Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Современные тенденции развития бактериальных поражений глаз, проблемы их антибиотикотерапии и фармацевтической технологии офтальмологических лекарственных форм 9
1.1 Особенности современных конъюнктивитов 9
1.2 Краткая характеристика азитромицина 17
1.3 Современные полимеры, применяемые в технологии получения глазных лекарственных форм 23
1.4 Современные подходы к проблеме доставки глазных лекарственных средств 31
Выводы по обзору литературы 36
Глава 2. Объекты и методы исследования 39
2.1 Объекты исследования 39
2.2 Перечень вспомогательных веществ, реактивов и оборудования 39
2.3 Методы исследования 40
Глава 3. Разработка состава и технологии глазных капель азитромицина 47
3.1 Обоснование состава глазных капель азитромицина 47
3.2 Изучение влияния полимеров на степень высвобождения азитромицина из глазных капель 53
3.3 Изучение динамики высвобождения азитромицина из капель методом диффузии в агар 58
3.4 Разработка технологической схемы производства глазных капель азитромицина 59
Выводы по главе 66
Глава 4. Разработка состава и технологии глазного геля азитромицина 67
4.1 Обоснование выбора основы для геля азитромицина с помощью биофармацевтических исследований 67
4.2 Изучение степени высвобождения и антимикробной активности гелей азитромицина 72
4.3 Изучение реологических параметров геля азитромицина 74
4.4 Разработка технологической схемы производства глазного геля азитромицина 78
Выводы по главе 83
Глава 5. Разработка норм качества глазных капель и геля азитромицина 84
5.1 Определение возможности применения метода непосредственной спектрофотометрии для количественного определения азитромицина 84
5.2 Разработка методики количественного определения азитромицина методом экстракционной фотометрии 87
5.3 Разработка методики экстракционно - фотометрического опрделения азитромицина по реакции с эозинатом натрия 89
5.4 Определение константы ионизации азитромицина и оптимального значения рН, его количественного определения методом экстракционной фотометрии 93
5.5 Валидационная оценка разработанной методики определения азитромицина методом экстракционной фотометрии по реакции с эозинатом натрия 98
5.6 Установление сроков годности разработанных глазных капель и геля азитромицина 102
5.7 Выбор норм качества разработанных глазных капель и геля азитромицина 105
Выводы по главе 107
Глава 6. Исследования фармакологической активности глазных капель и геля азитромицина 108
6.1 Изучение антибактериальной активности офтальмологических капель и геля азитромицина in vitro 108
6.2 Изучение антимикробной активности разработанных глазных лекарственных форм азитромицина на модели хламидийного конъюнктивита 110
Выводы по главе 121
Общие выводы 122
Список литературы 123
Приложения 140
- Особенности современных конъюнктивитов
- Обоснование состава глазных капель азитромицина
- Разработка технологической схемы производства глазного геля азитромицина
- Изучение антимикробной активности разработанных глазных лекарственных форм азитромицина на модели хламидийного конъюнктивита
Введение к работе
Актуальность темы.
В настоящее время лечение бактериальных поражений глаз приобретает особую актуальность в связи с широкой распространенностью этих заболеваний, их рецидивирующим течением, опасностью снижения остроты зрения вплоть до развития слепоты. В Российской Федерации число пациентов с болезнями глаз инфекционной природы достигает 16 млн. в год, составляя 40,2% среди амбулаторных больных и свыше 50% - среди госпитализированных. Около 65% инфекционных глазных заболеваний вызваны бактериями. Среди данных болезней чаще всего встречаются конъюнктивиты - 66,7% и блефариты - 23,3%. В России, как и во многих странах мира, отмечается рост инфекционных поражений глаз, вызванных С.trachomatis. Ежегодно офтальмохламидиозом в Российской Федерации заболевают более 1,5 млн. человек. Исследования ученых показали, что в лабораторных и клинических условиях при терапии хламидийных конъюнктивитов эффективен азитромицин, который также проявляет высокую активность против штаммов микроорганизмов S.epidermidis и S.aureus, являющихся наиболее частой причиной бактериальных поражений глаз.
