Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Актуальные проблемы разработки офтальмологических препаратов (обзор литературы) 10
1.1. Наиболее распростарнённые офтальмологические заболевания 11
1.2. Компоненты состава глазных капель 17
1.2.1. Характеристика таурина и никотинамида в качестве действующих веществ в составе глазных капель 17
1.2.2. Вспомогательные вещества применяемые в производстве глазных капель 21
1.3. Основные требования к составу и технологии получения глазных капель 28
1.3.1. Стерильность 28
1.3.2. Изотоничность 31
1.3.3. Изогидричность 32
1.3.4. Прозрачность и отсутствие механических включений 33
1.3.5. Поверхностное натяжение 33
1.3.6. Вязкость 34
1.3.7. Смачиваемость 34
1.3.8. Двумерное давление 34
1.3.9. Пролонгированное терапевтическое действие 35
1.3.10. Стабильность при хранении 36
1.3.11. Упаковка 36
Заключение 38
Глава 2. Объекты и методы исследований 39
2.1. Объекты исследований 39
2.1.1. Действующие вещества глазных капель 39
2.1.2. Вспомогательные вещества глазных капель 39
2.1.3. Компоненты для создания модельной системы 41
2.2. Методы исследований 43
2.2.1. Методики определения подлинности 43
2.2.2. Методики определения количественного содержания 44
2.2.3. Методики определения посторонних примесей 49
2.2.4. Методика определения механических включений 52
2.2.5. Методика определения вязкости 52
2.2.6. Методика определения осмолярности 52
2.2.7. Методика определения рН 53
2.2.8. Методика определения стерильности 53
2.2.9. Определение относительной потери массы препарата во флакон-капельницах 53
2.2.10. Определение in vitro влияния пролонгатора на скорость высвобождения таурина 53
2.2.11. Установление динамической вязкости глазных капель 54
2.2.12. Определение поверхностного натяжения глазных капель 55
2.2.13. Измерение двумерного давления глазных капель 56
2.2.14. Оценка смачивающей способности глазных капель на модельной системе 57
2.2.15. Микробиологические исследования 58
2.2.16. Изучение стабильности 58
2.2.17. Биологические исследования по определению концентрации таурина и никотинамида 58
Глава 3. Разработка состава пролонгированных глазных капель 60
3.1. Изучение динамической вязкости водньгх растворов декстрана 60
3.2. Изучение поверхностного натяжения экспериментальных растворов 62
3.3. Изучение смачиваемости экспериментальных растворов 65
3.4. Оценка двумерного давления экспериментальных растворов 67
3.5. Определение in vitro влияния декстрана на скорость высвобождения таурина 69
3.6. Установление концентрации компонентов глазных капель 71
3.7. Биологические испытания и установление оптимального состава глазных капель пролонгиюванного действия 73
Выводы 76
Глава 4. Разработка технологии получения и методов анализа глазных капель пролонгированного действия 77
4.1. Разработка технологического процесса 77
4.2. Выбор рациональной упаковки для глазных капель 81
4.3. Контроль качества глазных капель 85
4.3.1. Определение подлинности 85
4.3.2. Количественное определение 87
4.3.3. Определение посторонних примесей 89
4.3.4. Определение прозрачности глазных капель 89
4.3.5. Определение рН 89
4.3.6. Определение механических включений 90
4.3.7. Определение вязкости 90
4.3.8. Определение осмолярности 91
4.3.9. Определение стерильности 91
4.3.10. Изучение стабильности глазных капель в изучаемый срок хранения 93
Выводы 96
Глава 5. Изучение безопасности и эффективности глазных капель 97
5.1. Изучение безопасности 97
5.2. Фармакологическая активность 99
5.2.1. Изучение фармакологической активности разработанных глазных капель in vivo на модели дистрофии сетчатки 99
5.2.2. Изучение фармакологической активности разработанных глазных капель in vivo на модели катаракты 101
Выводы 102
Общие выводы 103
Список литературы 105
Приложения 117
- Наиболее распростарнённые офтальмологические заболевания
- Методики определения количественного содержания
- Разработка технологического процесса
- Изучение фармакологической активности разработанных глазных капель in vivo на модели катаракты
Введение к работе
Актуальность темы: При современном ритме жизни и использовании компьютерной техники, оказывающих нагрузку на органы зрения, офтальмологические заболевания такие как: катаракта, дистрофия сетчатки, глаукома и травматические заболевания глаз, становятся все более распространенными. Они представляют собой серьезную медико-социальную проблему и приводят к опасным, иногда необратимым изменениям тканей глаза.
