Особенности иммунной реактивности пострадавших с закрытой черепно-мозговой травмой легкой степени тяжести и их значение для формирования посттравматических последствий [Электронный ресурс] Осипова Ирина Викторовна

Содержание к диссертации

Введение

1. Современные представления об иммунной реактивности закрытой черепно-мозговой травмы легкой степени тяжести и ее последствий (обзор литературы) 12

1.1 Закрытая черепно-мозговая травма легкой степени тяжести в структуре классификации черепно-мозговой травмы 12

1.2. Патогенез закрытой черепно-мозговой травмы легкой степени тяжести 13

1.3. Последствия закрытой черепно-мозговой травмы легкой степени тяжести 24

1.4. Роль гематоэнцефалического барьера в развитии отдаленных последствий закрытой черепно-мозговой травмы легкой степени тяжести 29

1.5. Изменения иммунной реактивности организма в патогенезе отдаленных последствий закрытой черепно-мозговой травмы легкой степени тяжести 32

Материалы и методы исследования 42

2.1. Характеристика групп пострадавших 42

2.2. Иммунологические методы исследования 45

2.2.1. Исследование функциональной активности фагоцитов 45

2.2.1.1. Метод определения поглотительной пособности фагоцитов крови 46

2.2.1.2. Метод определения хемилюминесценции клеток крови 46

2.2.2. Иммуноцитохимический (стрептавидин-биотиновый) метод определения популяций мононуклеаров в периферической крови 48

2.2.3. Исследование уровня содержания цитокинов: интерлейкина-ір (IL-1J3), антагониста рецептора интерлейкина-1 (IL-lra), интерлейкина-4 (IL-4), интерлейкина-6 (IL-6), интерферона у (IFN-y) в сыворотке крови 50

2.2.4. Определение содержания иммуноглобулинов классов А, М, G в сыворотке крови 52

2.2.5. Метод определения нейротропных аутоантител в сыворотке крови 53

2.2.6. Определение содержания кортизола в сыворотке крови 55

2.3. Статистическая обработка результатов исследования 56

3. Результаты и обсуждение 57

3.1. Состояние неспецифической резистентности пострадавших с закрытой черепно-мозговой травмой легкой степени тяжести 57

3.1.1. Поглотительная способность фагоцитов крови 57

3.1.2. Изменение хемилюминесценции клеток крови 59

3.2. Клеточный иммунитет у пострадавших с закрытой черепно-мозговой травмой легкой степени тяжести 64

3.3. Содержание цитокинов (интерлейкина ір, рецепторного антагониста интерлейкина-1, интерлейкина-6, интерлейкина-4, интерферона-у) и кортизола в сыворотке крови у пострадавших с закрытой черепно-мозговой травмой легкой степени тяжести 75

3.4. Состояние гуморального иммунитета у пострадавших с закрытой черепно-мозговой травмой легкой степени тяжести 92

3.4.1. Содержание иммуноглобулинов классов А, М, G в сыворотке крови 92

3.4.2. Содержание аутоантител к нейроспецифическим белкам: S-100, глиальному фибриллярному кислому протеину, МР-65, фактору роста нервов в сыворотке крови 95

Заключение 108

Выводы 119

Практические рекомендации 121

Список литературы 122

Приложение 149

• Последствия закрытой черепно-мозговой травмы легкой степени тяжести
• Иммуноцитохимический (стрептавидин-биотиновый) метод определения популяций мононуклеаров в периферической крови
• Клеточный иммунитет у пострадавших с закрытой черепно-мозговой травмой легкой степени тяжести
• Содержание аутоантител к нейроспецифическим белкам: S-100, глиальному фибриллярному кислому протеину, МР-65, фактору роста нервов в сыворотке крови

Введение к работе

Черепно-мозговая травма (ЧМТ) относится к наиболее распространенному виду повреждений и составляет от 36 до 40 % от всех видов травм (Лебедев В.В., Крылов В.В., 2000). Ежегодно в России черепно-мозговую травму получают около 600 тыс. человек, около 50 тыс. из них погибает, и 50 тыс. становятся инвалидами (Лихтерман Л.Б., 2003). Частота ЧМТ у мужчин в 2-3 раза превышает таковую у женщин с сохранением этой зависимости во всех возрастных группах.

Наиболее часто поражаются лица в возрасте от 25 до 40 лет, т.е. наиболее мобильная и работоспособная часть населения, что в настоящее время приобретает особенно важное социальное и экономическое значение (Лебедев В.В., Крылов В.В, 2000).

