Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Проблема кандидозов слизистых оболочек в медицинской практике 13
1.2. Современные подходы к терапии кандидозов слизистых оболочек 19
1.3. Флуконазол, его характеристика и применение в лечении кандидозов 25
1.4. Суппозитории в лечении вагинальных кандидозов 29
1.5. Использование биорастворимых полимерных лекарственных пленок в терапии микозов слизистых оболочек 32
Заключение 37
Экспериментальная часть
Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1. Материалы исследования 38
2.2. Методы исследования 39
2.2.1. Методы исследования суппозиториев 39
2.2.2. Методы исследования биорастворимых полимерных лекарственных пленок 49
Выводы 56
Глава 3. Исследования по разработке состава, технологии получения и показателей качества суппозиториев с флуконазолом
3.1 Выбор основных компонентов разрабатываемой лекарственной формы 57
3.1.1. Обоснование выбора суппозиторной основы, дозировки флуконазола и способа его введения в суппозитории 57
3.1.2. Обоснование введения бензалкония хлорида в состав разрабатываемых суппозиториев 62
3.1.3 Обоснование введения твина-80 в состав разрабатываемых суппозиториев 65
3.1.4 Обоснование сочетанного использования бензалкония хлорида и твина-80 в составе разрабатываемых суппозиториев 66
3.2 Биофармацевтические исследования при разработке суппозиториев флуконазола 70
3.2.1 Влияние основы на антибактериальную активность суппозиториев флуконазола 70
3.2.2 Влияние дисперсности флуконазола на антибактериальную активность суппозиториев 72
3.2.3 Изучение профиля высвобождения флуконазола из суппозиториев методом равновесного диализа 77
3.2.4 Изучение профиля высвобождения флуконазола из суппозиториев с использованием теста «Растворение» 80
3.3. Технология получения интравагинальных суппозиториев с флуконазолом и оценка их качества 83
3.3.1. Технологическая схема производства суппозиториев 83
3.3.2 Валидационная оценка методики количественного определения флуконазола в суппозиториях 86
3.3.3. Оценка качества суппозиториев и изучение их стабильности 90
Выводы 101
Глава 4. Разработка биорастворимой полимерной лекарственной пленки флуконазола
4.1 Обоснование выбора матрицы-носителя и концентрации флуконазола в пленке 104
4.2. Биофармацевтические исследования при разработке биорастворимой полимерной лекарственной пленки 109
4.2.1. Влияние поверхностно-активных веществ на дисперсность флуконазола в пленках 109
4.2.2. Влияние бензалкония хлорида на антибактериальную активность пленки 114
4.2.3 Изучение профиля высвобождения флуконазола из пленок в опытах in vitro 116
4.3. Технология получения биорастворимой полимерной лекарственной пленки с флуконазолом и оценка ее качества 118
4.3.1. Технологическая схема получения биорастворимой полимерной лекарственной пленки 118
4.3.2. Валидационная оценка методики количественного определения флуконазола в пленке 120
4.3.3. Оценка качества и изучение стабильности биорастворимой полимерной лекарственной пленки флуконазола 124
Выводы 132
Общие выводы 134
Список литературы 136
Приложения 163
- Проблема кандидозов слизистых оболочек в медицинской практике
- Обоснование выбора суппозиторной основы, дозировки флуконазола и способа его введения в суппозитории
- Оценка качества суппозиториев и изучение их стабильности
- Оценка качества и изучение стабильности биорастворимой полимерной лекарственной пленки флуконазола
Введение к работе
Актуальность темы. Грибковые инфекции представляют собой одну из ведущих групп заболеваний в мире. По данным ВОЗ каждый пятый житель планеты страдает каким-либо микозом. Частота этих инфекций связана с ухудшением экологической ситуации, широким приемом антибиотиков, цитостатиков, глюкокортикостероидов, увеличением числа больных с нарушениями иммунной системы и т.д. За последние годы особенно возросла распространенность кандидозных инфекций, вызываемых грибами рода Candida. Клиницисты отмечают тенденцию к неуклонному росту заболеваемости данной патологией, частому рецидивированию процесса и указывают, что проблема носит острый медико-социальный характер, затрагивающий здоровье самых разных возрастных групп и слоев населения, их трудоспособность. В связи с чем на протяжении последнего десятилетия интерес к проблеме лечения и профилактики кандидозов слизистых оболочек в таких областях медицины, как гинекология, стоматология, офтальмология и оториноларингология не только ослабел, но и значительно возрос.