В фармакотерапии офтальмологических заболеваний широкое применение нашел препарат «Тауфон» на основе таурина. Однако он обладает рядом недостатков, среди которых следует отметить негативное действие на эпителиальные клетки глаза, а также его применение сопряжено с частыми инстилляциями, что может привести к механическому раздражению слизистой и различным офтальмологическим заболеваниям, объединяемым под общим названием «синдром сухого глаза». Современные подходы предполагают сочетание нескольких лекарственных веществ в одной лекарственной форме с целью оптимизации терапии многофакторных патологий, к которым относятся катаракта, дистрофия сетчатки, глаукома и травматические заболевания глаз, а так же возможной синергичности фармакологического эффекта. В связи с чем, одним из перспективных способов совершенствования био фармацевтических свойств глазных капель «Тауфон» является введение в состав никотинамида, так как сочетание действующих компонентов позволит реализовать многофакторную терапию. В ассортименте зарегистрированных в Российской Федерации лекарственных средств практически полностью отсутствуют глазные капли пролонгированного действия для лечения катаракты, дистрофии сетчатки, глаукомы и травматических заболеваний глаз, что вызывает необходимость многократного применения уже существующих лекарственных препаратов, что удлиняет курс лечения, а также не решает проблем, связанных с низкой биодоступность глазных капель. Кроме того, повышением эффективности препарата «Тауфон» в целом является введение пролонгатора - декстрана, который регулирует поверхностное натяжение и смачивающую способность глазных капель, подавляет патогенную микрофлору, создает в организме необходимую терапевтическую
концентрацию лекарственных веществ и временный защитный барьер на поверхности глаза. Поэтому разработка состава и технологии получения комбинированных глазных капель пролонгированного действия с таурином и никотинамидом является актуальной проблемой фармации и медицины.
Цель исследования: Разработка оригинального состава и технологии получения комбинированных глазных капель пролонгированного действия с таурином и никотинамидом.
Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи: задачи:
-
Провести исследования по определению оптимальной молекулярной массы и концентрации пролонгатора для разрабатываемых глазных капель.
-
Разработать и подтвердить состав комбинированных глазных капель с помощью физико-химических исследований, модельной системы и биологических испытаний.
-
Разработать технологию производства пролонгированных глазных капель с таурином и никотинамидом.
-
Определить нормы качества, изучить стабильность в процессе хранения и разработать нормативную документацию на глазные капли (проект ФСП, регламент).
Научная новизна исследований
- Теоретически обоснован состав пролонгированных глазных капель на основе тау-рина и никотинамида;
С помощью физико-химических методов исследований:
-определено, что эффективная молекулярная масса пролонгатора (декстрана) в глазных каплях 40 кДа, а концентрация 3 % (Метод ротационной вискозиметрии);
-установлено, что поверхностное натяжение экспериментального водного раствора глазных капель с декстраном существенно снижается при введении в состав таурина и никотинамида (метод Вильгельми («уравновешивание пластинки»));
-изучено влияние таурина и никотинамида на двумерное давление пролонгированных глазных капель, на примере раствора декстрана (метод Ленгмюра-Блоджетт);
-установлено, что в области высоких концентраций таурина и декстрана смачиваемость глазных капель не изменяется (метод «сидячей капли» и с помощью модельной системы);
-определено, что эффективная концентрация таурина 3%, никотинамида 0,4% (метод биологического исследования).
