Содержание к диссертации
Введение
Часть 1. Обзор литературы 11
Глава 1. Липофильные комплексы лекарственного растительного сырья: ингредиенты, медицинское значение, технологии получения, оценка качества 12
1.1. Биологически активные ингредиенты липофильных комплексов растений и их применение в медицине 12
1.2. Комплексы биологически активных веществ и применение в медицинской практике эхинацеи пурпурной {Echinaceapurpurea (L.) Moench) и ноготков лекарственных {Calendula officinalis L.) 16
1.2.1. Эхинацея пурпурная {Echinacea purpurea (L.) Moench) 16
1.2.2. Ноготки лекарственные {Calendula officinalis L.) 21
1.3 .Технология выделения липофильных комплексов растений 25
Выделение масел растений 25
Экстракция липофильных комплексов растений 27
Получение эфирных масел 32
Выделение липофильных комплексов растений в комплексной переработке сырья 34
1.4. Стандартизация препаратов липофильных комплексов растений 35
Анализ современных фармакопейных требований к жирным маслам 36
Требования к пищевым продуктам на основе липофильных комплексов растений 43
Часть 2. Результаты и обсуждение 45
Глава 1. Материалы и методы 45
1.2.1 .Анализ экстрактов 46
1.2.2. Методы определения показателей качества экстрактов 56
1.2.3.Макро- и микроскопический анализ растительного сырья 59
Глава 2. Выделение и изучение состава липофильных фракций плодов эхинацеи пурпурной и ноготков лекарственных 61
2.1. Определение показателей качества растительного сырья 61
2.2. Разработка технологии выделения липофильных фракций плодов эхинацеи пурпурной и ноготков лекарственных 72
2.3. Исследование состава выделенных липофильных фракций плодов ноготков лекарственных и эхинацеи пурпурной 80
2.3.1. Идентификация компонентов липофильной фракции плодов ноготков лекарственных 81
2.3.2. Физико-химические характеристики и стабильность липофильной фракции плодов ноготков лекарственных 97
2.3.3. Идентификация компонентов липофильной фракции плодов эхинацеи пурпурной 105
2.3.4. Физико-химические характеристики и стабильность липофильной фракции плодов эхинацеи пурпурной 116
Глава 3. Разработка препаратов с экстрактами НЛПЛФ и ЭППЛФ 121
Выводы 134
Список литературы 136
Приложения 151
- Эхинацея пурпурная {Echinacea purpurea (L.) Moench)
- Определение показателей качества растительного сырья
- Физико-химические характеристики и стабильность липофильной фракции плодов ноготков лекарственных
- Разработка препаратов с экстрактами НЛПЛФ и ЭППЛФ
Введение к работе
Актуальность проблемы. Растительные масла человечество использует многие тысячелетия. В настоящее время это: пищевые продукты и биологически активные добавки к пище, предназначенные для ежедневного обеспечения жизнедеятельности организма; нативные лекарственные препараты, по активности и безопасности превосходящие многие синтетические; незаменимое сырье для производства средств эстетической медицины и косметики; наконец – вспомогательные фармацевтические ингредиенты в производстве лекарственных форм (эмульсий, линиментов, суппозиториев, желатиновых капсул и др.). Сегодня доказано, что биологически активные вещества (БАВ) липофильных комплексов растений являются активными участниками многих процессов метаболизма и способны осуществлять коррекцию гомеостаза при дисфункциях различных органов и заболеваниях – от простудных до онкологических.
Номенклатура растительных масел, представленных на рынке сырья, за последние годы возросла в десятки раз. В основном это наблюдается за счет импортных поставок. В России интерес ученых и производителей к маслам растений также растет, при этом очевидна необходимость проведения подробных исследований, требующих серьезных материальных затрат и использования специального технологического и аналитического оборудования.
Уровень развития науки настоящего времени дает большие возможности исследователям: использование арсенала современной аналитической базы позволяет детально охарактеризовать метаболический статус растений и их продуктов, а в результате применения высокотехнологичных способов переработки растительного сырья сегодня можно не только получать экстракционные препараты, но выделять концентрированные комплексы биологически значимых метаболитов.
Перспективность разработки современных технологий получения и идентификации липофильных комплексов биологически активных веществ (БАВ) растений, а также актуальность создания препаратов на основе этих комплексов очевидны. В этом аспекте представляет интерес изучение новых и традиционных для медицины видов лекарственного растительного сырья (ЛРС) с использованием современных высокоселективных инструментальных аналитических методов и информационных баз.
