Введение к работе
Актуальность проблемы.
Согласно исследованиям, в России продолжается рост заболеваемости сифилиса с измененной клинической картиной, его атипичных и скрытых форм (Лковбян В.А., 1998; Привалова Н.К., Тихонова ЛИ., 2000). Сложная ситуация сложилась в отношении серорезистеятности - длительно сохраняющиеся положительные результаты серологических реакций после проведенного лечения Особенную тревогу вызывает тот факт, что данное явление зачастую регистрируется среди беременных женщин, что приводит, в ряде случаев, к необоснованному дополнительному лечению, неблагоприятно влияющему на плод (Гусева С.Н., 1999; Аравийская К Р., 2001; Гаевская О.В., 2001). В таких условиях все большее значение приобретает эффективная лабораторная диагностика данного заболевания.
На сеюдняшний день, традиционные методы серодиагностики, и в первую очередь реакция связывания комплемента, не могут служить источником высоко достоверной информации о наличии сифилитической инфекции и не обеспечивают необходимую верификацию выше перечисленных форм сифилиса. Поэтому сохраняется актуальность разработки и внедрения новых и усовершенствования уже существующих методов (Larsen S.A. et al., 1995; Дмигриев Г.А., БрагинаЕ.Е, 1996).
Для повышения информативности методов серологической диагностики необходимо учитывать последние достижения медицинской биотехнологии: возможность получения искусственных аналогов микробных антигенов и их использования в диагностических препаратах (Гражданцева А.А. с соавт., 1998; Обрядина А.П. с соавг., 1999), раздельное выявление классов и подклассов специфических иммуноглобулинов (Климович В.Б., 1996; Кузснкова А.В.. 1998). Возможным подходом к повышению информативности может являться и изменение трактовки результатов серологического тестирования в свете новейших достижений фундаментальной иммунологии.
РОС НАЦИОНАЛЬНА*] БИБЛИОТЕКА ]
OS wo$W&j
Несомненно, метод ИФА позволяет наиболее широко и полно использовать достижения биотехнологии, перечисленные выше Наряду с этим, он обладает такими достоинствами как простота постановки, короткое время анализа возможность автоматизации, высокая чувствительность, инструментальный учет результата, исключающий субъективизм.
Возможным решением проблемы улучшения качества диагностики сифилиса, может стать усовершенствование реакции иммунофлуоресценции (РИФ). В данном методе в качестве антигена используется цельноклеточная пашгенная трепонема, содержащая полный набор антигенных структур микроорганизма. Соответственно данным методом можно регисгрировать антитела к антигенам, не использующимися другими диагностическими методами. Например, к таким антигенам следует отнесіи липополисахаридный компонент внешней мембраны 1 pallidum.
"1 аким образом, цель настоящего исследования заключалась в разработке методов на основе ИФА и РИФ, позволяющих констатировать наличие или ог-суісгвие сифилитической инфекции в диагностически сложных ситуациях.
Для достижения поставленной цели были поставлены следующие задачи-
1. Разработать и оптимизировать ИФА с использованием искусствен
ных аналогов трепонемных антигенов для исследования сывороток крови и слю
ны на сифилис, а также изучить с его помощью динамику и спектр антител в
процессе лечения заболевания и при серорезистентности после проведенной
терапии;
-
Изучить возможность использования для серодиаіностики сифилиса культурального и кардиолипинового антигенов в ИФА-
-
Изучить возможность использования и оптимизирования процесса аффинной хроматографии с целью элиминации иммуноглобулинов класса G из сывороток крови;
4 Обосновать алгориш усіановления серорезисіентности после ра-
нее перенесенной сифилитической инфекции с исполыованием разрабоїанньїх модификаций серологических методов.
Научная новизна работы.
Впервые получены данные о биотехнологических свойствах иммуно-сорбента на основе синтетического трепонемного пептида из области лшюпро-теинаТрр41.
Впервые предпринята попытка конструирования модификаций ИФА, предназначенных для выявления антитрепонемных секреторных IgA слюны и для выявления антикардиолипиновых антител сыворотки.
Впервые адаптирован процесс аффинной хроматоірафии с рекомби-нантным аналогом стрептококкового белка G для конструирования модификации метода РИФ-абс, с целью высокоэффективного одномоментного удаления всех субизотипов иммуноглобулинов класса G из исследуемых сывороток крови.
Практическая значимость. Биотехпологические параметры разработанных авторских вариантов серологической диагностики сифилиса могут быть использованы при проведении научных исследований, а также в практической работе медицинских лабораторий для повышения качества диагностики сифилиса.
Разработанный алгоритм дифференциальной диагностики серологической резистентности позволяет улучшить качество медицинской помощи в дерматовенерологических учреждениях.
Апробация результатов исследования.
Результаты работы доложены на Конференции молодых ученых Смоленской государственной медицинской академии (Смоленск, 2002), Заседании Общества дерматовенерологов і. Смоленска (Смоленск, 2003), Юбилейной конференции, посвященной 80-летию кафедры микробиологии Военно-медицинской академии им СМ. Кирова (Санкт-Петербург, 2003), Заседании Санкг-Петербургского отделения Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов им. И.И.Мечникова (Санкт-Петербург, 2004), Конференции Российско-Шведского проекта «Контроль и профилактика инфекций, передаваемых половым путем» (Санкт-Петербург,
2004), Научной конференции с международным участием «Современные средства иммунодиаіносійки, иммуно- и экстренной профилактики актуальных инфекций» (Санкт-Петербург, 2004).
Результаты исследований внедрены в учебный процесс и диагностическую работу кафедр кожных и венерических болезней и микробиолої ии Военно-медицинской академии им. С.М.Кирова, а іаюке на кафедре дерматовенероло:ии Смоленской государственной медицинской академии.
Положения, выносимые на защиту.
-
Установленные параметры ИФА для выявления антитрепонемных им-муноілобулинов к белковым липопротсинам моїут использоваться для повышения информативности серологической диагаостики сифилиса;
-
Диагностическая эффективность ИФА с кардиолининовым антигеном, авторского варианта РИФабс.-IgM, а также обнаружения специфических секре-юрныч IgA слюны при сифилисе ірсбусі дополнительною изучения.
-
Применение линейно-дискриминантной функции позволяет дифференцировать наличие инфекционного процесса при сифилисе от длительно сохраняющихся положительных результатов греионемных серологических тесшв.
Публикации.
По материалам диссертации опубликовано 7 печашых работ.
Объем и структура диссертации.
Диссертация изложена на 184 сіраницах машинописного текста и включает введение, 6 глав, заключение, выводы, приложение, благодарности, а также список использованной литературы, содержащий 116 источников на русском языке и 91 на иностранных языках В текст включены 37 таблиц и 15 рисунков.
