Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Современное состояние исследований в области фармакотерапии келоидных и гипертрофических рубцов (обзор литературы)... 9
1.1. Келоидные и гипертрофические рубцы: клинические и гистологические особенности 9
1.2. Современная фармакокоррекция рубцов 16
1.3. Ассортимент средств, используемых для лечения и профилактики рубцов 21
1.4. Циклоферон. Препараты, фармакологическое действие, применение 25
1.5. Масло шиповника. Использование в медицине и косметологии 27
1.6. Глицин в наружных лекарственных формах и косметических средствах 29
1.7. Глицирам. Фармакологическое действие. Наружное применение 30
Заключение по обзору литературы 33
Глава 2. Объекты и методы исследования 34
2.1. Объекты исследования 34
2.2. Методы исследования
2.2.1. Технологические исследования 36
2.2.2. Фармакологические исследования 38
Глава 3. Обоснование состава противорубцовых средств 46
3.1. Исследования по выбору оптимальной основы
3.1.1. Исследование совместимости компонентов и основы
3.1.2. Исследование термо- и коллоидной стабильности основ
3.2. Выбор пенетрирующих добавок
3.3. Выбор консерванта для гелей противорубцовых
3.4. Состав и технология гелей противорубцовых 57
3.5. Разработка технологической схемы производства гелей 58
3.6. Реологические исследования противорубцовых гелей 61 Выводы по главе 63
Глава 4. Исследования по разработке норм качества и стабильности при хранении гелей противорубцовых 64
4.1. Разработка норм качества геля циклоферона с
глицирамом и маслом шиповника
4.1.1. Определение подлинности компонентов геля циклоферона с глицирамом и маслом шиповника
4.1.2. Разработка методики количественного определения циклоферона .
4.1.3. Методика количественного определения каротиноидов
4.1.4. Разработка методики определения глицирама в геле методом планарной хроматографии .
4.2. Нормы качества разработанного геля циклоферона с глицирамом и маслом шиповника 75 4.3. Разработка норм качества геля циклоферона с глицином
и маслом шиповника
4.3.1. Определение подлинности геля циклоферона с глицином и маслом шиповника 8 3
4.3.2. Определение количественного содержания
87 88 93 циклоферона, глицина и масла шиповника в геле 84
4.4. Разработка норм качества геля с циклофероном, глицином и маслом шиповника
4.5. Определение сроков годности гелей противорубцовых
Выводы по главе
Глава 5. Фармакологические исследования противорубцовых гелей
5.1. Изучение макроскопической картины процесса заживления раны с оценкой изменения показателей
периферической крови крыс
5.1.1. Изучение макроскопической картины процесса заживления раны ..
5.2. Влияние исследуемых гелей на состояние периферической крови .
5.3. Влияние изучаемых лекарственных форм на вазодилатирующую и антитромботическую функцию эндотелия сосудов при экспериментально вызванном патологическом рубце
Выводы по главе
Заключение
Список литературы 1
- Циклоферон. Препараты, фармакологическое действие, применение
- Исследование термо- и коллоидной стабильности основ
- Определение подлинности компонентов геля циклоферона с глицирамом и маслом шиповника
- Изучение макроскопической картины процесса заживления раны
Циклоферон. Препараты, фармакологическое действие, применение
Как видно из рисунка 1, заживление раны с образованием рубца является сложным процессом, в котором принимают участие не только клеточные элементы соединительной ткани, но и факторы, продуцируемые различными клетками сосудистого эндотелия, такие как оксид азота (NO), сосудисто эндотелиальный фактор роста (СЭФР), эндотелин-1 и др. [90, 135, 145, 149]. Эндотелий поддерживает сосудистый гемостаз путем регулирования тонуса сосудов и поддержания их анатомического строения, регулирования гемостаза и местного воспаления, выполняет защитную функцию и регулирует хемотаксические и репаративные процессы в ответ на локальное повреждение [111, 112, 134]. Если функции эндотелия сохранены, то преобладает его вазодилатирующее, антикоагулянтное, противовоспалительное действие. Однако пограничное положение эндотелия делает его уязвимым к различным повреждающим факторам [98, 112].