В последнее время наблюдается тенденция роста резистентности бактерий к применяющимся местно в офтальмологической практике антибактериальным лекарственным препаратам различных групп, в частности, к традиционно используемым фторхинолонам, аминогликозидам, тетрациклинам. Поэтому разработка антибактериальных лекарственных препаратов для местного применения в офтальмологической практике представляет особый интерес.
На фармацевтическом рынке России большинство глазных лекарственных препаратов антибиотиков, применяемых в клинической практике, представлено каплями. Однако, многие из них действуют кратковременно, так как быстро удаляются с поверхности глаза, не способны обеспечить длительный контакт с тканями глаза и требуют многократных инстилляций.
В определенной степени этот недостаток компенсируется использованием такой лекарственной формы, как глазные мази. Однако, выпускаемые отечественной и зарубежной промышленностью мази производятся, как правило, с использованием углеводородных основ, обладающих рядом недостатков, главным из которых является искажение зрения за счет различного преломления светового потока слезной жидкостью и основой мази. Этого лишены гели, приготовленные с использованием гидрофильных основ, но среди шести зарегистрированных в Российской Федерации глазных гелей препараты антибиотиков отсутствуют.
В ряде стран западной Европы и в США проведены многочисленные исследования по разработке глазных лекарственных форм азитромицина, в частности, в США широко применяются в клинической практике глазные капли «Азасайт». Однако, в нашей стране глазные лекарственные формы азитромицина для местного применения отсутствуют.
Поэтому очевидна целесообразность создания глазных гелей с использованием гидрофильных основ и глазных капель пролонгированного действия, содержащих такой высокоэффективный антибиотик, как азитромицин, что позволит в значительной степени повысить эффективность терапии заболеваний глаз бактериальной природы.
Таким образом, разработка технологии получения пролонгированных глазных капель и геля азитромицина является актуальной задачей для фармацевтической науки и практики.
Цель и задачи исследования.
Целью диссертационной работы является: разработка состава и технологии глазных капель и геля азитромицина, предназначенных для лечения глазных заболеваний бактериальной природы.
Для реализации поставленной цели необходимо решить следующие задачи:
На основании биофармацевтических исследований провести выбор основы для глазного геля и пролонгатора для глазных капель азитромицина.
Экспериментально обосновать состав капель и геля азитромицина.
Разработать технологические схемы производства глазных капель и геля азитромицина в заводских условиях.
Предложить нормы и методы оценки качества разработанных глазных лекарственных форм и установить сроки их годности.
Провести исследования антимикробной активности предложенных глазных лекарственных форм методом in vitro.
Провести предварительные фармакологические исследования эффективности разработанных глазных лекарственных форм на модели хламидийного конъюнктивита.
Научная новизна.
Установлено, что оптимальным пролонгатором для глазных капель азитромицина является поливиниловый спирт в концентрации 1%, и показано, что для поддержания необходимой изотоничности и изогидричности глазных капель слезной жидкости необходимо введение в их состав фосфатного буферного раствора и натрия хлорида.
Проведены сравнительные биофармацевтические исследования различных основ, и выявлено, что оптимальной основой для геля азитромицина является 1% гидрогель карбопола 934. Реологические исследования геля азитромицина показали, что его реологические параметры находятся в пределах оптимума консистенции для глазных мягких лекарственных форм.
Охарактеризованы основные показатели и нормы качества, определен срок годности разработанных глазных лекарственных форм.
Разработана и валидирована методика количественного определения азитромицина методом экстракционной фотометрии.
Показана эффективность предложенных капель и геля азитромицина против штаммов микроорганизмов, наиболее часто вызывающих бактериальные поражения глаз. Доказана эффективность глазного геля азитромицина на модели хламидийного конъюнктивита.
Практическая значимость.
Результаты исследований послужили экспериментальным обоснованием для разработки технологии и состава глазных капель и геля азитромицина. На основании проведенных фармакотехнологических исследований предложены технологические схемы производства разработанных глазных лекарственных форм в заводских условиях, даны рекомендации по проведению основных этапов технологического процесса.
Внедрение результатов исследований в практику.
