Содержание к диссертации
Введение
1. CLASS Обзор литератур CLASS ы 9
1.1. Отходы мясокомбинатов - перспективное непищевое сырье для микробиологических сред 9
1.1.1. Биохимический состав матки, плаценты и эмбрионов (плодов)
1.1.2. Использование плацентарно - эмбрионально - маточного материала в микробиологических средах 15
1.2 Бруцеллы 17
1.2.1. Биохимические и культурально-морфологические свойства бруцелл 17
1.2.2. Питательные среды для бруцелл 20
2. Собственные исследования 30
2.1. Материалы и методы исследований 30
2.2. Результаты собственных исследований 40
2.2.1. Биохимический состав различных гидролизатов 40
2.2.2. Оценка эффективности использования среды с ГПЭМ для культивирования бруцелл
2.2.2.1. Варианты питательной среды для бруцелл на основе ГПЭМ 47
2.2.2.2. Изучение культивирования бруцелл на средах с ГПЭМ 51
2.2.2.2.1. Использование агаровой среды на основе ГПЭМ 51
2.2.2.2.2. Использование бульонной среды на основе ГПЭМ 66
2.2.3. Оценка эффективности использования среды с ГМЯК для культивирования бруцелл 71
2.2.3.1. Варианты питательных сред на основе ГМЯК 71
2.2.3.2. Изучение культивирования бруцелл на средах с ГМЯК 72
2.2.3.2.1. Использование агаровой среды на основе ГМЯК 72
2.2.3.2.2. Использование бульонной среды на основе ГМЯК 79
2,2.4. Возможности применения сред на основе ГПЭМ и ГМЯК для культивирования других микроорганизмов 88
2.2.4.1. Ростовые свойства сред на основе ГПЭМ и ГМЯК для микоплазм и микобактерий 88
2242 Ростовые свойства сред на основе ГПЭМ и ГМЯК для Е. coli, М. lysodeicticus и St. aureus 92
3. Обсуждение полученных результатов 94
Выводы 97
Практические предложения 99
Список литературы 99
- Использование плацентарно - эмбрионально - маточного материала в микробиологических средах
- Результаты собственных исследований
- Использование агаровой среды на основе ГПЭМ
- Ростовые свойства сред на основе ГПЭМ и ГМЯК для микоплазм и микобактерий
Введение к работе
Актуальность темы. Совершенствование мер борьбы с инфекционными заболеваниями напрямую связано с улучшением их микробиологической диагностики. Для этого необходимы эффективные питательные среды надлежащего качества, применение которых, наряду с решением соответствующих задач, обеспечит реальные предпосылки для моделирования процессов культивирования бактерий и создания алгоритмов производства медико-биологических препаратов.
Номенклатура выпускаемых питательных сред постоянно расширяется, их качество улучшается. Однако в целом межведомственная проблема питательных сред продолжает оставаться актуальной, поскольку научные и практические учреждения нашей страны все еще не в полной мере обеспечены качественными микробиологическими средами. Такое положение сложилось в результате несоответствия между возросшей значимостью питательных сред и знаниями, которыми располагает микробиологическая наука по вопросам их конструирования (Б.М. Раскин, ГЛ. Калина, 1988 и др.).
Конструирование и производство питательных сред - одна из важнейших проблем биотехнологии вообще, и ветеринарной - медицинской микробиологии в частности (Г.А. Смирнова, 1991).
Общеизвестен слабый рост ряда микроорганизмов, используемых в производстве различных бактериальных препаратов, на синтетических питательных средах с источником азота в виде аммонийных солей ввиду недостаточности так называемых ростовых веществ (Ю.А. Козлов, 1950; М.О. Бир-гер, 1982 и др.).
На практике чаще используют полусинтетические среды с добавлением в качестве источника азотистого питания гидролизатов (казеина, мяса, рыбопродуктов и др.) с известными показателями аминокислотного спектра и величиной аминного азота. В зависимости от питательной потребности микроорганизмов, уменьшая или увеличивая содержание гидролизата в ереде, можно регулировать в ней уровень аминного азота в определенных пределах (Л.Я. Телишевская, 2000 и др.)