Новизна разработанной рецептуры глазных капель защищена патентом РФ на
изобретение №2414218 от 20.03.2011.
Практическая значимость работы. По результатам исследования разработаны:
-
состав глазных капель пролонгированного действия (проект ФСП «Таулонг, глазные капли», акт о разработке лабораторного регламента, проекта ФСП и подготовке регистрационного досье «Таулонг, капли глазные» ЗАО «Институт фармацевтических технологий» от 21.01.2013 г.);
-
технология получения глазных капель «Таулонг» (лабораторный регламент на производство №2 от 22.12.2012 г., апробирован в производстве ФГУП «Московский эндокринный завод», акт о проведении опытно-промышленной апробации технологии производства препарата «Таулонг, капли глазные» от 09.03.2013 г.);
Проведено доклиническое изучение фармакологической активности и биологической безопасности глазных капель «Таулонг» в ФГУН «Институт токсикологии» ФМБА России г. Санкт-Петербурге 21.11.2011г. Основные положения, выносимые на защиту:
результаты физико-химических исследований экспериментальных растворов глазных капель с целью обоснования состава и технологии получения пролонгированных глазных капель с таурином и никотинамидом;
технологическая схема производства пролонгированных глазных капель с таурином и никотинамидом;
нормы и методы оценки качества для глазных капель предложенного состава;
результаты изучения стабильности разработанных глазных капель с таурином и никотинамидом.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы представлены и доложены на конференциях «Актуальные проблемы синтеза и получение новых биологически активных соединений и фармацевтических препаратов» (г. Львов, 2008), «Пятый съезд общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова» (г. Москва, 2008), «Наукоемкие химические технологии» (г. Москва, 2009). Личный вклад автора заключается в непосредственном участии его на всех этапах исследования: от постановки задач и их реализации до обсуждения результатов в научных публикациях. Диссертант самостоятельно проводила физико-химические исследования глазных капель, анализ, интерпретацию и статистическую обработку полученных данных.
Публикации по работе: По материалам диссертационных исследований опубликовано 7 научных работ, в том числе 1 патент и 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ.
Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Диссертация соответствует формуле специальности 14.04.01 - технология получения лекарств. Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 2 и 3 паспорта специальности технология получения лекарств.
Связь исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с научным планом научно-исследовательский работ кафедры биомедицинских и фармацевтических технологий факультета Биотехнологии и органического синтеза ФГБОУ ВПО «Московского государственного университета тонких химических технологий имени М.В. Ломоносова» в рамках комплексной темы исследований «Разработка технологии и организация производства фармацевтических субстанций и готовых лекарственных форм».
Объем и структура диссертации: Диссертационная работа изложена на 116 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, 5 глав исследований, выводов, списка литературы и приложений. Работа иллюстрирована 21 таблицей, 27 рисунками. Библиографический указатель включает 151 источник, из них 30 на иностранных языках.
Наиболее распростарнённые офтальмологические заболевания
Одной из важнейших сред глаза, в которой происходят прием, распределение и возможные превращения лекарственного препарата, является слезная жидкость [87,138]. Для того, чтобы формулировать физико-химические требования, которые могут быть предъявлены к глазным каплям необходимо опираться на основные характеристики слезной жидкости, которые представлены в табл. 1.
Слезная жидкость, омывающая поверхность глазного яблока, предохраняет его от высыхания и, в известной мере, препятствует размножению микробов [45].
Нормальная физиология смачивания поверхности глаза зависит от состояния слезной жидкости и структур, которые ее формируют, состояния поверхности глаза и состояния век [49].
В результате мигательных движений век, которые в норме происходят каждые 5-10 сек., слезная жидкость равномерно распределяется по поверхности глазного яблока, образуя так называемую слезную пленку. Эту пленку можно разделить на три основных слоя (рис.2) [88,105,136]:
внешний (липидный слой, содержащий воск и иммобилизованные белки);
средний (водный раствор биологически активных компонентов и электролитов);
внутренний (гликопротеин муцин на поверхности эпителиальных клеток).