Подготовлен проект ФСП на глазной гель азитромицина, согласованный (02.09.10) с ОАО «Фармстандарт-Лексредства» (г. Курск). Получен акт апробации технологической схемы производства геля (02.10.10) в условиях заводского производства на базе ОАО «Фармстандарт - Лексредства» (г. Курск).
Положения, выносимые на защиту.
Результаты биофармацевтических и технологических исследований, проведенных для выбора основы глазного геля и пролонгирующего полимера для глазных капель.
Состав и нормы качества глазного геля и капель азитромицина.
Технологические схемы производства глазных капель и геля азитромицина.
Результаты исследования антимикробной активности разработанных капель и геля методом in vitro.
Результаты фармакологических испытаний эффективности предложенного глазного геля на модели хламидийного конъюнктивита.
Апробация работы.
Основные положения диссертации доложены и обсуждены в рамках Всероссийской школы - семинара «Современные наукоемкие лечебные и фармацевтические технологии для офтальмологии для молодых ученых» (28сентября - 1октября 2009 г., г. Белгород), Всероссийской научно - практической конференции «Актуальные проблемы фармацевтической науки и практики» (28-30 октября 2009г., г.Владикавказ), а также - на ежегодных научных региональных конференциях Пятигорской государственной фармацевтической академии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (2009, 2010, 2011, г. Пятигорск).
Публикации.
По материалам диссертации опубликовано 8 работ, в том числе в научных изданиях, входящих в перечень ВАК, опубликованы 3 работы.
Связь задач исследования с планом НИР учреждения, где выполнялась диссертация.
Диссертационная работа выполнена в рамках НИР кафедры технологии лекарств ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава».
Объем и структура диссертации.
Диссертационная работа изложена на 145 страницах машинописного текста компьютерного набора и состоит из введения, обзора литературы и 4 глав экспериментальных исследований, общих выводов, списка литературы и приложений. Работа содержит 27 таблиц и 26 рисунков. Список литературы включает 171 источника, их них 116 - на иностранных языках.
Особенности современных конъюнктивитов
Нормальная микрофлора конъюнктивы относительно постоянна и представлена, в основном, грамположительными бактериями. В обычных условиях конъюнктива поддерживает персистенцию популяции микроорганизмов, не вызывающих болезнь. Как и многие другие органы и системы, глазная поверхность колонизована различными микроорганизмами, которые являются, главным образом, комменсалами и играют незначительную роль в развитии воспалительного процесса. На поверхности конъюнктивы могут присутствовать некоторые грибы, их появление, например, может быть связано с загрязнением растворов для ухода за контактными линзами [1, 2].
Контаминация глаза бактериями в значительной степени зависит от состояния иммунной системы человека [3, 4]. Нормальная микрофлора конъюнктивы человека преимущественно состоит из дифтероидов (Corynebacterium spp.), Neisseria spp., некоторых разновидностей грамотрицательных бактерий, сходных с Haemophilus (Moraxella spp.), стафилококков, негемолитических стрептококков, включает в себя также и различные плесневые грибы: Fusarium spp., Cephalosporium spp., аспергиллы, пенициллы и др. [6,2].
Дифтероиды и коагулазонегативные стафилококки (КНС) служат частью защитного барьера и предотвращают колонизацию глаза патогенными микроорганизмами. При воздействии способствующих развитию инфекции факторов происходит нарушение баланса между этими микроорганизмами в сторону увеличения содержания коагулазанегативных стафилококков и уменьшения численности дифтероидов [5].
Неоднородность бактериальной флоры глаза зависит от конкуренции за питательные вещества, от процессов метаболизма и продукции ферментов, а также от других факторов. Существенное значение имеют анатомические барьерные функции глаза и иммунный статус человека. Неблагоприятные условия: травма, хирургические вмешательства, снижение факторов местного и общего иммунитета могут повлиять на количественный и качественный состав микрофлоры [7].
Инфекционно - воспалительные заболевания глаз являются серьезной медико - социальной проблемой практической офтальмологии. Воспаление является одной из основных причин временной нетрудоспособности больных с заболеваниями глаз (80%) и слепоты (10 - 30%). Клинико - статистический анализ, проведенный в различных регионах страны, показывает, что больные с глазными инфекциями занимают первое место в числе обратившихся к офтальмологу за помощью [8].