Несмотря на многообразие существующих сред для культивирования и индикации возбудителей инфекционных болезней животных и человека, проблема повышения их эффективности путем замены традиционно применяемых пищевых белков мяса, печени, рыбы и яиц остается актуальной (Ра-вилов А.З. и соавт., 1999). Дороговизна микробиологических сред на основе мясо-молочных и других пищевых продуктов, применяемых в производстве вакцин и других биологических препаратов, резко повышает себестоимость последних. Взамен мясных питательных сред нашли применение гидролизаты из растительного и непищевого сырья животного происхождения (И.Н, Бабушкин, 1964; К.Д. Геслаидзе, 1968; Л.А. Дерябина, 1971; Н.М. Алтунян, 1973; СИ. Цыганкова, Л.И. Трусова и др., 1982; А.Л, Винник, А.К. Варгина, 1986; А.П. Простяков, 1988; и др.).
Исследованиями, проводимыми на протяжении нескольких лет в ФГНУ ВНИВИ (ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»), обнаружены высокие ростовые свойства для ряда микроорганизмов различных систематических групп гид-ролизатной основы из плацентарно-эмбрионально-маточного материала стельных животных (ГПЭМ) и маточной ткани яловых коров (ГМЯК), являющихся отходами производства мясокомбинатов (Н.К. Мамлеева и др., 1993; Р.Я. Гильмутдинов и др., 1995; М.П. Торбина и др., 1996; Е.К. Акимов, 1999; Х.Н. Макаев и др., 2002; Н.И. Галиакберова, 2003).
Исследования в этом направлении перспективны. Сырье, используемое для изготовления ГПЭМ и ГМЯК в связи с резким подорожанием мясных продуктов, в 20-25 раз дешевле печени и мяса, используемых в традиционных микробиологических средах, а расход его на приготовление среды во много раз меньше.
Цели и задачи исследования. Целью исследований явилась разработка новых основ бактериологических питательных сред из дешевых гидроли 7 затов - отходов производства мясокомбинатов для культивирования бруцелл и других микроорганизмов. В связи с этим были поставлены следующие задачи:
1. Усовершенствовать технологию изготовления гидролизатов из плаценты, мышц плодов, матки стельных животных и матки яловых коров (установить оптимальный температурный режим и сроки гидролиза).
2. Изыскать оптимальные варианты питательной среды для культивирования бруцелл на основе ГПЭМ и ГМЯК.
3. Исследовать культурально-биохимические, морфологические и тинкториальные свойства бруцелл при длительном культивировании на жидких (бульонных) и плотных (агаровых) питательных средах с основой из ГПЭМ и ГМЯК.
4. Изучить ростовые свойства ГПЭМ коров, свиней, лошадей, овец и ГМЯК для микроорганизмов, относящихся к разным систематическим группам (микобактерии, микоплазмы и др.).
Научная новизна. В экспериментах с использованием широкого спектра видов и штаммов бруцелл доказано, что, независимо от видовых особенностей исходных тканей, гидролизаты из плацентарно-эмбрионально-маточного материала крупного рогатого скота, свиней и лошадей, как в отдельности, так и в смеси, являются хорошей ростстимулирующей основой питательных сред для культивирования бруцелл. Впервые теоретически обоснована возможность использования изученных гидролизатоа в качестве полноценного заменителя традиционных основ микробиологических сред.
Практическая значимость. Широкое внедрение в микробиологическую практику новой эффективной питательной среды для бруцелл с использованием дешевого, доступного белоксодержащего сырья из отходов производства мясокомбината, ранее для этих целей не используемого, позволит значительно удешевить производство бактериальных вакцин, и внесет значительный вклад в область микробиологических исследований.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на Всероссийских научно-производственных конференциях по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2002; 2004; 2006); Международной конференции по научным основам обеспечения защиты животных от экоток-сикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний (Казань, 2005); Международной практической конференции по профилактике, диагностике и лечению инфекционных болезней общих для людей и животных (Ульяновск, 2006); Всероссийской научно-практической конференции по перспективам агропромышленного производства регионов России в условиях реализации приоритетного национального проекта «Развитие АПК» (Уфа, 2006).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 работ.
