Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Современные представления о патогенезе и подходах к лечению хронической
недостаточности кровообращения в области вертебрально-базилярного бассейна 11
1.1. Патогенез и клинические проявления недостаточности кровообращения в вертебрально-базилярном бассейне 11
1.2. Подходы к лечению вертебрально-базилярной недостаточности на фоне остеохондроза шейного отдела позвоночника 21
1.3. Современные представления о механизме действия интервальной нормобарической гипокситерапии 24
1.4. Влияние гипоксии на церебральную гемодинамику и мозговые функции 28
ГЛАВА 2. Материал и методы исследования 32
2.1. Объект исследования 32
2.2. Методы исследования 38
2.2.1. Оценка субъективных симптомов ХВБН 40
2.2.2. Методы исследования неврологического статуса 42
2.2.3. Методы исследования нарушений памяти 42
2.2.4. Функциональные методы исследования 43
2.2.5. Лабораторные методы исследования 47
2.2.6. Методы воздействия 53
2.2.7. Статистическая обработка материалов 55
ГЛАВА 3. Исследование влияния интервальной нормобарической гипокситерапии на клинические проявления хронической вертебрально-базилярной недостаточности 56
ГЛАВА 4. Исследование влияния интервальной нормобарической гипокситерапии на мозговой кровоток и микроциркуляцию у больных с хронической вертебрально-базилярной недостаточностью 72
ГЛАВА 5. Исследование влияния интервальной нормобарической гипокситерапии на показатели активности ангиогенеза и оксидативный метаболизм у больных с хронической вертебрально-базилярной недостаточностью 79
ГЛАВА 6. Отдаленные результаты и медико-социальная эффективность использования интервальной нормобарической гипокситерапии в санаторном лечении больных с хронической вертебрально-базилярной недостаточностью 85
ГЛАВА 7. Обсуждение результатов 93
Выводы 104
Практические рекомендации
- Подходы к лечению вертебрально-базилярной недостаточности на фоне остеохондроза шейного отдела позвоночника
- Современные представления о механизме действия интервальной нормобарической гипокситерапии
- Методы исследования неврологического статуса
- Лабораторные методы исследования
Введение к работе
Актуальность темы. Актуальной проблемой медицины является лечение и реабилитация больных с синдромом хронической вертебрально-базилярной недостаточности (ХВБН). Расстройства циркуляции в вертебралыю-базилярной системе (ВБС) обусловливают развитие около 70% всех преходящих нарушений мозгового кровообращения и 30% всех инсультов (Виленский Б.С., 1995, 2000). Преимущественное поражение лиц молодого трудоспособного возраста (40-55 лет), склонность к хронизации и прогредиентности течения, высокая частота случаев временной или стойкой утраты трудоспособности при осложнениях ХВБН, склонность к затяжному течению с неоднократными рецидивами, частое осложнение в виде инсульта определяют необходимость поиска новых методов профилактики и лечения данной патологии (Верещагин Н.В., 1980, Жулев Н.В., 2001).
Медикаментозная терапия ХВБН проводится, как правило, в стадии декомпенсации, либо неустойчивой компенсации. В стадии полной и неполной компенсации ХВБН применяются преимущественно немедикаментозные методы лечения, целью которых является устранение или ограничение ирритации и компремирующего влияния на позвоночную артерию, а также нормализация в ней гемодинамики (Шмидт И.Р., 2001). При этом в комплекс лечебных мероприятий традиционно включают лечебную физкультуру, ручной массаж, электрофорез спазмолитиков и анальгетиков, локальную магнитотерапию. Однако, весь вышеперечисленный арсенал немедикаментозных методов лечения ХВБН оказывает недостаточный и ограниченный по времени эффект, о чем свидетельствуют данные о возрастании распространенности данного синдрома и хронический прогредиентный характер его течения (Яковлев Н.А., Курочкин А.А., Слюсаръ Т.А., 2001). В связи с этим, представляется перспективным
дополнение используемых комплексов лечения этой патологии в период компенсации новыми методами.