В Российской Федерации число больных с воспалительными заболеваниями глаз достигает 16 млн. в год. В связи с широким и фактически бесконтрольным использованием антибиотиков многие больные, страдающие бактериальной инфекцией глаз и занимающиеся самолечением, остаются неучтенными, если у них не развиваются тяжелые осложнения [9].
Среди общего числа больных с воспалительными заболеваниями глаз 66,7% составляют больные конъюнктивитами, 23,3% - блефаритами, реже встречаются воспалительные поражения роговицы, внутренних оболочек глаза - 4,2% и невриты - 5,8% [10].
Воспалительные процессы конъюнктивы могут вызывать различные этиологические агенты, такие как аэробные и анаэробные бактерии, вирусы, грибы и простейшие. В 64,2% случаев причиной инфекционных конъюнктивитов являются бактерии, в 30,2 % - вирусы, на патогенные грибы приходится только 5% случаев конъюнктивитов и пр.[8].
В области эпидемиологии бактериальных заболеваний глаз в последние годы отмечаются следующие отрицательные тенденции:
1) рост резистентных штаммов возбудителей к антибиотикам (например, к некоторым аминогликозидам - до 70%), полирезистентность штаммов;
2) сдвиг в сторону грамотрицательных возбудителей, более агрессивных (например, синегнойная. палочка);
3) связь бактериальных кератоконьюнктивитов в более 30% случаев с ношением контактных линз;
4); значительное увеличение токсико - аллергических реакций; вызванных используемыми консервантами и компонентами основы глазных лекарственных форм [11].
Важно отметить, что потенциальную опасность для возникновения бактериальных послеоперационных осложнений глаз представляет условно-патогенная микрофлора конъюнктивы глаза, которая проникает во внутриглазные структуры при выполнении разреза или имплантации интраокулярных линз и колонизирует их поверхности в форме микробных сообществ - биопленок [12].
Исследования последних лет показали, что на качественный и количественный состав бактериальной флоры глаза влияет ношение контактных линз, а также средства, используемые для дезинфекции линз, приводящие к селекции устойчивых к ним штаммов. Установлено, что бактериальная флора чаще выделяется у пользователей контактных линз, чем у пациентов, которые их не носили, причем мягкие контактные линзы контаминированы микроорганизмами различных видов в 70% случаев, а внутренняя поверхность контейнеров для их хранения - в 57%» случаев [13].
В настоящее время отмечается снижение частоты «классических» инфекционных заболеваний глаз, их место занимают новые инфекции. Существенную роль в развитии современных глазных инфекций играет условно-патогенная микрофлора, что объясняется, прежде всего, широким использованием местных или системных иммуносупрессивных препаратов[14]. Изменение состава микрофлоры также может произойти в результате бесконтрольного, использования кортикостероидов, которые уменьшают устойчивость макроорганизма к инфекции и способствуют появлению вирулентных штаммов бактерий. Причиной бактериальных конъюнктивитов являются аэробные и анаэробные бактерии. Аэробные бактерии, как правило, преобладают и среди них наиболее часто встречаются грамположительные микроорганизмы: S.epidermidis (75,0%), S.aureus (14,1%), Streptococcus spp. (6,2%), Micrococcus spp. (1,6%) и Enterococcus spp. (3,1%), а возбудителями бактериальных эндофтальмитов в 75% - 95% случаев являются грамположительные кокки: S. aureus, S. epidermidis и другие коагулазанегативные стафилококки [15, 15, 16]. Менее распространенными бактериями являются Neisseria gonorrhoeae, Neisseria meningitides, разновидность Pseudomonas, разновидность Proteus, Corynebacterium species Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae, a также представители рода Moraxella [10,18].
Данные литературных источников о наиболее часто вызывающих бактериальные поражения глаз микроорганизмах подтверждены проведенным нами за три года (2008 - 2010 г.г.) анализом 173 результатов бактериальных посевов отделяемого конъюнктивы 98 больных конъюнктивитом, обратившихся по поводу инфекционных поражений глаз в бактериологическую лабораторию. В разных случаях посевы проводились из одного или двух глаз пациентов в зависимости от локализации инфекции. По результатам бактериальных посевов идентифицировано 11 видов бактерий, давших рост в 198 случаях. Данные представлены в следующей таблице.