Основные положения диссертационной работы, выдвигаемые для защиты:
- биохимические показатели ГПЭМ и ГМЯК (содержание аминокислот, аминного азота, триптофана, степень расщепления белков, выраженная в соотношении аминного и общего азота и др.);
- варианты экспериментальных сред для бруцелл на основе ГПЭМ и ГМЯК;
- данные протеолитической активности поджелудочной железы разных видов животных;
- результаты длительного культивирования бруцелл на бульонных и агаровых средах с основой из ГПЭМ и ГМЯК;
- применение сред на основе ГПЭМ и ГМЯК для культивирования различных видов микроорганизмов.
Объем и структура работы. Диссертация состоит из разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, выводы, заключение, практические предложения. Работа изложена на 123 страницах компьютер 9 ного текста, содержит 46 таблиц и 5 рисунков. Список использованной литературы включает 232 библиографических источника, в том числе 32 на иностранном языке.
Использование плацентарно - эмбрионально - маточного материала в микробиологических средах
А.А. Клебанова, И.М. Подобедов (1932) и К.К. Белкин (1933) упростили изготовление плацентарных сред. Из измельченной и залитой водой плаценты путем 16-20-ти часового настаивания и последующего автоклавирова-ния готовилась плацентарная вода, к которой добавлялись пептон, хлористый натрий и агар-агар. Отмечен хороший рост на этой среде микробов кишечной группы, стафилококка, пневмококка с сохранением их биохимических и серологических свойств; хорошее пигментообразование у микробов, требующих для роста добавления асцита или крови.
Кроме общепринятой плацентарной воды, Н.В. Бродова (1938) получала из плаценты жидкий пептон и альбумин для приготовления плотной среды состоящей из: 10 г альбумина, 1 г пептона, 0,5 г хлористого натрия на 100 мл дистиллированной воды, с добавлением 2-3 капель 0,5%-го раствора фуксина. Культивирование на ней в течение 2 мес. не влияло на морфологические, биохимические и антигенные свойства штаммов групп коли-, тифа, дизентерии, стрепто- и стафилококка.
А.И. Молчанова, А.П. Балабанова (1940) предложили для изучения свойств тифо-паратифозных штаммов плацентарную агаровую среду, питательной основой которой служили исключительно ингредиенты плаценты человека. Вначале готовили водный раствор из плаценты, затем - плацентарный пептон по Хоттингеру (после приготовления мясной воды, материал последа пропускали через мясорубку, заливали водой 1:2, все кипятили 10 мин., охлаждали до 45С и помещали в бутыль, куда добавляли карбонат натрия -1 г/л, поджелудочную железу и хлороформ). На указанном пептоне и плацентарной воде готовили бульон и агар обычным способом, с добавлением хлористого натрия, карбоната натрия и устанавливали рН в пределах 7,2-7,4.
В.Д. Тимаков, Д.М. Гольдфарб (1958) указали на возможность замены мясных сред плацентарными. По Т.Г. Старковой (1958) на среде, обогащенной кусочками плаценты, вырастают даже прихотливые М. tuberculosis. А.К. Варгина и соавт. (1983) предлагают микробиологическую среду из триптиче-ского гидролизата плаценты человека.
Так как ткани матки и плаценты богаты белками и углеводами, они могут быть использованы в качестве исходного сырья для приготовления питательных сред (Б.П. Хватов, 1955; А.П. Студенцов и соавт., 1986).
Л.Г. Иванова и соавт. (1986) исследовали интенсивность роста и другие биологические свойства (капсулообразование, агглютинабельность и вирулентность) Str. pneumoniae при культивировании на 5 вариантах плацентарной среды.
