Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Морфофизиологические, генетические, культуральные свойства Tr.vaginalis и особенности биологического воздействия на одноклеточных про- и эукариот лазерного, СВЧ- и КВЧ- излучений (обзор литературы) 12
1.1 Общебиологическая характеристика Подцарства Простейшие Типа Саркомастигофоры и эндэкологические взаимодействия Tr.vaginalis с организмом человека 12
1.2 Морфологические, физиологические и генетические признаки Tr.vaginalis 17
1.3 Культивирование Tr.vaginalis in vivo и in vitro 24
1.4 Современные лабораторные методы выявления Tr.vaginalis в организме человека 27
1.5 Биологическое воздействие на одноклеточных про- и эукариот лазерного, СВЧ-и КВЧ- излучений 31
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 37
2.1 Подбор больных трихомониазом и методы забора посевного материала 37
2.2 Характеристика питательных сред, используемых для длительного и непрерывного культивирования 38
2.3 Оборудование, применяемое для длительного непрерывного культивирования Tr. vaginalis 39
2.4 Приборы генераторы лазерного, СВЧ- и КВЧ- излучений...42
2.5 Алгоритмы экспериментов, методы количественного учёта клеток и методы статистической обработки материала 44
ГЛАВА 3. Длительное культивирование Trichomonas vaginalis на различных средах 48
ГЛАВА 4. Влияние лазерного, СВЧ- и КВЧ- излучений на культуру Trichomonas vaginalis 61
Обсуждение результатов 70
Заключение 76
Выводы 77
Практические рекомендации 79
Список литературы 80
- Морфологические, физиологические и генетические признаки Tr.vaginalis
- Биологическое воздействие на одноклеточных про- и эукариот лазерного, СВЧ-и КВЧ- излучений
- Оборудование, применяемое для длительного непрерывного культивирования Tr. vaginalis
- Влияние лазерного, СВЧ- и КВЧ- излучений на культуру Trichomonas vaginalis
Введение к работе
Многочисленные эпидемиологические исследования свидетельствуют, что урогенитальный трихомониаз, возбудителем' которого является простейший одноклеточный паразит Trichomonas vaginalis - одно из самых распространенных заболеваний, передающихся половым путём.
Урогенитальный трихомониаз лидирует по частоте выявления среди
ИППП у лиц, обратившихся за специализированной
дерматовенерологической, акушерско-гинекологической и урологической помощью.
По данным* Всемирной организации здравоохранения в мире трихомониазом страдает примерно 170 млн. человек ( Donovan В, 2004 ).
Частота заражённых урогенитальной трихомонадой клинически здоровых женщин в развитых странах составляет 2-10% и в развивающихся 15-40%.
В США до последнего времени ежегодно выявлялось около 3 тыс. новых случаев заболеваний (Копылов В.М. с соавт., 2006; Wolner-Hansen PJ at al., 1989).
В Российской Федерации заболеваемость трихомониазом также остаётся стабильно высокой.
В 1996 году на 100* тыс. населения зарегистрировано 339 случаев трихомониаза ( Адаскевич В.П., 1999; Копылов В.М. с соавт., 2006 ).
В 1999 году - 327, 3 на 100 тыс. населения ( Кубанова А.А., Тихонова Л.И., 2001 ).
В» 2005 -2006 году было выявлено 343 случая мочеполового трихомониаза, тогда как за этот же период было диагностировано 111 случаев сифилиса, 82 - гонореи, 95 - хламидиоза ( Ермоленко Д.К. с соавт., 2007 ).
Заболеваемость трихомониазом по Саратовской области колебалась от 298-340 на 100 тыс. населения в 1994-98 г.г. до 430-437 на 100 тыс. населения в 2000 году ( Утц СР., Пронь Д.А. 2001; Софьин B.C. с соавт. 2003; Калинин В.И., 2005 ).
