглии мозга). Клетки этой системы появляются в относительно ранние сроки развития плода — от 6-й до 12-й недели гестации [71; 94; 195].
Различают микрофаги и макрофаги. Микрофагами являются нейтрофилы, а макрофагами —- крупные мопонуклеарпые клетки либо фиксированные тканевые, либо циркулирующие, относящиеся к моноцитам [107; 112]. Лейкоциты с полиморфными ядрами имеют срок полужизни 6—10 ч. Их функция сводится к захвату и внутриклеточному перевариванию гноеродных бактерий, некоторых грибов и иммунных комплексов. На всем протяжении фетального периода и далее полученные из периферической пуповипной крови лейкоциты новорожденных обладают низкой способностью к фагоцитозу и низкой подвижностью. Если поглотительная способность фагоцитов у новорожденных развита достаточно, то завершающая фаза фагоцитоза еще не совершенна и формируется в более поздние сроки (через 2—б мес). Это, в первую очередь, имеет отношение к патогенным микроорганизмам. У детей первых 6 мес. жизни содержание пефермептных катионных белков, участвующих в завершающей стадии фагоцитоза, низкое (1,09±0,02), затем оно повышается (1,57+0,05). Вместе с тем фагоцитоз представляет собой очень действенный механизм противоипфекциопиой защиты [37; 112]. Эта действенность определяется еще и большим абсолютным количеством тканевых, так и циркулирующих макрофагов и микрофагов. Активность фагоцитоза повышается эффектом опсонизации, в котором кооперативно участвуют сам фагоцит, объект фагоцитоза и белки с опсонизирующими свойствами. Роль последних могут выполнять IgG, СЗ, С-реактивпый белок и другие белки «острой фазы» — гаптоглобин, фибронектин, кислый альфа-гликопротеин, альфа2-макроглобулин. Очень важна опсонизирующая роль фактора Н системы комплемента. Таким образом, в настоящее время система фагоцитоза не может рассматриваться только как эволюциошю-примитивная линия первичной неспецифической защиты. У детей могут наблюдаться первичные и вторичные дефекты фагоцитоза [68]. Первичные дефекты могут касаться как микро- (иейтрофилов), так и макрофагов (мононуклеаров); они могут передаваться ил поколения в поколение, т. е. наследоваться. Передача дефектности фагоцитарной реакции может быть сцеплена с Х-хромосомой (хроническая гранулематозная болезнь) или аутосомальной, чаще рецессивного типа, что проявляется снижением бактерицидных свойств крови. Обычно дефекты фагоцитарных реакций проявляются увеличением лимфатических узлов, частыми кожными и легочными инфекциями, остеомиелитом, гепатосплепомегалией и др. При этом особенно высока склонность детей к заболеваниям, вызываемым Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Candida albicans (молочница) [68; 79]. Вторичное нарушение фагоцитоза, как правило, приобретенного характера развивается на фоне медикаментозной терапии, например, длительного применения цитостатических препаратов. Как первичные, так и вторичные нарушения фагоцитоза могут определяться как преимущественные нарушения хемотаксиса, адгезии, внутриклеточного расщепления объекта. Наследственные или приобретенные после тяжелых заболеваний или интоксикаций дефекты системы фагоцитоза могут определять и повышение частоты некоторых заболеваний и своеобразие их клинических проявлений [98; 106]. Специфические иммунологические реакции выполняет иммунная система организма, состоящая из центральных и периферических органов иммуногенеза. Конкретный иммунологический ответ при воздействии определенного антигена осуществляется Т- и В-лимфоцитами [71; 87]. Гуморальный иммунный ответ плода и новорожденного оказывается существенно отличающимся от ответа ребенка старшего возраста или взрослого человека как в качественном, так и в количественном отношении [43; 52].
Основные принципы иммунокоррекции
В основе профилактики иммунодефицитных состояний положены следующие принципы: освобождение организма ребенка от продуктов метаболизма, которые накапливаются в результате напряжения иммунной системы, обеспечение организма ребенка дефицитными микроэлементами и витаминами и, наконец, стимуляция отдельных звеньев иммунитета в соответствии с уровнем возрастного отставания.