Л.А. Винник и соавт. (1986) предлагают для повышения выхода биомассы пневмококка в капсульной форме использовать в среде для его культивирования в качестве питательной основы гидролизат плаценты человека с сухим остатком 6,3-7,4 %.
Гидролизаты эмбриональных тканей свиньи, коровы, цыплят дают положительные результаты в бактериальных питательных средах и средах для культур клеток (И.Г. Ермишина, Т.Л. Федорова, 1971; Т.П. Боровикова и соавт., 1994).
Широкий и богатый спектр биологически активных компонентов плаценты человека позволил использовать ее в качестве сырья для получения продуктов, обеспечивающих парентеральное азотистое питание больных (Л.А. Дерябина, 1971). 1.2. Бруцеллы
Весьма требовательной по своим питательным потребностям группой микроорганизмов являются бруцеллы. Работами S. Koser et al. (1919, 1941); J. Crulckshank (1948); L. Rode (1950); T. Sanders et al. (1953) и других исследователей показана повышенная требовательность бруцелл к аминокислотному составу питательной среды и содержанию в ней ростовых факторов. Поскольку наиболее богаты по аминокислотам белки животного происхождения, до настоящего времени в практических лабораториях преимущественно используются питательные среды на их основе. Из субстратов животного происхождения чаще применяются мясо, печень, селезенка (Р.С. Аверкиева, М.М. Ременцова, 1968). В состав многих сред для культивирования бруцелл входит кровь, чаще сыворотка (Н.С. Колесникова, 1961; Дж. Альтон, Л. Джонс, 1968).
Результаты собственных исследований
При изучении биохимических показателей ГПЭМ и ГПМ (крупного рогатого скота) обнаружено, что в ГПЭМ содержание аминного азота и пептидов достоверно выше (Р 0,05), чем в ГПМ (табл.3).
Анализ экспериментальных данных, представленных в таблице 3 характеризующих скорость и глубину гидролиза плацентарно-эмбрионально-маточного материала свидетельствовал, что при осуществлении этого процесса в температурном режиме 42-45 С (в отличие от 37С, согласно ранее разработанного регламента) перечисленные показатели достигали своего максимального значения на 3-4 сутки и сохранялись на этом уровне до его окончания (7 сут.). При этом наблюдался максимальный выход гидролизата с хорошими химическими показателями.
В практике ферментативного (триптического) гидролиза по Хоттингеру используются ткани поджелудочной железы свиней, крупного и мелкого рогатого скота, а также трипсин и панкреатин, активность которых чрезвычайно колеблется. По литературным данным (Д.В. Абрамова, 1991), «панкреати-ны не только различных фабрик и заводов, но даже одного и того же предприятия неодинаковы по ферментативному действию, даже будучи добыты от одного и того же вида животных». Есть сведения о том, что поджелудочная железа свиней дает препараты лучшего качества, с большим выходом трипсина.
В процессе гидролиза плацентарно-эмбрионально-маточного материала нами в сравнительном аспекте исследована ферментативная активность пан 42 креатической железы крупного рогатого скота и свиней (по инструкции: 150
г железы на 1 кг фарша тканей), а также трипсина фирмы «Difco» (1% к массе тканей). Обнаружено (рис, 1, 2), что при использовании панкреатической железы гидролиз протекает более активно, особенно эффективна свиная железа (табл. 4). Различия по величине аминного азота в динамике гидролиза статистически достоверны (Р 0,05).