Ценными и широко применяемыми в медицине и косметологии лекарственными растениями являются ноготки лекарственные (Calendula officinalis L.) и эхинацея пурпурная (Echinacea purpurea (L.) Moench). В качестве лекарственного сырья используют цветки ноготков (flores Calendulae), у эхинацеи – подземную и надземную часть. Широко применяются как самостоятельно, так и в составе лекарственных форм, средства, представляющие собой водные или спирто-водные извлечения этих видов сырья (настои, настойки, экстракты). В то же время, из данных научных публикаций известно, что оба растения содержат не только гидрофильные, но и ценные липофильные БАВ. Так, богатый липофильный комплекс цветков ноготков лекарственных обеспечивает эффективность медицинского использования аппликационных лекарственных форм с маслом календулы и масляными извлечениями из нее. Это обосновывает актуальность разработки новых интенсивных технологий выделения липофильной фракции из растения, детального изучения и создания препаратов средств на его основе.
Если липофильные извлечения из цветков ноготков лекарственных входят в состав ряда косметических и наружных средств, то препаратов на основе липофильного комплекса эхинацеи нет. За рубежом это направление разрабатывается, установлено, что липофильная фракция растений рода эхинацея обладает даже большим воздействием на иммунитет, чем их гидрофильная фракция. Поэтому представляет интерес выделение липофильного комплекса эхинацеи, его исследование и изучение возможностей использования в медицине.
Известно, что наибольшее количество масел накапливается в семенах и плодах растений. Учитывая сказанное, именно плоды ноготков и эхинацеи являются перспективным сырьем для разработки технологий получения липофильных фракций этих растений.
Как уже было сказано, создание современных средств коррекции гомеостаза на основе растительных источников невозможно без использования высокотехнологичных методов производства и анализа. Развитие высокоэффективных способов выделения БАВ из растений, таких, например, как экстракция сжиженными газами, дает возможность решения этой проблемы.
Цель. Разработка технологии получения липофильных фракций плодов ноготков лекарственных (НЛПЛФ) и эхинацеи пурпурной (ЭППЛФ), их изучение, стандартизация и создание препаратов на их основе.
Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
-
Разработать технологию получения липофильной фракции плодов ноготков лекарственных и эхинацеи пурпурной методом экстракции сжиженным газом.
-
Провести фитохимическое изучение полученных липофильных комплексов ноготков лекарственных (НЛПЛФ) и эхинацеи пурпурной (ЭППЛФ) (газовой хроматографией с последующей масспектрометрией, высокоэффективной жидкостной хроматографией - ВЭЖХ и др).
-
Определить основные физико-химические показатели качества полученных экстрактов в процессе изготовления и хранения.
-
Разработать параметры стандартизации полученных экстрактов НЛПЛФ и ЭППЛФ.
-
Разработать препараты на основе полученных экстрактов НЛПЛФ и ЭППЛФ в форме раствора в растительном масле и мягких желатиновых капсул.
-
Разработать и утвердить в установленном порядке нормирующие документы на полученные экстракты НЛПЛФ и ЭППЛФ и на разработанные препараты в форме масляных растворов НЛПЛФ и ЭППЛФ и желатиновых капсул с масляными растворами НЛПЛФ и ЭППЛФ
Научная новизна.
- Проведено углубленное морфологическое изучение плодов ноготков и эхинацеи пурпурной.
- Методом экстракции сжиженным газом (хладоном 22) впервые выделены концентрированные экстракты липофильных фракций плодов ноготков лекарственных и эхинацеи пурпурной.
- Методом газовой хроматографии с последующей масспектрометрией установлены составы метаболитов липофильных комплексов плодов ноготков лекарственных и эхинацеи пурпурной, полученных экстракцией сжиженным газом (хладоном 22).
- Определены физико-химические характеристики разработанных экстрактов НЛПЛФ и ЭППЛФ в процессе получения и хранения.
Практическая значимость и уровень внедрения результатов.
Разработана технология выделения липофильных фракций плодов ноготков лекарственных и эхинацеи пурпурной с помощью хладоновой экстракции. На основе полученных продуктов, представляющих собой концентрированные извлечения липофильных БАВ, созданы препараты в форме масляных растворов и желатиновых капсул. Разработанные технологии апробированы в производственных условиях (ООО Фармпромсож), где показана возможность их масштабирования.