Несмотря на значительный ассортимент и возможность выбора антимикотических препаратов, вопросы терапии кандидозов не теряют актуальность и требуют для своего решения внедрения новых, более эффективных фармакологических субстанций, а также создания на их основе лекарственных препаратов. Среди групп современных синтетических антимикотических средств, используемых в терапии кандидозов слизистых оболочек, доминируют триазольные соединения. Из них особое место принадлежит флуконазолу, высокая биодоступность, актуальность и возможность применения которого при различной локализации кандидозов подтверждена в эксперименте и клинической практике. В лечении кандидозов слизистых широко используют пероральный и парентеральный способы введения антимикотиков. Однако свою нишу занимает и местное применение указанной группы лекарственных средств. Так, в гинекологии одной из рациональных лекарственных форм являются суппозитории. Перспективным и достаточно эффективным методом аппликационного воздействия на очаги поражения кожи и слизистых оболочек считают использование биорастворимой лекарственной полимерной пленки, о чем свидетельствуют активные исследования, проведенные в последние десятилетия. Указанные лекарственные формы обладают рядом известных положительных свойств. Они непосредственно вводятся в/на очаг поражения, где создают высокую концентрацию действующего вещества и позволяют достичь значительного терапевтического эффекта при минимальном побочном действии, а также не требуют особых условий для применения. В связи с изложенным нами сформулированы цель и задачи исследования.
Целью настоящего исследования является экспериментальное и теоретическое обоснование составов, технологии получения и показателей стандартизации новых, эффективных лекарственных форм флуконазола, предназначенных для лечения и профилактики грибковых заболеваний слизистых оболочек.
Задачи исследования:
– обосновать и разработать состав, технологию получения интравагинальных суппозиториев, содержащих флуконазол;
– обосновать и разработать состав, технологию получения биорастворимой лекарственной полимерной пленки, содержащей флуконазол;
– проанализировать in vitro влияние фармацевтических факторов при разработке лекарственных форм флуконазола;
– изучить специфическую противогрибковую и антибактериальную активность суппозиториев и биорастворимой полимерной пленки флуконазола;
– разработать и валидировать методики количественного определения флуконазола в суппозиториях и биорастворимой лекарственной полимерной пленке;
– определить показатели качества разработанных лекарственных форм флуконазола, изучить стабильность и установить сроки годности;
– разработать проекты нормативной документации на предлагаемые лекарственные препараты.
Научная новизна результатов исследования. В результате проведения комплекса экспериментальных исследований (физических, физико-химических, технологических, биофармацевтических и микробиологических) впервые обоснованы и разработаны составы и технология получения суппозиториев с флуконазолом на основах витепсол Н-15 и полиэтиленоксидной, предназначенных для терапии вагинального кандидоза.
С использованием современных методов анализа впервые обоснованы и предложены состав и технология получения биорастворимой полимерной пленки флуконазола, предназначенной для лечения кандидозов слизистых оболочек в гинекологической, стоматологической, офтальмологической и ЛОР-практике.
Предложены и валидированы методики количественного определения флуконазола в вагинальных суппозиториях и биорастворимой лекарственной полимерной пленке с использованием метода УФ-спектрофотометрии.
Разработаны показатели оценки качества суппозиториев и биорастворимой лекарственной полимерной пленки с флуконазолом, изучена их стабильность в процессе хранения и определен срок годности.
Установлена противогрибковая и антибактериальная активность разработанных лекарственных форм флуконазола.
Практическая значимость полученных результатов. Разработаны проекты ФСП на препараты: «Флуконазола, суппозитории вагинальные на основе витепсол Н-15, 150 мг»; «Флуконазола, суппозитории на полиэтиленоксидной основе, 150 мг»; «Флуконазола, биорастворимая полимерная пленка, 2 мг/см2», а также лабораторные регламенты на производство «Флуконазола, суппозитории вагинальные на основе витепсол Н-15, 150 мг»; «Флуконазола, суппозитории на полиэтиленоксидной основе, 150 мг»; «Флуконазола, биорастворимая полимерная пленка, 2 мг/см2». Результаты исследований подтверждены удостоверениями на рационализаторские предложения: «Состав суппозиториев для лечения кандидозов» (№ 1966-11 от 8.06.11г, КГМУ), «Состав суппозиториев для лечения кандидозов на полиэтиленоксидной основе» (№ 1967-11 от 8.06.11г, КГМУ), «Состав биорастворимой лекарственной пленки для лечения кандидозов» (№ 1965-11 от 8.06.11 г, КГМУ).