Внешний липидный слой формируется из секрета мейбомиевых желез и желез Цейса и выполняет три основные функции [45]:
предохраняет водный слой от преждевременного высыхания;
является своего рода субстратом для работы сил поверхностного натяжения, обеспечивающих стабильное вертикальное положение всей пленки на роговице;
является смазкой тарзальнои конъюнктивы для оптимального скольжения по глазному яблоку.
Кроме этого, липидный слой придает гладкость роговице, служит надежным барьером для инфекционных агентов [45].
Средний водный слой формируется из слезной жидкости и составляет -98% толщины слезной пленки [45].
Внутренний муциновый слой формируется из секрета клеток Гоблета, Манца и крипт Генле. Его основная функция заключается в гидрофилизации гидрофобной поверхности эпителия роговицы. Этот слой способствует прочному контакту слезной пленки на поверхности глаза, обеспечивая ей характерный зеркальный блеск [37,48]. Кроме того, этот слой сглаживает все микронеровности поверхности роговицы и обволакивает инородные тела и отмершие клетки, которые затем удаляются с поверхности глаза. В составе муцинового слоя обнаружены полярные молекулы гликозаминогликанов, относящиеся к кислым мукополисахаридам [28].
В свою очередь, изменения поверхности глаза дистрофического, воспалительного или травматического генеза ухудшают качество контакта со слезной пленкой, вызывая, таким образом, неправильное распределение последней на поверхности глаза [49].
Синдром «сухого глаза» - это полиэтиологическое заболевание, в основе которого лежит нарушение смачивания поверхности глаза, обусловленное в первую очередь нарушением состояния слезной пленки (рис. 3) [17] . При введении в глаз лекарственный препарат претерпевает ряд физико-химических превращений, возможно, с изменением активности, фазового состояния и других характеристик [73].
Катаракта
Развитию этого заболевания способствуют нарушение обмена веществ (в частности, сахарный диабет) [15,51], токсическое или травматическое воздействие на глаз, заболевания внутренних оболочек глаза (воспаление, высокая степень близорукости, глаукома и др.). В офтальмологии катаракта занимает одно из ведущих мест среди других глазных заболеваний, приводящих к ограничению и утрате трудоспособности [118].
Катаракта, имеет прогрессирующее течение [39, 67]. Проведение антикатарактального лечения лекарственными препаратами возможно только в начальной и незрелой стадии катаракт. Наиболее распространенной лекарственной формой при консервативном лечении катаракт являются глазные капли [94]. Применяемые в настоящее время препараты для профилактики и лечения катаракты делят на две группы, исходя из механизма фармакологического действия. Препараты, участвующие в электролитном обмене и препараты, влияющие на метаболические процессы. Последняя группа более эффективна, но малочисленна [42]. Следует отметить, что основная проблема консервативного лечения катаракты связана с недостаточной ясностью причин ее возникновения. Поэтому для консервативного лечения применяется так называемая заместительная терапия, заключающаяся в том, что в составе капель в глаз вводятся вещества, с недостатком которых связывается развитие катаракты [41]. Известны две основные группы медикаментозных средств для консервативного лечения катаракт [119]:
средства для рассасывания помутнений или отсрочки их развития;
средства, улучшающие процессы обмена хрусталика.
В состав глазных капель, предназначенных остановить прогрессирование катаракты, часто входят витамины (С, РР и др.), йодистый калий, антиоксиданты (глутатион, цитохром «С»), аминокислоты, АТФ и ряд других веществ. Часто используют такие препараты, как «Квинакс», «Офтан-катахром», «Сэнкаталин», «Вита Иодурол», «Витафакол», «Вицеин», «Тауфон», «Капли Смирнова» и др. [26,58,61,65].