Обоснование состава глазных капель азитромицина
Глазные капли являются лекарственной формой, требующей всестороннего обоснования состава, так как ткани глаза особо чувствительны к физическим и химическим факторам, которые могут воздействовать на его слизистую оболочку.
Наряду с такими требованиями к глазным каплям, как стабильность, стерильность, отсутствие механических включений, особое значение придается изотоничности и изогидричности слезной жидкости. Несоответствие глазных капель этим параметрам слезной жидкости может вызвать болевые ощущения, обильное слезотечение, чувство жжения, резь, гиперемию глазного яблока и усилить воспалительный процесс [145].
Известно, что слезная жидкость имеет осмотическое давление, равное осмотическому давлению плазмы крови и осмотическому давлению, создаваемому 0,9% раствором натрия хлорида. Следовательно, капли, не вызывающие раздражения конъюнктивы, должны иметь такое же осмотическое давление, как и 0,9 % раствор натрия хлорида. При этом значение депрессии слезной жидкости равно депрессии плазмы крови, значение которой равно 0,52С, следовательно, капли, изотоничные слезной жидкости, должны иметь такое же значение депрессии, как плазма крови [145].
Для изотонирования глазных капель в фармацевтической технологии наиболее часто используют натрия хлорид. Расчет необходимого количества натрия хлорида проводят с учетом осмотического давления, создаваемого всеми ингредиентами глазных капель.
На первом этапе работы проведено определение изотонического коэффициента азитромицина. Для этого было необходимо определить значение депрессии растворов азитромицина. Измерение депрессии и расчет осмолярности проводили по методике, описанной в главе 2. Так как азитромицин нерастворим в воде, то для повышения растворимости использовался прием солеобразования, обычно применяемый для повышения растворимости антибиотиков. Азитромицин растворяли в 1М хлористоводородной кислоте, количество которой было найдено экспериментально. Оказалось, что ее количество, необходимое для полного растворения азитромицина, соответствует молярному отношению азитромицин - хлористоводородная кислота 1 : 2, поскольку азитромицин в своей структуре содержит два атома азота и является двукислотным основанием.
Для проведения эксперимента готовили растворы азитромицина с концентрацией от 0,1% до 1%. Данные, полученные в результате эксперимента, представлены в таблице 5.
Учитывая молярную концентрацию азитромицина и используемое количество хлористоводородной кислоты в соотношении 1:2, можно предположить, что азитромицин с хлористоводородной кислотой образует соль, которая диссоциирует не полностью. Это предположение подтверждают значения изотонического коэффициента, рассчитанные на основе данных измерения депрессии растворов азитромицина.
Полученные результаты позволили продолжить исследования по установлению изотоничности разрабатываемых глазных капель. На следующем этапе эксперимента было необходимо рассчитать количества натрия хлорида, необходимые для изотонирования растворов азитромицина. Для этого использовали среднее значение изотонического коэффициента для натрия хлорида, которое равно 1,82. Его подставляли в нижеприведенную формулу. Количество натрия хлорида, необходимое для доведения растворов азитромицина до изотоничности слезной жидкости, вычислялось по следующей формуле
Из результатов, приведенных в таблице, следует, что осмотическое давление, создаваемое азитромицином в водном растворе, незначительно. Расчетные данные были проверены экспериментально. Для этого определены значения депрессии растворов азитромицина, содержащих натрия хлорид в количествах, приведенных в таблице 4.
Представленные в таблице результаты подтверждают правильность рассчитанных теоретически количеств натрия хлорида, необходимых для доведения растворов азитромицина до изотонических концентраций. Следующим важным параметром, характеризующим качество глазных капель, является соответствие их требованию изогидричности слезной жидкости. Известно, что оптимальным для глазных лекарственных форм являются значения рН, находящиеся в интервале 7,2 - 7,8 [147].
Для установления соответствия этому требованию потенциометрически были измерены значения рН растворов азитромицина после изотонирования натрия хлоридом. В результате было установлено, что рН всех указанных растворов не соответствует оптимальному интервалу значений, характерному для слезной жидкости, а находятся в интервале от 4 до 5.