По результатам комплексных лабораторных и опытно-промышленных исследований разработана и утверждена в установленном порядке государственными уполномоченными органами нормативная документация для организации серийного производства на:
- «Масло плодов календулы, сырье для БАД», Свидетельство о государственной регистрации № 77.99.23.3.У.56.1.09 от 12.01.2009
- ТУ 9369-167-04868244-2009, ТИ 9369-167-04868244-2009 «Масло плодов календулы, сырье для БАД», Санитарно-эпидемиологическое заключение на документацию № 77.99.23.003.Т.000030.01.09 от 12.01.2009
- «Масло плодов эхинацеи, сырье для БАД», Свидетельство о государственной регистрации №77.99.11.3.У.9034.9.09 от 14.09.2009
- ТУ 9373-166-04868244-2009, ТИ 9373-166-04868244-2009 «Масло плодов эхинацеи, сырье для БАД», Санитарно-эпидемиологическое заключение на документацию №77.99.11.003.Т.002544.09.09 от 14.09.2009
- биологически активная добавка к пище «ВИЛАРИМ масло растительное с маслом плодов календулы» в форме раствора и желатиновых капсул свидетельство о государственной регистрации № 77.99.23.3.У.55.1.09 от 12.01.2009,
- ТУ 9373-169-04868244-2009, ТИ 9373-169-04868244-2009 на БАД к пище «ВИЛАРИМ масло растительное с маслом плодов календулы» в форме раствора и желатиновых капсул, санитарно-эпидемиологическое заключение на документацию №77.99.23.003.Т.000031.01.09 от 12.01.2009
- биологически активная добавка к пище «ВИЛАРИМ масло растительное с маслом плодов эхинацеи» в форме раствора и желатиновых капсул свидетельство о государственной регистрации №77.99.11.3.У.9038.9.09 от 15.09.2009
- ТУ 9369-168-04868244-2009, ТИ 9369-168-04868244-2009 на БАД к пище «ВИЛАРИМ масло растительное с маслом плодов эхинацеи» в форме раствора и желатиновых капсул, Санитарно-эпидемиологическое заключение № 77.99.11.003.Т.002545.09.09 от 15.09.2009.
На защиту выносятся:
- результаты разработки технологии экстракции сжиженным газом (хладоном 22) липофильных фракций плодов ноготков лекарственных и эхинацеи пурпурной,
- результаты изучения составов метаболитов полученных липофильных комплексов плодов ноготков лекарственных и эхинацеи пурпурной,
- данные по определению физико-химических показателей разработанных экстрактов НЛПЛФ и ЭППЛФ в процессе получения и хранения,
- экспериментальные результаты по разработке технологии получения препаратов в форме растворов и желатиновых капсул, содержащих выделенные экстракты НЛПЛФ и ЭППЛФ,
- показатели и нормы качества созданных препаратов (в форме масляных растворов и желатиновых капсул), содержащих выделенные экстракты НЛПЛФ и ЭППЛФ, после изготовления и в процессе хранения.
Апробация работы и публикации.
Основные положения диссертации представлены на научно-практической конференции Санкт-Петербургской ХФА «Фармация из века в век» (2008), Межвузовской научной конференции студентов и молодых ученых «Фармация в ХХ1 веке: эстафета поколений в Санкт-Петербургской ХФА (2009), Х международном конгрессе «Здоровье образование в ХХ1 веке» «Инновационные технологии в биологии и медицине» РУДН(2009), Москва.
Опубликование основных результатов диссертации в научной печати. По материалам диссертации опубликовано 7 печатных работ, в том числе 3 в изданиях, рекомендованных ВАК.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения и 2 частей: 1 часть - обзор литературы; 2 часть – результаты и обсуждение. 2 часть включает главу Материалы и методы и 2 главы собственных исследований, выводов.
Эхинацея пурпурная {Echinacea purpurea (L.) Moench)
Род Echinacea насчитывает 9 видов и 2 разновидности, родиной эхинацеи является Северная Америка и Мексика. В народной медицине этих стран растение используется для лечения язв, ран, опухолей и простуды.