Хронический трихомониаз, значительно чаще, чем прочие инфекции
передающиеся половым путем, вызывает тяжёлые патологии
урогенитального тракта у мужчин - уретриты, простатиты, аденому предстательной железы ( Глыбочко П.В., с соавт., 2001 г./ Скрипкин Ю.К. с соавт., 2001; D.Petrin, 1998г. Cindi van der Schee 1999 ).
Таким образом, трихомониаз - это серьезная медико-социальная проблема, так как представляет собой реальную угрозу репродуктивному здоровью населения вследствии развития различных осложнений. Наряду с вектором постоянного роста заболеваемости трихомониазом четко прослеживается тенденция изменения клинической картины этого заболевания, как у мужчин, так и у женщин, а так же многочисленные артефакты лабораторной диагностики ( Дмитриев Г.А., 2005; Кисина В.И. 2007; Fukuda М., Fukuda К., Ranoux С. 1996 ).
Морфология и физиология Trichomonas vaginalis, несмотря на небольшие размеры (7-10мк), довольно сложны ( Козлюк А.С. 2006; D.Petrin, 1998 ). Геном урогенитальной трихомонады насчитывает 160 млн. пар оснований, в то время как у человека он в 20 раз меньше ( Jane М. Carlton et al. 2007 ).
Весьма сложен и метаболизм трихомонад, являющихся гетеротрофными организмами с голозойным типом питания ( Полянский Ю.И., 1968; D.Petrin, 1998; Alvarez-Sanchez ME et al. 2000 ). Именно с этими таксономическими особенностями, скорее всего, связаны такие свойства трихомонад как высокая изменчивость, полиморфность, мимикрия, весьма затрудняющие диагностику трихомониаза, а также значительная цитотоксичность.
Биологические свойства трихомонады приобретают особое значение, если рассматривать' влияние непосредственно на её организм различных
8 физических факторов, широко используемых ныне в физиотерапевтических методах лечения, и реабилитации больных трихомониазом.
Имеется достаточно большое количество исследований, посвященных изучению влияния лазерного излучения, СВЧ- и КВЧ- излучений на организм человека и лабораторных животных, прокариотических микроорганизмов, но практически отсутствуют работы, которые преследовали бы цель изучить влияние физических факторов непосредственно на клетки трихомонад в чистой культуре ( Белишева Н.К., с соавт., 1984; Горбатова М.Э., с соавт., 1987; Шестерина М.А., соавт., 1987; Гапеев А.Б., Чемерис Н.К., 1999; Глыбочко П.В., 2007 ).
Физиотерапевтические методы лечения, вероятно, изменяют морфологические и генетические свойства Trichomonas vaginalis, что может затруднить выявление её в организме больного рутинными способами и методами. ПЦР - диагностики. Это, в свою очередь, влечет за собой постановку ложноотрицательных диагнозов при проверке эффективности лечения.
Исходя из вышеизложенного, изучение влияния физических факторов
(лазерного, СВЧ- и КВЧ - излучений) на чистую многодневную культуру
Trichomonas vaginalis представляет собой значительный научно-
практический интерес.
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ
Получение чистой культуры Trichomonas vaginalis на жидких средах различного состава в условиях как стационарного, так и проточного культивирования, и изучение влияния на неё лазерного, КВЧ- и СВЧ-излучений.
Исходя из поставленной цели, решали следующие
9 ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:
Модифицировать методы непрерывного культивирования Trichomonas vaginalis с целью получения чистой культуры.
Изучить морфо-физиологические особенности Trichomonas vaginalis в условиях непрерывного культивирования.
3. Исследовать влияние лазерного, КВЧ- и СВЧ- излучений различной
интенсивности непосредственно на культуру Tr.vaginalis in vitro.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА
Разработаны модифицированные методы непрерывного, длительного культивирования Trichomonas vaginalis in vitro.
Впервые изучены особенности морфофизиологии Trichomonas vaginalis в условиях непрерывного культивирования.
Впервые проведены эксперименты по изучению воздействия низкоинтенсивного лазерного СВЧ - и КВЧ - излучений на культуру Trichomonas vaginalis in vitro.
НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ
Предложенный модифицированный метод непрерывного
культивирования Trichomonas vaginalis и изучение на его основе влияния лазерного СВЧ -и КВЧ - излучений на организм простейшего является медико-биологической базой для разработки дальнейших методов лечения и диагностики трихомониаза.
На основании результатов изучения влияния широко используемых в лечении трихомониаза низкоинтенсивных лазерных СВЧ - и КВЧ -
излучений непосредственно на организм простейшего подготовлены научно-практические рекомендации по назначению физиотерапевтических мероприятий в комплексном лечении трихомониаза.
Разработаны новые схемы алгоритма диагностики трихомониаза^ с применением как рутинных лабораторных методов, так и методов молекулярных исследований.
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ
1. Технология длительной культивации Trichomonas vaginalis
существенно отличается от культивации прокариотических организмов*
2. Чистая культура Trichomonas vaginalis может служить биологической
моделью для дальнейшего изучения морфофизиологических особенностей
этого простейшего и его патогенеза.
3.Воздействие на культуру трихомонады терапевтических доз лазерного, СВЧ- и КВЧ-излучений приводит к изменению фенотипа паразита и стимулирует его размножение, что необходимо учитывать при лечении больных.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ
Результаты исследований были доложены и обсуждены на межрегиональной конференции дерматовенерологов ( Казань, 2005 г. ); научно-практической конференции с международным участием «Частные вопросы дерматовенерологии» (Саратов, 2006 г. ); ассоциации врачей-лаборантов г. Саратова ( 2006 г.).
ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИКУ
Разработанные методы лабораторной диагностики и используемые физиотерапевтические воздействия применяются в клинике кожных и венерических болезней ГОУ ВПО «Саратовский ГМУ Росздрава», Саратовском областном и городском кожно-венерологических диспансерах. Отдельные фрагменты работы внедрены в учебный процесс на кафедрах клинической лабораторной диагностики ФПК и ППС, кожных и венерических болезней ГОУ ВПО «Саратовский ГМУ Росздрава».
ПУБЛИКАЦИИ
По материалам диссертационного исследования опубликовано 7 печатных работ.
СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ
Диссертация изложена на 105 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 4 глав, включающих полученные результаты, обсуждение результатов, выводов, списка литературы, содержащего 164 источника (в том числе ПО отечественных и 54 иностранных). Иллюстративный материал представлен 13 рисунками и 10 таблицами.
Морфологические, физиологические и генетические признаки Tr.vaginalis
Среди нозологии, обобщенно именуемых инфекциями передающимися половым путем (ИППП) трихомониаз занимает особое место, хотя бы потому, что, строго говоря, это и не инфекция, а протозойная инвазия. Это следует из классического определения акад. Покровского В.И. (1998)-«инфекция - совокупность адаптационных и патологических процессов, развивающихся в макроорганизме в результате его взаимодействия с возбудителем растительного происхождения, главным образом бактериями различных видов. Подобные процессы сопровождаются нарушениями гомеостаза организма и его физиологических функций».
Инвазии, вызываемые простейшими и гельминтами, сопровождаются аналогичными до известной степени поражениями, но в тоже время имеют, несомненно, патогенетические, клинические и микро экологические особенности. Последние далеко не всегда учитываемые при диагностике, лечении и реабилитации больных, страдающих данными заболеваниями. Некорректный, обобщенный подход к протозойной инвазии как к бактериальной инфекции, приводит на наш взгляд к целому ряду ошибок, как в диагностике, так и лечении трихомониаза как заболевания передающегося половым путем.
Распространенным заблуждением, особенно среди врачей, является мнение о простейших как низкоорганизованных животных. В тоже время, ошибочной является и другая крайность, а именно - приписывание типу простейших совершенно несвойственных им свойств и функций (і Свищева Т.Я., 1998 ).