Причинами эндотелиальной дисфункции могут быть различные факторы, в том числе ишемия или гипоксия тканей, возрастные изменения, свободнорадикальное повреждение, действие цитокинов, интоксикация, гипертензия и т.д. [79]. При нарушении функции или структуры эндотелия резко меняется спектр выделяемых им биологически активных веществ - усиливается выработка эндотелина-1, простагландинов, фибронектина, фактора Виллебранда и др. Это приводит к сдвигу динамического равновесия в противоположную сторону: увеличивается продукция вазоконстрикторов, провоспалительных и протромботических агентов [65, 79, 111, 112]. Указанные медиаторы могут принимать прямое и опосредованное участие в образовании келоидов [9, 77].
На сегодняшний день доказано, что следствием повреждения или нарушения функционирования любого сосуда вне зависимости от его органной локализации при любых хирургических операциях является эндотелиальная дисфункция [79, 111, 134]. Первоначально, в ответ на действие агрессивных факторов оперативного вмешательства в организме возникают полифункциональные изменения, которые объединяют в понятие «операционный (хирургический) стресс» [19, 135]. В частности, происходит повышенное выделение физиологически активных веществ типа монокинов, эйкозаноидов, радикалов кислорода, которые могут стать факторами повреждения эндотелия. Кроме того, хирургический стресс является одной из причин эндотоксинемии, которая, в свою очередь, способствует снижению активности эндотелиальной NO-синтетазы (eNOS) и, следовательно, также может быть одним из факторов развития эндотелиальной дисфункции [79].
Схематично «порочный круг», приводящий к развитию эндотелиальной дисфункции, можно представить следующим образом. С одной стороны одним из звеньев формирования операционного стресс-ответа является так называемый «оксидантный стресс», которому принадлежит основная роль в механизме развития эндотелиальной дисфункции [19, 25]. С другой стороны в развитии операционного стресса принимают прямое участие медиаторы воспаления (гистамин, серотонин, простагландины, лейкотриены, субстанция Р, кинины, цитокины и др.) [25].
В настоящее время воспалительному компоненту хирургического стресса в процессах заживления ран придается вс большее значение [8, 19, 88]. В результате развития воспалительного процесса нарушается микроциркуляция, усугубляется гипоксия, происходит дополнительный выброс медиаторов воспаления, воспалительный процесс в ране приобретает неадекватный характер, происходит его хронизация, углубляется кожный дефект, накапливаются продукты распада тканей, свободные радикалы и медиаторы воспаления, замыкая тем самым «порочный круг». Кроме этого, хроническое воспаление также приводит к дополнительной стимуляции базальных кератиноцитов, следствием чего является повышение продукции СЭФР.
Таким образом, оксидантный стресс, сопровождающийся накоплением большого числа свободных радикалов (O-2, NO-), в сочетании с хроническим воспалением способен приводить к возникновению существенных изменений функции эндотелия сосудов, которые, в свою очередь, служат местным пусковым механизмом нарушения регенерации дермы и создают предпосылки к образованию келоида [60, 90, 131]. В сложившихся неблагоприятных условиях эндотелием постоянно и в больших количествах (по сравнению с нормой) востребуются биохимически активные субстанции, обеспечивающие релаксацию сосуда, ключевым из которых является эндотелиальный оксид азота - NO, что в конечном итоге приводит к истощению его запаса. Стоит отметить, что базальный (фоновый) уровень NO образуется при участии двух конституциональных форм NO-синтетаз (NOS) – эндотелиальной (eNOS) и нейрональной (nNOS), а большие количества NO образуются при участии индуцибельной формы NO-синтазы (iNOS) [8, 41, 60, 131]. По данным последних лет, система, содержащая реактивные посредники азота, которые представляют собой производные iNOS, существует в макрофагах и нейтрофильных лейкоцитах и обладает уникальными функциями – цитотостатической и цитотоксической [60].