В структуре клинических форм ЧМТ повсеместно доминирует сотрясение головного мозга (63-90%), далее следуют ушибы мозга (5-13%) и его сдавление (1-3%). Эти данные согласуются с показателями травматизма пострадавших за последние годы, поступивших на нейрохирургическое отделение клиники сочетанной травмы ГУСПбНИИ скорой помощи им. И.И. Джанелидзе: у 78% из них наблюдалось сотрясение головного мозга, в 13% случаев - ушиб головного мозга, в 9% - сдавление головного мозга.

Число пострадавших с сотрясением головного мозга в России ежегодно достигает 350-400 тыс. В Америке и Европе на легкую травму головного мозга ("mild brain injury")₅ основную часть которой составляет сотрясение головного мозга (СГМ), также приходится 60-90% всех пострадавших с ЧМТ.

Причинами сотрясения мозга у населения являются как дорожно-транспортные происшествия, так и бытовые, производственные, криминальные и спортивные травмы (Л.Б. Лихтерман, 2003).

Стойкая компенсация церебральных функций наблюдается у 28-39% пациентов после СГМ. По данным различных авторов (Ромоданов А.П. и соавт., 1990; Штульман Д.Р., Левин О.С.,1999) у пострадавших с ЛЗЧМТ в 19-50 % случаев отмечается прогрессирование неврологических и соматических симптомов повреждения мозга, приводящее к прогредиентному течению и формирующее в отдаленном периоде функциональные нарушения, проявляющиеся различными клшшко-неврологическими синдромами.

Среди больных неврологического, а отчасти и соматического профиля, контингент с перенесенной ЧМТ, в том числе и легкой, является одним из часто встречающихся. Экономические затраты, связанные с последствиями ЧМТ, значительно превышают расходы, приходящиеся на острый период. Это, прежде всего, касается последствий легкой ЧМТ, которые в силу своей распространенности превратились в самостоятельную медицинскую проблему (Штульман Д.Р., Левин О.С.,1999; Воскресенская О.Н., 2003). Так называемая. легкая закрытая черепно-мозговая травма (ЛЗЧМТ) держит первенство в "поставке" хронических болезней и инвалидизации населения (Филатова М.М., 2003).

Поэтому вопросы диагностики, лечения и реабилитации больных с ЛЗЧМТ остаются актуальными с теоретической, практической и экономической точек зрения.

В последние годы представление о травматической болезни головного мозга получило существенное развитие. Благодаря использованию методов нейровизуализации (компьютерной томографии, магнитно-резонансной томографии, позитрошюй эмиссионной томографии) появилась возможность

осуществлять прижизненные клинико-анатомические сопоставления { в

отдаленном периоде ЧМТ. Новые данные нейрофизиологических,

нейрохимических и иммунологических исследований позволили уточнить

I патогенез ряда неврологических синдромов позднего периода ЧМТл в

частности, не имеющих четкого морфологического субстрата в остром jee

!

8 периоде (А.Ю.Макаров, 2001). Последствия ЛЗЧМТ обычно формируются спустя месяцы, иногда и годы после острого периода травмы. В основе их патогенеза чаще всего лежит не усугубление посттравматических морфологических изменении, а развивающиеся или прогрессирующие нарушения функционального состояния центральной нервной системы (ЦНС), церебральной нейродинамики, интегративной деятельности мозга. Весьма значимы аутоиммунные сдвиги, эндокринная дисфункция и психовегетативные расстройства, обусловленные патологией образований лимбико-ретикулярного комплекса. В связи с этим, оценка иммунной реактивности пострадавших в посттравматическом периоде имеет большое значение для прогноза характера течения заболевания и контроля за эффективностью проводимой терапии.

Цель исследования

Выявить особенности иммунной реактивности пострадавших с изолированной ЗЧМТ легкой степени тяжести и определить их значение для диагностики и прогноза развития отдаленных последствий травмы мозга.

Задачи исследования

1. Исследовать показатели неспецифической резистентности организма пострадавших в различные сроки после травмы.

2. Исследовать состояние клеточного иммунитета с помощью определения фенотипических и активационных маркеров мононуклеаров крови. \

3. Изучить параметры цитокинового звена иммунитета и кортизола*в
различные сроки после травмы. '

4. Исследовать содержание иммуноглобулинов и уровень
нейроспецифических аутоантител в крови пострадавших с закрытой
черепно-мозговой травмой легкой степени тяжести.