Впервые эхинацея была описана Карлом Линнеем в 1753 г. Он назвал это растение рудбекией в честь своего учителя Клауса Рудбека (1630 - 1702). Позже немецкий ботаник Конрад Менх обособил, эхинацею в самостоятельный род (от греч. echinos - колючий). В качестве лекарственного растения эхинацея узколистная впервые была включена в USP уже в 18 веке. Далее популярность и значимость этого рода растений только возрастала, в настоящее время эхинацея успешно интродуцирована [17, 18].
В настоящее время в мире в качестве лекарственного сырья препаратов используют три вида эхинацеи: Е. angustifolia (усколистная), E.pallida (бледная), Е purpurea (пурпурная) [85, 86, 90,141], последняя является в Российской Федерации фармакопейным сырьем [3, 66]. Ценные биологически активные компоненты содержатся во всех частях этого растения, поэтому для получения лекарственных средств используют как надземные (траву), так и подземные (корневище с корнями) части растения, высушенные и свежие [22,30,31].
Ботаническая характеристика
По ботанической классификации растение эхииацея пурпурная -Echinacea purpurea (L.) Moench относят к:
Класс: Magnoliopsida (Двудольные)
Подкласс: Asteridae (Астериды)
Порядок: Asterales (Астровые)
Семейство: Asteraceae (Астровые)
Род: Echinacea (Эхинацея)
Вид: Echinacea purpurea (Эхинацея пурпурная). Описание: Многолетнее травянистое растение высотой 50-100 см. Корневая система представлена корневищем, переходящим в сильно разветвленный, светло-коричневатый корень. Стеблей один или несколько; они цилиндрические, ребристые, ветвистые. Листья черешковые, линейно-или ланцетно-эллиптические, по краю зубчатые, шероховатые, с 3-5 жилками. Цветки собраны в крупные корзинки (диаметром до 10 см) с выпуклым, коническим цветоложем; краевые цветки ложноязычковые, светло- или темно-пурпуровые, срединные - трубчатые, оранжево- или темно-пурпуровые. Плод - обратнопирамидальная, четырехгранная, серовато-бурая семянка с хохолком в виде неправильной, зубчатой окраины. Растение зацветает на 2-й год жизни. Продолжительность цветения до 75 дней.
Гидрофильный комплекс эхинацеи включает в себя полисахариды, фенольные соединения, белки, глицин-бетаин, сапонины, витамин С. Наиболее подробно изучена углеводная фракция, в которой установлено наличие: простых Сахаров (арабинозы, галактозы,- ксилозы, маннозы, фруктозы, рамнозы), олигосахаридов (сахарозы) и полисахаридов (инулин, пектин, гемицеллюлоза, крахмал). Сравнительное изучение состава полисахаридов и Сахаров эхинацеи узколистной, пурпурной и бледной показало их неравнозначность и специфику. Так наибольшее количество инулина обнаружено в корнях эхинацеи узколистной (5.9 %). В тоже время суммарное содержание нерастворимых углеводов (пектинов, клетчатки, гемицеллюлозы) достигает 38% в наземной части эхинацеи пурпурной [53, 59, 64].
Из фенольных соединений выделены: кверцитин, рутин, кемпферол-3-рутинозид, лютеолин, а так же дубильные вещества пирокатехиновой группы. В растении обнаружены кофейная, цикориевая, кафтаровая кислоты. Их количество варьирует в зависимости от вида и сезона. Так, соединение цикориевой кислоты в корнях эхинацеи пурпурной летом может достигать 2,27%, а осенью снизится до 0,52%, для эхинацеи узколистной характерно наличие цинарина и эхинакозида. Липофильный комплекс эхинацеи представлен эфиромасличными соединениями, фитостеринами, алкиламидами ненасыщенных жирных кислот.
В эфирном масле эхинацеи обнаружены: ванилин, бифенол, лируен, лимонен, кариофилен, борнеол, альфа- и бета-пииен и другие соединения. Содержание эфирного масла в разных частях растения достигает 0,6%.
Алкиламиды ненасыщенных жирных кислот найдены во всех трех лекарственных видах эхинацеи, наиболее детально они описаны в (Dr. Duke s. Phytochemical and Etnobotanical Databases), где установлено более 20 соединений этой группы только в различных частях эхинацеи пурпурной. Для эхинацеи пурпурной характерны амиды 2.4-диеновой структуры (полиненасыщенные С10-С14 изобутиламиды карбоновой кислоты, а также С10-С18 алкены и алкины), которые составляют 0,0004-0,039%. Липофильный алкиламид 7,8-додека-2е, 4е, 8z, 10e/z тетраеновой кислоты изобутиламид, наряду с другими алкиламидами, обнаружен в корнях и надземной части эхинацеи пурпурной и узколистной.