Одним из ведущих факторов формирования ХВБН является остеохондроз шейного отдела позвоночника, приводящий на определенной стадии к экстравазалыюй компрессии позвоночных артерий с развитием хронической гипоксии мозга и снижением адаптационных возможностей мозгового кровотока (Кадыков А.Н., 1999), Следовательно, патогенетически обосновано использование методов, развивающих адаптивные возможности системы кровообращения, повышающих толерантность мозговой ткани к гипоксии, а также эффективность функционирования коллатералей и анастомозов и их предуготованность на случай возникновения сосудистого эпизода. Анализ литературы позволил нам предположить, что такие эффекты может оказывать интервальная нормобарическая гипокситерапия (ИНГ), заключающаяся в регулярно повторяющемся воздействии на организм умеренного гипоксического стимула.
К настоящему времени доказана возможность повышения физической и интеллектуальной работоспособности, а также эмоциональной устойчивости с помощью ИНГ (Стрелков Р.Б., Чижов А.Я., 2001). Накоплен значительный опыт по профилактике и лечению ряда заболеваний и патологических состояний: отклонений в антенатальном развитии плода, заболеваний бронхо-легочной, сердечно-сосудистой систем (ишемическая болезнь сердца, гипертоническая болезнь), желудочно-кишечного тракта, эндокринных нарушений, аутоиммунных, аллергических, онкологических заболеваний, анемии и др. (Потиевская В.И., 2002). В доступной литературе мы не встретили данных о применении ИНГ при церебро-васкулярной дисфункции в вертебралыю-базилярном бассейне. В то же время, известно, что при лечении этим методом больных с хроническими заболеваниями системы кровообращения комплексная адаптивная перестройка организма включает не только благоприятные изменения центральной гемодинамики,
но и развитие устойчивости головного мозга к гипоксии, улучшение кровотока в магистральных артериях головного мозга (Чижов А.Я., Караш Ю.М., 1981; Ельчанинова С.А. и др., 2002).
Цель и задачи исследования. Цель работы - разработка новой технологии лечения больных с хронической вертебрально-базилярной недостаточностью путем включения интервальной нормобарической гипокситерапии в комплекс санаторного лечения.
Задачи исследования:
Изучить динамику субъективных симптомов, неврологических синдромов и когнитивных функций у больных хронической вертебрально-базилярной недостаточностью при лечении комплексом санаторных методов, курсом интервальной нормобарической гипоксии и их сочетанием.
Изучить динамику показателей мозгового кровотока и микроциркуляции у больных хронической вертебрально-базилярной недостаточностью при лечении комплексом санаторных методов, курсом интервальной нормобарической гипокситерапии и их сочетанием.
Исследовать влияние интервальной нормобарической гипокситерапии на показатели активности ангиогенеза, оксидативного стресса у больных хронической вертебрально-базилярной недостаточностью.
Оценить отдаленные результаты и медико-социальную эффективность использования интервальной нормобарической гипокситерапии в комплексе санаторного лечения больных с хронической вертебрально-базилярной недостаточностью.
Научная новизна. Разработана и внедрена новая медицинская технология - интервальная нормобарическая гипокситерапия как самостоятельный метод, так и в комплексе санаторной реабилитации больных с хронической вертебрально-базилярной недостаточностью,
Впервые показано положительное влияние курса интервальной нормобарической гипокситерапии на клинические проявления данного синдрома, гемодинамику в вертебрально-базилярной системе, микроциркуляцию. Механизм воздействия интервальной нормобарической гипокситерапии на организм больных хронической вертебрально-базилярной недостаточностью включает нормализацию метаболизма активных форм кислорода, а также возрастание в крови концентрации васкулярного эндотелиального фактора роста и основного фактора роста фибробластов, способных усиливать процессы репарации поврежденного эндотелия.