9 5. На основании комплексного анализа результатов клинико-лабораторного обследования пациентов выявить зависимость изменений иммунной реактивности и отдаленных последствий закрытой черепно-мозговой травмы легкой степени тяжести

Научная новизна исследования

При проведении иммунологического мониторинга пострадавших с закрытой черепно-мозговой травмы легкой степени тяжести, включающего исследования фагоцитоза, клеточного и гуморального иммунитета, цитокинов и кортизола в крови впервые

3. - выявлены изменения содержания в крови цитокинов IL-4, IL-6, в сочетании с высоким уровнем аутоантител к НСБ, прежде всего к GFAP и МР-65, отражающих преобладание гуморального иммунитета;

4. - получены данные о нарушении баланса содержания в крови IL-ip и рецепторного антагониста IL-1 (IL-lra) у пострадавших с прогредиентным типом течения посттравматического периода;

5. - получены данные об изменении баланса содержания вкровиІЬ-Ір, IL-6 и кортизола у пострадавших с прогредиентным течением посттравматического периода;

6. - выявлены изменения содержания в крови HLA-DR⁺-KJieTOK; у пострадавших с повторной травмой мозга и у пациентов | с прогредиентным течением посттравматического периода; і

Результаты настоящего исследования существенно дополняют современные представления об иммунопатогенезе закрытой черепно-мозговой травмы легкой степени тяжести и ее последствий.

Практическая значимость '

Практическая значимость работы заключается в разработке алгоритма ранней лабораторной диагностики последствий закрытой . череп*

10 мозговой травмы легкой степени тяжести (ЛЗЧМТ), который включает в себя исследование хемилюминесценции клеток крови, содержание в сыворотке крови ИЛ-6, IL-lp и IL-ra, величину индекса IL-ip и IL-ra, аутоантител к нейроспецифическим белкам в 1-10 сутки после травмы.

Использование предложенного нами алгоритма позволит прогнозировать развитие отдаленных последствий ЛЗЧМТ, улучшить их диагностику и своевременно использовать соответствующую патогенетическую терапию.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. ЛЗЧМТ вызывает нарушение неспецифической резистентности
пострадавших, проявляющееся в снижении поглотительной
способности фагоцитов и усилении индуцированной
хемилюминесценции клеток крови. Изменения сохраняются не менее Г
года у пострадавших с прогредиентным, типом течения
посттравматического периода.

2. Изменения клеточного иммунитета наблюдаются у пострадавших с
ушибом головного мозга легкой степени тяжести, у пациентов с
повторной травмой мозга и у больных с прогредиентным типом течения
ЛЗЧМТ. Изменения проявляются в увеличении содержания в крови
С025⁺-мононуклеаров и снижении HLA-DR⁺-iaieTOK в раннем
посттравматическом периоде, увеличении HLA-DR⁺-iaieTOK в
отдаленном периоде.

3. У пострадавших с прогредиентным типом течения ЛЗЧМТ в посттравматическом периоде наблюдается дисбаланс содержания в крови IL-ip, IL-6 и кортизола - медиаторов, участвующих в формировании нейроиммунноэндокринных взаимодействий.

4. У пострадавших с регредиентным течением посттравматического периода содержание IL-lra значительно превышает содержание IL-lp в

крови, в отличие от пациентов с прогредиентным течением, у которых содержание IL-lp либо не отличается от уровня IL-lra, либо превышает его значение.

5. Активация гуморального иммунитета у пострадавших сопровождается увеличением содержания IL-4 в крови, продуцируемого Т-хелперами, в течение 1 месяца после травмы. Выявленные изменения характерны для пострадавших с прогредиентным типом течения травмы.

6. ЛЗЧМТ характеризуется развитием специфического иммунного ответа к антигенам ткани мозга, достоверным признаком которого является наличие аутоантител к нейроспецифическим белкам в сыворотке крови пострадавших.

Последствия закрытой черепно-мозговой травмы легкой степени тяжести

ЧМТ характеризуется высокой частотой различных последствий, которые могут появляться уже в остром, но, главным образом, в промежуточном и отдаленном периодах. Среди хронических больных неврологического, а отчасти и соматического профиля, контингент перенесших ЧМТ, является одним из ведущих.

В международной классификации болезней (МКБ-10) состояния, возникающие после легкой ЧМТ, обозначаются термином «посткоммоционный или постконтузионный синдром» (ПКС), что подразумевает наличие когнитивных, эмоциональных и поведенческих изменений. (Магалов Ш.И., Пашаева Т.С., 2002; Левин О.С., Черняк З.В., 1996; Rizzo М., Tranel D., 1996).