Как указывалось выше, ГПЭМ включает в себя несколько компонентов: ткани матки, плаценты (80-90%) и мышцы плода (10-20%). Сравнительное изучение биохимических свойств гидролизатов отдельных компонентов ГПЭМ, а также гидролизата маточной ткани яловых коров, являющейся отходом производства мясокомбинатов, показало (рис. 3-5), что по уровню аминного азота, триптофана и пептидов гидролизаты плацентарной ткани и мышц плода отличались в меньшей степени, в отличие от ГМЯК, выделяющейся значительно более высоким содержанием аминного азота и пептидов (различия статистически значимы).Как указывалось выше, ГПЭМ включает в себя несколько компонентов: ткани матки, плаценты (80-90%) и мышцы плода (10-20%). Сравнительное изучение биохимических свойств гидролизатов отдельных компонентов ГПЭМ, а также гидролизата маточной ткани яловых коров, являющейся отходом производства мясокомбинатов, показало (рис. 3-5), что по уровню аминного азота, триптофана и пептидов гидролизаты плацентарной ткани и мышц плода отличались в меньшей степени, в отличие от ГМЯК, выделяющейся значительно более высоким содержанием аминного азота и пептидов (различия статистически значимы).
Использование агаровой среды на основе ГПЭМ
При испытании эффективности питательных сред с ГПЭМ для размножения бруцелл подбирались варианты со сбалансированной смесью необходимых компонентов и в концентрациях, обеспечивающих наилучший рост бактерий.
Таблица 12 дает представление о ростовых свойствах для В. abortus (вакцинные штаммы 19 и 82) сред с ГПЭМ крупного рогатого скота и ГМЯК, изготовленных в рассмотренных ранее вариантах. Результаты исследований свидетельствовали о колебаниях ростобеспе чивающей способности для бруцелл вариантов сред с ГПЭМ №№ 1, 2, 3, и 4, но значительного различия не наблюдалось. В сравнении же с контролем прослеживается четкая тенденция к лучшему росту В. abortus штаммов 19 и 82 на экспериментальных средах с ГПЭМ. Контрольной служила общепринятая бульонная печеночно-пептонная глюкозо-глицери новая среда (1% пептона, 0,5% хлористого натрия, 1% глюкозы, 3% глицерина, 94,5% печеночного бульона). Для приготовления плотных сред дополнительно вводился агар-агар в количестве 2 %.
В качестве объектов исследований использовали вакцинные штаммы В. abortus: 19, 82 и 82-ПЧ.
Результаты изучения свойств исходных культур бруцелл различных штаммов и их репродуцируемых популяций при длительном пассировании на плотных - агаровых (50 пассажей) и жидких - бульонных (30 пассажей) экспериментальных и контрольной питательных средах представлены в таблицах 13-16.
Как видно из таблицы после 10-ти кратного пассирования бруцелл штаммов 19 и 82 на плотных гидролизатных средах, отмечалось некоторое уменьшение количества выросших колоний, возможно, за счет адаптации к новым средам. Штамм 82-ПЧ по числу выросших колоний на гидролизатных средах давал более высокие показатели. В то же время ростовые свойства контрольной и гидролизатной № 2 сред для указанных штаммов бруцелл были сопоставимы. Колонии бруцелл, выращенные на разных средах по величине и форме не отличались - были бесцветными, блестящими, выпуклыми, круглыми, правильно контурированными, с гладкой поверхностью, величиной до 3-4 мм. Характер роста в бульонных средах являлся типичным - равномерное помутнение среды с осадком и образованием пристеночного кольца в процессе старения культуры. Морфологические и тинкториальные свойства бруцелл указанных штаммов, пассированных 10-ти кратно на разных средах, оставались типичными; неподвижные, палочковидной формы грамотрицательные микроорганизмы, беспорядочно расположенные в препарате.
После 30-ти кратного пассирования на плотных средах по числу выросших колоний бруцелл штаммов 19 и 82 отмечалось явное преимущество гидролизатных экспериментальных сред в сравнении с контрольной. Рост бруцелл штамма 82-ГТЧ на гидролизатных средах был примерно одинаковым с контролем. При сопоставлении величин оптической плотности роста бруцелл всех штаммов выявлены более высокие показатели роста на гидролизатных средах, причем на варианте №2 лучше, чем на варианте №1 (таблицы 13, 15). Обращал внимание замедленный рост бруцелл на контрольной среде в сравнении с экспериментальными.
