Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Аналитическая и фармакологическая характеристика резвератрола (3,5,4'-тригидрокси-гл4іс-стильбена)
1.1. Методы выделения и анализ 3,5,4'-тригидрокси-гарянс-стильбена (резвератрола) 15
1.2. Применение резвератрола в медицине 19
1.3. Перспективность резвератрола как компонента дерматологических лекарственных форм 22
1 .4. Анализ номенклатуры отечественного рынка существующих антисеборейных препаратов 25
Глава 2. Материалы, методы и методики исследования
2.1. Материалы исследования 34
2.1.1. Действующее вещество и его характеристика 34
2.1.2. Вспомогательные вещества и их характеристика 35
2.2. Методы исследования 36
2.2.1. Физические и физико-химические методы анализа: 36
2.2.1.1. Растворимость (ОФС 42-0049-07) 36
2.2.1.2. Ионометрия (ОФС 42-0048-07) 36
2.2.1.3. Плотность (ОФС 42-0037-07) 37
2.2.1.4. Вязкость (ОФС 42-0038-07) 37
2.2.1.5. Прозрачность и степень мутности жидкостей (ОФС 42-0051-07) 37
2.2.1.6. Биофармацевтические методы анализа скорости высвобождения резвератрола из лекарственной формы по методике Крувчинского 37
2.2.1.7. Тонкослойная хроматография (ОФС 42-0094-09) 38
2.2.1.8. Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях (ОФС 42-0042-07) 39
2.2.1.9. Высокоэффективная жидкостная хроматография (ОФС 42-0096-09) 43
2.2.1.10. Газовая хроматография 46
2.2.1.11. Электронное микроскопирование 49
2.2.2. Химические методы анализа 50
2.2.2.1 Общие реакции на подлинность резвератрола и аскорбиновой кислоты
2.2.2.2 Косвенная нейтрализация ацетилированного резвератрола (3,5,4'-тригидрокси-/72ра«с-стильбена) 51
2.2.2.3 Количественное определение кислоты аскорбиновой методом окислительно-восстановительного титрования 52
2.2.3. Биологические методы контроля 53
2.2.3.1 Микробиологические исследования 53
2.2.4. Статистическая обработка результатов химического эксперимента (ОФС 42-0111-09) 55
Выводы к главе 2 56
Глава 3. Обоснование состава и разработка технологии жидкой лекарственной формы с резвератролом антисеборейного действия
3.1. Выбор действующего вещества и вида лекарственной формы 61
3.2. Изучение растворимости резвератрола в различных растворителях 64
3.3. Выбор вспомогательных веществ 65
3.3.1. Выбор дисперсионной среды 66
3.3.2. Выбор консерванта 69
3.3.3. Выбор стабилизатора 70
3.4. Изучение величины рН модельных смесей 73
3.5. Определение скорости высвобождения резвератрола из жидкой лекарственной формы по методике Крувчинского 74
3.6. Разработка технологической схемы производства жидкой лекарственной формы с резвератролом 75
3.6.1. Технология приготовления жидкой лекарственной формы с резвератролом 75
3.6.2; Технологическая схема получения жидкой лекарственной формы с резвератролом 76
3:7. Изучение биоцидной, активности жидкой лекарственной формы с 3,5,4'-тригидрокси-трднс-стильбеном 78
Выводы к главе 3 83
Глава 4. Разработка норм качества разработанной жидкой лекарственной формы и изучение ее сроков годности
4.1. Использование цветных реакций для идентификации 3,5,4'-тригидроіссй-/я/7анс-стнльбена 85
4.1.1. Количественное определение 3,5,4'-тригидрокси-трянс-стильбена методом фотометрии в видимой области спектра 86
4.2. Использование метода хроматографии в тонком слое сорбента для идентификации 3,5,4'-тригидрокси-трйнс-стильбена (резвератрола)... 90
4.3. Использование УФ-спектрофотометрии для идентификации (резвератрола) 91
4.3.1. Изучение возможности количественного определения 3,5,4'- тригидрокси-ятранс-стильбена в жидкой лекарственной форме методом УФ-спектрофотометрии 92
4.3.2. Валидация УФ-спектрофотометрической методики количественного определения 3,5,4'-тригидрокси-гарянс-стильбена в жидкой лекарственной форме 94
4.4. Использование метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для идентификации резвератрола 100
4.4.1. Изучение возможности количественного определения резвератрола методом ВЭЖХ 103
4.4.2. Валидация ВЭЖХ-методики количественного определения резвератрола в жидкой лекарственной форме 104
4.5. Изучение возможности количественного определения ацетилированного резвератрола в разработанной лекарственной форме методом косвенной нейтрализации 100
4.6. Изучение возможности кодичественного определения спирта этилового и глицерина в разработанной жидкой лекарственной форме методом газожидкостной хроматографии (ГЖХ) 111