В условиях оксидантного стресса, хронического воспаления, действия бактериальных эндотоксинов и некоторых цитокинов (TNF , ИЛ-1) происходит экспрессия iNOS. В итоге происходит усиление синтеза индуцибельного NO компонента патогенеза осложнений, возникающих при заживлении послеоперационных ран. Так, с одной стороны, усиленная генерация оксида азота приводит к ингибированию синтеза интерлейкина-1, контролирующего активность коллагеназы и отвечающего за подавление избыточного разрастания соединительной ткани. С другой стороны, повреждающий эффект гиперпродукции индуцибельного оксида азота, связанный с образованием большого количества пероксинитрита, преобладает над его защитным действием, направленным на обезвреживание возбудителей в ране [65]. При этом пероксинитриты усугубляют течение ишемии органов и нарушают связывающую функцию гемоглобина, подавляя работу цикла Кребса, ингибируя образование энергии в митохондриях [8,111]. Наблюдается торможение эндотелий-зависимой возодилатации, увеличение синтеза адгезивных молекул и факторов роста, усиление агрегации тромбоцитов и тромбообразования, повышение активности апоптоза эндотелиоцитов [90].
Исследование термо- и коллоидной стабильности основ
Вазодилатирующую функцию эндотелия оценивали по реакции сосудов кожи в условиях модификации синтеза эндогенного оксида азота при внутривенном введении анализаторов следующим образом: ацетилхолин (АЦХ) (Acros organics, США) в дозе 0,01 мг/кг; L-аргинин (L-arg) (Acros organics, США) в дозе 300 мг/кг; нитроглицерин (НТГ) (МТХ, Москва) в дозе 0,007мг/кг и нитро-L-аргинин (нLа) (Acros organics, США) в дозе 10 мг/кг. Каждое введение анализатора осуществлялось после возвращения скорости кровотока до исходного уровня. Регистрацию скорости кровотока осуществляли на участке кожи возле рубца в центре его нижнего участка с помощью ультразвукового допплерографа, датчика УЗОП-010-01 с рабочей частотой 25МГц и рабочей компьютерной программы ММ-Д-К-Minimax Doppler v.1.9. (Санкт – Петербург, Россия) [95, 97, 99].
Можно предположить, что один и тот же датчик, размещенный над тканью органа, регистрирует кровоток в определенной, сопоставимой по массе ткани, а не во всем органе. Поэтому кровоток фиксировался в условных единицах (ус.ед.). При введении анализатора регистрировали изменение скорости кровотока по отношению к исходному, и, таким образом, по увеличению/уменьшению скорости кровотока в % по отношению к исходному уровню судили о расширении или сужении сосудов и косвенно об участии системы NO в регуляции тонуса сосудов и кровообращения исследуемого участка кожи.
В условиях эндотелиальной дисфункции в ответ на введение НТГ, L-arg, АЦХ, а также блокатора синтеза нитрооксида нLа оценивали степень нарушения вазодилатирующей функции эндотелия, а также эндотелиопротективные свойства исследуемых композиций. Оценку влияния экспериментальных образцов на стабильность и мощность NO-синтазной системы эндотелия проводили после каждого введения ацетилхолина, при этом основным фактором являлся процент прироста скорости кровотока к исходному значению.