Простейшие (Protozoa) представляют собой особьійіуровень в эволюции эукариотических организмов, сочетающих организменную и клеточную природу (Полянский Ю.И., 1981; Бейер Т.В;, Свежова Н.В., 2004 ).
Protozoa; дав начало высшей форме организмов- многоклеточным, в ходе своей эволюции, оставаясь одноклеточными, образовали ряд прогрессивных филогенетических ветвей. Исходя І уже из этого, название «Простейшие», можно считать до известной степени условным. Многие таксоны простейших обнаруживают все черты биологического прогресса. Число видов простейших велико и даже на сегодня точно неизвестно: Простейшие- существенные звенья пищевых цепей биоценозов. Многие виды простейших стали паразитарными организмами и являются этиологическими факторами большого количества болезней человека и животных. При этом имеются данные, позволяющие предполагать, что процессы видообразования и сейчас протекают в разных группах простейших довольно интенсивно ( Полянский Ю.И., 1981 ). Это нельзя не учитывать при эпидемиологических и клинических наблюдениях за патологиями, обусловленнымипростейшими паразитами.
С филогенетической» точки зрения «Простейшие» являются самыми древними эукариотическими организмами. Их возраст составляет околобОО млн. лет. Отличительной особенностью простейших в эволюционном плане является тот факт, что при переходе к паразитизму не наблюдается морфофизиологический регресс. В этом еще одно отличие закономерностей эволюции Protozoa и Metazoa ( Полянский Ю.И., Райков И.Б., 1977 ). У Trichomonas , например, имеются четыре жгутика - рулевой и три локомоторных.
Копылов В.М. с соавт.(2001г.), выделяет еще пятый жгутик непосредственно в ундулирующей мембране. Полимеризацию органоидов (увеличение их количества) можно рассматривать как прогрессивный путь эволюции.
Не исключено, что микроэволюционные процессы у простейших, паразитирующих в организме человека, протекают более интенсивно, чему свободно живущих простейших. Это может быть обусловлено интенсивным воздействием медикаментозных препаратов и физиотерапии (лазер, СВЧ, КВЧ, магнитотерапия и др.) применяемых при лечении протозойных заболеваний.
В этом плане, интересное, хотя- на наш взгляд и спорное мнение, высказывает Б.В.Клименко с соавт. (2001 г.), что «в процессе своей эволюции влагалищные трихомонады приспособились паразитировать в мочеполовых органах не только женщин, но и мужчин». Более верной на наш взгляд является точка зрения, что трихомонады вообще недавно с эволюционной точки зрения поселились в урогенитальном тракте человека.
Конечно, антропогенные факторы в первую очередь воздействуют на сам макроорганизм, однако мы должны помнить, что еще Павловский Е.Н.(1935г.), определяя паразитизм, отмечает, что «паразиты используют организм хозяина не только как источник питания, но и как место обитания». И далее в статье «Организм как среда обитания» (1934г.) - «...хозяин есть не один из компонентов сожительства двух животных организмов,- а та среда, в которой живет и которой приспосабливается, паразит. Организм, ведущий паразитический образ жизни, как справедливо указывает Мошковский М.Д.(1946г.) «перекладывает бремя регуляции отношений с внешней средой на организм хозяина». Исходя из этого, очевиден тот парадоксальный факт, что организм человека как бы невольно защищает организм паразита от внешних воздействий, в том числе и направленных на эрадикацию самого паразита.
Особенностью среды обитания паразитов является ограниченность во времени и пространстве. Поэтому многие биологические процессы приобретают у паразитирующих организмов резко выраженный характер, они как бы конденсируются? во времени: и пространстве ( Догель В і А., 1962; Король А.Б:, Прейгель СИ:, 1988 ).