Практическая значимость работы. Полученные результаты свидетельствуют о возможности использования курса ИНГ при синдроме ХВБН как в виде самостоятельного метода лечения, так и в сочетании с традиционными санаторными методами реабилитации: бальнеолечением, лазеротерапией, магнитотерапией, лечебной физической культурой и классическим массажем. Работа обосновывает клиническую эффективность и экономическую целесообразность нового комплекса методов санаторного лечения ХВБН, включающего курс ИНГ, а также перспективность применения ИНГ в амбулаторно-поликлинической практике.
Показана возможность использования показателей конъюктивальной биомикроскопии, активности основных внутриклеточных антиоксидантных ферментов, общей прооксидантной активности и концентрации тиобарбитуратреактивных продуктов в качестве дополнительных объективных критериев эффективности лечения ХВБН.
Положения, выносимые на защиту.
1. Разработанная новая технология лечения больных хронической
вертебрально-базилярной недостаточностью методом интервальной
нормобарической гипокситерапии вызывает целый ряд благоприятных
клинических и гемодинамических изменений, сохраняющихся в течении года
после его проведения.
2. Сочетанное применение интервальной нормобарической гипокситерапии и
методов санаторного лечения значительно повышает эффективность как в
ближайшем, так и в отдаленном периоде наблюдения.
3. Механизм лечебного эффекта интервальной нормобарической
гипокситерапии при хронической вертебрально-базилярной недостаточности
включает ослабление повреждения эндотелия сосудов вследствие
уменьшения выраженности оксидативного стресса, а также транзпторное
повышение концентрации в плазме крови васкулярного эндотелиального
фактора роста и основного фактора роста фибробластов, способЕшх
стимулировать процессы репарации эндотелия.
Апробация материалов диссертации. Результаты исследований доложены и обсуждены на V Всероссийском научном форуме "Физические факторы и здоровье человека" (Москва, 2002), научной конференции "Курортология и физиотерапия Сибири в концепции развития здравоохранения и медицинской науки Российской Федерации" (Томск, 2002), V Межрегиональной научно-практической конференции "Современные методы диагностики" (Барнаул, 2003), V Межрегиональной научно-практической конференции "Современные методы диагностики" (Барнаул, 2003), 3-й научной конференции "Белки-маркеры патологических состояний" (Астрахань, 2003), V конгрессе с международным участием "Паллиативная медицина и реабилитация в здравоохранении" (Москва, 2003), научной конференции "Курортология и физиотерапия Сибири в концепции развития здравоохранения и медицинской науки" (Томск, 2003), научной
конференции "Компенсаторно-приспособительные процессы:
фундаментальные, экологические и клинические аспекты" (Новосибирск, 2004), научной конференции с международным участием "Проблемы лимфологии и инстерстициального массопереноса" (Новосибирск, 2004), III региональной научно-практической конференции "Современные проблемы восстановительной медицины и курортологии" (Барнаул, 2005), Краевой конференции неврологов "Актуальные проблемы неврологии Алтайского края" (Барнаул, 2005), заседании Проблемной комиссии Алтайского государственного медицинского университета Росздрава (Барнаул 2006), заседании Проблемной комиссии при Томском НИИКиФ Росздрава (Томск, 2006).
Публикации: по материалам диссертации опубликовано 21 работа, в том числе 1 в журнале, рекомендованном ВАК.
Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из следующих разделов: "Введение", "Обзор литературы", "Материал и методы исследования", "Результаты исследования", "Обсуждение результатов", "Выводы", "Практические рекомендации", "Список литературы". Работа изложена на 130 страницах, иллюстрирована 9 рисунками и 27 таблицами. Список литературы включает 255 литературных источников, из них 208 -отечественных и 47 - иностранных.
Подходы к лечению вертебрально-базилярной недостаточности на фоне остеохондроза шейного отдела позвоночника
В настоящее время для лечения ХВБН применяют как медикаментозную, так и немедикаментозную терапию. Медикаментозная терапия направлена на компенсацию гемодинамических и микроциркуляторных нарушений (альфа-адреноблокаторы, антагонисты кальция, производные барвинка, производные ксантина и др.), коррекцию нейродинамических расстройств (ноотропы, блокаторы Н-рецепторов). Кроме того, в последние годы в комплексной терапии ХВБН довольно широко эмпирически используют метаболитные антиоксиданты (токоферол, ретинол и др.) (Суслина З.А. и соавт.2000; Шток В.Н.,1999; Верещагин Н.В., Реброва О.Ю., 2000).