На разработанные лекарственные формы составлены:
– методические рекомендации «Технология, контроль качества и применение комбинированных суппозиториев в терапии воспалительных заболеваний различной этиологии» (утв. Комитетом здравоохранения администрации Курской области, 2009 г);
– методические рекомендации «Разработка составов и технологии лекарственных форм для лечения кандидозов слизистых оболочек» (утв. в ГБОУ ВПО КГМУ, 2011 г);
– информационное письмо «Разработка и исследование суппозиториев для лечения вагинальных кандидозов» (утв. в ГБОУ ВПО КГМУ, 2011 г);
– учебное пособие «Биофармацевтические аспекты разработки суппозиториев» для студентов фармацевтических факультетов учреждений высшего профессионального образования очной и заочной форм обучения, слушателей ФПК и последипломной подготовки специалистов. Электронное пособие, регистрационный №0321300078 ФГУП НТЦ «Информрегистр», 2013г.
Материалы диссертации используются в научно-исследовательской работе и учебном процессе на кафедрах ГБОУ ВПО Курского государственного медицинского университета (КГМУ), ФГАОУ ВПО НИУ Белгородского государственного университета (БелГУ), Воронежского государственного университета (ВГУ), Воронежской государственной медицинской академии имени Н.Н. Бурденко (ВГМА им Н.Н. Бурденко), Казанского государственного медицинского университета, Смоленской государственной медицинской академии (СГМА).
Лабораторный регламент получения препарата «Флуконазола, суппозитории вагинальные на основе витепсол Н-15, 150 мг» апробирован на предприятии ЗАО «Аквион», г. Москва.
Положения, выносимые на защиту.
1. Результаты исследований по разработке состава и технологии получения вагинальных суппозиториев флуконазола.
2. Результаты исследований по разработке состава и технологии получения биорастворимой полимерной пленки флуконазола.
3. Результаты in vitro биофармацевтических исследований по разработке вагинальных суппозиториев и биорастворимой полимерной пленки флуконазола.
4. Разработанные показатели оценки качества суппозиториев и биорастворимой лекарственной полимерной пленки флуконазола.
5. Результаты изучения стабильности суппозиториев и биорастворимой лекарственной полимерной пленки флуконазола.
Апробация работы. Результаты исследований представлены и доложены на Международной научно-практической конференции «Кластерные подходы в современной фармации и фармацевтическом образовании» (Белгород, 2008 г); Всероссийской школе-семинаре «Современные наукоемкие лечебные и фармацевтические технологии для офтальмологии» для молодых ученых (Белгород, 2009 г); 4-й Всероссийской с международным участием научно-методической конференции «Фармобразование 2010» «Пути и формы совершенствования фармацевтического образования» (Воронеж, 2010 г); XVII и XVIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2010 г; Москва 2011 г); итоговых научных межвузовских конференциях студентов и молодых ученых КГМУ (Курск, 2008-2012 гг); Всероссийской научно-практической интернет-конференции с международным участием «Современные аспекты разработки и совершенствования состава и технологии лекарственных форм» (Курск, 2011 г); научно-практической интернет-конференции «Биофармацевтические особенности создания лекарственных препаратов в аспекте медицинского пользования» (Харьков, 2011 г).
Личный вклад автора. Автору принадлежит ведущая роль в выборе направления исследования, постановки цели и поиске путей ее достижения. Автором лично проанализированы отечественные и зарубежные источники по теме диссертационного исследования. В работах, выполненных в соавторстве, Автиной Т.В. лично проведены экспериментальные исследования, аналитическая, статистическая обработка полученных результатов, их обобщение и представление. Вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии на всех этапах исследования.
Публикации. По материалам диссертационных исследований опубликовано 17 работ, из них 4 – в изданиях, рекомендованных ВАК.
Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Выполненная работа соответствует паспорту специальности 14.04.01 – технология получения лекарств. Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 1, 3 и 4 паспорта специальности технология получения лекарств.
Связь задач исследования с проблемным планом науки. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГБОУ ВПО КГМУ Минздравсоцразвития России (номер государственной регистрации 0120. 0 803352).
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 188 стр., состоит из введения, обзора литературы (1 глава), 3-х глав экспериментальных исследований, общих выводов, приложения; содержит 28 таблиц и 13 рисунков; библиографический указатель включает 236 источника, из них 75 – на иностранных языках.
Проблема кандидозов слизистых оболочек в медицинской практике
В настоящее время в медицинской науке и практике с ростом заболеваний, сопровождающихся различными иммунодефицитными состояниями и нейтропениями, возрос интерес к поражениям различных органов и тканей организма человека патогенными и условно-патогенными грибковыми инфекциями (микозами). Это стимулирует изучение микробиологических свойств грибов, микробиологических реакций на грибковую инвазию, создание новых методов диагностики микозов, усовершенствования схем и форм применения имеющихся антимикотических лекарственных препаратов, а также поиск новых [80, 108, 132, 138].
Наиболее частыми возбудителями микозов являются условно-патогенные микроорганизмы - грибы рода Candida. Однако, при определенных состояниях организма способны вызывать широкий диапазон заболеваний - от легких повреждений кожи и слизистых оболочек до инвазивных процессов, которые могут поражать практически любой орган, нередко создавая угрозу жизни [28, 109, 170,232].