Из местного сырья получены, апробированы и сертифицированы биологически активные пищевые добавки растительного и водорослевого происхождения, освобождающие от вредных продуктов метаболизма, благотворно влияющих на различные защитные механизмы и пополняющих резервы развивающегося организма Организация лечебно-профилактической работы среди детей основана на данных многолетних динамических наблюдений за состоянием иммунной системы и заболеваемостью детей различных районов Архангельской области.
В комплекс профилактических мероприятий включаются натуральные растительные сорбенты (сегодня лучшими из них являются альгииаты кальция, калия и магния), фиточаи или фитопапитки, содержащие комплекс хлорофилла, витаминов, флавоноидов, микроэлементов и фитомасла или рыбий жир), обеспечивающие антиоксидантное влияние и утилизацию микро- и макроэлементов [41] .
Наиболее удобно в организованном коллективе в качестве сорбента использовать альгинат кальция, калия или магния, добавляя их в пищу во время завтрака или обеда (кисломолочные продукты, каша, салат, овощное рагу) из расчета на одного ребенка в возрасте 7-14 лет по 0,5 г (содержание катиона в этой дозе составляет 0,20 г)_ Различия в дозировке пересчета па кг массы тела нивелируются разницей веса съедаемой пищи и потребности в кальции у детей разного возраста,
Альгиновая кислота является представителем водорослевых
полиуронидов. Накапливается во всех крупных бурых водорослях, особенно в различных видах Laminaria, Macrocistis и Fucus, где содержание её может достигать 50% сухой массы. Альгинаты используются преимущественно, как сорбенты. Активность и специфичность сорбции зависит от концентрации сорбента и катиона. Катион сам по себе, отщепляясь от кислоты, даст свой эффект [41], Эффект влияния катиона (особенно кальция) резко возрастает при одновременном применении фитомасла, которое рекомендуется добавлять в то же блюдо в количестве І чайной ложки (5мл), Хороший эффект получен при использовании масла шиповника, облепихи, алоэ, каланхое, а также оливкового масла и рыбьего жира. Рыбий жир капсулированный очень удобен и используется в количестве 2-х капсул на прием в момент принятия альгината.
В качестве фиточая или фитонапитка наиболее эффективно использовать плоды шиповника, смородины, рябины, черники, малины, листья малины, смородины, черники и брусники, а также траву тысячелистника, ромашки, крапивы, мать-и-мачехи, и одуванчика. Можно использовать напитки из одного растения, хорошо влияют апробированные композиции, сочетающие плоды и траву. Фиточай заваривается из расчета 5г сбора на 150 мл воды, доводится до кипения, настаивается до 30 мин. и подастся в полдник или на ужин. Удобны для употребления растворимые фитонапитки, когда ребенок сам может растворить фитокомплскс в соответствующем количестве воды. Подобное действие оказывают сиропы, в том числе сироп шиповника в дозе 1 чайная ложка в день.
В значительной степени усиливается эффект иммунокоррекции при добавлении в комплекс гематогена в количестве 5 г (1 долька) в день во время обеда. Минимальный курс общей иммунокоррекции составляет не менее 20 дней. В ряде случаев (хроническое течение воспалительных заболеваний) возникает необходимость более глубокого влияния на организм ребенка иммуномодуляторами и антисептическими средствами растительного происхождения. Это возможно в условиях пребывания детей в детских оздоровительных лагерях после обследования ребенка с определением содержания IgA, циркулирующих иммунных комплексов и активности фагоцитоза. Указанный комплекс иммунологических параметров может быть определен при исследовании мочи, кала или слюны; для этих целей совсем не обязательно брать кровь. При выявлении дефицита содержания IgA (менее 1г/л), повышенных, более 2г/л, концентраций ЦИК и низкой активности фагоцитоза (менее 50%) оправдано использование полисахаридов ламинарии дополана или суполана в минимальной терапевтической дозе 5 мг/кг массы тела ежедневно в течение минимум 3-х недель за 30 мин до приема пищи 1 раз вдень [42]
В первые 3 дня формирования нового детского коллектива происходит интенсивный обмен микроорганизмами с последующей их активизацией (преимущественно альфа- или бетта-гемолитические стрептококки, респираторные вируса). В этой ситуации предотвращение обострений хронической инфекции и эпидемического подъема заболеваемости достигается тем, что в течение первых 3-х дней интраназально всем детям 2 раза в день закапывается антисептическое фитомасло по 4 капли в каждый носовой код [36].