4.7. Изучение возможности количественного определения кислоты аскорбиновой в жидкой лекарственной форме методом окислительно-восстановительного титрования 114
4.8. Определение срока годности разработанной жидкой лекарственной формы с резвератролом 115
4.9. Составление проекта Фармакопейной статьи предприятия для жидкой лекарственной формы с 3,5,4'- тригидроксистильбеном (резвератролом) 120
Выводы к главе 4 131
Общие выводы 132
Список литературы 134
Приложения 149
- Анализ номенклатуры отечественного рынка существующих антисеборейных препаратов
- Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях (ОФС 42-0042-07)
- Изучение биоцидной, активности жидкой лекарственной формы с 3,5,4'-тригидрокси-трднс-стильбеном
- Валидация УФ-спектрофотометрической методики количественного определения 3,5,4'-тригидрокси-гарянс-стильбена в жидкой лекарственной форме
Введение к работе
Актуальность темы. Одной из тенденций развития российского фармацевтического рынка является увеличение доли лечебной косметики и лекарственных средств, предназначенных для этих целей. Широко представленные в аптеках средства для волос являются, преимущественно импортными, большинство из них предназначены для лечения различного рода аллопеций и перхоти, и лишь отдельные - для лечения больных сухой и жирной себореей волосистой части головы. Отечественные лекарственные средства этого назначения практически отсутствуют, а имеющиеся на фармацевтическом рынке косметические средства (шампуни, лосьоны, бальзамы) при лечении и профилактике себореи просто не эффективны.
В этой связи, проведение научно-исследовательских работ, направленных на разработку новых составов, технологии и последующего производства лекарственных препаратов антисеборейного действия, является, несомненно, актуальной задачей, требующей всестороннего изучения и поиска новых решений.
Одним из перспективных к применению для профилактики и лечения себореи лекарственных веществ является 3,5,4'-тригидрокси-от/>янс-стильбен (резвератрол), достаточно широко применяемый в зарубежной медицинской практике.
Цель и задачи исследования. Целью диссертационного исследования является разработка состава и технологии жидкой лекарственной формы для наружного применения антисеборейного действия на основе полифенольного лекарственного вещества растительного происхождения - резвератрола. В связи с поставленной целью должны быть реализованы следующие задачи:
-
Теоретически обосновать и экспериментально апробировать состав жидкой лекарственной формы с резвератролом.
-
Разработать технологическую схему получения жидкой лекарственной формы для наружного применения.
-
Провести микробиологические исследования, подтверждающие антисеборейное действие разрабатываемой жидкой лекарственной формы с резвератролом.
-
Разработать методики идентификации и количественного анализа резвератрола, пригодные для его определения в разрабатываемой жидкой лекарственной форме.
-
Предложить нормы качества для разработанной жидкой лекарственной формы с резвератролом и изучить условия и сроки ее хранения разработанной жидкой лекарственной формы с резвератролом.
-
Разработать проекты НД в виде лабораторного регламента и проекта ФСП.
Научная новизна исследования.
Впервые проведены микробиологические исследования, подтверждающие антисеборейное действие препарата на основе природного лекарственного вещества полифенольной природы -резвератрола.
Разработаны методы количественного и качественного анализа, подтверждающие стабильность жидкой лекарственной формы антисеборейного действия в процессе хранения. Определены основные показатели качества разработанного лекарственного средства и определены условия и сроки ее хранения.
Научная новизна исследования подтверждена патентами РФ: №2391997 «Антисеборейное фармацевтическое средство», №2385457 «Способ идентификации резвератрола» и №2390772 «Способ количественного определения резвератрола».
Практическая значимость и внедрение результатов в практику.
На основании проведенных исследований создан оригинальный отечественный лекарственный препарат для лечения и профилактики себореи волосистой части головы на базе природной субстанции -резвератрола.
