Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 Воспалительные заболевания кожи. Основные принципы лечения. Лекарственные формы для наружного применения 12
1.1 Дерматиты. Определение. Классификация. Принципы лечения 12
1.2 Лекарственные формы для наружного применения. Современное состояние исследований лекарственных форм 15
1.3 Перспективы применения лекарственных средств на основе хлорофиллипта для лечения воспалительных заболеваний кожи 32
Заключение по обзору литературы 34
Глава 2 Объекты и методы исследования 36
2.1 Объекты исследования 36
2.2 Методы исследования 42
2.2.1 Технологические методы исследования 42
2.2.2 Биологические методы исследования 44
2.2.3 Физико-химические методы исследований 48
2.2.4 Биофармацевтические методы исследований 49
Глава 3 Разработка состава, технологии и норм качества мази эвкалипта листьев экстракта густого для лечения воспалений кожи 52
3.1 Биофармацевтические исследования с целью обоснования состава компонентов мази эвкалипта листьев экстракта густого 52
3.2 Изучение реологических показателей, намазывающей и прилипающей способности мази эвкалипта листьев экстракта густого 60
3.3 Разработка технологической схемы производства мази эвкалипта листьев экстракта густого противовоспалительного действия 63
3.4 Разработка методик качественного и количественного анализа мази на гидрофильной основе эвкалипта листьев экстракта густого на гидрофильной основе 67
3.4.1 Качественный анализ мази 67
3.4.2 Количественный анализ мази 69
3.5 Нормирование качества мази эвкалипта листьев экстракта густого 72
3.5.1 Органолептический контроль 72
3.5.2 Изучение однородности мази 73
3.5.3 Установление водородного показателя 73
3.5.4 Изучение термостабильности и коллоидной стабильности 73
3.5.5 Микробиологическая чистота 74
3.5.6 Подлинность и количественное содержание фенолоальдегидов 75
3.6 Определение стабильности мази при хранении с целью установления срока годности 75
Выводы по главе 77
Глава 4 Разработка состава, технологии и норм качества диадерматического пластыря эвкалипта листьев экстракта густого для лечения воспалений кожи 78
4.1 Биофармацевтические исследования модельных образцов диадерматического пластыря эвкалипта листьев экстракта густого в опытах in vitro 79
4.2 Определение сопротивления отслаивания модельных образцов диадерматического пластыря эвкалипта листьев экстракта густого 82
4.3 Изучение реологических показателей диадерматического пластыря эвкалипта листьев экстракта густого 83
4.4 Технологическая схема диадерматического пластыря эвкалипта листьев экстракта густого 84
4.5 Разработка методик качественного и количественного анализа пластырной массы на гидрофильной основе эвкалипта листьев экстракта густого 90
4.5.1 Качественный анализ пластырной массы 90
4.5.2 Количественный анализ пластырной массы 92
4.6 Нормирование качества диадерматического пластыря эвкалипта листьев экстракта густого 95
4.6.1 Органолептический контроль 95
4.6.2 Определение количества пластырной массы 95
4.6.3 Определение сопротивления отслаивания диадерматического пластыря эвкалипта листьев экстракта густого 95
4.6.4 Определение микробиологической чистоты диадерматического пластыря эвкалипта листьев экстракта густого 96
4.7 Установление срока годности предлагаемого диадерматического пластыря эвкалипта листьев экстракта густого 97
Выводы по главе 100
Глава 5 Фармакологические и микробиологические исследования мази и диадерматического пластыря эвкалипта листьев экстракта густого 101
5.1 Оценка местнораздражающего действия мази и диадерматического пластыря эвкалипта листьев экстракта густого 101
5.1.1 Оценка местнораздражающего действия мази эвкалипта листьев экстракта густого 101
5.1.2 Определение местнораздражающего действия пластыря эвкалипта листьев экстракта густого 103
5.2 Определение острой токсичности мази эвкалипта листьев экстракта густого 107
5.3 Определение гиперчувствительности кожи морских свинок к аппликациям диадерматического пластыря эвкалипта листьев экстракта густого 108
5.4 Изучение специфической активности лекарственных форм эвкалипта листьев экстракта густого 110
5.4.1 Исследование противовоспалительной активности мази эвкалипта листьев экстракта густого 110
5.4.2 Изучение противовоспалительной активности диадерматического пластыря эвкалипта листьев экстракта густого 112
5.5 Микробиологический анализ лекарственных форм эвкалипта листьев экстракта густого 114
Выводы по главе 116
Общие выводы 117
Список литературы 119
Приложение 137
- Перспективы применения лекарственных средств на основе хлорофиллипта для лечения воспалительных заболеваний кожи
- Изучение реологических показателей, намазывающей и прилипающей способности мази эвкалипта листьев экстракта густого
- Определение сопротивления отслаивания диадерматического пластыря эвкалипта листьев экстракта густого
- Исследование противовоспалительной активности мази эвкалипта листьев экстракта густого
Введение к работе
Актуальность темы. Воспалительные заболевания кожи имеют различную этиологию и поэтому, несмотря на большой ассортимент противовоспалительных средств, лечение этих заболеваний требует разработки новых лекарственных препаратов для лечения кожных заболеваний. В настоящее время наибольшее применение для этой цели находят мази различного состава. Особенно широко в качестве противовоспалительных средств используют мази с кортикостероидами. Однако наряду с высокой эффективностью такие мази проявляют ряд побочных эффектов. Это делает их применение особенно нежелательным в детской практике и в пожилом возрасте.