У эндопаразита окружающая среда может резко менятьсяшашротяжении? очень короткого срока (срабатывают механизмы гомеостаза) в связи, с чем и процессы изменчивости паразита ускоряются до величин; не встречающихся у свободно живущих организмов. Особенно/это заметно по отношению к паразитирующим простейшим, которые могут претерпевать изменения1 прш каждом; бесполом размножению
Возникновение разновидностей:и рас у свободно живущих организмов связано с преодолением больших пространств; или с возникновением непреодолимых географических барьеров (изоляция). Аналогичные процессы. у паразитов, могут происходить,на самом ограниченнрмшространстве:
Биологическое воздействие на одноклеточных про- и эукариот лазерного, СВЧ-и КВЧ- излучений
История изучения действия различного рода излучений на биологические объекты насчитывает уже более полувека. За это время накопилось достаточное количество научного материала по механизмам воздействия лазерного, СВЧ- и КВЧ- излучений, а также их сочетаний.
Было показано, что степень и характер действия лазерного излучения (Light Amplification by Stimulated of Radiation) на клетки, ткани и организм животных и растений в целом, зависят от целого ряда параметров -мощности, длины волны, длительности экспозиции ( Гамалея Н.Ф., 1972; Бриль И.Е., с соавт., 2006; Куру Т.И., 2006; Москвин СВ. , 2006; Маханьков О.В., 2007 ).
Достаточно много исследований посвящено терапевтическому воздействию этих излучений при остром и хроническом трихомониазе, а также микст инфекциях ( Богунов И.М. 1996; Адаскевич В.П. 1999; Кира Е.Ф. 2001; .Клименко Б.В., с соавт., 2001; .Захаркин Ю.Ф., с соавт., 2007; Межевитинова Е.А., с соавт., 2005; Constancis Р et al .,1994 ).
Однако эти и многие другие работы содержат результаты воздействия излучений на макроорганизм, при этом в ряде работ отмечается негативный эффект лазерного, СВЧ- и КВЧ- излучений при лечении как острой так и хронической трихомонадной инвазии ( Софьин В.С.с соавт., 2003; Constancis P.Etal.,1994).
Что касается исследований и экспериментов, выявляющих биологический эффект непосредственно на микроорганизм (про- или эукариотический), то таких работ в доступной литературе мы нашли весьма мало. Так в работе М.В. Шестериной (1987г.) приводятся данные влияния НИЛИ на условно патогенные микроорганизмы. Автор выявил ингибирующее действие лазерного излучения, которое выявилось в торможении ростовых свойств культуры. Облучение культуры Е.СОІІ показало неоднозначный биологический эффект, в зависимости от дозы и времени экспозиции - от безразличного до бактериоцидного ( Горбатова Н.Е. с соавт., 1987 ). Изучение лазерного воздействия на состояние микрофлоры мочи при хроническом пиелонефрите выявило, что применение лазера приводило к снижению патогенных свойств уроштаммов ( Неймарк А.И. с соавт., 1998).
Исследования по изучению влияния углекислого лазера на микобактерии туберкулёза также убедительно доказали бактериостатическое влияние этого вида излучений на этот вид прокариотического организма, отличающегося устойчивостью к экзогенным воздействиям ( Калюк А.Н., 1991 ).
Большой научно-практический интерес представляет работа И.М.Богуна (1996г.) посвященная магнитолазеротерапии в комплексном лечении хронического уретропростатита, в том числе и трихомонаднои этиологии. Эти исследования показали, что наряду с положительным эффектом имели место случаи неэффективности применяемой физиотерапии.
Аналогичные данные были получены в экспериментальных работах по изучению влияния лазерного и других излучений на течение заболеваний различной этиологии ( Горохов М.Э., Зильберман Ю.М. 1991; Кульчавеня Е.В., 1996; Курлаев П.П. с соавт., 2000; Тихонов И.В., Сидорова Т.И.,2006 ).