К настоящему времени описано более 150 биологических видов дрожжеподобных грибов, при этом степень распространенности и патогенности штаммов разнообразна. Основную роль в патологии человека играют ограниченное количество видов, при резком доминировании С. albicans (80-90%), обладающего такими факторами вирулентности, как продукция протеиназы, фосфолипазы, и способностью вырабатывать псевдомицелий. В последние годы многими авторами отмечается тенденция увеличения частоты заболевания, особенно при хронических и рецидивирующих формах, вызванной другими (non-albicans) видами Candida. Среди последних, клиническое значение имеют преимущественно С. glabrata (5-10%), С. tropicalis (3-5%), С. parapsilosis (3-5%), С. krusei (1-3%), а также С. pseudotropicalis [21, 51,189].
Инфекционное заболевание кожи, слизистых оболочек и внутренних органов, вызываемое дрожжеподобными грибами рода Candida, возникающее на фоне снижения защитных сил организма и относящееся ко вторичным микозам называют кандидозом (кандидамикозом) [28].
Самый распространенный вид патологии среди кандидозных поражений организма человека - кандидоз слизистых оболочек.
Слизистые оболочки урогенитального, респираторного и пищеварительного тракта представляют собой «открытые» системы, постоянно контактирующие с внешней средой, что объясняет значительную распространенность транзиторного кандидоносительства в человеческой популяции.
У здоровых людей С. albicans асимптоматически колонизирует эпителиальные поверхности, в результате чего развивается Candida-специфический иммунитет. Возникновению инфекции способствуют нарушения иммунореактивности и факторов неспецифической защиты организма на системном и местном уровне. На увеличении числа больных сказывается воздействие различных факторов внешней среды на организм человека таких, как: ухудшение экологической ситуации, обширное применение химических веществ, загрязнение воздуха, частые и длительные эмоциональные стрессы, истощающие физические нагрузки и др. [150,184].
К росту иммунокомпрометированных больных приводит использование новых медицинских технологий (интенсивная цитостатическая и иммуносупрессивная терапии, трансплантация органов и тканей, инвазивных диагностических и лечебных процедур и пр.) [70, 74]. Самолечение, прием антибиотиков широкого спектра действия, подавляющих рост лактобактерий; пандемия ВИЧ-инфекции; аутоиммунные и аллергические заболевания, особенно на фоне лечения глюкокортикостероидами; эндокринопатия; эндогенное аутоинфицирование из кишечника и/или полости рта также относят к факторам риска возникновения кандидозов [42,147,101,153].
Клинические проявления кандидоза разнообразны и зависят от характера основного заболевания и сопутствующей патологии, стадии патологического процесса, особенностей фонового микробного пейзажа.
Проблема лечения и профилактики кандидозов является достаточно узкой во всех областях медицины и, особенно, в гинекологической практике [38, 41, 86]. У женщин кандидозно-воспалительные изменения могут ограничиваться наружными половыми органами (вульвит) или влагалищем (вагинит), но чаще наблюдается сочетанное поражение (вульвовагинит), реже возникает уретрит и цистит [92, 227].
В общей структуре инфекционной патологии органов мочеполового тракта вульвовагиниты, обусловленные грибковой инфекцией, по данным разных авторов, составляют от 30% до 50%. Но наиболее частым проявлением кандидоза слизистых оболочек в гинекологии является вагинальный, который прочно занимает лидирующую позицию в гинекологии среди специфических инфекций репродуктивных органов, уступая лишь бактериальному вагинозу. Исследования показывают, что около 75% женщин в течение жизни имеют, по меньшей мере, один эпизод вагинального кандидоза, 50% - повторный, а до 20% пациенток страдают хроническим рецидивирующим ВВК [17, 41, 58, 131, 183].
Вагинальный кандидоз не является ШИШ, но может свидетельствовать об изменениях иммунного и/или гормонального статуса. При ВК инфекционный процесс чаще всего локализуется в поверхностных слоях эпителия влагалища и обуславливает изменение микробиоценоза влагалища. Это создает оптимальные условия для резкого увеличения условно-патогенной флоры, которая и становится основным патогенным фактором в развитии заболевания [15,57,129].
Микробиологические исследования показывают, что в патологическом материале находится скопление 10-15 и более дрожжевых клеток, преимущественно с почкованием, псевдомицелий содержится в большом количестве. При острых формах заболевания преобладают клеточные формы, при хронических - скопление псевдомицелия [64].
Основными клиническими симптомами ВК являются обильные или умеренные творожистые выделения из влагалища, образование на гиперемированной слизистой оболочке белого налета, зуд и жжение в области наружных половых органов, дизурические явления, диспареуния. Слизистая легко травмируется и кровоточит при осмотре [18, 109, 151].