В то же время многолетнее использование растительных лекарственных препаратов доказало их значительно меньшее побочное действие по сравнению с синтетическими. Получение таких препаратов для наружного применения при кожных заболеваниях сдерживается отсутствием разработок по поиску растительных источников, проявляющих противовоспалительное и противомикробное действие. Кроме того, в литературе мало сведений по разработке современных лекарственных форм, которые обеспечивают высокую степень биодоступности, а, следовательно, эффективности лекарственных препаратов.
Среди лекарственных растений, проявляющих указанные виды фармакологической активности, следует выделить эвкалипт. Это растение используется для получения многих лекарственных средств, в том числе для наружного применения. Получение новых современных лекарственных препаратов с использованием биологически активных веществ эвкалипта для наружного применения в литературе не описано. Поэтому разработка таких лекарственных препаратов в определенной степени позволит улучшить лекарственное обеспечение больных, страдающих воспалительными заболеваниями кожи.
Таким образом, разработка мази и диадерматического пластыря эвкалипта листьев экстракта густого является актуальной задачей для фармацевтической технологии.
Цель и задачи исследования. Целью диссертационной работы явилась разработка состава и технологии лекарственных препаратов в виде мази и диадерматического пластыря противовоспалительного действия, содержащих эвкалипта листьев экстракт густой и предназначенных для лечения и профилактики воспалительных поражений кожи.
Для реализации поставленной цели были решены следующие задачи:
провести биофармацевтические, технологические исследования по выбору основы и вспомогательных веществ мази хлорофиллипта;
изучить реологические свойства и предложить оптимальную технологию производства мази;
экспериментально обосновать состав пластырной массы и провести выбор материала-носителя для пластыря;
разработать технологию производства диадерматического пластыря;
провести фармакологические и микробиологические исследования предлагаемых лекарственных препаратов;
разработать нормы качества на мазь и диадерматический пластырь и определить сроки годности;
составить нормативную документацию на мазь и диадерматический пластырь.
Научная новизна. Проведен комплекс технологических, физико-химических, биофармацевтических и фармакологических исследований для обоснования разработки лекарственных форм эвкалипта листьев экстракта густого для наружного применения, которые проявляют противовоспалительное и антимикробное действие.
Проведено сравнительное изучение 14 мазевых основ и выбран оптимальный состав мази и пластырной массы эвкалипта листьев экстракта густого. Разработан способ производства мази и диадерматического пластыря, позволяющий получить лекарственные препараты с высокой фармацевтической доступностью и необходимыми технолого-экономическими характеристиками. Экспериментально установлена возможность использования нетканого полотна в качестве подложки-носителя диадерматического пластыря. При проведении биофармацевтических исследований «in vitro» пластыря использована модельная биологическая мембрана, позволившая рассчитать степень высвобождения фенолоальдегидов. Определены реологические показатели разработанной мази эвкалипта листьев экстракта густого, доказывающие удовлетворительные технологические и потребительские свойства. Разработана рациональная технологическая схема производства мази и пластыря. Модернизирована методика спектрофотометрического количественного определения фенолоальдегидов применительно к мази и пластырной массе. Впервые проведены микробиологические и фармакологические исследования, свидетельствующие о возможности безопасного применения разработанных препаратов в качестве противовоспалительного препарата в лечении воспалительных заболеваний кожи.