Большинство известных антикатарактальных глазных капель содержат единственное действующее вещество, т.к. учитывая специфические особенности глаза, трудно подобрать сочетание лекарственных веществ, выполняющих комбинированную функцию. Учитывая, что часто требуется длительная терапия, в результате которой могут возникнуть побочные эффекты, целесообразно включать в состав глазных капель вещество, обладающее репаративным действием.
Дистрофия сетчатки
Дистрофия сетчатки глаза возникает при нарушении ее полноценного питания. Чаще всего, причиной такого нарушения служат общие заболевания сердечно-сосудистой системы, которые осложняются нарушением кровоснабжения глаз. Сетчатка глаз очень чувствительна к нарушениям кровоснабжения и реагирует повреждением как центральной зоны, так и периферии [129].
Методики определения количественного содержания
Титрометрический. 5 мл препарата помещали в коническую колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 30 мл воды очищенной, 5 мл формалина и титровали 0,1 М раствором натрия гидроксида до появления слаборозового окрашивания (индикатор - фенолфталеина раствор 1 % 0,06 мл).
Параллельно проводили контрольный опыт. 1 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида соответствует 0,01252 г (C2H7NO3S) таурина, которого в 1 мл препарата должно быть от 0,0380 до 0,0420 г.
Приготовление раствора для контрольного опыта. 100 мг (точная навеска) натрия гидроксида (ГФ XII, ч.1, с.332) помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл. Прибавляли около 80 мл воды, перемешивали при нагревании до полного растворения навески. После охлаждения раствора до 20 С, доводили объем раствора водой до метки и перемешивали. Срок годности раствора 7 суток при комнатной температуре.
Декстран
Определяли поляриметрически, принимая удельное вращение декстрана [а] д 20 = +1990.
Таурин, никотинамид и нипагин
Анализ проводится методом ВЭЖХ.
Хроматографические условия:
Колонка: Luna С 18(2), 5 um, 250 х 4,6 мм (Phenomenex).
Подвижная фаза А: 0,2М фосфатный буфер
Подвижная фаза В: ацетонитрил.
Программа градиента:
Скорость потока - 1 мл/мин.
Детектор спектрофотометрический.
Длина волны - 220 нм.
Температура - 20С.
Количество образца - 20 мкл.
Время анализа — 15 минут
Реактивы.
Натрия фосфорнокислый двузамещенный 12-водный (Na2HP04xl2H20, MW 358), ГОСТ 4172-76 или эквивалентный. Калий фосфорнокислый однозамещенный (КН2Р04, MW 136), ГОСТ 4198-75 или эквивалентый. Пропионовый ангидрид (№240311, Aldrich). Ацетонитрил для хроматографии (№АС03292500, Scharlau, Испания). Борная кислота (чда, ГОСТ 9656-75). Натрия гидроксид (чда, ГОСТ 4328-77). Вода milli-Q.
Стандартный образец.
Таурин (№Т0625, Sigma). Никотинамид (№72340, Sigma). Нипагин, этил-4-гидроксибензоат (№111988, Aldrich). 1 Мраствор натрия гидроксид.
В мерную колбу вместимостью 500 мл вносят навеску 20 г натрия гидроксида, прибавляют 400 мл воды и перемешивают до растворения. Полученный раствор доводят до метки водой и тщательно перемешивают.
0,1 М боратный буфер.
В химическом стакане вместимостью 500 мл растворяют 3,1 г Н3ВО3 в 300 мл воды и доводят значение рН раствора до 10,4 с помощью добавления 1 М раствора натрия гидроксида. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 1 л и доводят объём до метки водой.
Подвижная фаза А.
В мерную колбу вместимостью 1 л вносят навеску 12,5 г калия фосфорнокислого однозамещенного и 30,1 г натрия фосфорнокислого двузамещенного 12-водного, прибавляют 800 мл воды и перемешивают до растворения. Полученный раствор доводят до метки водой и тщательно перемешивают.
Подвижная фаза.