Следует отметить, что комплексная медикаментозная терапия проводится, как правило, в стадии декомпенсации, а также неустойчивой компенсации. В стадии полной и неполной компенсации применяются немедикаментозные методы лечения ХВБН, целью которых является устранение или ограничение ирритации и компремирующего влияния на ПА, а также нормализация в ней гемодинамики. Именно эти методы наиболее широко используются на этапах санаторной реабилитации. При этом в комплекс лечебных мероприятий традиционно включают лечебную физкультуру, направленную на тренировку вестибулярных функций, формирования и укрепления мышечного корсета на уровне шейного отдела позвоночника (Филиппова Г.Н., Булдакова Г.Е.,1988), ручной массаж по классическим методикам рефлексогенной воротниковой зоны, воздействие преформированными физическими факторами - электрофорез спазмолитиков и анальгетиков на шейно-воротниковую зону либо поперечно на верхнешейный отдел позвоночника (Ратнер А.Ю., 1970), ультразвук в импульсном режиме (Сперанский А.П., Рокитянский В.И., 1970; Стрелкова Н.И., 1983), синусоидальные модулированные токи на шейные симпатические узлы (Сперанский А.П., 1975; Кремер А.Я., Гольдельман М.Г.,1978), магнитотерапию (Кузьменок В.В., Поемный Ф.А., 1978; Старкова Н.В.,1981).
В последнее десятилетие для лечения ХВБН стала широко применятся лазерная терапия, обладающая стимулирующим эффектом на процессы регенерации нервной ткани и возбудимости нейронов (Рахишев А.Р., Цой В.П., 1982). Лазерная терапия используется также для рефлекторного воздействия на биологически активные и репрезентативные точки ПА. По данным Ф.Е. Горбунова и А.В. Кочеткова (2003) эффективность надсосуднстого лазерного воздействия с учетом динамики показателей РЭГ составляет 31,8-42,2%.
Распространены также различные виды бальнеолечения (хвойные, морские, иодо-бромные, хлоридно-натриевые, углекислые ванны и другие) и методики мануальной терапии, направленные на устранение функциональных патобиомеханических нарушений в шейном отделе позвоночника: нервно-мышечные методики (Красноярова Н.А., 2002), методика постизометрической релаксации (Mennel J., 1949; Lewit К., 1983; Коган О.Г., Найдин В.Л, 1988), мягкотканные (остеопатические) методики (Жулев Н.М., Лобзин B.C., Бадзгарадзе Ю.Д. 1992; Васильев А.С., Васильева В.В, 1994,1996,2002; Иваничев Г.А., 1997).
В настоящее время сложно отдать предпочтение какому-либо из этих методов или их комплексу, единые стандарты лечения больных ХБВН на
этапе санаторной реабилитации отсутствуют. Проведенный нами анализ результатов работ, касающихся оценки эффективности немедикаментозных методов лечения ХВБН на этапе санаторной реабилитации, показал, что в основном исследовалась эффективность отдельных методов воздействия, а не их комплексов, и их влияние на отдельные составляющие симтомокомплекса ХВБН. Кроме того, следует отметить противоречивость такого рода данных разных исследователей. Так, по данным Краснояровой Н.А. (2002) эффективность мануальной терапии в области суставов кранио-вертебралыюго перехода при ХВБН составляет около 40%. Однако, исследованиями Licht Р.В. (1998,1999) при аналогичном мануальном воздействии показано лишь слабовыраженное и кратковременное (до 40 сек после воздействия) улучшение показателей мозгового кровотока. Аналогичные данные приводят А.И, Небожин (2002), А.В. Борисенко (1992) и Л.И. Мажейко (1997).