Особенностью кандидозной инфекции в настоящее время является хроническое, длительное, склонное к рецидивированию, течение процесса. Так, практически у 40% женщин, перенесших заболевание, возникают рецидивы, что неблагоприятно влияет не только на состояние здоровья, но и на качество жизни в целом [83, 184].
Следует подчеркнуть, что наряду с клинически выраженным заболеванием существует бессимптомная колонизация влагалища дрожжеподобными грибами - около 20% здоровых женщин являются их носителями [76, 123].
В настоящее время наиболее часто появляются сообщения о «поп-albicans» поражениях влагалища, которые относят к так называемому осложненному вагинальному кандидозу, ассоциирующегося с хроническими рецидивирующими формами заболевания [17, 230]. Клиницисты отмечают, что хронические влагалищные инфекции становятся причиной патологии не только нижних, но и верхних отделов мочеполовых органов, приводя к бесплодию и невынашиванию беременности. Наличие у женщин вульвовагинального кандидоза во время беременности приводит в 70% случаев к колонизации микроорганизмов ротовой полости детей [2, 52, 75].
В связи с изложенным, кандидозная инфекция органов мочеполовой системы является актуальной проблемой современной гинекологии.
Обоснование выбора суппозиторной основы, дозировки флуконазола и способа его введения в суппозитории
Одной из поставленных задач исследования является разработка состава суппозиториев, содержащих в качестве действующей субстанции антимикотик, обуславливающий специфическое действие лекарственной формы. Обоснование его содержания в суппозиториях, а также оптимальной суппозиторной основы осуществляли на основании изучения литературных данных и результатов проведенных экспериментальных исследований.
Как отмечалось ранее, в последние годы достаточно надежными и эффективными зарекомендовали себя антимикотики, относящиеся к группе триазольных соединений, среди которых особое место занимает флуконазол. Анализ данных литературы показывает, что содержание противогрибковых средств в суппозиториях, например, группы имидазолов, чаще всего составляет 150 мг, реже 300 мг, на один суппозиторий. При выборе терапевтической концентрации флуконазола учитывали следующие предпосылки. Во-первых, антимикотики группы триазолового ряда, в сравнении с представителями других групп, обладают большей эффективностью и биодоступностью. Во-вторых, при создании лекарственных форм, предназначенных для интравагинального и ректального введения, как правило, руководствуются дозами, установленными для перорального применения. Соответственно этому, в медицинской практике России и в других странах, между интравагинальными и пероральными назначениями разовых и суточных доз у большинства препаратов разницы нет. Флуконазол, чаще всего назначается внутрь в капсулах с дозировкой 150 мг [56, 123, 141, 142]. Поэтому при изучении возможности создания новой лекарственной формы для флуконазола его вводили из расчета 150 мг на один суппозиторий.
Известно, что одним из факторов, оказывающим значительное влияние на действие лекарственных веществ в суппозиториях, является основа и компоненты ее составляющие. При выборе ингредиентов основы необходимо учитывать ряд требований, в частности: отсутствие раздражающего действия на слизистую оболочку, равномерное распределение по ее поверхности, совместимость с лекарственными веществами и способность к их высвобождению, стабильность при хранении [6, 22, 160].
Кроме того, основа должна обеспечивать хорошие технологические показатели, а именно, в расплавленном состоянии иметь определенную вязкость, для избежания седиментации взвешенных в ней частиц при дозировании суппозиторной массы, а разлитая в гнезда формы расплавленная масса, должна быстро затвердевать и легко отделяться от их поверхности [100,228].
На сегодняшний день на международном фармацевтическом рынке под известными торговыми марками представлены суппозиторные основы различного характера - гидрофильные, гидрофобные, дифильные.
Характерной особенностью гидрофильных основ является их хорошая растворимость. Процесс всасывания лекарственного средства из основ происходит независимо от температуры их плавления, поскольку он обусловлен скоростью растворения самих основ и скоростью диффузии из них лекарственного вещества. Самым ярким представителем данного класса основ являются полиэтиленоксидные. Комбинируя разные по консистенции ПЭО, можно получить основы с необходимыми структурно-механическими свойствами. Наиболее часто суппозиторные основы получают путем сплавления ПЭО-400 и ПЭО-1500 в соотношениях (1:9) и (2:8) [30,43]. Для полиэтиленоксидной основы также характерно наличие осмотической активности и слабого бактерицидного действия. Она активно адсорбирует экссудат, уменьшает отеки ткани и слизистых оболочек [113, 162].
К гидрофобным суппозиторным основам относят жиры, жироподобные вещества природного и полусинтетического происхождения, которые плавятся при температуре тела.