Проведена практическая апробация на предприятии ОАО «Фармстандарт-Лексредства», акт внедрения предложения (от 22.11.2010 г.), разработан проект нормативной документации (лабораторный регламент и аналитические методики), принятый к перспективному рассмотрению ОАО «Фармстандарт-Лексредства». Фрагменты технологических и аналитических исследований внедрены в лабораторно-практический курс по предметам «Фармацевтическая технология» и «Фармацевтическая химия» на фармацевтическом факультете ГОУ ВПО «Белгородский государственный университет» (№80 от 25.10.2010 г., №81 от 25.10.2010 г.) и ГОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет» (№93 от 15.11.2010 г., №94 от 16.11.2010 г.).
Основные положения, выносимые на защиту:
обоснование выбора состава действующих и вспомогательных компонентов при разработке жидкой лекарственной формы для наружного применения антисеборейного действия;
технологическая схема производства жидкой лекарственной формы с резвератролом;
микробиологические исследования разработанного состава жидкой лекарственной формы с резвератролом;
результаты анализа полученной лекарственной формы с резвератролом и установление условий и сроков ее хранения.
Апробация работы.
Основные положения диссертационного исследования обсуждались: на Международной научно-практической конференции «Лекарственные растения и биологически активные вещества: фитотфапия, фармация, фармакология» (Белгород, 2008 г.), на Международной научно-практической конференции «Биологически активные соединения природного происхождения: фитотерапия, фармацевтический маркетинг, фармацевтическая технология, фармакология, ботаника» (Белгород, 2008 г.), на Международной научно-практической конференции «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2010 г.), на научно-практической
конференции «Актуальные проблемы современной фармации и фармацевтического образования» в рамках ХШ межрегиональной специализированной выставки Белгородской торгово-промышленной палаты «Медицина. Фармация» (2010г.), на межкафедральном заседании ГОУ ВПО «Белгородский государственный университет» (2010 г.).
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» в рамках научного направления «Разработка методологических подходов к анализу природных и синтетических биологически активных соединений в объектах различного происхождения. Изучение фармакологических аспектов использования данных биологически активных соединений». Номер государственной регистрации темы диссертационного исследования 01201051313.
Публикации по работе. По материалам диссертационных исследований опубликовано 18 научных работ, 6 - в изданиях, рекомендованных ВАК, получены 3 патента РФ.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 148 страницах машинописного текста, содержит 30 таблиц, 21 рисунок, состоит из введения, 4 глав, выводов, приложения, списка литературы, включающего 133 источника, в т.ч. 108 работ зарубежных авторов.
Анализ номенклатуры отечественного рынка существующих антисеборейных препаратов
В последние годы в аптечных учреждениях в значительной степени расширился ассортимент лекарственных средств и изделий медицинского назначения ведущих мировых фармацевтических компаний. Однако среди спектра антисеборейных препаратов наблюдается явный недостаток средств с активным началом природного растительного происхождения (табл. 1).
Кроме того, надо отметить, что существующий небольшой набор целевых лекарственных средств в основной массе препараты импортного производства с соответственно высокой розничной ценой. Создание отечественных препаратов против себореи позволит достичь ее многократного снижения.
В таблице 1 представлены антисеборейные лекарственные средства, зарегистрированные в России.
Из данных таблицы 1 видно, что на современном российском рынке зарегистрировано достаточное количество антисеборейных лекарственных средств. Наибольший вклад по производству антисеборейных лекарственных препаратов,в российский рынок вносят такие страны, как Бельгия, Дания, Испания, Польша, США и Хорватия. Наиболее распространенными для лечения себореи являются шампуни, мази и кремы. Действующими веществами в них выступают кетоконазол, цинк-пиритион, бетаметазона дипропионат, флуоцинолона ацетонид, кальципотриола моногидрат. Необходимо отметить, что данные соединения синтетического происхождения, что определяет наличие у описанных лекарственных средств большого числа побочных эффектов: аллергические реакции, дерматиты, зуд, шелушение.
Из данных таблицы 2 видно, что розничные цены на отечественные лекарственные антисеборейные средства значительно ниже цен на аналогичную продукцию зарубежного производства, что имеет особое значение в современных условиях экономики. Кроме того, анализ номенклатуры действующих веществ, входящих в состав антисеборейных препаратов, показывает, что они относятся к синтетическим АФС.
Помимо этого, отечественного антисеборейного лекарственного препарата на основе биологически активного соединения растительного происхождения, пригодного как для лечения, так для профилактики себореи волосистой части головы не выявлено. Поэтому разработка такового поможет расширить существующий спектр целевых лекарственных препаратов с априори низкой вероятностью наличия побочных эффектов.