В настоящее время этим соединениям приписывают особую роль в обеспечении иммунотропного действия растения. USP 30 рекомендует стандартизацию сырья и экстрактов эхинацеи не только по содержанию коричных кислот и эхиназида, но и по содержанию изобутиламидов 2Е,4Е-гексадиеновых кислот, определяя их количество методом ВЭЖХ с использованием стандарта.
Фармакологическое действие. Сегодня в мире выпускается более 240 препаратов эхинацеи. По фармакологическим свойствам они входят в группы антимикробных, противовирусных, иммунорегулирующих средств [8, 51, 54, 59, 63, 75]. Лекарственные препараты из эхинацеи успешно используются также для лечения ревматоидных артритов, импотенции, депрессии, астении, в качестве ранозаживляющих. В последние годы эхинацею рекомендуют для приема больным раком и СПИДом.
Флавоноиды эхинацеи — антиоксиданты и мембранопротекторы, они оказывают гииохолестеринемическое, противодиабетическое противовоспалительное и спазмолитическое действие. Кофейная и цикориевая кислоты обеспечивают противобактериальное и противовирусное действие растения. К числу наиболее значимых относят эхиназиды, обладающие бактерицидной активностью по отношению к стафилакокам, стрептококкам, а так же гипотензивным и анальгетическим эффектом.
Полисахариды эхинацеи стимулируют фибробласты и инактивируют гиалуронидазу, что способствует ускорению регенерации тканей. Вносят свой вклад в общий иммуностимулирующий и противовоспалительный эффекты, усиливая фагоцитоз и стимулируя продуцирование интерлейкинов и противоопухолевого фактора. Показано, что полисахаридный комплекс эхинацеи также активирует фагоциты, макрофаги, Т-супрессоры лимфоцитов [63, 64].
Алкиламидам ненасыщенных жирных кислот, найденным в эхинацее, приписывают эффективное воздействие на иммунную систему. Очевидно, вследствие своей нестабильности они менее изучены, чем например, флавоноиды.
Определение показателей качества растительного сырья
В работе использовали партии плодов урожая 2006 и 2007 года.
Растительное сырье, предназначенное для экстракции, тестировали на соответствие действующей нормативной документации.
Плоды использованного растительного сырья эхинацеи пурпурной и ноготков лекарственных собраны в период массового плодоношения и высушены в соответствии с рекомендациями, утвержденными в установленном порядке.
Действующая в настоящее время нормативная документация на растительное сырье - ТУ 9373-163-04868244-2007 (эхинацеи пурпурной плоды) и ТУ 9373-164-04868244-2007 (календулы плоды). В сырье нормируются следующие показатели: внешние признаки, влажность, содержание золы общей, других частей растения, органической и минеральной примеси, радионуклиды и микробиологическая чистота. Внешние признаки.
Согласно ТУ 9373-163-04868244-2007 эхинацеи пурпурной плоды обратно пирамидальные, четырехгранные, длиной до 6 мм, к основанию суженные, с хохолком в виде короны с неравномерными зубчиками.
Согласно ТУ 9373-164-04868244-2007 ноготков лекарственных плоды серповидно или дугообразно изогнуты, длиной до 2 см, с продольными рядами шипиков или бугорков на спинной стороне и обращенным внутрь носиком.
Числовые показатели. Результаты, полученные при анализе качества сырья, приведены в таблице 2.2.1.
Влажность сырья оказывает большое влияние на выход продукта, с ее увеличением выход извлекаемых веществ-падает. Очевидно, влага в клетках сырья препятствует процессам смачивания клеточных структур и взаимодей ствия экстрагента с экстрактивными веществами в сырье. Оптимальной величиной влажности сырья, предназначенного для хладоновой экстракции считается 7% (19, 36).
Радионуклиды, тяжелые металлы, микробиологическая чистота. Со гласно протоколам анализов, проведенных в специализированных лабораториях, растительное сырье соответствовало установленным СанПиН 2.3.2.1078-01 нормам содержания радионуклидов (не более 400 и 200 Бк/кг цезия-137 и стронция-90 соответственно) и токсичных элементов (ртути не более 0,1 , мышьяка — 0,5 мг\кг, свинца и кадмия не более 6,0 и 1,0 1 мг\кг соответственно).