Использование современных методов нейровизуализации позволило выявить постоянные нарушения регионарного мозгового кровотока после таких травм, которые могут приводить к аксональным повреждениям, нарушению проницаемости гематоэпцефалнческого барьера, атрофии нейронов гиппокампа. Эти изменения, выявляемые при электрофизиологических исследованиях, могут стать причиной нарушений, возникающих при «посткоммоционном синдроме» (Gollaher К., et al., 1998). На пневмоэнцефалограммах у лиц, перенесших легкую ЗЧМТ, могут выявляться прогрессирующие структурные изменения в субарахноидальных пространствах и желудочковой системе мозга. Результаты компьютерной и, особенно, магнитно-резонансной томографии подтверждают незавершенность патологических процессов в отдаленном периоде ЗЧМТ. В оболочках и веществе мозга остаются стойкие изменения тканей и прогрессируют нарушения крово- и ликворообращения, приводящие к гипоксии тканей, частичной атрофии мозгового вещества. Одновременно с деструктивными изменениями в отдаленном периоде продолжаются и репаративные процессы (Мякотных и соавт., 2002 Stratton М.С., Gregory R.J.1994).

При благоприятном течении ЧМТ наблюдается полное или почти полное клиническое выздоровление; при неблагоприятном течении -клиническое проявление спаечных, рубцовых, атрофических, гемоликворо-циркуляторных, вегетовисцеральных, аутоиммунных и других процессов (Горбунов В.И., Лихтерман Л. Б., Ганнушкина И.В., 1996).

Современные представления о сотрясении головного мозга были пересмотрены Furtak J. и Podgorski J.K. в 1997 году. Практическое выздоровление или стойкая компенсация наблюдается только у приблизительно 30% пострадавших. У 15% пациентов имеющиеся нарушения функций после ЛЗЧМТ проявляются в основном посткоммоционным синдромом (Шогам И.И. и соавт., 1991; Штульман Д.Р., Левин О.Л., 1999). Согласно другим источникам (Ромоданов А.П. и соавт., 1990), прогрессирующее нарастание патологических явлений при ЛЗЧМТ наблюдается у 50 % пострадавших, при среднетяжелой и тяжелой - примерно у 90%.

Замечено, что не всегда последующее состояние больных соответствует тяжести перенесенной травмы: часто после ЛЗЧМТ развиваются стойкие астенические состояния, психические расстройства, слабоумие, эпилептические приступы и пр. Посттравматическая патология часто проявляется после длительного (10-20 лет) периода относительного благополучия. Травма мозга, перенесенная в молодые годы, может способствовать более раннему началу, быстрому и тяжелому течению инволюционного периода (Горбунов В.И. и соавт., 1996). Почти при каждой клинической форме последствий ЧМТ в той или иной степени выраженности присутствуют вегетативные дисфункции. Однако в клинике доминирует какой-то ведущий синдром. Поэтому, говоря о конкретной клинической форме последствий ЧМТ, имеют в виду ее доминирование в клинике и патогенезе. Клинические проявления отдаленных последствий могут встречаться вследствие перенесенной травмы мозга различной степени тяжести. Посттравматический арахноидит, пахименингит и вегетативные дисфункции могут возникнуть как после легкой, так и среднетяжелой и тяжелой ЧМТ. Все зависит от степени компенсации нарушенных функций и иммунологического фона, на котором формируются эти последствия (В.И. Горбунов, Л. Б. Лихтерман, И.В. Ганнушкина, 1996; Мякотных B.C. и соавт., 2002).

Цепь патологических реакций, порожденных ЛЗЧМТ, как правило, не завершается через две-три недели, когда больные, казалось бы выздоровели, а продолжаются, порождая ряд новых изменений, не наблюдавшихся непосредственно в остром посттравматическом периоде (А.Н.Ромоданов, О.В.Копьев, 1984).

Основным в клинической картине больных в посттравматическом периоде является психовегетативный синдром, включаящий астению, головные боли, инсомнические и эмоциональные нарушения. Наиболее характерной жалобой и одним из основных факторов ухудшения самочувствия после травмы у пациентов является головная боль напряжения. У половины пациентов наблюдаются астенические проявления, нарушение эмоциональной сферы в виде раздражительности, эмоциональной неустойчивости, ранимости, а также нарушения когнитивной сферы, проявляющейся снижением памяти, затруднением концентрации внимания, рассеяностыо. Достаточно часто встречаются ин- и постсомпические нарушения, которые проявляются трудностью засыпания, повышенной сонливостью в утренние и дневные часы.

Иммуноцитохимический (стрептавидин-биотиновый) метод определения популяций мононуклеаров в периферической крови

Относительное и абсолютное число зрелых Т- и В лимфоцитов и их субпопуляций, моноцитов определяли по наличию на их мембране дифференцировочных кластеров (cluster of differentiation - CD) с помощью соответствующих моноклональных антител (МКА). Определяли содержание в крови следующих субпопуляций лимфоцитов: зрелых Т-лимфоцитов (CD3+), Т-хелперов (CD4+), Т-цитотоксических лимфоцитов (CD8+), число клеток, экспресснрующих а-цепь рецептора интерлейкина 2 (CD25+), натуральных киллеров (CD16+), В-лимфоцитов (CD20+), а также число мононуклеаров крови, экспресснрующих антигены HLA-DR, молекул адгезии CD18 ф2 интегринов).