Из представленного обзора литературных данных ясно обозначается существующая проблема. С одной стороны, доказана многоплановая фармакологическая активность рёзвератрола (3,5,4 -тригидрокси-транс-стильбена), с другой стороны, сегодня практически отсутствуют лекарственные формы, созданные по результатам проведенных испытаний. Хотя, в настоящее время существует ряд биологически активных добавок к пище на основе рёзвератрола. Доказанное фунгицидное и противовоспалительное действие 3,5,4 -тригидрокси-/ярянс-стильбена определяют возможность его использования в составе антисеборейных лекарственных средств. Поэтому разработка антисеборейной жидкой лекарственной формы с резвератролом (3,5,4 -тригидрокси-/этранс-стильбеном) является актуальной. „ Таким образом, вышесказанное подтвердило актуальность данных диссертационных исследований, определило их цель и задачи.
Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях (ОФС 42-0042-07)
0,15 мл анализируемой жидкой лекарственной формы с резвератролом переносили в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводили до метки спиртом этиловым 96%-ным и перемешивали. Спектр поглощения полученного раствора в области от 240 до 340 нм должен иметь максимум поглощения при 306-307 нм.
Для сравнения можно использовать раствор стандартного образца резвератрола в спирте этиловом 96%-ном в концентрации около 4x10"6 г/мл.
Количественное содержание 3,5,4 -тригидрокси-трш/с-стильбена в разработанной лекарственной форме определяли методом с использованием стандартного образца (СО).
0,15 мл препарата помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводили объём раствора спиртом этиловым 96%-ным до метки и перемешивали.
Измеряли оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре СФ-56 в кювете с толщиной слоя 10 мм, при длине волны 306 нм. В качестве раствора сравнения использовали спирт этиловый 96% -ный.
Параллельно определяли оптическую плотность раствора СО 3,5,4 -тригидрокси-транс-стильбена.
Содержание резвератрола в 1 мл препарата (X), вычисляли по формуле
Примечания:
1 .Приготовление раствора СОрезвератрола
0,01 г (точная навеска) стандарта 3,5,4 -тригидрокси-шракс-стильбена помещали в мерную колбу вместимостью 50,0 мл, прибавляли небольшое количество спирта этилового 96%-ного, перемешивали до полного растворения, объём раствора доводили до метки тем же растворителем (исходный раствор).
1 мл исходного раствора помещали в мерную колбу вместимостью 50,0 мл, доводили объём раствора спиртом этиловым 96%-ным до метки и перемешивали.
2. Метод с использованием уравнения калибровочного графика в случае использования цветных реакций
Точную навеску 3,5,4 -тригидрокси-/77/?янс-стильбена растворяли небольшим количеством спирта этилового 96 % в мерной колбе вместимостью 50,0 мл и доводили объем раствора до метки тем же растворителем (рабочий образец). Путем разбавления полученного раствора готовили серии растворов с различной концентрацией 3,5,4 -тригидрокси-трсшостильбена.
Из рабочего образца в мерные колбы вместимостью 10,0 мл отбирали от 1,0 до 6,0 мл данного раствора, прибавляли определенное количество реактива, доводили до метки спиртом этиловым 96%-ным и проводили измерение оптической плотности с помощью спектрофотометра СФ-56 в кювете с толщиной слоя 1,0 см в диапазоне длин волн 240-340 нм.
Устанавливали графическую зависимость оптической плотности от концентрации 3,5,4 -тригидрокси-трянс-стильбена в растворе. По полученным данным с помощью программы Microsoft Excel было рассчитано уравнение прямой, соответствующее прямолинейному участку калибровочного графика, а также удельный и молярный коэффициенты поглощения.
Изучение биоцидной, активности жидкой лекарственной формы с 3,5,4'-тригидрокси-трднс-стильбеном
С целью подтверждения эффективности разработанной жидкой лекарственной формы с 3,5,4 -тригидрокси-гарсшс-стильбеном (резвератролом) и корректировки состава (в случае необходимости) был проведен спектр микробиологических исследований.
Исследование спектра активности лекарственной формы с 3,5,4 -тригидрокси-гарзнс-стильбеном в отношении грамположительных микроорганизмов включало в себя проведение опытов в отношении следующих тест-штаммов микроорганизмов, рекомендованных ГФ-Х1: Staphylococcus aureus АТСС 25923, Bacillus subtilis АТСС 6633, Bacillus cereus var mycoides 537.