Следует отметить, что весь вышеперечисленный арсенал методов лечения ХВБН оказывает недостаточный и ограниченный по времени эффект, о чем свидетельствуют данные о возрастании распространенности данного синдрома и хронический прогредиентный характер его течения. Поэтому несомненно актуальной проблемой медицины является поиск новых эффективных подходов к первичной и вторичной профилактике ХВБН (Яковлев Н.А., Курочкин А.А., Слюсаръ Т.А., 2001). Представляется, что для лечения этой патологии в период ремиссии наиболее перспективны немедикаментозные методы, развивающие адаптивные возможности системы мозгового кровообращения, повышающие толерантность мозговой ткани к гипоксии, а также повышающие эффективность функционирования коллатералей и анастомозов и их предуготованность на случай возникновения сосудистого эпизода.
Современные представления о механизме действия интервальной нормобарической гипокситерапии
Исследования отечественных и зарубежных авторов подтверждают, что гипоксия оказывает существенное влияние на кровоток в мозговых артериях. В частности, было установлено, что кровоток в капиллярах мозга в условиях гипоксии может возрастать на 40% (Ганнушкина И.В., 1997). Схожие результаты были получены при изучении влияния ИНГ на мозговой кровоток у крыс, которое показало усиление кровотока на 50-90% в сером веществе головного мозга и на 180% в белом веществе (Beck Т., Krieglstein J., 1987).
Как известно, церебральный кровоток, для которого свойственна ауторегуляция, во многом зависит от тонуса резистивных сосудов головного мозга . Показано, что изменение тонуса артерий и артериол головного мозга может вызывать большое число различных факторов, среди которых особое значение имеют биологически активные вещества, продуцируемые эндотелием (Faraci F.M., Heistad D.D., 1998). Установлено, что гипоксия является локальным раздражителям клеток эндотелия и многие ее эффекты на мозговой кровоток реализуются через усиление продукции оксида (Cooke J., Rossitch Е., Andon N.A. et al., 1991). Это, вероятно, связано как с кратковременным возрастанием активности NO-синтазы, так и с усилением ее биосинтеза. Об этом свидетельствуют, в частности, следующие факты. При остром воздействии умеренной гипоксии на организм крыс было выявлено двукратное усиление мозгового кровотока, которое снижалось на 70% в случае применения ингибиторов NO-синтазы (Reid J. М. et al., 1995). При хронической гипоксии отмечалась активация экспрессии гена конститутивной NO-синтазы в клетках эндотелия (Fischer S. et al., 1999). Примечательно то, что хроническая гипобарическая гипоксия оказывает ингибирующее влияние на экспрессию гена NO-синтазы (Folkman J, 1995; Fischer S. et al., 1999).
В последние годы появились сведения о том, что дилатационная активность гипоксии на мозговой кровоток происходит при участии АТФ-зависимых калиевых каналов 8-9 (Fredericks К.Т. et al., 1994; Faraci F.M., Sobey C.G., 1996). Активация калиевых каналов под воздействием гипоксии вызывает гиперполяризацию цитоплазматической мембраны, что приводит к закрытию кальциевых каналов и релаксации гладкомышечных клеток сосудистой стенки (Louis G. et al., 1998; Hudetz A.G. et al., 2002).. Механизмы активации АТФ-зависимых калиевых каналов связывают как с непосредственным воздействием гипоксии, так и с активирующим влиянием оксида азота (Shankar V., Armstead W.M., 1995).
Кроме того, в экспериментальных исследованиях показано, что гипоксический стимул (кратковременная умеренная гипоксия) вызывает развитие оксидативного стресса в различных органах и тканях, и в том числе в головном мозге (Takahashi Н., Asano К., Nakayama Н. 1996; Ohman Т., Parish G., Jackson R.M., 1999; Simon B.C., Noll В., Maisch В., 1999). Это связывают, главным образом, с увеличением продукции супероксида в митохондриях, обусловленным накоплением восстановленных эквивалентов (НАДН и др.). Предполагается, что эти эквиваленты в условиях недостатка кислорода в митохондриях восстанавливают кислород не через цитохром-оксидазу с образованием воды (двухэлектронное восстановление), а путем присоединения одного электрона с образованием супероксида. Кроме того, однократное воздействие гипоксии ведет к снижению активности основных антиоксидантных ферментов, что связывают со снижением периода существования их мРНК (Jackson R.M., Parish G., Но Y.S., 1996; Oillet J., Koziel V., Vert P. et al., 1996).