В качестве заменителей классической основы - масла какао, применяемой для изготовления суппозиториев ex tempore, различными фармакопеями мира приняты и достаточно широко используются гидрогенизированные жиры, сплавы гидрогенизированных жиров с жироподобными веществами, эмульгаторами или углеводородными продуктами. К такой группе основ принадлежат бутирол и комплексно-жировые [165].
По свойствам, не уступающим масло какао, можно отнести и основу ГХМ-5Т. Она обладает определенными преимуществами за счет содержания эмульгатора Т-2, который способствует равномерному распределению массы по слизистой оболочке, высвобождению лекарственного вещества и усиливает его всасываемость [160].
В промышленном производстве для изготовления суппозиториев широко используют основу витепсол, которая обладает рядом положительных свойств. Она индифферентна, не образует полиморфных модификаций, хорошо эмульгирует водные растворы, после плавления быстро застывает [43, 164, 182, 200].
В диссертационной работе использованы основы витепсол Н-15; КЖО (сплав гидрожира:парафина:масла какао :эмульгатора Т-2 в соотношении 53,3:16:28:2,7, соответственно); полиэтиленоксидная (сплав ПЭО-400 и ПЭО-1500 в соотношении 2:8); ГХМ-5Т; бутирол (сплав масла какао:парафина:гидрогенизированного жира в соотношении 30:20:50, соответственно). Перечисленные суппозиторные основы соответствуют указанным выше требованиям и обладают необходимыми структурно-механическими свойствами; оптимальным соотношением показателей температуры плавления и температуры затвердевания; при введении в полость организма одни способны расплавляться, а другие растворяться в секретах слизистых оболочек.
При изготовлении лекарственной формы руководствовались основными положениями статьи «Суппозитории» ГФ-ХІ изд. (вып.2) [32].
Разрабатывая технологию изготовления суппозиториев с флуконазолом, учитывали природу и физико-химические свойства как лекарственного вещества, так и используемых основ.
Для проведения эксперимента модельные образцы суппозиториев готовили методом выливания, используя формы с объемом гнезда 1,5 г. Предварительно, экспериментальным путем, был установлен обратный коэффициент замещения флуконазола (0,63), поскольку его содержание в суппозиториях превышало 5%.
Компоненты основ сложного состава сплавляли в фарфоровой чашке на водяной бане, с учетом их температур плавления, а витепсол - плавили.
Многочисленными результатами экспериментальных исследований доказана важность изучения такого фактора, как степень дисперсности лекарственного вещества. Она влияет на однородность суппозиторной массы, равномерность распределения в ней субстанции и точность дозирования, а также на биодоступность, связанную с процессом высвобождения и полнотой проявления терапевтического действия лекарственного препарата в целом [88, 99, 171].
Учитывая физико-химические свойства флуконазола (субстанция не растворяется в основе, мало растворима в воде), при изготовлении суппозиторной массы его вводили по типу суспензии, предварительно измельчив в мельнице марки МЛ-1.
Оценка качества суппозиториев и изучение их стабильности
В настоящее время Российская фармацевтическая промышленность вышла на новый качественный уровень развития. В связи с чем, ведется интенсивная работа по разработке и приведению требований, предъявляемых к лекарственным препаратам, в соответствие с международными стандартами.
Авторами проекта, при подготовке ОФС «Суппозитории» для включения в ГФ РФ XII изд., помимо основной базы нормативной документации на зарегистрированные в РФ лекарственные препараты, были использованы фармакопеи других стран, в том числе европейская и американская. В проект статьи планируется ввести ранее не описанные в ГФ XI изд. такие показатели, как «Размер частиц» для исследования суппозиториев с ЛВ, вводимыми по типу суспензии, «Однородность дозирования», «Растворение» [61, 87]. Учитывая выше перечисленное, а также используя фармакопейные и разработанные нами методики, изучали качество суппозиториев по как после изготовления, так и в процессе длительного хранения. Применяя органолептические, физические, физико-химические, технологические, биофармацевтические, микробиологические методы анализа, оценку качества проводили по следующим критериям: внешний вид, средняя масса и отклонения от нее, температура плавления, время полной деформации (для суппозиториев на основе витепсол Н-15) или время растворения (для суппозиториев на полиэтиленоксидной основе), значение величины рН водного извлечения, размер частиц флуконазола, подлинность лекарственной субстанции и ее количественное содержание в суппозиториях, тест «Растворение», однородность дозирования, микробиологическая чистота, антимикробная активность [32, 61,98,174, 182].
Для наблюдения за стабильностью суппозиториев было приготовлено по три серии на каждой основе (1072009, 2071009, 3072009). Перед закладкой на хранение произведена оценка их качества, результаты которой описаны ниже.