Следовательно, для поддержания оптимального значения рН, нормально переносимого глазом, в состав капель необходимо вводить буферную систему. Для подержания значения рН, равного 7,4 и являющегося оптимальным для тканей глаза, была выбрана фосфатная буферная смесь следующего состава (на 100 мл): 1,2% - раствора гидрофосфата натрия 81,8 мл и 0,91 % раствора дигидрофосфата калия 18,2 мл [148].
Выбор данной смеси обусловлен тем фактом, что фосфатная буферная система является одним из регуляторов кислотно-щелочной среды в организме человека и физиологична для тканей глаза. Кроме того, данная система применяется в технологии глазных капель длительное время и зарекомендовала себя как хорошо совместимая с водной средой глаза [149].
Компоненты буферной системы являются солями сильной кислоты и сильного основания. С учетом этого факта в водном растворе происходит диссоциация на ионы, вклад которых в суммарное осмотическое давление значителен. Поэтому были определены значения депрессии растворов азитромицина в фосфатной буферной системе.
Приготовление растворов и измерение депрессий проводили в соответствии с описанной выше методикой, используя для доведения растворов до заданного объема вместо воды очищенной фосфатный буфер с рН = 7,4.
Данные, полученные в результате эксперимента, представлены в следующей таблице.
Разработка технологической схемы производства глазного геля азитромицина
Одним из главных требований, предъявляемым к глазным лекарственным формам, является стерильность. Учитывая тот факт, что основой для-разрабатываемой лекарственной формы является гидрогель карбопола 934, при нагревании которого происходит явление синерезиса, а действующим веществом является термолабильная субстанция азитромицина, в производстве разрабатываемого геля нельзя использовать стерилизацию путем обычно применяемой в технологии стерильных лекарственных форм мембранной фильтрации или термической стерилизации.
Применение радиационной стерилизации также нецелесообразно из - за возможных процессов деструкции, окисления, трансформации связей и других структурных преобразований, которые могут быть вызваны ионизирующим излучением в молекуле азитромицина и структурных звеньях основы, являющейся редкосшитым полимером акриловой кислоты, а также материала первичной упаковки контейнера из полиэтилена. Газовая стерилизация исключается из-за трудности и длительности процесса полного удаления стерилизующего агента, как правило, являющегося высокотоксичным соединением,, а также возможным его взаимодействием с материалом контейнера.
Использование токов высокой или сверхвысокой чистоты» не рекомендуется, так как не возможно добиться одинаковой электропроводности всей массы геля и достижения равномерной глубины воздействия стерилизующего фактора.
Вышеперечисленные причины исключают возможность применения методов холодной стерилизации и термических методов. Следовательно, единственным путем достижения требования стерильности, предъявляемого к глазным лекарственным формам, является проведение всех стадий технологического процесса в асептических условиях, полностью исключающих контаминацию патогенными микроорганизмами. Субстанция азитромицина, основа, а также вспомогательные вещества должны быть стерильными.
Так как из - за термолабильности азитромицина и основы технология получения разрабатываемого геля исключает финишную стерилизацию, то все процессы производственного цикла требуют проведения работ в чистых зонах класса чистоты А, окруженных помещениями класса В. Все оборудование, помещения и персонал должны быть аттестованы на соответствие требованиям-и стандартам GMP [152].