Микробиологическая чистота соответствовала нормам ГФХ1 Изменение №3.
Таким образом, использованное сырье соответствовало требованиям действующей в настоящее время нормативной документации. Однако для более полной характеристики сырья сочли целесообразным уточнить и дополнить раздел «внешние признаки», провести микроскопию плодов, определить количество масла в плодах. Микроскопия. Изучение морфолого-анатомических признаков сырья проводили по общепринятым методикам (гл.1 ч.2). Диагностическое значение имеют цвет, характер поверхности околоплодника, размеры (длина, толщина, поперечник плода), запах и вкус.
Ноготки лекарственные.
Внешние признаки. На рис. 2.2.1 и 2.2.2 приведен внешний вид плодов (семянок) ноготков лекарственных.
Видно, что в сырье присутствуют все типы семянок ноготков лекарственных, характерные для одного растения, описание которых приведено в литературе [15].
Таким образом, можно дать следующее описание лекарственного растительного сырья «Ноготков лекарственных плоды»:
«Собранные в фазу плодоношения плоды (семянки) культивируемого однолетнего травянистого растения ноготков лекарственных - Calendula officinalis L., семейства астровые - Asteraceae.
Цельные плоды представляют собой изогнутые зубчатые семянки без хохолка трёх видов:
- серповидно-изогнутые, с продольными рядами шипиков на спинной стороне и длинным, обращенным внутрь носиком, длиной до 2-3 см, желтовато-коричневые;
- дугообразные на спинке остробугорчатые, внутри килеватые, длиной 10-18 мм, светло-коричневые;
- кольцевидные со спинки сплошь бугорчатые или шиповатые, длиной 5-9 мм, темно-коричневые. (Рис. 2.2.2) Запах слабый, ароматный. Вкус водного извлечения слегка горьковатый.
Анатомо-морфологические признаки (микроскопия).
Для микроскопического анализа готовили микропрепараты поперечного среза плодов (семянок) ноготков лекарственных. Использовали сырье, размягченное в спиртоглицериновой смеси.
Плод состоит из околоплодника (перикарпия) и заключённых в него семян. Перикарпий может быть сухой (сухие плоды) или мясистый (сочные плоды). Диагностическое значение имеют цвет, характер поверхности околоплодника, размеры (длина, толщина, поперечник плода), запах и вкус. В околоплоднике различают три слоя: наружный - экзокарпий (эпидермис), средний - мезокарпий, внутренний - эндокарпий, Обращают внимание на форму, строение клеток эпидермиса, на наличие и особенности строения волосков; в мезокарпий важное диагностическое значение имеют наличие механических элементов, их форма и расположение, число и расположение эфирномасличных канальцев, проводящих пучков, наличие кристаллических включений, форма клеток паренхимы и др. Эндокарпий у некоторых плодов срастается с семенной кожурой, иногда эндокарпий представлен механической тканью в виде клеток с четко видными утолщениями [26].
При рассматривании поперечного среза на малом увеличении (56х) виден: экзокарпий, состоящий из 2-3 слоев мелких клеток с утолщенными стенками; мезокарпий с более крупными клетками и расположенным в нем кольцом сосудистых пучков. Эндокарпий, состоящий из очень крупных клеток, к центру частично разрушенных. При рассматривании поперечного среза семени (Рис. 2.2.5) видны клетки эндосперма различного размера.
Физико-химические характеристики и стабильность липофильной фракции плодов ноготков лекарственных
Относительная ошибка определения при доверительной вероятности 0,95 не превышает 2,37% (табл.2.3. 8). Отсутствие систематической ошибки анализа подтверждено опытами с добавками а-токоферола, данные приведены в табл.2.3.9.
При определении физико-химических показателей учитывали требования нормирующей документации, предъявляемые к лекарственным средствам [26, 72, 90, 141]
Описание. Полученный экстракт НЛШ1Ф представляет собой маслянистую жидкость светло-коричневого цвета с характерным для данного растения запахом.
Растворимость. НЛПЛФ не растворяется в воде, практически не растворима в этиловом спирте, хорошо растворима гексане и. хлороформе, а в эфире начинает растворяться с соотношения 1:3 (таблица 2.3:10).
Физико-химические показатели НЛПЛФ. Результаты определения физико-химических показателей приведены в таблице 2.3.11.