Рост бруцелл (по числу выросших колоний) на экспериментальных гидролизатных средах после 40-кратного пассирования был аналогичен таковому на контрольной среде (штамм 82 - ПЧ) - таблицы 13 и 16. По оптической плотности на экспериментальных, гидролизатных средах наблюдались более высокие показатели роста, причем среда №2 превосходила среду №1. Визуально, колонии бруцелл, выросших на средах с ГПЭМ, были крупнее и рост их начинался в более ранние сроки в сравнении с контролем.
Результаты завершающего опыта по изучению плотных питательных сред с ГПЭМ для вакцинных штаммов бруцелл при длительном (50-ти кратном) пассировании свидетельствуют о сопоставимости по изученным показателям традиционных и экспериментальных сред на основе ГПЭМ, а в большинстве случаев превосходили традиционную среду бруцелл (табл.13). Колонии бруцелл, выросшие на средах с ГПЭМ, были крупнее и рост их начинался в более ранние сроки в сравнении с контрольной средой, причем морфология и тинкториальные свойства бруцелл оставались типичными.
Многократное пассирование на плотных гидролизатных средах не отражалось на биохимических характеристиках бруцелл: все культуры обладали способностью сероводородобразования, разложения мочевины (через 5-6 часов от начала наблюдения происходило полное изменение цвета среды от желтого до малинового, свидетельствующее о положительной уреазной активно 59 сти бруцелл), а также каталазной активностью. Другие свойства пассированных культур на всех этапах исследований также не изменялись, поэтому, в дальнейшем приводятся результаты, полученные после 50-ти кратного пассирования в сравнении с исходными показателями.
Ростовые свойства сред на основе ГПЭМ и ГМЯК для микоплазм и микобактерий
При испытании эффективности питательных сред из ГПЭМ и ГМЯК для размножения бактерий, относящихся к другим, чем бруцеллы, таксономическим группам, подбирались среды со сбалансированной смесью необходимых питательных компонентов в концентрациях, обеспечивающих наилучший рост микроорганизмов. При подборе питательных сред с гидролиза-том ориентировались на характер сред, служащих контролем. Для выращивания Е. coli, Micrococcus lysodeicticus и Staphylococcus aureus таковым служил мясо-пептонный агар (МПА).
Оценка ростовых свойств производилась по учету сроков роста колоний, их количества и морфологии после строго дозированного посева на твердые питательные среды с последующим термостатированием при 37 С.
Из таблицы 46 видно, что количество выросших колоний Е. coli, шт. 0126 на контрольной и гидролизатных средах было примерно одинаковым. Ростообеспечивающая способность сред на основе гидролизатов в отношении тест-культур St. aureus, шт. 209 Р и М. lysodeicticus превышала таковую на контрольной среде МПА. Различие по числу выросших колоний было статистически значимым. Обращали внимание более крупные размеры колоний Е. coli и St. aureus на средах из ГПЭМ овец, лошадей и ГМЯК.
Отмечается необходимость в качестве источника азота для роста бактерий наличия аминокислот в питательных средах (Braun, 1930), причем указывается на значение баланса аминокислотного состава (спектра и концентрации) питательной среды для обеспечения максимальной интенсивности роста бруцелл (L. Rode et al., 1950).
Известна необходимость для роста В. suis таких аминокислот, как гис-тидин, тирозин, фенилаланин и триптофан (М Cullough et al., 1947). По содержанию именно этих компонентов ГПЭМ сопоставим с ТПС, только по количеству гистидина уступает ФГМ в 2 раза.
С другой стороны, аланин, содержание которого может привести к снижению вирулентности бруцелл и появлению диссоциированных вариантов (М.К. Юсковец, А.И. Колесов, 1955) сопоставим по количеству в ГПЭМ, ФГМ и ТПС.
По количеству метионина, который отдельные исследователи (Д.Н. Донской и соавт., 1983) специально вводят в синтетические среды для бруцелл, ГПЭМ сопоставим с ТПС и лишь незначительно уступает ФГМ и ГЛА.