В качестве контроля сравненйя .были выбраны: спирт этиловый 70 % (обладает противомикробным, антисептическим действием и выраженным действием на микроорганизмы именно в указанной концентрации), суспензия 3,5,4 -тригидрокси-трй!нс-стильбена.
Результаты сравнительных исследований представлены в таблице 12
Примечание - концентрация спирта этилового и количество резвератрола в суспензии эквивалентно составу разработанной жидкой лекарственной формы.
Из данных таблицы 12 следует, что зоны задержки роста микроорганизмов Staphyllococcus aureus АТСС 25923, Bacillus subtilis АТСС 6633 и Bacillus cereus varmycoides 537 ъ случае использования разработанной жидкой лекарственной формы больше в сравнении с суспензией резвератрола - в 2,3 раза, со спиртом этиловым 70"% - в 1,3 раза.
Исследование анаэробной активности разработанного лекарственного состава в отношении факультативно-анаэробных грамотрицательных микроорганизмов также базировалось на опытах с тест-культурами, рекомендованными ГФ-ХІ: Escherichia coli АТСС 25922, Proteus vulgaris АТСС 4636 и Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853. Исследование антимикотической активности проводилось с использованием штамма Candida albicans NCTC 2625, Aspergillus niger PUKTF-106/BKMF1119.
В качестве контроля были выбраны: спирт этиловый 70 % и суспензия резвератрола. у Результаты сравнительных исследований представлены в таблице 13Примечание - концентрация спирта этилового и количество 3,5,4 -тригидрокси-гарянс-стильбена (резвератрола) в суспензии эквивалентно составу разработанной лекарственной формы.
Из данных таблицы 13 следует, что зоны задержки роста микроорганизмов Escherichia coli АТСС 25922, Proteus vulgaris АТСС 4636, Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853, Candida albicans NCTC 2625 и Aspergillus niger PnKTF-106/BKMF 1119 в случае использования разработанной жидкой лекарственной формы больше в сравнении с суспензией резвератрола — в 1,4 раза5" со спиртом этиловым 70 % - в 1,2 раза.
Дальнейшим этапом исследований стало изучение сравнительной биоцидной активности разработанной жидкой лекарственной формы с резвератролом и известных, лекарственных средств антисеборейного действия.
В качестве препаратов сравнения были выбраны антисеборейные лекарственные: препараты Hair Vital, производитель, - Betafarma S.p.A., Испания (препарат 1), Бальзам дерматологический с экстрактом крапивы, производитель - Laboratories Home Institut - 54670 Millery, Франция (препарат 2) — наиболее широко применяемые жидкие лекарственные формы, обладающие специфической активностью и включающие в свой, состав растительные компоненты.
Результаты сравнительных . исследований антимикотической активности представлены в таблице 14.
Из данных таблицы 14 следует, что зоны задержки роста микроорганизмов Staphyllococcus aureus АТСС 25923, Bacillus subtilis АТСС 6633 и Bacillus cereus varmycoides 537 в случае использования разработанной лекарственной формы с резвератролом значительно больше зон задержки роста контроля: с препаратом 1 - в 1,5 раза, спрепаратом 2 - в 2,4 раза.
Результаты исследования сравнительной антимикробной активности изучаемых препаратов в отношении факультативно-аэробных грамотрицательных микроорганизмов.представлены в таблице Из данных таблицы 15 следует, что зоны задержки роста микроорганизмов Escherichia coli АТСС 25922, Proteus vulgaris АТСС 4636, Pseudomons aeruginosa АТСС 27853, Candida Albicans NCTC 2625 и Aspergillus niger PnKTF-106/BKMF 1119 в случае использования разработанной жидкой лекарственной формы с резвератролом значительно больше зон задержки роста контроля: с препаратом 1 — в 1,3 раза, с препаратом 2 - в 1,9 раза.
Таким образом, полученные результаты исследования свидетельствуют о том, что разработанная жидкая лекарственная форма с 3,5,4 -тригидрокси транс-стильбешм (резвератролом) обладает выраженным антимикробным и фунгицидным действием, превосходящим эффективность препаратов сравнения.
Валидация УФ-спектрофотометрической методики количественного определения 3,5,4'-тригидрокси-гарянс-стильбена в жидкой лекарственной форме
Для аналитических методик, используемых в количественном определении 3,5,4 -тригидрокси-транс-стильбена (резвератрола), следует продемонстрировать такие валидационные характеристики, как специфичность, правильность, прецизионность, линейность и диапазон применения, а для методики идентификации - специфичность.