Для постановки реакции из 4 мл венозной крови выделяли мононуклеары (Мн) крови в градиенте плотности фиколл-верографина, плотность 1,077г/см3 (Boyum А., 1968). Количество выделенных Мн составило 90-97%, жизнеспособность которых по данным теста с трипановым синим была 98%. Клеточную суспензию дважды отмывали при центрифугировании (1200 об/мин) в 10 мл среды Хенкса без фенолового красного.

Для исследования субпопуляционного состава лимфоцитов использовали иммуноцнтохимический метод (стрептавидин-биотиновый) с применением моноклональных антител и системы визуализации фирмы NOVOCASTRA NCL (Великобритания). Принцип метода основан на использовании высокой аффинности авидина к биотину. На основе методических рекомендаций «Стандартизация методов иммунофенотипирония клеток крови и костного мозга» (Тотолян А.А. и соавт., 1999) был разработан адаптированный протокол выявления специфических антигенов на поверхностной мембране клеток с учетом предварительного подбора оптимального разведения МКА (см. приложение). Образцы последовательно инкубировали: - с моноклональными антителами (мышиными или кроличьими ) определенной специфичности к определенным клеточным антигенам; - с биотинилированными связывающими антителами к мышиным или кроличьим иммуноглобулинам; - со стрептавидином, конъюгированным с пероксидазой; Для каждой новой серии специфических и /или связывающих антител с меткой подбиралась оптимальная рабочая концентрация в разведении от 1:10 до 1:300. Оптимальная концентрация антител - это наименьшая концентрация, при которой позитивные клетки еще имели интенсивное специфическое окрашивание. Эту концентрацию принимали за рабочий титр антител. Использовали максимально возможное разведение, так как это снижало интенсивность неспецифического фонового окрашивания. Для выявления маркеров дифференцировки на поверхностной мембране применяли стандартный положительный контроль CD45 - общий лейкоцитарный маркер и отрицательный контроль - жидкость для разведений антител. При микроскопии идентифицировали окрашенный темно-коричневый продукт иммуноферментной реакции, образующийся в местах связывания антигенов, выявляемых при использовании диаминобензидина в качестве хромогена. Учет результатов проводили в световом микроскопе (МИКМЕД-2, ЛОМО) при суммарном увеличении ХІ350 с использованием масляной иммерсии (окуляры 15, объектив 90). Положительно окрашенной считалась клетка, по окружности которой окрашенный продукт реакции занимал не менее трети. Подсчитывали 200 клеток и определяли процент положительно окрашенных. Полученное процентное содержание конкретной популяции мононуклеаров пересчитывали по формуле для получения абсолютного числа (АЧ) популяции (-10%): АЧ популяции (-109/л) = АЧ лимфоцитов % популяции / 100 АЧ популяции (-109/л) = АЧ мононуклеаров- % популяции / 1 Цитокины представляют собой эндогенные полипептидные медиаторы, которые продуцируются всеми клетками организма в ответ на действие патогенов, осуществляют связь на уровне организма между иммунной, нервной, эндокринной, кроветворной и другими системами и служат для их вовлечения в организацию и регуляцию единой защитной реакции. Нами было исследовано содержание в крови интерлейкина-1 (3 (IL-ф), антагониста рецептора интерлейкина-1 (IL-lra), интерлейкина-4 (IL-4), интерлейкина-6 (IL-6), интерферона у (IFN-y).

Сыворотку для исследования получали путем центрифугирования крови при 1500 об/мин в течение 15 мин, аликвотировали и замораживали при температуре -20С до использования. После размораживания пробы сывороток тщательно перемешивались, в случае выпадения осадка, центрифугировались при 1500 об/мин в течение 10 мин.

Содержание IL-ip, IL-lra, IL-4, IL-6, IFN-y в сыворотке крови определяли методом непрямого твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА), используя тест-системы ООО «Цитокин» г. Санкт-Петербург. Тест 51 системы хранили при 4С и перед использованием все реагенты доводили до комнатной температуры.