Все перечисленные работы и многие другие объектом своих наблюдений и экспериментов имели прокариотический организм, паразитирующий в организме человека или животных. Фундаментальных теоретических и экспериментальных исследований посвященных непосредственному воздействию лазерного, СВЧ- и КВЧ-излучений на культуру эукариотических клеток в доступной литературе мы не нашли. Так в работе О.М. Крепак и М.Ю., Языкова (1984г.) было изучено действие лазера на про- и эукариотические организмы в чистых культурах. Было установлено, что лазерное излучение влияет на морфологию как про- так и эукариотических организмов, но при этом ингибирует размножение бактерий и стимулирует рост дрожжей. Рядом авторов был изучен цитогенетический эффект лазерного облучения личинок Dr. Melanogaster ( Белишева Н.К, с соавт., 1984 ) Установлено, что степень и характер воздействия на ткани и организм животных зависят от характеристик лазерного излучения (мощности, длины волны, длительности экспозиции) а также от особенностей самого биологического объекта.
В зависимости от указанных факторов, лазерное излучение может приводить как к повреждающему действию, так и к изменению защитно-репаративных и регуляторных механизмов клетки.
Несмотря на положительные эффекты, которые вызывает облучение лазерами гелий-неонового типа, имеются сведения и о его негативном действии: стимуляции роста опухолевых клеток, индукции хромосомных аббераций ( Крепак О.М. с соавт., 1984; Москвин СВ., 2006 ). К сожалению, действие лазера на генетический аппарат животных клеток мало изучен.
Биологический эффект воздействия различного рода излучений на организм простейших в чистой культуре на сегодня практически не изучен. Нам известна только работа Л.И.Январёвой (2006г.) по изучению влияния светодиодных излучений разной длины волны и дозы на двигательную активность инфузорий. Автор установила, что различные длины волн и дозы излучений оказывают как стимулирующие, так и угнетающее действие на организм простейшего. Однако линейной зависимости между увеличением длины волны, уменьшением или увеличением энергии кванта и характером ответа не выявлено.
Оборудование, применяемое для длительного непрерывного культивирования Tr. vaginalis
Материал для исследований брался у пациентов клиники кожных и венерических болезней СГМУ и городского кожно-венерологического диспансера г. Саратова с основным диагнозом урогенитальный трихомониаз. Больные находились как на стационарном, так и на амбулаторном лечении.
Исследования проводились в течение двух лет в различные сезоны года. Всего был обследовано 82 пациента. Забор биоматериала для посева и дальнейшего культивирования был произведён у 51 больного - 34 мужчины и 17 женщин в возрасте от 17 до 40 лет.
Диагноз данным больным ставился на основании клинических данных и результатов микроскопирования окрашенного мазка.
Большинство пациентов имели сопутствующие заболевания: гонорея, уреаплазмоз, хламидиоз
Инокулят брался до начала лечения или в самом его начале. Наружное отверстие уретры предварительно обрабатывали тампоном, смоченным дезинфицирующим раствором. У мужчин делался соскоб ложечкой Фолькмана из уретры с глубины 5-7 см. У женщин из уретры материал брался с глубины 1-3 см. Так же у женщин соскоб брался из влагалища и из шейки матки.
Перед посевом делался «влажный препарат» и производился подсчёт клеток в камере Горяева. Во всех случаях такого контроля инокуляционный материал содержал не менее 300 живых трихомонад.
Для проведения ПЦР анализа у мужчин бралась сперма после четырёх дневного воздержания от половых контактов. Микроскопический анализ проводился на микроскопе Jenaval при увеличении 10 х 100. Микрофотографии сделаны с помощью цифровой камеры-окуляра для микроскопа Scopetek DCM35.
Из всего многообразия сред, применяемых для культурального метода диагностики трихомониаза и экспериментального изучения урогенитальной трихомонады, мы выбрали две. Это - диагностическая среда "Vagicult", произведенная в Финляндии. И широко примняемая как в диагностических, так и научных целях жидкая среда 199-СДС.