Тренировка ИНГ или, как говорят в последние годы, прекондиционирование гипоксией ведет к возрастанию активности антиоксидантных ферментов через усиление экспрессии их генов (Duan С, Yan F., Song X. et al., 1999; Franco A.A., Odom R.S., Rando T.A., 1999; Ельчанинова C.A. и соавт., 2003). Особый интерес, представляют данные о предотвращении повреждающего действия ишемии на мозг предшествующей гипоксической тренировкой (Duan С, Yan F., Song X., Lu G.W. , 1999; Ohman Т., Parish G., Jackson R.M., 1999). Кроме того, в эксперименте на животных показано, что при гипоксии в клетках эндотелия индуцируется экспрессия генов ряда факторов роста (тромбоцитарный фактор роста В, сосудистый эндотелиальный фактор роста и др.), участвующих в ангиогенезе, в процессе физиологической регенерации эндотелия (Perrella М.А., Edell E.S., Krowka M.J. et al., 1992).
Следует отметить, что изменения подобного характера отмечаются во всех тканях и органах, однако, в наибольшей степени они выражены в головном мозге и миокарде, где синтез АТФ обеспечивается в основном аэробными процессами (Войткевич В.И., 1973, Иванов К.П., Кисляков Ю.Я., 1979, Меерсон Ф.З., 1973, Караш Ю.М., Стрелков Р.Б., Чижов А.Я., 1988). Примечательно, что адаптационные изменения при гипоксии сходны с таковыми при интенсивной деятельности нервных центров (Меерсон Ф.З., 1973). Эта общность послужила основанием для предположения, что сформировавшаяся адаптация к гипоксии может оказать положительное влияние на функционирование мозга.
Методы исследования неврологического статуса
Для изучения кратковременной памяти применяли методики "Оперативная память", "Память на числа", "Память на образы" (таблицы Шульте, Эндиклопедия..., 1997), комплекс которых позволяет охарактеризовать кратковременную память на информацию, полученную через различные сенсорные системы.
Методика "Оперативная память"
Испытуемому вручали бланк и зачитывали 10 цифровых рядов, содержащих 5 цифр. Интервал между зачтением рядов - 15 секунд. Испытуемый должен был запомнить эти 5 цифр в том порядке, в каком они прочтены, в уме сложить первое число со вторым, второе с третьим, третье с четвертым, четвертое с пятым и записать полученные четыре суммы в каждом ряду. Затем подсчитывали число правильно найденных сумм. За норму принимали 30-40 правильно записанных сумм. Методика "Память на числа"
Испытуемому демонстрировали в течение 20 секунд таблицу с 12 двузначными числами, которые нужно было запомнить и записать на бланке. Оценку кратковременной зрительной памяти производили по количеству правильно воспроизведенных чисел. Норма взрослого человека - 7 и выше. Методика "Память на образы"
Испытуемому в течение 20 секунд показывали таблицу с 16 образами (знаки, рисунки и др.), которые нужно было запомнить и воспроизвести на бумаге в течение 1 минуты. Оценку результатов тестирования производили по количеству правильного воспроизведенных образов. Нормой считали 6 правильных ответов и более.
Офтальмоскопию проводили с использованием рефракционного зеркального офтальмоскопа. Обращали внимание на соотношение сосудов венозного и артериального русла, на изменение их хода и угла деления, а также состояние диска зрительного нерва.