Оценка влияния исследуемых гелей на тромбоцитарный компонент гемостаза (изменения агрегатного состояния крови)
Влияние веществ на агрегацию тромбоцитов исследовали на двухканальном лазерном анализаторе агрегации тромбоцитов (модель 220 LA) научно-производственной фирмы «Биола» (г. Москва) по методу Born G. (1962) в модификации Габбасова З.А. и соавторов (1989) [21, 126]. Метод основан на регистрации степени изменений светопропускания богатой тромбоцитами плазмы при добавлении веществ, индуцирующих агрегацию, в условиях постоянного перемешивания, а также на анализе флюктуаций светопропускания, вызванных случайным изменением числа частиц в оптическом канале. В процессе эксперимента в кювету агрегометра помещали 0,3 мл плазмы, выдерживали при температуре 37С в течение 2 минут. После инкубации вносили индуктор агрегации динатриевую соль аденозин-5-дифосфорной кислоты (АДФ) («Reanal», Венгрия) в конечной концентрации 5 мкM. Используя графическую регистрацию процесса агрегации кровяных пластинок (в течение пяти минут) строили кривые, которые показывали падение оптической плотности плазмы, обогащнной тромбоцитами. По значению максимальной амплитуды агрегатограммы оценивали интенсивность агрегации.
Определение фактора фон Виллебранда (fvW) - проводилось с помощью «набора для определения фактора Виллебранда» (производство НПО РЕНАМ, Россия) на двухканальном лазерном анализаторе агрегации тромбоцитов (модель 220 LA) научно-произодственной фирмы «Биола» (г. Москва, Россия).
Оценка влияния исследуемых гелей на вязкость крови
Для изучения гемореологических параметров наиболее доступным и информативным показателем является вязкость крови. Повышение значений этого параметра свидетельствует об изменениях мембраносвязанных функций эритроцитов. Вязкость крови оценивали с помощью анализатора крови реологического АКР-2 (Россия). В основе действия прибора лежит метод ротационной вискозиметрии со свободно плавающим цилиндром-ротором [2]. Движение статора создает магнитное поле, которое приводит к вращению плавающий ротор. Показатель вязкости крови является производным от скорости вращения ротора в изучаемом образце крови. Анализатор обеспечивает измерение вязкости крови в диапазоне скоростей сдвига от 5 с-1 до 300 с-1. Для определения вязкости пробу крови объемом 0,8 мл мерной пипеткой вносили в измерительную кювету, куда помещался ротор-поплавок. Далее кювета устанавливалась на 10 минут в термостат. После термостатирования кювету перемещали в ячейку для измерений. Результаты анализа фиксировали с цифрового табло после установления показаний (неизменное значение в течение 40 секунд после его последней смены) [2].
Оценка влияния исследуемых гелей на показатели периферической крови Гематологические показатели (количество эритроцитов, цветовой показатель, уровень гемоглобина, количество тромбоцитов, количество лейкоцитов, лейкоформула) определяли с использованием системы ветеринарного автоматического гематологического анализатора BC 2800vet (Mindray). Принцип определения основан на методе импеданса, который заключается в определении количества и размера клеток в зависимости от изменения электрического сопротивления, когда частица (клетка) в токопроводящей жидкости проходит через маленькую апертуру. Каждая клетка при этом вызывает изменение импеданса проводящей суспензии клеток крови. Эти изменения регистрируются как увеличение напряжения между электродами. Количество импульсов определяет количество клеток. Амплитуда импульса пропорциональна объему клетки. Импульсы подсчитываются только в границах, которые находятся между заранее установленными нижними и верхними пределами (дискриминаторами). Принцип измерения гемоглобина. Гемоглобин определяется в лизированном разведении 1:196 цианметгемоглобиновым методом. Реагент лизирует эритроциты, при этом высвобождается гемоглобин. Железо гемоглобина окисляется из двухвалентного в трехвалентное, формируя метгемоглобин, который реагирует с цианидом калия с образованием стабильного цианметгемоглобина или гемоглобинцианида. Затем концентрация гемоглобина измеряется фотометрически. Определение проводили 1 раз в неделю. Забор крови осуществляли из подъязычной вены. Оценка макроскопической картины процесса заживления
На 14 и 45 дни проводили макроскопическое исследование состояния ран, фиксировали фотоаппаратом Nikon Coolpix S3300. По внешним проявлениям оценивали в баллах интенсивность процесса в соответствии с таблицей 4, которая учитывает следующие критерии: заживление первичным натяжением в % от общей протяженности рубца, покраснение или его отсутствие, наличие полостей с гноем (оценивается при вскрытии), наличие на рубце струпа в % от общей протяженности рубца, наличие ровного, без деформаций – нормотрофического рубца в % от общей протяженности рубца.