Антисептики растительного происхождения содержатся и хорошо сохраняются в различных фитомаслах (ламинарии, можжевельника, пихты, кедра, сосны, тысячелистника, календулы и т.д.), препаратах чеснока (алликор, алисат, каринат и т.д.), а также водных настоях трав, содержащих активные антисептики-фитонциды и фитоалексины. При выявлении признаков гипертрофии миндалин и в случаях хронического тонзиллита одновременно назначается полоскание полости рта антисептиком водного настоя или раствора растительного концентрата указанных выше растений [36; 40].
Краткая характеристика используемых в работе признаков, характеризующих состояние иммунной системы
Гематологические исследования включали определение общего содержания лейкоцитов в венозной крови и лейкограмму для последующей оценки концентраций фенотипов лимфоцитов. Содержание в периферической крови лейкоцитов и показателей лейкоцитограммы определяли с помощью клавишного механического счетчика СЛ-1 (ЗЛО «ЛоиП», С.-Петербург, 1999г.), Для определения содержания лейкоцитов крони стерильным стеклянным капилляром набирали 0,008 мл крови и смешивали её с ОД мл 10% раствора уксусной кислоты, полученную взвесь тщательно перемешивали и заполняли камеру Горяева, Подсчитывали обвісе количество лейкоцитов с применением объектива х20 и окуляра х7 в 20 больших квадратах камеры Горяева и определяли по формуле абсолютное содержание клеток и 1 мл крови. Количество лимфоцитов, моноцитов, нейтрофилов, эозипофилов, базофилов подсчитывали в мазках крови, окрашенных по Романовскому-Гимзе при иммерсионном увеличении объектива х90 и окуляра х7. Для регистрации клеток использовали клавишные лабораторные счётчики.
Производили подсчет 100 клеток. Данные анализа выражали в процентах. Абсолютное содержание клеток определяли подсчётом процентного содержания от общего количества лейкоцитов.
Для получения лейкоцитарной взвеси 5-10 мл венозной крови, взятой в асептических условиях в пробирку с гепарином из расчёта 20 Ед на 1,0 мл крови, выдерживали при комнатной температуре в течение 1,5 часов для оседания эритроцитов, после чего плазму с элементами белой крови отсасывали в стерильную пробирку и центрифугировали 5 минут при 1000 об, в минуту, Надосадочную жидкость удаляли и вместо неё наливали раствор Хенкса без ионов кальция и магния в том же объёме. После смывания со дна и стенок пробирки проводили дважды дополнительное центрифугирование отмытых форм. Осадок клеток ресуспензировали в среде 199 с 10% бычьей сывороткой, доводя концентрацию до 1 106/мл,
Получение отдельных популяций лейкоцитов основано на различиях удельной массы лейкоцитов разных популяций. В качестве градиента плотности использовали водный раствор фикола с добавлением верографипа. Принцип метода состоит в том, что суспензию клеток помещают сверху градиента и центрифугируют. В результате тс клетки, которые имеют плотность больше, чем градиент, проходят через него и скапливаются на дне пробирки, в то время как все остальные остаются над градиентом. Использование градиента позволяет разделять сумму лейкоцитов па отдельные популяции: моноцитоядерные клетки и іранулоцитьі.
Субпопуляции Т-лимфоцитов определяли методом непрямой иммунопероксидазной реакции с использованием моноклональных антител на препаратах лимфоцитов типа «высушенная капля» [21;64], производства «Медбиосттектр» НПЦ (г. Москва) и НПО «ДиапюТех» (г. Новгород). После выделения в градиенте фиколл-верогафип 075 мл лейкоцитов наносили каплю на предметное стекло и помещали на 20 мин. в холодильник при Т=н-4С. По завершении инкубации остатки жидкости высушивали при комнатной температуре. На высушенную каплю наносили 20 мкл 3% раствора перикиси водорода на 10 мин для блокады эндогенной пероксидазы. Каплю промывали 5 раз в 100 мкл физиологического раствора и наносили 20 мкл хорошо перемешанного раствора моноклональных антител, инкубировали в течение часа при комнатной температуре под чашкой Петри на влажной бумаге. Промывали препараты 5 раз в 100 мкл физиологического раствора и наносили 20 мкл хорошо перемешанного пероксидазного конъюгата, инкубировали до появления коричневого окрашивания при комнатной температуре. Ядра клеток докрашивали гематоксилином или раствором бриллиантового зелёного. После высушивания образцов добавляли 20 мкл 50% глицерина и считали число клеток с коричневой зернистостью при объективе х90 окуляре хЮ.