Практическая значимость результатов исследования.
Обоснован состав и разработана технология мази и пластыря, содержащих эвкалипта листьев экстракт густой. Доказана их фармакологическая активность и безвредность, что позволяет их рекомендовать для комплексного лечения и профилактики воспалительных кожных заболеваний.
Разработаны методики определения качества и определены сроки годности мази и диадерматического пластыря.
Внедрение результатов исследований в практику.
На основании полученных результатов исследований разработаны и утверждены НД в виде ТУ и ТИ на производство мази и диадерматического пластыря для ООО «МедЛинфарм», г. Москва. Получены акты технологической апробации на мазь и пластырь на базе ООО «МедЛинфарм», г. Москва.
Основные положения, выносимые на защиту:
- результаты экспериментального исследования по выбору оптимального состава мази и пластырной массы противовоспалительного действия с помощью биофармацевтических исследований «in vitro»;
- результаты разработки технологии производства мази эвкалипта листьев экстракта густого и диадерматического пластыря;
- результаты оценки технологических свойств мази и пластырной массы;
-разработка норм качества мази и диадерматического пластыря противовоспалительного действия, установление сроков их годности;
-результаты микробиологических и фармакологических исследований мази и диадерматического пластыря;
- основные данные по разработке НД для внедрения мази и диадерматического пластыря в фармацевтическое производство.
Апробация и публикация результатов исследования.
Основные положения диссертационной работы доложены на 64, 65, 66-ой научной конференции «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (г. Пятигорск, 2009, 2010, 2011 гг.), I-ой межрегиональной научной конференции «Актуальные проблемы фармации» (г. Владикавказ, 2010 г.) и II-международной научно-практической конференции «Молодые ученые в решении актуальных проблем науки» (г. Владикавказ, 2011 г.).
По материалам диссертации опубликовано 11 работ, из которых 5 работ в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ.
Связь задач исследований с проблемным планом фармацевтических наук.
Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом НИР кафедры технологии лекарств ГБОУ ВПО Пятигорской ГФА Минздравсоцразвития России (№ государственной регистрации 01.20.0215436) в рамках проблемы "Фармация".
Объём и структура диссертации.
Диссертационная работа изложена на 136 страницах машинописного текста, содержит 25 таблиц, 17 рисунков, состоит из введения, обзора литературы (1 глава), второй главы, посвященной материалам и методам исследований, 3-х глав, содержащих результаты собственных экспериментальных исследований, общих выводов, списка литературы и приложений. Список литературы включает 180 источников, в т.ч. 13 иностранных авторов, 10 патентов.
Перспективы применения лекарственных средств на основе хлорофиллипта для лечения воспалительных заболеваний кожи
Мазь — мягкая лекарственная форма, предназначенная для нанесения на кожу, раны или слизистые оболочки, состоящая из основы и лекарственных веществ равномерно в ней распределенных [11, 34]. Эффективность применения наружных мягких лекарственных форм при различных заболеваниях зависит во многом от выбора носителя лекарственных веществ - основы. Использование определенной основы зависит не только от характера заболевания, но и от физико-химических свойств назначаемых лекарственных средств [26]. Это лекарственная форма, основу которой составляют жиры или жироподобные вещества: вазелин, ланолин, животные жиры, растительные и минеральные масла, гидрогенизированные масла и др., а также разнообразные гидрофильные основы. Жировые индифферентные основы ожиривают и смягчают сухую, шелушащуюся кожу, улучшают ее эластичность, размягчают корки и чешуйки, способствуют разрешению инфильтрации кожи и проникновению в глубь кожи включенных в основу фармакологических веществ. Растительные масла (оливковое, подсолнечное, миндальное, персиковое и др.) часто используют в кремах, гелях. Известно, что чем больше в масле натуральных высших жирных кислот (линолиевая, линоленовая и арахидоновая), тем они активнее. Растительные масла, содержащие непредельные жирные кислоты (витамин F), обладают противовоспалительными свойствами, следовательно, целесообразно их применение при заболеваниях кожи, сопровождающихся хроническим воспалением. Линол и линетол льняного масла представляю собой витамин F почти в чистом виде. В последние годы успешно используют синтетические мазевые основы: полиэтил енгликоли, проникают и удаляются с поверхности, не окисляются и не