По внешнему виду суппозитории имеют одинаковую торпедовидную форму, однородные, белого цвета, с гладкой поверхностью (на продольном срезе отсутствуют вкрапления), средней массой 1,5 г, отклонение от средней массы не превышало ± 5%.
Температура плавления суппозиториев, изготовленных на основе дифильного характера (витепсол Н-15), находится в пределах от (34,5 -35,5)С. Значения данного показателя качества суппозиториев не превышают нормативного - (37±1)С.
Время полной деформации для суппозиториев на дифильной основе также соответствует НД (не более 15 мин), а именно, находится в интервале 12,5-13,5 мин.
Суппозитории на гидрофильной ПЭО-основе растворяются в течение 9-11 мин, что соответствует требованиям НД (не более 60 мин). Значение рН, в зависимости от основы, варьирует. Так, для водной вытяжки из суппозиториев на ПЭО-основе оно находится в интервале от 5,0 до 5,6, на витепсоле Н-15- от 6,8 до 7,6.
Подлинность флуконазола подтверждали методами тонкослойной хроматографии и УФ-спектрофотометрии.
Хроматографирование проводили в тонком слое сорбента на пластинах марки Kieselgel 6OF254 в экспериментально подобранной системе растворителей: этилацетат:изопропиловый спирт:раствор аммиака концентрированный - 8:7:3. Зоны адсорбции флуконазола визуализировали в УФ свете, наблюдая на хроматограмме пятно фиолетового цвета, Rf которого соответствует значению Rf раствора СОВС, взятого в качестве свидетеля. В процессе определения действующего вещества в суппозиториях, приготовленных на двух основах, на хроматограммах не наблюдали посторонних пятен и шлейфов у пятна, что подтверждает подлинность флуконазола.
Оценку подлинности также проводили и одновременно с определением количественного содержания флуконазола в лекарственной форме, используя метод УФ-спектрофотометрии. Спектр раствора активного компонента, полученный извлечением его из суппозиториев ОДМ раствором кислоты хлористоводородной, идентичен спектру поглощения раствора СО флуконазола в диапазоне длин волн от 200 до 400 нм и имеют одинаковые максимумы при (261±1) нм.
Проведенный количественный анализ флуконазола методом УФ-спектрофотометрии позволил определить, что его содержание в лекарственной форме, приготовленной на основах витепсол Н-15 и ПЭО находится в пределах от 0,142 г до 0,158 г и укладывается в допустимые нормы отклонений.
Как отмечалось ранее, биофармацевтическая доступность лекарственной субстанции из суппозиториев во многом определяется размером ее частиц. Разработанные составы и технология суппозиториев позволили существенно изменить фракционный состав частиц субстанции флуконазола, в сравнении с исходным. Их размер не превышает 30 мкм, с преобладанием фракции частиц (около 80%) до 10 мкм, что вполне соответствует требованиям, предъявляемым к данной лекарственной форме.
Достигнутая степень дисперсности положительно сказалась на таких показателях как «Однородность дозирования» и «Растворение». Для количественной оценки активной субстанции в лекарственной форме при определении этих показателей так же использован метод УФ-спектрофотометрии.
В суппозиториях, изготовленных на основах витепсол Н-15 и ПЭО-основе, результаты анализа по показателю «Однородность дозирования» находятся в пределах допустимых отклонений. Это в очередной раз доказывает, что разработанная технология позволяет достичь точности дозирования флуконазола при изготовлении суппозиторной массы.
Кроме указанных показателей качества суппозиториев на основе витепсол Н-15 и ПЭО, содержащих флуконазол, предложен еще один - с использованием прибора «вращающаяся корзинка» - тест «Растворение». При скорости вращения корзинки 100 об/мин в 0,1М растворе кислоты хлористоводородной (объем среды 1000 мл) и продолжительности эксперимента 30 мин в акцепторной среде содержание флуконазола достигает установленного нами критерия оценки качества данной лекарственной формы - не менее 80% (Q).
Качество суппозиториев оценивали так же по такому микробиологическому показателю как наличие антибактериального действия, используя метод диффузии в агаровый гель. Свежеприготовленные суппозитории проявляют активность не только в отношении специфического тест-штамма С. albicans, но и ко всем изучаемым шести музейным тест-микроорганизмам. Однако, несмотря на достаточно широкий спектр биоцидного действия суппозиториев, в качестве основного критерия предлагается их стандартизация по наличию специфического биоцидного действия в отношении С. albicans. Результаты определения противогрибковой активности суппозиториев представлены в табл. 12.