Проведенные биофармацевтические исследования, результаты которых представлены выше, позволили экспериментально обосновать выбор основы для геля. В качестве оптимального был предложен следующий состав геля
Предложенная технологическая схема апробирована (02.10.10) в условиях заводского производства на базе ОАО «Фармстандарт -Лексредства»(г.Курск), о чем получен акт апробации (02.10.10), представленный в приложении А. Описание технологического процесса производства глазного геля азитромицина
BE It Санитарная подготовка производства
Описание данных этапов технологической схемы аналогично приведенным в главе 3, в связи с чем оно не приводится. ВР 2 Получение воды для инъекций и подготовка компонентов
ВР 2.1 Получение воды для инъекций
Одной из важных подготовительных операций является получение воды для инъекций. Рекомендуется использовать метод дистилляции. ВР 2.2 Приготовление 0,1М раствора натрия гидроксида
Для получения раствора в смеситель загружают соответствующие количества воды для инъекций и натрия гидроксида, который добавляют частями при перемешивании до его полного растворения. Приготовление раствора проводят за сутки до основного технологического процесса. Перед использованием раствор фильтруют под вакуумом через стерилизующий фильтр с диаметром пор, равным 0,2 микрона. ВР 2.3. Отвешивание компонентов геля
Подготовку всех компонентов геля проводят в асептических условиях, в помещении класса чистоты В. Учитывая, что субстанции карбопола 934 и азитромицина представляют собой мелкодисперсные порошки, а гель по дисперсологической классификации является мазью-раствором, в дополнительном просеивании субстанций- нет необходимости. На весах производят отвешивание необходимого количества субстанции азитромицина и карбопола 934. После чего их помещают в стерильные емкости для временного хранения. Аналогичным образом поступают и с бензалкония хлоридом. ВР 2.4. Растворение бензалкония хлорида в воде для инъекций
Растворение бензалкония хлорида проводят в части воды для инъекций. Для этого предварительно отвешенное количества субстанции помещают в стерильный смеситель и растворяют в воде для инъекций, добавляемой в соотношении 1:10. ТП 1 Приготовление основы 1% гидрогеля карбопола ТП 1.1 Гидратацшг карбопола
Для производства геля используют реактор, изготовленный из-. нержавеющей стали, являющийся стандартными для. фармацевтических производств: Реактор должен быть снабжен мешалкой якорного или рамного типа паровой1 рубашкой, а также системой создания вакуума, позволяющей проводить технологический процесс при: отсутствии воздуха и необходимой для предотвращения,включения воздуха в основу геля.
В смеситель загружают воду для инъекций, включают систему нагрева паровой рубашки, температура поддерживается равной 70 - 80G для того, чтобы избежать формирование конгломератов полимера. Включают мешалку и устанавливают скорость вращения 60 - 70 об/мин. Частями добавляют отвешенное количество карбопола 934 и перемешивают в течение 30 минут, после чего система выдерживается в течение 1 часа при выключенной мешалке для гидратации молекул полимера. ТП 1.2 Нейтрализация: карбопола
Карбопол нейтрализуют ранее приготовленным раствором натрия; гидроксида, добавляя его небольшими порциями при перемешивании, которое продолжают до образования однородного геля. ТП 2 Получение геля азитромицина ТП 2.1 Введение в основу азитромицина
Частями при постоянном перемешивании добавляют отвешенное количество азитромицина. Процесс перемешивания продолжают 50 - 60 минут до получения прозрачного гомогенного геля - раствора. ТП 2.2 Введение в основу водного раствора бензалкония хлорида
В последнюю очередь после охлаждения до комнатной температуры в гель вводят раствор бензалкония хлорида в воде для инъекций. Перемешивание продолжают до образования однородной гелеобразной массы в течение еще 10-15 минут
Изучение антимикробной активности разработанных глазных лекарственных форм азитромицина на модели хламидийного конъюнктивита
Эксперимент по изучению фармакологической активности предлагаемого глазного геля азитромицина был проведен на базе научно - исследовательского испытательного центра (медико - биологической защиты) ФГУ ГНИИИ военной медицины МО РФ, г. Санкт-Петербург.
С учетом высокой контагиозности С. trachomatis животные содержались в специальном виварии, находящемся в зоне, предназначенной для работы с карантинными инфекциями. Исследование проводили на 12 кроликах (24 глаза) породы шиншилла массой 2,5-Зкг. Животных содержали в стандартных условиях вивария с естественным 12 - часовым свето-темновым режимом, со свободным доступом к воде и пище, при температуре воздуха 20-21 С. Содержание животных соответствовало правилам надлежащей лабораторной практики - Приказу МЗ РФ № 267 от 19.06.2003 г. «Об утверждении лабораторной практики».
Модель хламидийного конъюнктивита воспроизводили путем однократной интраконъюнктивальной инъекции в веко 0,1мл 5% суспензии оболочек желточных мешков куриных эмбрионов, зараженных штаммом серотип L -2 Chlamydia trachomatis. Манипуляции производили с предварительной местной анестезией: двукратно инсталлировали 1% дикаин.