Среда "Vagicult содержит белковый гидролизат, дрожжевой экстракт, мальтозу, цистеин, аскорбиновую кислоту, сыворотку крови овец, а также антибиотики для подавления сопутствующей патогенной микрофлоры. Данная среда в принципе не предназначена для экспериментальных исследований, так как бедна питательными веществами и не пригодна для длительного культивирования урогенитальной трихомонады. Однако, учитывая её доступность и, главное, массовое использование при диагностике трихомониаза культуральным методом, мы решили остановиться на ней. Компенсировать недостатки среды решили путем тщательного взятия инокуляционного материала и повседневного контроля за культурой. Другой целью было использовать среду "Vagicult" в качестве стартового накопителя с дальнейшим пересевом на среду 199-СДС, содержащую богатый ассортимент всех необходимых для жизнедеятельности трихомонады компонентов. Среда 199-СДС представляет собой комбинированный состав из среды 199 и среды СКДС. Исходя из литературных источников, эта среда имеет наиболее оптимальный состав для получения культур эукариотических клеток или тканей. 2.3 Оборудование, применяемое для длительного непрерывного культивирования Tr.vaginalis С целью длительного непрерывного культивирования урогенитальнои трихомонады использовалась установка каскадно-проточного культивирования с интерактивным управлением «Каскад». Прибор состоит из комплекса ферментёров, объёмом 100 мл каждый, соединённых трубками и управляемый компьютером. В связи с тем, что урогенитальная трихомонада является строгим анаэробом, мы внесли конструктивные изменения в установку исключающие поступление кислорода в проток. Кроме того, мы поместили в ферментёры субстраты и носители. В качестве субстрата мы использовали культуры живых клеток, а носителями (покрытиями) различные материалы - от традиционных: стекловолокна, керамики, желатина, до современных: «Биокол» и «Фолидерм». Такая модель ферментёров по типу турбидостата, имитирующего до известной степени мочеполовой тракт, дает возможность использовать её для длительного культивирования урогенитальнои трихомонады на стандартных диагностических средах, а так же проводить эксперименты по изучению воздействия на Trichomonas vaginalis различного рода препаратов и физиотерапевтических факторов. Рис 1, 2. Для непрерывного культивирования использовали среду следующего состава: солевой раствор -100мл, гидролизат казеина для парентерального белкового питания -10 мл дрожжевой нутолизат-10 мл сыворотка крови лошади или крупного рогатого скота без консерванта -30 мл, 20% раствор мальтозы- 10мл, пенициллин и стрептомицин- по 160000ЕД (среда 199 - СКД). Мы внесли некоторые корректировки в данную среду, которые связаны с особенностями регламента культивирования на протоке.
Скорость потока питательной среды задавалась и поддерживалась автоматически и составляла в среднем от 50 до 100 мл в час. При этом автоматически контролировалась температура (37 С ) и рН среды (6,0-6,3).
Влияние лазерного, СВЧ- и КВЧ- излучений на культуру Trichomonas vaginalis
Являясь самым распространенным заболеванием, передающимся половым путем трихомониаз представляет собой серьёзную медико-социальную проблему.
На этом фоне предаётся забвению тот очевидный факт, что урогенитальная трихомонада животный организм со сложной морфологией, чрезвычайно изменчивым фенотипом, мало изученным циклом развития, практически неизвестными механизмами размножения и патогенеза.