Ацетонитрил для ВЭЖХ.
Испытуемый раствор.
100 мкл препарата помещают в пластиковую пробирку вместимостью 1,5 мл, добавляют 1000 мкл боратного буфера и 20 мкл пропионового ангидрида. Смесь тщательно перемешивают и выдерживают 10 минут, периодически перемешивая.
Холостая проба.
100 мкл воды помещают в пластиковую пробирку вместимостью 1,5 мл, добавляют 1000 мкл боратного буфера и 20 мкл пропионового ангидрида. Смесь тщательно перемешивают и выдерживают 10 минут, периодически перемешивая. Стандартный раствор №1.
В мерную колбу вместимостью 25 мл вносят навеску 750,0 мг таурина, 150,0 мг никотинамида и 12,5 мг нипагина, прибавляют 20 мл воды и перемешивают до растворения. Полученный раствор доводят до метки водой и тщательно перемешивают.
100 мкл стандартного раствора помещают в пластиковую пробирку вместимостью 1,5 мл, добавляют 1000 мкл боратного буфера и 20 мкл пропионового ангидрида. Смесь тщательно перемешивают и выдерживают 10 минут, периодически перемешивая.
Стандартный раствор №2.
В мерную колбу вместимостью 25 мл вносят навеску 1500,0 мг таурина, 100,0 мг никотинамида и 25,0 мг нипагина, прибавляют 20 мл воды и перемешивают до растворения. Полученный раствор доводят до метки водой и тщательно перемешивают.
100 мкл стандартного раствора помещают в пластиковую пробирку вместимостью 1,5 мл, добавляют 1000 мкл боратного буфера и 20 мкл пропионового ангидрида. Смесь тщательно перемешивают и выдерживают 10 минут, периодически перемешивая.
Стандартный раствор №3.
В мерную колбу вместимостью 25 мл вносят навеску 375,0 мг таурина, 50,0 мг никотинамида и 50,0 мг нипагина, прибавляют 20 мл воды и перемешивают до растворения. Полученный раствор доводят до метки водой и тщательно перемешивают.
100 мкл стандартного раствора помещают в пластиковую пробирку вместимостью 1,5 мл, добавляют 1000 мкл боратного буфера и 20 мкл пропионового ангидрида. Смесь тщательно перемешивают и выдерживают 10 минут, периодически перемешивая. Проверка пригодности системы.
Пригодность системы определяется по хроматограммам стандартного раствора №2.
Эффективность для пика N-пропионилтаурина должна составлять не менее 5000 теоретических тарелок.
Хвостовой фактор для пика нипагина должен быть не более 2,0.
Разрешение R между пиком пропионовой кислоты и N-пропионилтаурина должно составлять не менее 3,0.
Относительное стандартное отклонение для площадей пиков определяемых веществ не должно превышать 5%. Методика определения.
В хроматограф, выведенный на рабочий режим, вводят раствор холостой пробы. На хроматограмме отмечают системные пики. Далее в хроматограф 3 раза вводят стандартный раствор №2. Идентифицируют пики пропионовой кислоты, N-пропионилтаурина, никотинамида и нипагина, используя данные из таблицы. Определяют параметры пригодности системы. Параметры удерживания компонентов.
Разработка технологического процесса
Подтверждение разработки технологии глазных капель нами осуществлялось в условиях производства в соответствии с требованиями GMP. Технология производства глазных капель включает подготовительный этап и процесс приготовления раствора глазных капель (рис. 21). Вспомогательные работы заключались в подготовке вентиляционного воздуха, воды для инъекций, сжатого воздуха, «чистых» помещений, оборудования, технологической одежды и вспомогательных материалов и в получении захоложенной воды, «чистого» пара, дезрастворов. Управление работой установки для приготовления и фильтрации раствора препарата (ТП.2) осуществляли с помощью системы управления и визуализации процесса типа «Siemens CPU 315-PN/DP». Информация о происходящих процессах выводилась на дисплей, где осуществляли контроль значений температуры, массы, давления, скорости вращения мешалки. Все работы по приготовлению глазных капель «Таулонг» проводили в условиях асептики, в стерильной одежде. Используемое в процессе приготовления раствора препарата сырье (таурин, никотинамид, декстран, нипагин, калия монофосфат, натрия двуосновный фосфат, вода для инъекций) прошло входной контроль на соответствие показателям качества нормативной документации и поступило в цех с протоколами анализов. Расчет массы составляющих компонентов проводили исходя из состава препарата и приготавливаемого объема по формуле Приготовление глазных капель «Таулонг» проводили в помещении класса чистоты С).