Количественное определение сывороточных иммуноглобулинов проводили методом радиальной иммунодиффузии в геле по Маичини (222). Метод основан па измерении диаметра кольца преципитации, образующегося при внесении исследуемой сыворотки в лунки, вырезанные в слое агара, в которые предварительно диспергирована моноспецифическая сыворотка. В стандартных условиях опыта диаметр кольца преципитации прямо пропорционален кои цент рации исследуемого иммуноглобулина. Оценку колец преципитации соответствующих Tg А и Ig G проводили через 24 часа, соответствующих Jg М через 48 часов. Уровень иммуноглобулинов определяли по калибровочной кривой выражающей зависимость между уровнем иммуноглобулинов и диаметром колец преципитации. Концентрации сывороточных иммуноглобулинов определили с антисыворотками научно-исследовательского Института эпидемиологии микробиологии, а также предприятия биологических медицинских препаратов «Биомед» им. И.И. Мечникова (г. Нижний Новгород). Содержание Ig Е определяли иммуноферментным методом диагностическими наборами производства «Hoffmann-La-Roch (Швейцария). Реакцию оценивали с помощью фотометра «Multiskan MS» фирмы «Labsystems» (Финляндия). Контроль качества выполнения анализа осуществлялся внутрилабораторными методами с применением контрольных сывороток, входящих в комплект наборов. Оценку результатов производили сравнением с прилагаемыми к наборам стандартами. Определение уровня циркулирующих иммунных комплексов проводили помощью тест-набора химической компании «Реакомлекс» (г. Чита), Метод основан на нефелометрии различной растворимости мономеров иммуноглобулинов в составе иммунных комплексов в среде полиэтиленгликоля (ПЭГ-6000). В пробирку набирали 5-6 мл венозной крови без антикоагулянтов и ипкубировали в термостате при t+37 С в течение 2 часов для отделения сыворотки. Полученную сыворотку разводили (0,2 мл сыворотки и 0,4 мл боратного буфера). 1 контрольную пробирку вносили 0,2 мл разведенной сыворотки и 1,8 мл боратного буфера, в опытную пробирку-0,2 мл разведенной сыворотки и 1,8 мл полиэтиленгликоля. Обе пробирки выдерживали при комнатной температуре 2 часа. Фотометрически при длине волн 440 нм определяли процент пропускание по шкале «Т», используя кювету с длиной оптического пути 5,0253. Результаты учитывали, взяв пропускание контрольной пробы за 100%. Калибровочной кривой определяли концентрацию ЦИК в г/л.
Для оценки фагоцитоза применяли диагностические наборы химической компании «Реакомплекс» (Россия)- В 2 силиконовые центрифужные пробирки вносили по 0,1 мл исследуемой крови с гепарином и 0,05 мл зимозапа. Взвесь перемешивали аккуратным встряхиванием пробирок и инкубировали 30 мин в термостате при t +37С, повторно встряхивая через каждые 5 мин. Далее пробирки охлаждали проточной водой и центрифугировали при 1500 об / мин 5-7 минут. Надосадочную жидкость сливали и ресуспензировали в остатке жидкости. Для определения поглотительной активности нейтрофилов из полученной взвеси готовили мазки на предметных стеклах, высушивали при комнатной температуре, фиксировали в смеси Никифорова 20 мин. Отмытые и высушенные мазки микроскопировали при объективе х90 и окуляре х7. Оценка результатов проводилась по фагоцитарному показателю (процент фагоцитирующих клеток из числа сосчитанных нейтрофилов), а также по фагоцитарному числу (числу частиц, поглощенное одним активным нейтрофилом). В исследуемом материале изучали также сорбционную способность эпителия с дифференциацией степени способности 10, 50 и 100.