разлагаются. Полиэтиленгликоли обладают выраженной дренажной активностью, благодаря чему, срок развития оттека и экссудата уменьшается. Они не ожиривают кожу, слабо препятствуют испарению влаги и хорошо эмульгируются [11]. Традиционные жировые мазевые основы оказывают более выраженный окклюзионный эффект, чем синтетические водорастворимые основы. Действие лекарственной формы на кожу тем глубже, чем сильнее она задерживает испарение влаги с ее поверхности, поэтому мази применяют в тех случаях, когда необходимо достигнуть глубокого и длительного воздействия лекарственного вещества на пораженный участок кожи. Применение мазей показано при хроническом воспалении кожи, сопровождающимся застойной гиперемией, шелушением, инфильтрацией; для размягчения и удаления корок и утолщенного рогового слоя; при лечении поверхностных инфекционных и паразитарных заболеваний кожи. Кроме того, выпускается большой спектр мазей, содержащих кортикостероидные гормоны, антибиотики, противогрибковые и антивирусные препараты в герметической упаковке (тюбиках). При необходимости мазь можно применять в виде смазываний, повязок, компрессных повязок или втираний. Для поверхностного действия мазь наносят на кусок марли или полотна, прикладывают к пораженной коже и забинтовывают. Для глубокого воздействия мазь наносят непосредственно на очаг поражения и покрывают повязкой. Для размягчения корок и чешуек мазь накладывают на 3—6 часов. При хронических процессах делают «мазевый компресс» (под вощеную бумагу или целлофановую пленку). Этот метод используется при лечении, например, застарелых бляшек псориаза, омозолелостей и т. п. Глубокого проникания мази можно добиться и энергичным втиранием ее в кожу [40, 60].
Гели - мази вязкой консистенции, способные сохранять форму, пластичные, упругие и имеющие коллоидную структуру [11]. В дерматологии чаще применяются гели, которые представляют собой коллоидную структуру в форме пространственных сеток, ячейки которых обычно заполнены растворителем. В зависимости от природы образующих гель веществ различают гели, построенные из жестких частиц (хрупкие гели) и гели, образованные гибкими макромолекулами - эластичные гели (студни). К хрупким гелям можно отнести Si02, S11O2, Fe203 и др.; типичным примером является гель кремнекислоты. Хрупкие гели также называются ненабухающими, так как его объем при высушивании или оводнении мало изменяется. Данное свойство гелей объясняется наличием жесткости образующих частиц и всего каркаса геля в целом. Хрупкие гели имеют пористую структуру, с множеством капилляров. Внешне гель с пустыми или частично заполненными капиллярами кажется мутным, однако при заполнении их соответствующим растворителем он становится прозрачным. Гели имеют студенистую консистенцию (эластичные гели, студни), образованны цепными молекулами полимеров, желатина и др. Они способны сохранять форму и обладают эластичностью и пластичностью. Поглощение растворителя эластичными гелями сопровождается увеличением объема студня, его набуханием, следовательно, благодаря этому явлению эластичные гели называют набухающими. Неограниченное набухание геля происходит в том случае, если после стадии набухания происходит полное растворение полимера. Для изготовления таких гелей используют такие вещества как гуммиарабик, каучук, и др., разбухающие в растворителе с образованием коллоидной системы. Набухание называется ограниченным, если студень поглощает определенное количество растворителя, при этом не образуя раствора полимера. Такое явление наблюдается при растворении желатина в холодной воде. Для неограниченного набухания в данных случаях необходимо физическое воздействие, например, повышение температуры, изменение состава среды [38, 100, 106].
Изучение реологических показателей, намазывающей и прилипающей способности мази эвкалипта листьев экстракта густого
При обзоре литературных источников и патентной информации, указанной выше, видно, что применение противовоспалительных растительных дерматопрепаратов в последнее время является актуальным. Препараты, применяемые при лечении дерматитов, должны оказывать противовоспалительный эффект. Очень часто встречаются случаи присоединения вторичной инфекции. Этот факт обуславливает и оказание антибактериального действия. Следуя всему выше сказанному, в ходе исследований обратили особое внимание на хлорофиллипт. Препараты хлорофиллипта получают из высушенных листьев эвкалипта прутовидного (Eucaliptus viminalis Labill., семейство миртовые - Myrtaceae). Родина всего рода Eucaliptus - Австралия. В РФ культура успешно произрастает на Черноморском побережье Кавказа, а также на Закавказье [92].