Ввиду того, что декстран относится к набухающим полимерам, его навеску вносили в отдельную емкость и перемешивали с Уг частью рассчитанной воды для инъекций с температурой 25±5С 25-30 минут до полного исчезновения комков (Кт). После достижения однородности раствор оставили для набухания в течение 24 часов (Кт) (ТП. 2.1).
В аппарат для приготовления раствора марки «AISI 316», «Remoin», (Италия) оснащенный фильтром марки «C3PFRP1», с участка водоподготовки через теплообменник типа «С-300» загрузили Уг часть рассчитанного количества воды для инъекций (регистрация при помощи системы взвешивания типа «PR 6241», контроль в системе управления с температурой 80±5С и вручную через загрузочный люк при включенной мешалке вводили нипагин, перемешивали раствор в течение 10-15 минут до полного растворения, после чего добавляли никотинамид и перемешивали раствор в течение 10-15 минут до полного растворения, далее, поддерживая температуру раствора в аппарате, загрузили натрия хлорид и перемешивали раствор в течение 10-15 минут до полного растворения. Полученный раствор охлаждали до температуры от 15С до 30 С, при помощи подачи охлажденной воды с температурой от 7С до 12 С в рубашку аппарата (ТП. 2.2).
После охлаждения раствора, в аппарате для приготовления раствора «Таулонг», вручную вводили рассчитанное количество таурина, калия монофосфата, натрия двуосновного фосфата, раствора декстрана и перемешивали раствор в течение 10-15 минут до полного растворения, контролируя визуально через смотровое стекло (ТП. 2.3).
Через пробоотборник аппарата отбирали пробу раствора препарата «Таулонг» для определения соответствия качества требованиям, утвержденной спецификации на полупродукт по физико-химическим показателям (описание, подлинность, прозрачность, цветность, рН, посторонние примеси, количественное определение, осмолярность). На аппарат с раствором препарата «Таулонг» прикрепили этикетку с указанием наименования препарата, номера партии, количества, даты. Получив положительный результат анализа, раствор препарата направляли на фильтрацию.
Стерилизующую фильтрацию раствора глазных капель проводили через два мембранных фильтра из полиамида типа «Nylon-66», установленных последовательно. Для предварительной фильтрации использовали фильтр с отсекающей способностью 1,0 мкм, для стерилизующей фильтрации - с отсекающей способностью 0,2 мкм. После фильтрации проводили тест для проверки целостности стерилизующего фильтра на приборе типа «Palltronic Flowstar» модель «FFS02». Раствор препарата направляли на фильтрацию из аппарата в чистый, подготовленный сборник под давлением стерильного сжатого воздуха от 0,05 до 0,2 МПа (от 0,5 до 2,0 бар), контролируя при помощи датчика давления, визуально по дисплею системы управления. По окончании фильтрации на сборник прикрепили этикетку с указанием наименования препарата, номера серии, номера сборника, даты, времени окончания фильтрации, объема, «стерильно» (ТП.2.4).
Из сборника через пробоотборник отбирали пробу раствора препарата в предварительно подготовленную колбу для определения наличия механических включений и проведения микробиологического анализа. Получив положительные результаты анализа, раствор подали на стадию выдува флакон-капельниц, наполнения их раствором препарата и запайки.