При этом медики, занимающиеся проблемами трихомониаза, очень часто игнорируют данные современной протозоологии, имеющей глубокие научные корни. Вследствии этого, с одной стороны рождаются и процветают различного рода околонаучные спекуляции, приписывающие урогенитальной трихомонаде канцерогенные, мутагенные и даже трансформирующие свойства, с другой, напротив, трихомонаде отводиться роль организма комменсала, не приносящего вреда. Наши исследования не ставили своей целью разрешить множество проблем, связанных с трихомонадной инвазией и самой трихомонадой. Мы пытались добиться длительного стационарного и длительного непрерывного культивирования Tr.vaginalis на коммерческих средах с использованием обычных, несколько модифицированных технологий выращивания микроорганизмов. Главной целью нашей работы было получение чистой культуры Trichomonas vaginalis на жидких средах различного состава в условиях как стационарного, так и проточного культивирования, и изучение влияния на неё лазерного, КВЧ- и СВЧ- излучений. Таким образом, нами сделана попытка, до известной степени смоделировать трихомониазную инвазию и изучить на этой модели воздействие лазерного, СВЧ- и КВЧ- излучений. Эти физические факторы электромагнитной природы давно применяются в физиотерапии ШИШ, в том числе и трихомониаза. Однако, если в начале эпохи ЭМИ в биологии и медицине применение их было чисто эмпирическим, то теперь, когда накоплены громадные знания о механизме влияния этих факторов на биологические объекты, использование излучений происходит целенаправленно, в соответствии со специально разработанными регламентами и инструкциями ( Ковалев М.И. ,1992; Клячкин Л.М. с соавт., 1995;Ситников Н.В. 1997; Неймарк А.И., с соавт., 2003;Тихонов И.В., с соавт. 2006 ) На сегодня доказан терапевтический эффект ЭМИ при очень многих заболеваниях - от соматических до психических. В дерматовенерологической практике, при очень многих патологиях широко используются лазерное, СВЧ- излучение, а в последние годы КВЧ-излучение, а так же всевозможные комбинации ЭМИ с магнитными полями и другими физиотерапевтическими фактами. ( Молочков В.А.,2000; Илларионов В.Е., 2001; Суворов С.А., 2001; Глыбочко П.В., с соавт., 2005 ). При этом, если ранее, физиотерапия, основанная на применении ЭМИ, использовалась как вспомогательное лечебное, или лечебно-профилактическое мероприятие, которое проводилось на стадиях реконвалесценции или реабилитации больных после медикаментозного лечения, то в настоящее время ЭМИ терапия начинается сразу после постановки диагноза, а то и до этого. Такому неверному на наш взгляд подходу к алгоритму лечения любого заболевания, а И111Ш в особенности, в немалой степени способствовало развитие частных кабинетов венерологов и урологов и громадным ассортиментом приборов и аппаратов, генерирующих ЭМИ. Ничего не имея против частной медицины и производителей физиотерапевтического оборудования, мы своими исследованиями пытались привлечь внимание к тем трудностям и проблемам, которые могут возникнуть при непродуманном применении различного рода излучений при трихомонадной инвазии. Все виды излучений, которые мы применили в наших экспериментах в терапевтических дозах, способствовали значительному увеличению числа клеток паразита по сравнению с необлученными культурами. Этот факт указывает на стимуляцию пролиферации Тг.vaginalis Низкими дозами лазерного, СВЧ- и КВЧ- излучениями. Это противоречит данным достаточно многих работ по изучению влияния ЭМИ на микроорганизмы, в том числе и патогенные. Но исследователи во всех этих случаях имели дело с прокариотическими организмами, не имеющими ядра, с относительно простым геномом. Анализ литературных источников, посвященных исследованиям биологического эффекта ЭМИ на культуры эукариотических клеток как in vivo, так и in vitro свидетельствует о возможности стимуляции пролиферативной активности.
Установлено, что лазерное излучение на молекулярном уровне увеличивает синтез белков, образование молекул АТФ, усиливает метаболические процессы, стимулирует транскрипцию генов-регуляторов митотической активности. Этим в немалой степени объясняется хороший терапевтический эффект лазерного излучения при заживлении раневых поверхностей, ожогов, трофических язв -происходит ускорение эпителизации повреждённых кожных покровов и грануляции ран. Возможность стимуляции митотической активности КВЧ- и СВЧ- излучением показана на культурах животных клеток и клетках дрожжей.
![Оценка репродуктивного здоровья на основе изучения качества жизни женщин фертильного возраста [Электронный ресурс]](/i/i/4356/183933.png "Оценка репродуктивного здоровья на основе изучения качества жизни женщин фертильного возраста [Электронный ресурс] Кусмарцева Ольга Федоровна")