Изучением технологии лекарственных препаратов из эвкалипта, их фармакологической активностью занимались впервые ученые НИИ микробиологии им. Мечникова (г. Харьков). Совершенствованием технологии занимались ученные ВИЛР (г. Москва), фармацевтической компании ЗАО «Вифитех» (п. Оболенск, Московская область) и ОАО «Фармацевтической фабрики Санкт-Петербурга» [12,44,119,160]. Хлорофиллипт обладает антибактериальным действием в отношении стафилококков, устойчивых к антибиотикам, а также комплексно воздействует на патогенетический механизм воспаления. Антимикробные свойства проявляют вещества, входящие в экстракт из высушенных листьев эвкалипта, в частности фенолоальдегиды, или эуглобали, относящиеся к терпеновым производным флороглюцина [50, 164].
Изучению специфической активности хлорофиллипта посвящено много трудов. Так стало известно об антибактериальной активности в 1970-х годах в отношении стафилококков, резистентных к некоторым антибиотикам. При изучении фармакологических свойств хлорофиллипта было установлено, что препарат нетоксичен, не обладал пирогенностью и не содержал гистаминоподобных веществ. На основании клинических испытаний сделан вывод об эффективности применения препарата при заболеваниях стафилококковой этиологии [93]. Область применения препаратов из эвкалипта довольно широкая, благодаря оказываемому действию: антибактериальному, противовоспалительному, противогнилостному, противовирусному, спазмолитическому, кровоостанавливающему, ранозаживляющему. В литературных источниках имеются данные о применении различных препаратов хлорофиллипта при лечении ожогов и трофических язв, флегмон, дерматитов, пролежней, ожогов и экзем, а также при эрозии шейки матки, гнойно-воспалительных и аллергических заболеваниях кожи и слизистых оболочек. Имеются данные о внутреннем применении препаратов хлорофиллипта при носительстве стафилококков в кишечнике. Препарат может вводиться внутривенно и в полость при перитоните и эмпиеме. При ангине, тонзиллите, ларингите применяют ингаляции с хлорофиллиптом. Очень часто применяются препараты эвкалипта в народной медицине [27, 66, 67, 75, 118, 168]. Известно также об антисептических и противовоспалительных свойствах эфирного масла эвкалипта [169, 179]. Коллективом кафедры вирусологии Гейдельбергского университета в Германии изучается противовирусная активность эвкалиптового масла. Применение эвкалиптового масла при герпетической инфекции они считают перспективным. Действующие вещества, проявляющие противовирусную активность ими устанавливаются [175]. Ученые Университета в Саудовской Аравии занимаются изучением трансдермальной доставки гидрокортизона из микроэмульсии эвкалипта [173]. Масло эвкалипта применяется как самостоятельно, так и входит в состав препаратов: S спрей для носа «Отривин»; S мазь для растираний и ингаляций «Доктор Тайсс Эвкалипт»; S «Ангинал» спрей при ангине, фарингите; S Капли «Бронхосан», «Эвказолин», «Пиносол»; S «Доктор Мом» - мазь для растирания; S Эвкалиптовый бальзам от простуды Доктор Тайсс. Очень часто эвкалипт входит в состав таблеток для рассасывания в полости рта при лечении ларингита, тонзиллита, ангины [27,48,49,133]. Известны лекарственные препараты из листьев и побегов эвкалипта «Хлорофиллипт», «Хлорофиллипт, раствор спиртовой 1%» и «Хлорофиллипт, раствор масляный 2%», раствор 0,25% для инъекций, «Галенофиллипт», «Эвкалимин», таблетки для рассасывания в полости рта 12,5 и 25 мг. Выпускаемые отечественной промышленностью масляный и спиртовые растворы хлорофиллипта не всегда удовлетворяют требованиям клинической медицины. Все вышеизложенное свидетельствует о необходимости расширения исследований в области создания рациональных лекарственных средств с хлорофиллиптом для наружного применения. Наше внимание привлекла возможность использования лекарственного препарата «Хлорофиллипт», с целью разработки лекарственных средств -мази и диадерматического пластыря на его основе.
Определение сопротивления отслаивания диадерматического пластыря эвкалипта листьев экстракта густого
Приготовление составов №1,2,5,6,9,11,12 основывается на набухании основообразователя на воде очищенной. Композиции под №1 и №9 после набухания полимера загущали 0,8 мл гидроксидом натрия 0,1 М. В качестве эмульгатора в образцах №№1, 2, 4 использовали гидрированное касторовое масло - кремофор СО-40, в котором диспергировали необходимое количество эвкалипта листьев экстракта густого. После полного растворения экстракта в кремофоре, полученную массу соединяли с основой. Диспергировали до образования однородной массы. В композиции №9 эмульгатором являлся твин-80, в котором при нагревании на водяной бане диспергировали эвкалипта листьев экстракт густой. После чего действовали по аналогии с составом №1.