Флакон-капельницы выдувались, наполнялись раствором препарата и запаивались в машине «SYFPAC» модель «VEGA 8 US» производства «Brevitti Angela», (Италия) в зоне класса чистоты А. Флакон-капельницы получали из полиэтилена марки Purell РЕ 2420F, производства Basell (Нидерланды) методом экструзии. За 40-45 минут до начала технологического процесса включали обогрев двенадцати зон экструдера в пределах от 160 до 190 С. В каждой зоне осуществляли автоматический контроль температуры с помощью температурных датчиков. При достижении заданной температуры в зонах экструдера включали машину в работу. Формование флакон-капельниц осуществляли с пониженным на 1,0 кгс/см2 давлении. После поступления в экструдер полиэтилен расплавлялся и выходил в виде пяти ровных и цилиндрических шлангов длиной, заданной автоматически. После, пресс-форма смыкалась на них. Флакон-капельницы формировали за счет вакуума. В корпус литьевой формы подавали захоложенную воду с температурой от 5 до 12 С. Верхняя часть флакон-капельниц оставалась открытой и передвигалась в положение наполнения. Наполняющие форсунки вводились в верхнюю часть флакон-капельниц, после чего осуществляется наполнение стерильным раствором препарата. Затем верхняя часть флакон-капельниц сжималась в пресс-форме, запаивалась и одновременно охлаждалась. На флакон-капельницы нанесли маркировку, этикетку и заложили на хранение для изучения стабильности (ТП.З).
Опытная партия глазных капель «Таулонг» была произведена на участке глазных капель ФГУП «Московский эндокринный завод», в асептических условиях в соответствии с требованиями правил GMP.
Изучение фармакологической активности разработанных глазных капель in vivo на модели катаракты
Обследование и лечение проводили на 24 кроликах породы Шиншилла. При моделировании травматической катаракты была использована энергия лазерного импульса, воздействующего на хрусталик правого глаза. Для коагуляции использован лазер «Oculight SLX» производства фирмы «Iris Medical Inc.» (США).
Все животные были разделены на 7 групп, по 6 кроликов в каждой (6 опытных глаз и 6 контрольных).
Всем кроликам непосредственно после моделирования рассматриваемого заболевания, а также через 1 и 2 месяца терапии сравниваемыми препаратами осуществляли фоторегистрацию характера помутнения хрусталика с помощью аппарата «Retcam-2» (производство фирмы «Massive Res.»; США). Проводили исследования фармакологической активности следующих препаратов: Визиомакс — таблетки серии VM07102207 (Hankintatukku Оу, Финляндия) по 1 таблетке ежедневно в течение 60 дней; Миртилене Форте — капсулы серии 040364А (С.И.Ф.И. С.п.А., Италия) по 1 капсуле ежедневно в течение 60 дней; Таулонг капли глазные по 1 мг на кг массы кролика 1 раз в сутки субконъюнктивально в течение 10 дней; Вода для инъекций по 0,3 мл кролику 1 раз в сутки субконъюнктивально в течение 10 дней.
При исследовании эффективности проводимой кроликам терапии установлено, что практически все изучаемые препараты оказывают существенное положительное влияние на экспериментальную травматическую катаракту (рис. 27), но наиболее благоприятные результаты, характеризующиеся минимальной площадью и интенсивностью помутнения поврежденного участка хрусталика, отмечены у кроликов, получавших Таулонг.
Так, через 1 месяц проводимого лечения у всех животных, получавших сравниваемые препараты, отмечена устойчивая тенденция к уменьшению площади и интенсивности помутнения хрусталика. Полученные данные свидетельствуют о достаточной эффективности исследованных лекарственных препаратов в лечении экспериментальной травматической катаракты у кроликов. При этом наибольший эффект отмечен на фоне применения Таулонга. В процессе проведения исследований нами не обнаружено каких-либо побочных эффектов, а также признаков непереносимости и аллергизирующего действия всех исследованных препаратов.