Определение подлинности компонентов геля циклоферона с глицирамом и маслом шиповника
Эффективность пластинки определяли по числу теоретических тарелок пятен стандартных образцов. Данный показатель для глицирама составил около 250 теоретических тарелок.
Полученные результаты свидетельствуют о достаточной чувствительности, специфичности и эффективности хроматографической методики.
Для валидации методики количественного анализа определяли линейность, правильность и воспроизводимость.
Линейность устанавливали по градуировочным графикам (3 повторности), полученным при компьютерной обработке хроматограмм в координатах площадь пика (S) - масса (m, мкг). Для этой цели использовали раствор РСО глицирама с концентрацией 1 мкг/мкл. Хроматограмму готовили, как указано выше. Диапазон масс глицирама в пятнах 1,0-5,0 мкг. По данным градуировочных графиков рассчитывали статистические характеристики и коэффициент корреляции. Методом наименьших квадратов определяли значимость свободного члена линейной зависимости (а), величину углового коэффициента (b). Расчеты проводили с помощью программы Microsoft Excel.
Градуировочный график данных одной из пластин описывается уравнением у = (7468±798)х, коэффициент корреляции г = 0,997. Правильность методики определяли методом «введено-найдено». По градуировочному графику рассчитывали содержание глицирама на 5-и уровнях концентраций стандартного образца и рассчитывали метрологические характеристики. Результаты приведены в таблице 18. Таблица 18 - Результаты определения открываемости хроматографической методики определения глицирама методом планарной хроматографии специфична, имеет достаточно высокую чувствительность и эффективность. Методика количественного определения отвечает необходимым требованиям по показателям линейность, правильность и воспроизводимость. Данную методику можно использовать для качественного и количественного определения глицирама в геле.
На основании ОСТ 91500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения» и результатов проведенных исследований были установлены нормы качества разработанных композитных гелей, представленные в таблице 20. Таблица 20 – Нормы качества геля с циклофероном, глицирамом и маслом шиповника
Показатели Методы Нормы Описание Визуальный, органолептический Однородная масса мягкой вязкой консистенции, желто-коричневого цвета с характерным запахом
Подлинность: 1. ЦиклоферонГлицирам Масло шиповника СпектрофотометрияВизуальный ТСХВизуальноВизуально Спектрофотометрия Спектр раствора, приготовленного для количественного определения, совпадает со спектром раствора СО циклоферона Фиолетово-синяя люминесценцияRf пятна контрольного трека, должно соответствовать Rf пятен стандартного образца (0,13±0,004) Появление пятен коричневого цветаПоявление быстро исчезающего зеленовато-синего окрашивания Спектр раствора, приготовленного для количественного определения, имеет максимумысветопоглощения при длинах волн 450±2 нм и 471±2 нм рН Потенциометрически 5,0 - 6,0 Размер частиц По ГФ XI, т. 2. Не более 80 мкм Микробиологическая чистота ГФ ХII Категория 2А Количественное определение1. Циклоферон2. Глицирам3. Масло шиповника СпектрофотометрияМетод тонкослойнойхроматографииСпектрофотометрия 4,75 – 5,25 %4,5 – 5,3 %каротиноидов не менее 12 мг% 4.3 Разработка норм качества геля циклоферона с глицином и маслом шиповника 4.3.1 Определение подлинности геля циклоферона с глицином и маслом шиповника Для определения циклоферона и масла шиповника в геле, предложено использовать методики разработанные для геля, содержащего циклоферон, глицирам и масло шиповника (глава 4, параграф 4.1.1).