Приготовление композиций №№3, 13 также состояло из процесса набухания. Аэросил равномерно распределяли по поверхности масла и оставляли на 1,5-2,0 часа при комнатной температуре для набухания с периодическим перемешиванием. После образования прозрачной гелевой основы добавляли экстракт в количестве 1,0 и гомогенизировали до получения однородной массы.
При приготовлении эмульсионной основы вазелин сплавляли с эмульгатором. Одновременно при постоянном перемешивании приливали горячую воду очищенную. Основу перемешивали до получения однородной массы и оставляли при комнатной температуре до охлаждения. После охлаждения основы добавляли действующее вещество, предварительно распустив его в масле льняном. Диспергировали до получения однородной массы.
Получение основ № 7,8 осуществляли путем расплавления на водяной бане ПЭО-1500 с последующим добавлением ПЭО-400 и эвкалипта листьев экстракта густого в полученную расплавленную основу. В составе №8 эвкалипта листьев экстракт густой распускали в глицерине и добавляли к полученной ранее сплаву основ. В композиции № 14 экстракт диспергировали в глицерине и добавляли к расплавленному ранее ПЭО-1500. Полученную массу диспергировали до получения однородной мазевой композиции. Приготовленные образцы мазей переносили в сухие, чистые банки, укупоривали и использовали для дальнейших биофармацевтических исследований. Полученные мазевые композиции эвкалипта листьев экстракта густого оставляли на хранение при температуре +4 С (в условиях холодильника). Ежедневно в течение 18 месяцев проводили визуальный контроль. Результаты наблюдений представлены в таблице 2. В результате приготовления модельных образцов мазей на 14-ти различных мазевых основах, обнаружилось, что эвкалипта листьев экстракт густой плохо растворим в глицерине. Наблюдалось образование игольчатых форм. Таким образом, гидрофильные основы с добавлением глицерина в качестве пластификатора не удовлетворяют требованиям, предъявляемым мазям. При распускании основного действующего вещества в масле льняном и масле оливковом при длительном диспергировании наблюдалось его полное растворение. Также хорошая растворимость хлорофиллипта наблюдалась и с эмульгатором твин-80 при нагревании на водяной бане, однако при хранении после 1 -го месяца на поверхности мази образовывалась тонкая пленка. Композиции № 2 и № 6 к концу срока наблюдения подвергались расслаиванию. При определении однородности мазей по методике описанной во 2-ой главе можно заключить, что все мази кроме №№5, 6, 8 однородны. Указанные номера составов не однородны, вследствие плохого растворения эвкалипта листьев экстракта густого в глицерине.
Выбор оптимальных основ проведен на основании изучения степени диффузии действующих веществ в модельную среду, имитирующую гидрофильно-липофильный баланс кожи, состоящую из равных частей эмульсий прямого и обратного типа (глава 2). В качестве индикатора использовали ванилиновый реактив, окрашиваемая зона приобретала красно-коричневое окрашивание (качественная реакция на фенолоальдегиды) (рис.3).
Исследование противовоспалительной активности мази эвкалипта листьев экстракта густого
При отсутствии раздражающего действия, как видно из таблицы №20, изучаемый диадерматический пластырь можно отнести к нулевому классу выраженности раздражающих свойств.
Для оценки раздражающего действия диадерматического пластыря использовали ХЕТ-КАМ тест определения повреждающего действия на хориоаллатоисной оболочке куриного эмбриона (Leupka, 1985) [98].
Для проведения опыта использовали развивающиеся эмбрионы яиц домашних кур породы белый леггорн в возрасте 10 дней. Яйца выдерживали в инкубаторе при температуре 37,8С и влажности 62,5%. Перед началом эксперимента инкубированные яйца выдерживали в течение 24 часов в стационарном положении тупым концом вверх, для чего, за сутки до опыта, их переносили из инкубатора в термостат (t= 37,8 С). Перед началом работы яйца укрепляли на фиксирующей подставке тупым концом вверх, освобождали от скорлупы воздушную камеру, затем смачивали подскорлуповую оболочку изотоническим раствором натрия хлорида (t= 37,8 С). После этого яйца помещали в термостат. Через 30 минут яйца извлекали из термостата и приступали к эксперименту.