Коньюктивальную биомикроскопию проводили с помощью щелевой лампы ЩЛ-2 (Россия), установленной горизонтально на подвижном штативе (увеличение в 16 раз). В последние годы конъюктивальная биомикроскопия считается одним из наиболее информативных методов визуальной оценки микроциркуляции. Отличаясь простотой и доступностью, а также неинвазивностыо, она позволяет оценить кровоток в конечных ветвях сосудистого русла - артериолах, капиллярах, венулах, периваскулярных тканях. Доказана корреляция изменений конъюктивальных сосудов с измениями микроциркуляции в других органах и тканях организма (Шульпина Н.Б., 1974). Оценку микроциркуляции проводили по методу B.C. Волкова и соавторов (1976) с вычислением конъюктивального индекса - суммы баллов признаков нарушения микроциркуляции, указанных в табл. 8. Этот качественно-количественный показатель отражает внутрисосудистые изменения, изменения формы сосудов, а также показатели периваскулярного характера.
Мозговой кровоток оценивали ультразвуковым методом - проводили дуплексное сканирование брахиоцефальных артерий на аппарате АЛОКА 4000 с помощью импульсного датчика частотой 7,5 МГц. При исследовании позвоночных артерий пациент находится лежа на спине. Голова пациента лежит ровно, датчик ставится под углом 90 градусов к продольной оси сосуда и поверхности шеи. Таким способом исследовали сегменты VI и V2 позвоночной артерии. Для визуализации сегмента V3 датчик располагали за углом нижней челюсти При идентификации мозговых артерий обращали внимание на расположение сосуда, глубину сканирования и направление кровотока по отношению к датчику. Визуализацию сегмента V4 позвоночной артерии осуществляли транстемпорально через субокципитальный доступ (положение пациента -лежа на животе с опущеной вниз головой). Тем же доступом идентифицировали и основную артерию. Датчик располагали по средней линии ниже большого затылочного отверстия или латерально. Плоскость сканирования при этом составляет от 30 до бОградусов с поверхностью шеи. При интракраниальном исследовании визуализация сегмента V4 ПА достигает 92%, а основной артерии - 93% (Митьков В.В., 1997).
Лабораторные методы исследования
Общую прооксидантную активность (ОПА), рассматриваемую как показатель суммарной концентрации всех прооксидантов и свободно-радикальных метаболитов в плазме, оценивали по накоплению в модельной системе продуктов перекисного окисления ТВИН-80, реагирующих с ТБК (Молчанов А.В., Галактионова Л.П., 1997; Галактионова Л.П., Молчанов А.В., Ельчанинова С.А. и др., 1998).
Реактивы: 1) 1% раствор моноолеата полиоксиэтилированного сорбитана (ТВИН-80); 2) 40% раствор трихлоруксусной кислоты (ТХУ); 3) 0,25% раствор тиобарбитуровой кислоты (ТБК).
Ход анализа: В посуду из темного стекла с притертыми пробками объемом 200 мл вносили по 2 мл ТВИН-80. В опытную пробу прибавляли 0,2 мл плазмы крови, а в контрольную соответствующий объем дистиллированной воды. После инкубации при 40С в течение 48 часов в пробы добавляли по 1 мл ТХУ и оставляли при комнатной температуре на 60 мин. После центрифугирования при 8000 об/мин в течение 15 мин супернатант (2 мл) смешивали с 2 мл ТБК и инкубировали на кипящей водяной бане 15 мин. При этом ТБК реагировала с малонилдиальдегидом с образованием триметинового комплекса розового цвета. Пробы охлаждали и измеряли поглощение при 532 нм против дистиллированной воды. Расчет проводили по формуле: ОПА (%) = х 100, Ек где Ек и Ео- экстинкции соответственно контрольной и опытной проб. Показатели антиоксидантного статуса организма
Для характеристики антиоксидантного статуса организма в гемолизате исследовали активность основных антиоксидантных ферментов супероксиддисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы и рассчитывали ее на единицу массы гемоглобина, определяемого гемиглобинцианидным методом (Меньшиков В.В. и соавт., 1987).