Оценка качества и изучение стабильности биорастворимой полимерной лекарственной пленки флуконазола
В существующем ОСТе 91500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения» приводится перечень требований, предъявляемых нормативной документацией на многие лекарственные формы, однако лекарственные пленки среди них отсутствуют. Поэтому стандартизацию изготовленных трех серий лекарственного препарата осуществляли в соответствии с известными, общепринятыми и разработанными показателями: внешний вид, размеры, средняя масса, адгезивные свойства; время растворения; значение рН водного раствора; остаточная влажность; размер частиц лекарственной субстанции (в данном случае флуконазола); подлинность флуконазола, его количественное содержание; микробиологическая чистота и антимикробная активность [12, 40,45,48,82,213,236].
При органолептическом контроле приготовленные пленки представляли собой непрозрачные, белые, однородные, эластичные пластинки квадратной формы, шириной и длиной 10±0,02 мм, средней массой 0,025 г±10%, без запаха и механических включений.
Значения рН водных растворов пленок находятся в пределах, близких к нейтральным (5,8-6,6).
По результатам изучения адгезивных свойств пленки, средние значения силы отрыва составили около 1,8Н/мм2-2,0Н/мм2, время адгезии 36-38 мин, индекс набухания 270-290%, ВПП - 22-25 мин.
Средние значения времени растворения пленок составляют 65-70 мин.
Проведенный дисперсологический анализ позволил установить, что разработанная технология пленок дает возможность получить размер частиц флуконазола не превышающий 10 мкм.
Подлинность флуконазола подтверждали методами тонкослойной хроматографии и УФ-спектрофотометрии.
Хроматографирование проводили в тонком слое сорбента на пластинах марки Kieselgel 60 F254 системе растворителей: этилацетат:изопропиловый спирт:раствор аммиака концентрированный (8:7:3). Зоны адсорбции флуконазола визуализировали в УФ свете, наблюдая на хроматограмме пятно фиолетового цвета, Rf которого соответствует значению Rf раствора СОВС, взятого в качестве свидетеля, и равного 0,62±0,05.
Идентификацию флуконазола методом УФ-спектрофотометрии проводили одновременно с определением его количественного содержания в лекарственной форме (гл. 2 с. 52). УФ-спектры испытуемых растворов, полученные извлечением из пленок 0,1М раствором кислоты хлористоводородной в диапазоне от 200 до 400 нм, стабильно имели полосу поглощения с максимумом при (261±1) нм и были идентичны со спектрами раствора СО флуконазола.
Количественное содержание флуконазола оценивали методом спектрофотометрии в УФ области.
Для проведения анализа флуконазол выделяли из БЛП с помощью 0,1М раствора кислоты хлористоводородной, измеряли оптическую плотность в максимуме светопоглощения при длине волны (261±1) нм в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм. Раствором сравнения служил 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной. Содержание флуконазола рассчитывали относительно стандартного образца. Проводили по два параллельных опытов на трех сериях образцов пленок. Содержание флуконазола находится в пределах 0,0018-0,0022 г/см .
Для наблюдения за стабильностью и установления срока годности трех серий упакованных соответствующим образом БЛП их подвергали хранению при температуре (4±1)С (условия холодильника). Через каждые 6 мес. отбирали образцы пленок на анализ, и оценивали их качество по перечисленным показателям.
Кроме того, на протяжении всего времени хранения проводили микробиологические исследования с использованием метода диффузии в агар для подтверждения антимикотической активности БЛП в отношении специфического тест-штамма микроорганизма С. albicans АТСС 885-653, замеряя зоны ингибирования роста тест-культур микроорганизмов (табл. 24).
Полученные результаты свидетельствуют о сохранности антибактериальной активности в отношении изучаемого тест-штамма микроорганизма, которая была сопоставима с активностью свежеизготовленной лекарственной формы.
Проведенные исследования подтверждают, что разработанный состав и технология БЛП обеспечивают микробиологическую чистоту лекарственных пленок в течение длительного хранения (24 мес), о чем свидетельствует отсутствие роста микроорганизмов на питательных средах (табл. 25).
В табл. 26-28 представлены результаты изучения стабильности БЛП в процессе хранения по контролируемым показателям: внешний вид, время растворения, сила адгезии, время адгезии, индекс набухания, остаточная влага, значение рН водного извлечения из БЛП, размер частиц флуконазола, количественное и качественное определение флуконазола в лекарственной форме. Результаты свидетельствуют, что предлагаемый нами состав БЛП флуконазола, изготовленной на полимерах Na-КМЦ и ПВС, стабилен по изучаемым показателям и сохраняет специфическую противогрибковую активность в отношении тест-штамма С. albicans на протяжении всего исследуемого срока хранения (24 мес).
Таким образом, при контроле за стабильностью трех серий образцов БЛП, хранившихся в условиях холодильника при температуре (4±1)С, установлено их соответствие основным критериям качества в течение 24 мес. (срок наблюдения).