Определение глицина в геле циклоферона
Для установления подлинности глицина в присутствии других компонентов геля нами предложена фотометрическая методика, основанная на реакции аминокислот с нингидрином [46]. В результате реакции образуется окрашенный продукт (фиолетового цвета), имеющий максимальное светопоглощение при длине волны 590 нм.
На первоначальном этапе необходимо было выяснить, будут ли входящие лекарственные и вспомогательные вещества мешать определению глицина с помощью нингидриновой пробы. Для этого готовили растворы стандартных образцов (СО) циклоферона, масла шиповника и растворы вспомогательных веществ в таких же концентрациях, как и в растворе, используемом для анализа глицина в геле. Полученные растворы лекарственных и вспомогательных веществ подвергали реакции с нингидрином.
В ФСП 42-1702-07 «Циклоферон, линимент 5%» для анализа N-метилглюкамина – составной части циклоферона применяют метод ТСХ, в качестве проявителя используют 0,3% раствор нингидрина, в результате на хроматограмме проявляются пятна розово-оранжевого цвета. Поэтому, необходимо было проверить, специфична реакция глицина с нингидрином и не будет ли присутствующий циклоферон мешать определению глицина. Для этого готовили раствор СО циклоферона в концентрации 0,05%, что соответствует концентрации в извлечении из геля при проведении нингидриновой пробы, и в концентрации 0,5%, т.е. в 10 раз превышающей аналитическую. В результате оказалось, что растворы циклоферона, также как и остальные компоненты геля, не давали реакции с нингидрином, и, следовательно, не мешали определению глицина в препарате. Раствор циклоферона в концентрации 0,5% также не давал реакции с нингидрином.
Изучение макроскопической картины процесса заживления раны
Эндотелий синтезирует биологически активные соединения, которые обеспечивают баланс между тромбогенным и антитромбогенным, антикоагуляционным и прокоагуляционным гемостазом в норме и при патологии. В нормальных физиологических условиях эндотелий сосудов препятствует агрегации, коагуляции крови и спазмированию сосудов, синтезируя группу активных веществ: оксид азота, простациклин, антитромбин III и др. Кроме того, эндотелий, образуя тромбомодулин, блокирует активные коагулянты, присутствующие в плазме крови, в частности, тромбин, адсорбирует антикоагулянты из плазмы крови, препятствуя адгезии и агрегации тромбоцитов на своей поверхности (гепарин, протеины С и S, антитромбина III). Сам эндотелий синтезирует гепариноподобные вещества. Конечный эффект оксида азота - антиагрегирующий, противосвертывающий и вазодилататорный [59,78].
Хирургическое вмешательство сопровождается повреждением эндотелия сосудов, обнажением субэндотелиальных слоев, нарушениями в системе синтеза оксида азота, что способствует запуску реакций агрегации, свертывания, повышения вязкостных характеристик крови, вызывает спазм сосуда. Таким образом, при развитии эндотелиальной дисфункции наблюдается переключение активности эндотелия на синтез оксидантов, вазоконстрикторов, агрегантов и тромбогенных факторов [5, 62, 144, 159].
У животных с экспериментально вызванным патологическим рубцом наблюдается повышенная агрегация тромбоцитов, что проявляется в статистически значимом увеличении индекса агрегации тромбоцитов. При экспериментально смоделированной патологии, исследуемые вещества и их комбинации снижали индекс агрегации тромбоцитов; повышали индекс дезагрегации тромбоцитов по сравнению с группой животных с ЭПР (приложение 1).
Введение исследуемых веществ животным с ЭПР достоверно (P 0,05) во всех группах снижало скорость агрегации тромбоцитов. Наиболее выраженное улучшение показателей АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов (снижение ИАТ, скорости агрегации, повышение ИДАТ) наблюдалось при применении геля с циклофероном, глицирамом и маслом шиповника. По силе влияния на тромбоцитарный компонент гемостаза данная комбинация превышала показатели препаратов сравнения «Хондроксида» и «Контрактубекса», гель с циклофероном, глицином и маслом шиповника незначительно уступал препаратам сравнения.