Состояние иммунологической реактивности у детей на Севере
Влияние на иммунитет данных факторов заключается в чрезмерной активации Т-клеток с рецепторами к антигенам класса 2 главного комплекса гистосооместимости. Активация касается и В-лимфоцитов, синтеза Ig5 в том числе IgE . Повышенные концентрации IgE более часто и в больших концентрациях выявляются у детей, что свидетельствует о более резком влиянии комплекса неблагоприятных факторов на иммунную систему у ребенка. Итак, среди обследованных детей регистрируется дефицит IgA и нормальных киллеров при необычно высокой активации со стороны Т-лимфоцитов HLA DR+ и синтеза IgE. Следовательно, у детей отставание возрастного формирования иммунной системы с дефицитом IgA резко выражено. Установлены сильные положительные корреляционные взаимосвязи у детей между фагоцитарной активностью и сорбционной способностью эпителия (г=0.,9) (рис.2). Выявлены средние положительные корреляционные взаимосвязи между фагоцитарной активностью и IgA (г=0,64), фагоцитарной активностью и % активных фагоцитов (г=0,3) Регистрируется средняя отрицательная корреляционная взаимосвязь между фагоцитарной активностью и ЦИК (г= - 0,64), Вторичные, или приобретенные, иммунодефициты определяют как нарушения иммунной защиты организма, развившиеся в постнатальном периоде вследствие действия ненаследственных индукторных факторов (внешних или внутренних). Фактически эти иммунодефициты лишены самостоятельности, имея статус состояния, сопутствующего известным заболеваниям или действию повреждающих факторов.
Роль наследственного фактора в развитии вторичных иммунодефицитов не исключается, поскольку чувствительность иммунной системы к действию причинных факторов развития иммунодсфицитных состояний варьирует, часто в зависимости от наследственности. Однако наследственные факторы сами по себе, без действия индуктора недостаточны для проявления вторичного иммунодефицита. Проблема взаимоотношений между понятиями первичных и вторичных иммунодефицитов может быть сведена к относительному вкладу наследственных факторов и индукторных воздействий в формирование иммунодефицита.
Нередки ситуации, когда действие индуктора иммунодефицита выражено слабо, и проявление реакции на него иммунной системы обусловливается наследственным предрасположением- Общеизвестно, что частые инфекции и простудные заболевания — основное проявление многих форм иммунодефицитов, как первичных, так и вторичных. В этих случаях возникает вопрос, следует ли расценивать хронические легочные процессы как причину вторичных иммунодефицитов или как проявление первичных иммунодефицитов, приводящее к его усугублению. Как правило, такие случаи трактуются как вторичный иммунодефицит. Наоборот, многообразные проявления иммунодефицита, сопутствующего системному кандидозу кожи и слизистых оболочек, трактуются как первичный иммунодефицит. Можно представить условную шкалу, на которой иммунодефицита различной природы расположены по убыванию их зависимости от наследственного фактора и нарастанию зависимости от внешних по отношению к иммунной системе воздействий. На этой шкале крайние позиции займут первичные иммунодефнциты, при которых заболевание практически определяется конкретной мутацией (например, сцепленный с полом тяжелый комбинированный иммунодефицит), и вторичные иммунодефнциты с четко выраженной зависимостью от причинного фактора (например, радиационный иммунодефицит или СПИД, при которых поражение иммунитета минимально модулируется наследственными факторами). Между этими полюсами располагаются другие формы иммунодефицитов. Задача состоит в том, чтобы найти границу, которая разделяет первичные и вторичные иммунодефнциты. Для этого необходимо оценить соотношение вкладов наследственного и «внешнего» факторов» Практическая значимость подобного разграничения будет возрастать по мерс совершенствования гепотсрапии, применение которой должно быть продуктивным при первичных, но не при вторичных имму но дефицитах.
Разграничению двух форм иммунодефицитов могут помочь данные о соотношении сроков развития оппортунистических инфекций и действия факторов, которые обычно расценивают как индукторы вторичных иммунодефицитов. Проявление оппортунистических инфекций до действия указанных факторов сидетельствует в пользу первичное дефицита, их противоположное соотношение во времени — в пользу вторичности иммунодефицитов.
Проведен сравнительный анализ состояния иммунной регуляции у 200 детей и их родителей, проживающих в Эжве и Сосногорске республики Коми. Возраст детей 10-12 лет, возраст родителей в пределах 31-45 лет; в общей сложности обследовано 200 матерей и 200 отцов (таб.7).