Специфичность. Спектры поглощения 3,5,4 - тригидрокси-транс-стильбена в спирте этиловом 96 % - ном (СО 3,5,4 -тригидрокси-транс-стильбена) и в разработанной лекарственной форме, подтверждающие специфичность, представлены на рисунке 13 и рисунке 14.
Специфичность методики подтверждается тем, что данные характеристики сохраняются в спектре, полученном при идентификации 3,5,4 -тригидрокси-транс-стильбена (резвератрола) в спирте этиловом 96 % -ном и в разработанной лекарственной форме (максимум светопоглощения при длине волны 306-307 нм).
Правильность, прецизионности (сходимость), линейность и диапазон применения.
Характеристики правильности и прецизионности (сходимости) исследовались на модельных растворах препарата с концентрациями 3,5,4 -тригидрокси-трянс-стильбена, которые находятся в пределах от 80 % до 120 % содержания по отношению к номинальному значению, что соответствует диапазону применения данной методики.
Из данных, приведенных в таблицы 19, следует, что для 3,5,4 тригидрокси-транс-стильбена (резвератрола) методика анализа характеризуется достаточной правильностью и прецизионностью во всем диапазоне концентраций (от 80 % до 120 %) и является корректной. В диапазоне концентраций 3,5,4 -тригидрокси-тр янс-стильбена от 80 % до 120 % по отношению к номинальной концентрации методика не имеет значимой систематической погрешности.
Линейность методики также-исследовали в диапазоне концентраций 3,5,4 -тригидрокси-шранс-стильбена от 80 % до 120 % по отношению к номинальному значению. Установлено, что требования к параметрам линейной зависимости выполняются, то есть линейность методики определения 3,5,4 -тригидрокси-транс-стильбена подтверждается в диапазоне указанных концентраций от номинального значения.
Для оценки линейности методики используют следующие критерии:
1. Требования к свободному члену а.
Свободный член а должен быть статистически неотличим от нуля, т.е. не должен превышать свой доверительный интервал
Вклад свободного члена в неопределенность результата анализа должен быть незначимым в сравнении с максимально допустимой неопределенностью
Требования к относительному остаточному стандартному отклонению (RSDo):
Доверительный интервал экспериментальных точек относительно рассчитанной регрессионной прямой равняется произведению коэффициента Стьюдента на остаточное стандартное отклонение (RSDrest) и не должен превышать максимально допустимую неопределенность методики анализа А As (число степеней свободы точек прямой равняется f= 5—2=3)
Вначале оценивают неопределенность пробоподготовки. Согласно общей статье «Валидация аналитических методик и испытаний», неопределенность не должны превышать:
- неопределенность навески 335,4 -тригидрокси-7и/?днс-стильбена (резвератрола) 100x0,0002/0,3 = 0,07 %
- неопределенность объема мерной колбы 100 мл - 0,12 %
- неопределенность объема пипетки 1 мл - 0,6 %.
Суммарная неопределенность пробоподготовки (Asp) равна: ASp=ЛІО,072 + 0Д22 + 0,62 + 0Д22 = 0,63
Неопределенность конечной аналитической операции (спектрофотометрии) (AAS) рассчитывают, исходя из требований к максимальному относительному стандартному отклонению (RSDmax), числа параллельных измерений (п) и соответствующий ему коэффициент Стыодента для односторонней вероятности 95 %
При допустимом 20 % отклонении концентрации 3,5,4 -тригидрокси транс-стилъбена в жидкой лекарственной форме рассчитанное значение суммарной неопределенности не превышает значения maxAAs = 0,32 х20 = 6,4 0,964. Это свидетельствует о том, что методика соответствует критериям пригодности для количественного определения действующего компонента в жидкой лекарственной форме и будет давать корректные результаты в других лабораториях.
Для подтверждения отсутствия систематической ошибки были проведены опыты с добавками. Сначала определяли оптическую плотность Dx анализируемого раствора, содержащего 3,5,4 -тригидрокси-яграис стильбен (резвератрол) известной концентрации сх, а затем в анализируемый раствор добавляли известное количество определяемого 3,5,4 -тригидрокси транс-стильбена (сст) и вновь измеряли оптическую плотность DX+CT полученного раствора.