Широко применяемый твердофазный ИФА относится к методам высоко чувствительного иммунохимического анализа, основанного на реакциях антиген-антитело. В нашей работе мы применяли тест-системы для количественного определения цитокинов, основанные на сэндвич-методе твердофазного ИФА. Для реализации этого варианта использовали два моноклональных антитела с различной эпитопной специфичностью к соответствующим антигенам, в качестве которых выступали исследуемые цитокины - IL-ip, IL-lra, IL-4, IL-6, IFN-y. Одно из них было иммобилизовано на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок), второе конъюгировало с пероксидазой. На первой стадии анализа иммобилизованные цитокины, содержащиеся в калибровочных и исследуемых пробах, связывались с антителами, иммобилизованными на внутренней поверхности лунок. На второй стадии анализа иммобилизованные цитокины взаимодействовали с конъюгатом вторых антител — биотипом. На последней стадии в лунки вносили авидин-пероксидазу.

Клеточный иммунитет у пострадавших с закрытой черепно-мозговой травмой легкой степени тяжести

В-лимфоцит, являющийся одной из антигенпрезентирующих клеток (АПК), где путем эндоцитоза происходит переработка поступающего антигена (в качестве антигена в нашем случае может выступать НСБ). Образовавшиеся пептиды комплексируются с молекулами МНСН и возвращаются на поверхность В-клеток для презентации Т-лимфоцитам. В случае распознавания этого комплекса антигенспецифическими преактивированными Th2 (Т-лимфоцитами-хелперами) взаимодействие этих двух клеток приводит к продукции цитокинов и экспрессии пар костимулирующих молекул, вызывая пролиферацию и дифференцировку В-лимфоцитов в антителопродуценты (Фрейдлин И.С., Тотолян А.А., 2001). Для выполнения своей антигенпрезентирующей функции В-лимфоциты конститутивно экспрессируют МНСП и костимулирующие молекулы (CD80 и CD86), экспрессия которых усиливается при их активации. После антигенспецифической активации на В- и Т-клетках возрастает экспрессия адгезионных молекул, в том числе и CD 11 a/CD 18 (LFA-1), которые способствуют стабилизации связи Т и В лимфоцитов в процессе презентации и распознавания антигена. Цитокины IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL13, IFN-y усиливают пролиферацию, дифференцировку, активацию В-лимфоцитов с участием костимулирующих молекул, среди которых важнейшей считается пара CD40/ CD40L.

CD 18 - фенотипический маркер Р-цепи молекулы р2 интегринов (рецептора 3 компонента комплемента, CR3), которые относятся к семейству адгезинов. Интегрины - это гетеродимерные рецепторы, состоящие из двух нековалентно связанных субъединиц (а и Р), каждая из которых является гликопротеином. Благодаря трансмембранной ориентации эти рецепторы интегрируют и переносят сигналы от внеклеточного матрикса к цитоскелету (Фаллер Д.М., Шилдс Д., 2003). Члены семейства интегринов классифицируются на основе различия в их Р-цепях. В настоящее время описано девять разновидностей Р-цепей. Интегрины, обладающие р2-субъединицей, присутствуют исключительно в лейкоцитах и позволяют клеткам прикрепляться к ним и проходить сквозь барьер эндотелиальных клеток, выстилающих кровеносные сосуды в очаге дестабилизации сосудистой стенки. Кроме того, 02- интегрины выполняют важную роль в контактном взаимодействии лимфоцитов с антигенпрезентирующими клетками и при миграции лейкоцитов в ткани, принимают участие в межклеточных взаимодействиях и взаимодействиях клеток с внеклеточным матриксом (Ройт А. и соавт., 2000). Следует отметить, что в нашем исследовании число CDIS мононуклеаров у пострадавших с ЛЗЧМ в остром периоде имело лишь тенденцию к снижению по сравнению с контролем, в то время как через год после травмы - содержание CD18+ имело тенденцию к увеличению по сравнению с контролем в группах 2 (ЛУГМ) и 6 (ПТС). Наблюдалась стабильность показателей в группе 5 (БП) на протяжении всего наблюдаемого периода (табл. 16).

Таким образом, анализ содержания в крови мононуклеаров с различными фенотипическими и активационными молекулами при асептическом повреждения ткани при ЛЗЧМТ позволил выявить некоторые особенности клеточного иммунитета пострадавших.

Наибольшее число изменений по сравнению с контролем наблюдалось в группах с регредиентным (группа 5, БП) и прогредиентным типом (группа 6, ПТС) течения посттравматического периода, причем эти изменения отмечались уже с момента поступления пострадавших в стационар и были сформированы к 10 суткам. Так, к этому сроку наблюдения у пострадавших БП (группа 5) наблюдалось уменьшение количества зрелых Т-, цитотоксических и HLA-DR -клеток на 48%, 20% и 63% соответственно. Значительно сниженное, на 66%, (р 0,05) содержание HLA ЭЯ+-клеток по сравнению с контролем при поступлении и его достоверное увеличение через год после травмы было отмечено у пациентов с посттравматическим синдромом (группа 6). Факт значительного снижение содержания HLA DR+-клеток у пациентов с ПТС в 1-3 сутки после травмы, можно рассматривать как прогностический показатель риска развития неврологической патологии в отдаленном посттравматическом периоде.