Инфицированные животные в эксперименте были распределены следующим образом: терапию первой группы проводили гелем азитромицина 1%, второй - препаратом сравнения - мазью эритромицина 10000 ЕД в 1г, третья группа - служила контролем активности основы геля, четвертая -контролем без лечения.
Ежедневно гель азитромицина, мазь эритромицина и основу геля в объеме 0,15мл с помощью стерильного шприца без иглы вводили в конъюнктивальную полость двукратно с интервалом десять часов.
Во время эксперимента наблюдали за лабораторными животными и отмечали, что общая толерантность, определяющаяся по изменениям характера поведения (агрессивность, вялость), общее состояние (аппетит, вес, внешний вид, состояние шерсти) не изменялись.
Глаза кроликов осматривали с помощью бифокальной лупы при боковом фокальном освещении. Контрольное офтальмологическое обследование с фоторегистрацией проводили перед заражением, после введения культуры возбудителей на 2, 4, 7, 10, 13, 17 и 20 сутки.
Критериями оценки динамики хламидийного конъюнктивита служили: наличие и выраженность блефароспазма, отека и гиперемии конъюнктивы, серозного (или гнойного) отделяемого, фолликулов, помутнения роговицы. Степень выраженности каждого симптома определялась количеством баллов (от 1 до 4), которые суммировали для получения общей оценки степени тяжести хламидийного процесса. Соответствующая шкала представлена в следующей таблице.
Первые симптомы хламидийного процесса в переднем отделе глаз кроликов появились на вторые сутки после инфицирования в виде умеренной воспалительной реакции в области введения возбудителя, которая характеризовалась слабо выраженной гиперемией и ограниченным отеком конъюнктивы века, появлением скудного серозного отделяемого.
Терапия гелем азитромицина и мазью эритромицина, введение в конъюнктивальную полость основы геля в качестве контроля была начата на третьи сутки эксперимента на фоне быстрого нарастания клинической картины.
На четвертые сутки признаки воспаления были максимально выраженными, отмечались: выраженный распространенный отек конъюнктивы век и глазного яблока, выраженные гиперемия конъюнктивы век и глазного яблока и блефароспазм, серозно-гнойное отделяемое, фолликулы в умеренном количестве распространялись по своду и конъюнктиве глазного яблока, появилось краевое помутнение роговицы.
На седьмые сутки у леченных антибиотиками животных клиническая картина была незначительно менее выражена. На десятые сутки отмечали снижение количества серозно-гнойного отделяемого, выраженности отека и гиперемии конъюнктивы век, блефароспазм значительно уменьшился, число фолликулов и помутнение роговицы не нарастало, оставалось прежним.
Начиная с тринадцатых суток на фоне лечения клинические проявления инфекционного процесса начали заметно регрессировать: блефароспазм стал слабо выраженным, отделяемое было скудным, уменьшились отек и гиперемия конъюнктивы, краевое помутнение роговицы было менее выраженным.
На семнадцатые сутки лечения удалось достичь существенного снижения выраженности симптомов заболевания, дольше всего сохранялись фолликулы даже на фоне относительно спокойной конъюнктивы.
На двадцатые сутки по визуально оцениваемым признакам наблюдалась слабо выраженная картина воспалительного хламидийного процесса.
У контрольных животных (без лечения и животных с введением в конъюнктивальную полость основы геля) инфекционный процесс приобрел тяжелую форму, отмечали резко выраженные отек и гиперемию конъюнктивы век и глазного яблока, блефароспазм, обильное серозно - гнойное отделяемое, диффузное помутнение роговицы, множественные фолликулы, распространявшиеся по всей поверхности глазного яблока и век, приобрели сливной характер. На рисунке представлены диаграммы, иллюстрирующие течение хламидийного процесса.
Как видно из рисунка, терапия гелем 1% азитромицина демонстрирует результат, сопоставимый по эффективности, а в некоторых случаях превосходящий по антихламидиинои активности препарат сравнения - мазь эритромицина.
Фотографии, иллюстрирующие динамику течения хламидийного конъюнктивита представлены ниже.