Для оптимизации среды с ГПЭМ в его состав нами введены также хлористый натрий (0,5 %), глюкоза (1 %), глицерин (3 %) и, в варианте плотной среды - агар-агар (2 %). Из 5 исследованных вариантов сред, этот был наиболее оптимальным для В. abortus 82, но незначительно уступал В. abortus 544 варианту среды № 2 и для В. suis 1330 - варианту № 4 (табл. 7).
При этом выявлены количественные различия в содержании аминного азота и петидов в ГПЭМ коров, свиней, овец и лошадей (табл. 8): максимум имел место в ГПЭМ лошадей, в то же время по ростовым свойствам для В. abortus 544, В. suis 1330 и В. melitensis 16-М преимущество наблюдалось у ГПЭМ коров. Таким образом, рассматриваимые показатели оказались не столь принципиальными. Возможно в данном случае на ростовых свойствах сред, а именно количестве выросших колоний, сказывалось не столько со 95 держание аминного азота и пептидов, сколько наличие и концентрация тех или иных аминокислот или другие факторы. В целом же среда с ГПЭМ превосходила по ростовым характеристикам общепринятые для выращивания бруцелл среды: печеночно-пептонный глюкозо-глицериновый агар и агар Д.
Отмечается снижение ростовых свойств питательной среды при увеличении, выше оптимальной, концентрации в ней ГПЭМ, что связано, очевидно, с ингибирующим эффектом повышенных концентраций присутствующих в ней аминокислот. При этом морфологические и тинкториальные свойства бруцелл при многократном пассировании не изменялись,
Вакцины, полученные на среде с ГПЭМ по физическим и морфологическим показателям не отличались от таковых, полученных с использованием традиционных сред.
При определении обсемененности морских свинок бруцеллами, рост последних выявлялся чаще на традиционных средах в отличие от экспериментальных сред с ГПЭМ (в 11 из 130 исследованных случаев, что составляет 12,5%).
Среды с ГМЯК также отличались высокими ростовыми свойствами, но, в отличие от ГПЭМ, на них имелись изменения, свидетельствующие о признаках диссоциации бруцелл в R-форму.
В дополнительных исследованиях показана универсальность среды с основой из ГПЭМ для культивирования различных микроорганизмов (мико-плазм, микобактерий, Е. coli, М. lysodeicticus и St. aureus), причем для Е. coli и St. aureus наилучшие ростовые свойства отмечались на средах из ГПЭМ свиней, а для М. lysodeicticus - из ГПЭМ коров.
Проведены экспериментальные исследования по изучению стабильности бруцелл при многократном пассировании их на бульонной и агаровой вариантах указанных сред. Изучены культуральные свойства В. abortus штаммов 19, 82, 82-ГТЧ, 544; В. suis 1330; В. melitensis 16-М: культурально-морфологические, биохимические, антигенные свойства, рост в присутствии красок, окрашиваемость колоний.
Установлена стабильность основных свойств бруцелл в динамике 5-ти, 10-ти, 15-ти, 30-ти кратного пассирования на жидкой и 5-ти до 50-ти пассажей на агаровой экспериментальной среде на основе ГПЭМ. На среде из ГМЯК при более длительном пассировании (15-ти на жидкой и 30-ти на агаровой) у штаммов В. abortus, 19, 82, 82-ПЧ намечались признаки перехода в R-форму.
В виде обсуждения полученных результатов хочется остановиться на следующем. Известна изменчивость микробов под влиянием разнообразных факторов окружающей среды, в том числе питательной среды для поддержания роста. Предрасположенность к изменчивости бруцелл отмечается многими исследователями. Известно также, что на практике для получения высокого уровня микробной массы используют обогащенные питательные среды с добавлением, например, к печеночному бульону гидролизата Хоттинге-ра, пептона Мартена и других компонентов (Щелковский биокомбинат) и, наоборот, для культивирования в пробирках используют обедненные питательные среды.