В группах, сформированных по принципу степени тяжести полученной травмы, достоверные различия были отмечены только в остром периоде травмы. В группе с ушибом головного мозга легкой степени тяжести (ЛУГМ) в первые сутки после травмы было снижено содержание СОЗ+-лимфоцитов по сравнению с контролем на 47,5% (р 0,05). Также, у пострадавших этой группы мы наблюдали повышенное в 2 раза по сравнению с нормой (р 0,05) содержание С025+-лимфоцитов при поступлении и на 3 сутки после травмы, что возможно носило компенсаторно-приспособительный характер.

При сравнении показателей в группах с первичной и повторной травмой отмечено снижение С04+Т-лимфоцитов на 33,5% по сравнению с контрольной группой у пострадавших с повторным СГМ (группа 4) к 10 суткам после травмы. Через год после травмы у этих же пациентов отмечено увеличенное в 1,95 раза содержание НЬАЛЖ+-клеток, маркеров хроннзацни воспалительного процесса.

Таким образом, на основании вышеизложенного можно сделать вывод о том, что в целом для пострадавших с ЛЗЧМТ не характерны выраженные изменения субпопуляционного состава мононуклеаров в посттравматическом периоде. В то же время для пострадавших с более тяжелой травмой, с ушибом головного мозга легкой степени тяжести, было характерно увеличение содержания ранних активационных маркеров CD25+ - клеток в остром периоде после травмы, что свидетельствует о заинтересованности клеточного иммунитета в остром асептическом воспалительном процессе. Для пострадавших с повторным сотрясением головного мозга отмечено увеличение содержания HLA-DR+-KneTOK через год после травмы. Увеличение этого же показателя в те же сроки у пациентов с посттравматическим синдромом может свидетельстововать о хронизации воспалительного процесса.

Содержание аутоантител к нейроспецифическим белкам: S-100, глиальному фибриллярному кислому протеину, МР-65, фактору роста нервов в сыворотке крови

Обращает на себя внимание содержание IL-ip, IL-б и кортизола в периферической крови через год после травмы. Так, в группе БП отмечено параллельное снижение содержания IL-lp и IL-6. В группе пострадавших с посттравматическим синдромом при нормальном содержании IL-lp, отмечено высокое содержание IL-6 (р 0,05) в сыворотке крови. Как уже упоминалось ранее, IL-6 обладает противовоспалительными свойствами, ингибируя продукцию IL-ip (Назаров П.Г., 2001) и, по-видимому, в данном случае, IL-6 выступает как антагонист IL-ip, удерживая воспаление у пострадавших из группы с ПТС на локальном уровне и одновременно отражая хронизацию процесса.

Мы отметили положительную корреляционную связь между IL-lp и кортизолом при поступлении и на 3 сутки у пациентов с ПТС (г=0,539 и г=0,889, р 0,01, п=25), у пострадавших «без последствий» на 3 сутки (г=0,672, р 0,01, п=18). Через 1 год у пострадавших с ПТС отмечена отрицательная корреляция между содержанием IL-lp и кортизолом (г= - 0,446, р 0,05, п=25), что, возможно, является отражением нарушения нейроиммуноэндокринных взаимодействий. Похожие изменения в группе с ПТС наблюдались при корреляционном анализе содержания IL-6 и кортизола, когда при поступлении и на 3 сутки мы наблюдали положительную корреляцию в эти сроки наблюдения (г=0,512, г=0,901, р 0,01, п=25) и отрицательную через 1 год после травмы (г=- 0,505, р 0,05, п=25).