Результаты определения физико-химических показателей для 3 серий НЛПЛФ приведены в таблице 2.3.12.
Кислотное число характеризует содержание свободных жирных кислот в продукте. Из данных научных публикаций известно, что не рафинированные липофильные экстракты, полученные экстракцией сжатым газом (диоксидом углерода) имеют как правило, высокие кислотные числа. Причиной этого очевидно, служит технология выделения, например, кислотное число С02-экстракта «семян винограда составило 30,3 [36]. Величины показателя масла, полученного из этого же сырья путем экстракции бензином и гексаном составило 7,7 и 6,0 соответственно.
При анализе НЛПЛФ получены величины кислотного числа в диапазоне от 4,1 до 4,6. Это несколько превышает требования СаНПиНа к пищевым маслам, но не выходит за рамки величин показателя для липофильных экстрактов из лекарственного растительного сырья.
Йодное число указывает на содержание ненасыщенных жирных кислот и позволят судить о способности к окислению. Для жирных кислот с одинаковым количеством атомов углерода по мере увеличения непредельных связей йодное число растет, так как увеличивается количество прореагировавшего йода. В зависимости от величины йодного числа определяют степень высыхаемости масла, так невысыхающие масла (тип олеиновой кислоты) имеют йодное число от 80 до105, полувысыхающие (тип лииолевой кислоты) - 90-120, высыхающие (тип линоленовой кислоты) -130-206. [77] Данные, полученные в результате анализа (см. табл. 2.3.11, йодное число составляет 133,8 ± 0,44) позволяют отнести НЛПЛФ к типу полувысыхающих масел, типу линолевой кислоты, что согласуется с результатами анализа жирнокислотного состава, установившего, что основное количество жирных кислот НЛПЛФ - непредельные.
Число омыления. В соответствии с полученными экспериментальными данными число омыления составило около 180, а для трех различных серий продукта находилось в пределах от 178,4 до 187,8 - это указывает на присутствие непредельных жирных кислот С18, и согласуется с данными определения жирнокислотного состава НЛПЛФ.
Перекисное число. Величины перекисного числа проанализированных образцов, приведенные в таблице 2.3.11 и составил от 1,83 до 1,90.
Показатель преломления и плотность — качественные характеристики, их величины определяются составом жирных кислот. С увеличением молекулярной массы и степени ненасыщенности плотность уменьшается, присутствие свободных жирных кислот также снижает этот показатель, присутствие продуктов окисления - наоборот, повышает.
Неомыляемая фракция включает витамины, фитостерины, возможно и другие вещества, относящиеся к воскам, фосфолипидам.
Изучение стабильности
Установление сока годности НЛПЛФ проведено на основании экспериментального изучения стойкости продукта к автоокислению.
Образцы трех серий масла хранили в стеклянных флаконах из светозащитного стекла укупоренных пластмассовым пробкой с навинчивающейся крышкой в защищенном от света месте без доступа воздуха в условиях холодильника при температуре +8 С. Результаты определения показателей качества НЛПЛФ приведены в таблице 2.3.13.
На основании полученных экспериментальных результатов установлен срок годности НЛПЛФ — 1 год, нормы показателей приведены в таблице 2.3.13.
Разработка препаратов с экстрактами НЛПЛФ и ЭППЛФ
Изучение состава полученных экстрактов показало, что содержание в них основных групп БАВ достаточно высоко и поэтому на основании рекомендаций экспертов института Питания РАМН для создания готового препарата проводили купажирование выделенных липофильных фракций в подсолнечном масле. Составы полученных продуктов приведены в табл. 3.1. С позиции биофармацевтической концепции фармацевтической технологии в качестве лекарственных форм выбраны две - масляный раствор и медицинские желатиновые капсулы. Кроме того, технологии этих лекарственных форм в настоящее время автоматизированы и могут быть внедрены в производство. Важно, что обе лекарственные формы, как правило, характеризуются высокими характеристиками биодоступности. Работа выполнена на базе кафедры общей фармацевтической и биомедицинской технологии ММА им. И.М. Сеченова, ГНУ ВИЛАР Россельхозакадемии и УП Минскинтеркапс.
Изложение разработанных технологий производства препаратов на основе НЛПЛФ и ЭППЛФ представлено в настоящем разделе во взаимосвязи, поскольку производство раствора полученных продуктов в растительном масле можно рассматривать как самостоятельную технологию, так и в рамках технологии получения желатиновых капсул, наполненных этим раствором.