Активность супероксиддисмутазы (СОД) определяли по подавлению образования нитроформазана - продукта восстановления синего нитротетразолия супероксидом, образующимся при взаимодействии феназинметасульфата и НАДН (Чевари С, Андял Т., Штренгер Я., 1991).
Реактивы: 1) 0,15 М фосфатный буфер рН 7,8; 2) Инкубационная смесь - 37 мг ЭДТА-]Ча2, 330 мг нитросинего тетразолия, 55 мг феназинметасульфата, 300 мл фосфатного буфера (исползовали через 12 часов); 3) Раствор НАДН -152 мг в 100 мл трис-ЭДТА, рН 8,0; 4) Стандартные растворы препарата СОД из эритроцитов быка ("Sigma", США) в физиологическом растворе - 450ед/мл, 900 ед/мл, 1800 ед/мл, 2700 ед/мл.
Ход анализа: В опытную пробирку с 1 мл гемолизата (0,1 мл отмытых эритроцитов + 0,9 мл дистиллированной воды) добавляли 0,5 мл абсолютного спирта, 0,25 мл хлороформа и 300 мг КН2РО4. После интенсивного перемешивания смесь центрифугировали при 5000 об/мин 30 мин. Затем в опытную и контрольную пробы добавляли по 1,5 мл инкубационной смеси, 0,05 мл раствора НАДН и 0,1 мл супернатанта (в контрольную пробу 0,1 мл воды) и через 10 мин измеряли поглощение при 540 нм. Расчет проводили по формуле: сод(%) = Ек"Еохюо, Ек где Ек и Ео - экстинкции контрольной и опытной проб.
С помощью калибровочной кривой, построенной по стандартным растворам СОД, определяли активность фермента в ед/мл. За 1 ед. СОД принимали такое количество фермента, которое ингибирует на 50% скорость восстановления цитохрома С 3 мл реакционной системой ксантин/ксантиноксидаза при 25С и рН 7.8 при исходной величине поглощения раствора ксантиноксидазы ДА 5so= 0,025 ± 0,005. Активность СОД эритроцитов рассчитывали в ед/мг НЬ.
Активность каталазы определяли по подавлению окисления молибдата перекисью водорода (Чевари С, Андял Т., Штренгер Я., 1991)
Реактивы: 1) 0,3 % раствор перекиси водорода; 2) 4% раствор молибдата натрия; 3) Стандартные растворы препарата каталазы из печени быка ("Sigma", США) в физиологическом растворе - 20000ед/мл, 40000 ед/мл, 60000 ед/мл, 80000 ед/мл, 100000 ед/мл.
Ход анализа: В опытную и контрольные пробирки с 2,0 мл раствора перекиси водорода добавляли соответственно 0,01 мл гемолизата (0,1 мл отмытых эритроцитов + 4,9 мл дистиллированной воды) или 0,01 мл дистиллированной воды. Затем в каждую пробу добавляли 1,0 мл раствора молибдата натрия и тотчас измеряли поглощение при 410 нм. Расчет проводили по формуле:
Рк- — Ро
Каталаза(%) = хЮО,
Ек
где Ек и Ео - экстинкции контрольной и опытной проб.
С помощью калибровочной кривой, построенной по стандартным растворам каталазы, определяли активность фермента в ед/мл. За 1 ед. Активности каталазы принимали такое количество фермента, которое разлагает 1,0 мкМ перекиси водорода в минуту при рН 7,0 и 25С при исходной концентрации перекиси водорода 10,3 мМ. Активность каталазы эритроцитов рассчитывали в ед/г НЬ.
![Однокамерные сульфатно-гидрокарбонатные натриево-магниево-кальциевые ванны в комплексном лечении трофических язв нижних конечностей при хронической венозной недостаточности [Электронный ресурс]](/i/i/4591/175790.png "Однокамерные сульфатно-гидрокарбонатные натриево-магниево-кальциевые ванны в комплексном лечении трофических язв нижних конечностей при хронической венозной недостаточности [Электронный ресурс] Попов Андрей Владимирович")