Высоко информативным показателем гемореологических нарушений при экспериментально вызванной патологии является уровень фактора Виллебранда в плазме крови. Фактор фон Виллебранда – тромбопластический фактор плазмы, сложный мультимерный адгезивный гликопротеин. Участие фактора Виллебранда в первичном (сосудисто-тромбоцитарном) гемостазе осуществляется за счет обеспечения адгезии тромбоцитов к коллагену сосудистой стенки. Участие фактора Виллебранда во вторичном (коагуляционном) гемостазе осуществляется за счет стабилизации молекулы фактора VIII и транспортировки ее к месту активного образования гемостатической пробки. Известно, что повышенные уровни антигена vWF / активности являются индикатором повреждения эндотелия при сосудистых заболеваниях. При многих заболеваниях, сопровождающихся острым и хроническим повреждением эндотелия (хирургические вмешательства, сахарный диабет, атеросклероз и т.д.), уровень vWF крови значительно повышается.
При изучении данного параметра были получены следующие результаты: в группе животных с ЭПР без фармакологической коррекции наблюдалось значительное достоверное повышение уровня фактора Виллебранда в крови, что подтверждает наличие нарушений в коагуляционном гемостазе, повышении процессов адгезии и тромбообразования при развитии эндотелиальной дисфункции.
Под влиянием исследуемых гелей наблюдалось снижение данного показателя по отношению к группе с ЭПР без лечения.
Реологическим феноменом, во многом определяющим микроциркуляторный кровоток, является вязкость крови. Во-первых, повышенная вязкость крови является независимым фактором риска самых различных патологических состояний вследствие нарушения микроциркуляции. Во-вторых, формирование самой вязкости крови зависит от таких параметров, как вязкость плазмы, уровень гематокрита, степень агрегации, деформируемость эритроцитов. Нарушение этих параметров, что наблюдается при развитии эндотелиальной дисфункции, в результате приводит к снижению скорости кровотока и нарушению микроциркуляции [23].
В результате проведенного исследования было обнаружено статистически значимое увеличение показателей вязкости крови в группе с ЭПР по отношению к интактным животным во всем диапазоне скоростей сдвига, что свидетельствует о комплексных нарушениях со стороны системы гемостаза. На фоне введения исследуемых составов вязкость крови снижалась, особенно при низких скоростях сдвига.
Обобщая полученные результаты, можно предположить, что изучаемые гели обладают эндотелиопротективной активностью. По сравнению с полученными параметрами прироста и падения скорости кровотока в ответ на активацию и блокаду синтеза NO у группы с ЭПР без фармакологической поддержки, у животных, получавших гель с циклофероном, глицирамом и маслом шиповника происходило повышение прироста скорости кровотока в ответ на введение ацетилхолина на 107,4%, уменьшение прироста скорости на введение L- аргинина – на 44,08%, более выраженное падение кровотока на 133,82% на введение N – L – аргинина. Таким образом, гель с циклофероном, глицирамом и маслом шиповника превосходил значения препаратов сравнения «Хондроксид» и «Контрактубекс» (приложение 1).
У животных с ЭПР наблюдаются нарушения как со стороны коагуляционного (плазменного) гемостаза, так и со стороны сосудисто тромбоцитарного. Антикоагулянтный и антитромбогенный потенциал сосудистого эндотелия смещается в сторону повышения показателей агрегации тромбоцитов, повышения уровня фактора Виллебранда в крови, увеличение вязкости крови на всех скоростях сдвига. Таким образом, мы можем судить о выраженных изменениях в системе гемостаза при экспериментальной патологии и развитии эндотелиальной дисфункции. При этом необходимо отметить, что наиболее выраженное влияние на уровень фактора Виллебранда, снижение вязкости крови, особенно на низких скоростях сдвига оказал гель с циклофероном, глицирамом и маслом шиповника.