Этап ВР. ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ РАБОТЫ ВР-1. Санитарная подготовка прогваодства.
ВР-1.1. Подготовка дезинфицирующих растворов для санитарной обработки.
ВР- 1.2. Подготовка помещений и оборудования.
Перед началом технологического процесса проводят уборку помещений и обработку дезинфицирующими растворами.
Подготовку оборудования к работе следует проводить согласно инструкциям по мойке и обработке дезинфицирующими средствами.
ВР-1.3. Подготовка одежды и персонала.
Персонал, занятый в процессе производства, фасовки, упаковки и хранения должен соблюдать инструкции, регламентирующие порядок работы, охрану здоровья и требования гигиены.
ВР-2. Подготовка сырья и упаковки.
ВР-2.1. Подготовка сырья.
Проведение входного контроля исходных ингредиентов.
Входной контроль растительного масла рафинированного (растворителя) проводят по показателям «кислотное число» и «перекисное число», величины которых должны соответствовать ГОСТ 52465-2005.
Входной контроль НЛПЛФ и ЭППЛФ проводят по показателям качества ТУ 9373-166-04868244-2009 и ТУ 9369-167-04868244-2009, перечисленным в главе 2 ч.2 настоящей работы.
Входной контроль желатина; глицерина проводят в соответствии со спецификациями.
ВР-2.2. Получение воды очищенной. Воду очищенную получают с помощью водоподготовительной системы мембранной ВПСМ -1-16.
ВР-2.3. Подготовка первичной упаковки - флаконов и пробок - заключается в их мойке на машине моечной КЗ-ОКМ.
Подготовка вторичной упаковки и вспомогательных материалов.
ЭТАП -ТП. ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС
777-3. Приготовление раствдра НЛПЛФ и ЭППЛФ в подсолнечном масле (купажирование).
Для приготовления раствора использовали масло подсолнечное рафинированное, содержащее в своем составе в соответствии ГОСТ Р 52465-2005 «Масло подсолнечное. Технические условия» не менее 40 мг% токоферола.
В соответствии с рецептурой; приведенной в таблице 3.1. в реактор загружают часть масла растительного (равную количеству липофильной фракции).
В реактор добавляют при перемешивании необходимое по прописи количество НЛПЛФ или ЭППЛФ, перемешивают в течение 10 минут. К полученному раствору добавляют равное количество подсолнечного масла (растворителя) и продолжают перемешивание еще 10 минут. Затем приливают оставшееся количество подсолнечного масла, после чего продолжают перемешивание в течение 2 часов.
Контроль приготовленного раствора НЛПЛФ или ЭППЛФ в масле подсолнечном рафинированном проводят по кислотному числу.
Выход на стадии 97,5%
При производстве препарата в форме раствора в масле полученный после продукт подают на стадию УМО - упаковка и маркировка.
777- 4. Получение желатиновой массы.
5 кг желатина заливают водой очищенной и нагревают в реакторе до температуры 45 С. При перемешивании добавляют в реактор 250 мл глицерина, 2,5 г нипагина и продолжают перемешивать при скорости вращения мешалки 30 об/мин в течение 1,0 часа, нагревая содержимое реактора до 55-60 С. По окончании времени перемешивания выключают мешалку и выдерживают желатиновую массу при температуре 55-60 С в течение 1 часа, затем полученную желатиновую массу вакуумируют для удаления пузырьков воздуха. По окончании времени выдержки отбирают пробу желатиновой массы для контроля вязкости, которая при температуре массы 60 С должна составлять 550-600 мм2/с.
Стандартную желатиновую массу фильтруют через тканный фильтр и передают в чистые сборники.
Выход на стадии - 95,8%
777 5. Получение желатиновых капсул.
ТП. 5.1 .Капсулирование
Проводили роторно-матричным способом.
Передаточные емкости с желатиновой массой и с масляным раствором при помощи электрической тали поднимают на антресоль и подсоединяют к автоматической линии получения мягких капсул посредством передаточных шлангов. Для поддержания рабочего состояния желатиновой массы (60-65 С, вязкость 550-600 м /с) передаточная емкость подключается к автоматическому контролеру.
Автоматическая линия инкапсуляции состоит.из двух частей, находящихся в непосредственной близости друг от друга (автомата для изготовления желатиновых капсул и барабанной сушилки, в которой осуществляется предварительная сушка капсул).