Таким образом, анализируя ситуацию в целом, можно сделать вывод о том, что к 10 суткам после травмы изменение баланса IL-lp, IL-б и кортизола в крови у пострадавших с черепно-мозговой травмой легкой степени тяжести в группах различных по типу течения посттравматического периода может свидетельствовать о нарушении регуляции гомеостаза как в остром, так и отдаленном посттравматическом периоде. Повышенное содержания IL-6 в крови в остром периоде травмы может использоваться как ранний прогностический показатель хронизации воспалительного процесса и служить критерием риска развития неврологической патологии в отдаленном посттравматическом периоде. IL-lra рецепторный антагонист интерлейкина-1 по функциональной классификации цитокинов относится к семейству интерлейкина-1 (Ройт А. и соавт., 2000). Известно, что антагонисты цитокинов связываются со специфическими клеточными рецепторами, блокируя передачу внутриклеточного сигнала. Ингибитор IL-ip индуцибельный протеин, продуцируется различными типами клеток, включая Мо/Мф и ПМЯЛ. IL-ra отменяет большинство эффектов IL-ip и в настоящее время рассматривается как перспективный противовоспалительный фактор локального действия. В экспериментальных исследованиях было показано, что экспрессия IL-lra, наряду с IL-1 и TNF-a при травме повышается и связана с гомеостатическими процессами в мозге и поведенческими реакциями животных (Клименко В.М., Зубарева О.Е., 2002; Toulmond S., Rothwell N.J., 1995). При исследовании содержания IL-lra в сыворотке крови у пострадавших с ЛЗЧМТ (общая группа 1) нами была отмечена тенденция к увеличению этого показателя с момента поступления. Через год после травмы наблюдалось достоверное по сравнению с контролем увеличение (р 0,05) содержания IL-lra в крови. Полученные данные представлены в таблице 21. При сравнении содержания IL-lra в группах, различных по типу течения посттравматического периода, было отмечено, что эта тенденция к увеличению показателя была характерна для пострадавших из группы 5 (БП), в то время как у пациентов с ПТС содержание IL-lra практически не отличалось от нормальных показателей. При индивидуальном сравнении содержания в крови IL-1J3 и IL-lra было отмечено, что в группе БП содержание IL-lra значительное превышало (в 3,4 -11 раз) содержание IL-ip у одного и того же пациента в течение всего наблюдаемого периода. В отличие от них, для пострадавших из группы с ПТС, был характерен одинаковый или повышенный уровень содержания IL-1р по сравнению с содержанием IL-lra. При расчете отношения IL-lp/IL-lra у каждого пациента без последствий и с посттравматическим синдромом мы получили величины, характерные для групп с различным типом течения посттравматического периода (табл. 22). Подобные изменения в содержании цитокинов и в их соотношении наблюдались на всем протяжении посттравматического периода. При расчете индекса IL-ф / IL-lra у каждого больного оказалось, что при его значении меньше единицы (в диапазоне 0,1-0,4 отн. ед.) наблюдалось регредиентное течение процесса, при значении больше единицы (в диапазоне 1,1-2,6 отн. ед.) существовал высокий риск прогредиентного течения посттравматического периода (табл. 23). Таким образом, мы можем предположить, что изменение соотношения IL-1 p/IL-Ira в сторону даже незначительного преобладания интерлейкина-ір по сравнению с его рецепторным антагонистом является неблагоприятным прогностическим признаком в развитии посттравматического периода, отражением хронизации асептического воспаления при травме мозга. Преобладание содержания IL-lra по сравнению с IL-ip как в пределах нормальных величин, так и значительное увеличение IL-lra, можно расценивать как отражение адаптивного противовоспалительного ответа и как благоприятный прогностический признак в развитии посттравматического периода.

Похожие диссертации на Особенности иммунной реактивности пострадавших с закрытой черепно-мозговой травмой легкой степени тяжести и их значение для формирования посттравматических последствий [Электронный ресурс]

Диагностическое и прогностическое значение исследования десневой жидкости у пациентов с катаральным гингивитом и пародонтитом легкой степени тяжести при проведении профессиональной гигиены полости ртаРыжкова Мария Викторовна

Лабораторные критерии прогнозирования течения и исхода черепно-мозговой травмыКулюцина Елена Романовна

Клинические и лабораторные показатели в оценке степени тяжести гестозаЕрмакова Наталия Руслановна

Значение лабораторного исследования периферической крови в оценке тяжести и прогнозирования течения Крым-Конго геморрагической лихорадкиКовалевич Надежда Игоревна

Клиника, диагностика и лечение черепно-мозговой травмы средней степени тяжести в промежуточном периодеМанькова Светлана Александровна

Показатели спонтанного пульса центральной вены сетчатки в комплексной нейроофтальмологической диагностике степени тяжести закрытой черепно-мозговой травмыНургалеев Сабир Исхакович

Клинико-функциональная характеристика глазной патологии при закрытой черепно-мозговой травме легкой и средней степени тяжести и возможность ее коррекцииБурцева Мария Сергеевна

Показатели качества жизни и серотонина периферической крови пострадавших в остром периоде закрытой черепно-мозговой травмы легкой и средней степени тяжести в процессе леченияЕрошина, Ольга Анатольевна

Когнитивные нарушения в остром и подостром периоде черепно-мозговой травмы легкой и средней степени тяжестиДроздова Екатерина Александровна

Закономерности развития и пути коррекции вторичных повреждений головного мозга при черепно-мозговой травме тяжелой степениГоворова Наталья Валерьевна