Подскорлуповую оболочку удаляли, предварительно убрав раствор натрия хлорида при помощи микропипетки. На хориоаллантоисную оболочку наносили 0,3 мл. растворителя (вода очищенная) с помощью дозатора и проводили наблюдение за состоянием оболочки под каплей растворителя в течение 100 секунд. Эксперимент проводили в пятикратной повторности. Во всех случаях растворитель не оказывал никакого воздействия. Для установления раздражающего действия изучаемого препарата на хориоаллатоисную оболочку наслаивали по 0,3 мл. тестируемой жидкости в виде капли. Для испытания использовали 5 эмбрионов. Время наблюдения 50 сек. Для оценки результатов использовали 5-ступенчатую классификацию веществ в зависимости от наблюдаемой картины повреждения куриного эмбриона. При проведении опыта установлено, что раствор диадерматического пластыря эвкалипта листьев экстракта густого можно отнести к 1 классу веществ по раздражающему действию, так как во всех 5 опытах наблюдали ненарушенную прозрачную тонкую оболочку с нормально функционирующей сетью кровеносных сосудов и капилляров. Эмбрионы оставались живыми в течение 30 мин. Проведённые исследования показали, что диадерматический пластырь с фитоэкстрактом не обладает возможным раздражающим действием на слизистые оболочки. Определение острой токсичности проводили по методу Кербера. О степени токсичности препаратов судили по картине интоксикации и выживаемости лабораторных животных в течение 48 часов, а также по изменению общего состояния животных (внешний вид, поведенческая реакция, их активность, частота дыхания, состояние рефлекторной деятельности, пробы на болевое раздражение, потребление пищи). Острую токсичность разработанной мази определяли на белых беспородных крысах обоего пола [84, 156]. Наблюдение за крысами проводили в течение 2-х недель. Контролем служили крысы, которым на соответствующую поверхность тела наносили адекватное количество мазевой основы. При этом у животных снимали шерстяной покров на поверхности спины площадью 10 см . Мазь наносили тонким слоем в дозе 10 г/кг массы животного, что в десять раз превышает дозы мазевых препаратов, применяемых в медицине [13]. Результаты по определению токсического действия мази эвкалипта листьев экстракта густого представлены в таблице 21. 107 Таким образом, по результатам проведенного исследования можно заключить, что мазь эвкалипта листьев экстракта густого при наружном применении по классификации К.К. Сидорова может быть отнесена к практически нетоксичным веществам. В эксперименте принимали участие 10 морских свинок, разделенные на две группы по 5 животных в каждой: 1-ая группа - морским свинкам путем аппликации наносили на кожу исследуемый диадерматический пластырь эвкалипта листьев экстракта густого. 2-ая группа - интактная. Наличие гиперчувствительности кожи морских свинок к диадерматическому пластырю определяли путем многократных аппликаций в течение 4-х недель из расчета 20 аппликаций на одно животное [83]. При отсутствии положительного результата после первого тестирования дальнейшие нанесение вещества обычно прекращают. Учитывая длительность применения и постоянного контакта пластыря с кожей рекомендуемых мест аппликации, количество аппликаций на участке первичного контакта с веществом доводили до 20. Более 20 накожных аппликаций проводить не рекомендуется, так как они могут вызвать гипосенсибилизирующее действие, особенно если фармакологическое средство является слабым аллергеном. Исследуемый диадерматический пластырь ежедневно наносили путем аппликаций на предварительно эпилированный участок кожи. Через 6 часов пластырь аккуратно отклеивали и протирали кожу животного легкими, недавящими движениями ватным тампоном, смоченным в теплой воде [88]. Первое тестирование проводили после 10 аппликаций, второе после 20 аппликаций. Определение сенсибилизации проводили через сутки после последней аппликации. Через 24 часа отмечали реакцию на участке разрешающего нанесения и на участке первичного контакта с веществом. Критерии оценки сенсибилизирующего действия изучаемых веществ: 1) ускорение развития воспалительной реакции на участке разрешающего нанесения по сравнению со сроком появления первичноконтактной реакции; 2) более выраженная интенсивность воспалительной реакции на участке разрешающего нанесения; 3) развитие воспаления на участке затухшей первично-контактной реакции.
