Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 8
1.1. N-винилпирролидон и его физиологически активные сополимеры 8
1.2. Современные иммуномодуляторы 17
1.3. Обоснование выбора характеристик объекта исследования 27
ГЛАВА 2. Объекты и методы исследования 28
2.1. Объекты исследований 28
2.1.1. Действующее вещество 28
2.1.2. Исходные и вспомогательные вещества 28
2.2. Методы исследований 30
2.2.1. Физико-химические методы 30
2.1.3. Оценка количественных аналитических методик 46
ГЛАВА 3. Технология получения, физико-химические свойства и методы контроля качества субстанции сополимера 47
3.1. Разработка технологии получения субстанции сополимера 47
3.2. Специфические методы анализа субстанции 55
3.2.1. Содержание мономерных звеньев МВП 56
3.2.2. Характеристическая вязкость 58
3.2.3. Молекулярно-массовое распределение 59
3.3. Общие методы анализа субстанции 62
3.3.1. Посторонние примеси 62
3.3.2. Остаточные органические растворители 63
3.3.3. Количественное определение 64
3.4. Разработка нормативной документации на субстанцию 65
3.5. Стабильность субстанции сополимера 70
3.6.Исследования по безопасности субстанции 71
3.7. Выводы по главе 71
ГЛАВА 4. Получение лекарственной формы 75
4.1. Разработка состава 75
4.1.1. Обоснование выбора концентрации 75
4.1.2. Обоснование выбора рН 75
4.1.3. Выбор стабилизатора 76
4.2. Разработка технологии получения лекарственной формы 78
4.2.1. Выбор условий розлива, ампулирование и стерилизация 78
4.2.2. Технология получения лекарственной формы 79
4.3. Стандартизация 80
4.4. Стабильность лекарственной формы 85
4.5. Изучение фармакологической активности 87
4.6. Выводы по главе 87
Общие выводы 89
Список сокращений 91
Список литературы
- Современные иммуномодуляторы
- Исходные и вспомогательные вещества
- Характеристическая вязкость
- Разработка технологии получения лекарственной формы
Современные иммуномодуляторы
Поливинилпирролидон (ПВП) обладает комплексом физико-химических и физиологических свойств, которые обуславливают его широкое применение в фармацевтической промышленности. ПВП представляет собой желто-белый порошок с t размягчения 140 — C, d 4 =l,19. Очень гигроскопичен. При комнатной температуре ПВП растворим в воде, спирте, хлорированных и фторированных углеводородах, кетонах, лактонах, нитропарафинах, а при нагревании выше 150 С полимер приобретает оранжево-бурую окраску и не растворяется в воде и органических растворителях. Способен к гидратации и не растворяется в растворителях, не смешивающихся с водой, поэтому при растворении в эмульсиях с водой будут наблюдаться области несмешивания, что используют при фракционировании полимеров [21, 48].
Полагают, что ПВП в растворе находится в форме статистических клубков, в водном растворе может образовывать комплексы с молекулами различных классов: ионы неорганического происхождения, заряженные органические молекулы, природные и синтетические соединения. Однако константа комплексообразования зависит от природы аниона, рН раствора и наличия солей: в присутствии, например, NaCl, NaSCN константа возрастает. ПВП относится к нейтральным полимерам с неспецифической активностью, его физиологическая активность проявляется за счет специфических физико-химических свойств: молекулярно-массового распределения, молекулярной массы. При этом он не взаимодействует с клеточными мембранами и биополимерами и не обладает токсичностью, что является важной характеристикой для его фармацевтического применения [67, 87].
Впервые ПВП был получен Фикенчером и Херле в 1939 г. методом полимеризации N-винилпирролидона (ВПД) в воде в присутствии пероксида водорода и аммиака. Пероксид водорода используется в качестве инициатора и регулятора молекулярной массы полимера. Выделение полимера в виде порошка осуществляли экстрагированием органическим растворителем, затем высушиванием в распылительной сушке. Однако полимеры ВПД, полученные путем радикальной полимеризации, обычно имеют широкое молекулярно-массовое распределение. Для получения узких фракций используют метод фракционирования полимеров на мембранах [34, 48].
За счет своих свойств ПВП широко применяется в медицине. В зависимости от молекулярной массы и структуры (сшитый или линейный) ПВП активно применяют как вспомогательное вещество: наполнитель, разрыхлитель, связующее в таблетках и покрытиях, растворитель в препаратах антибиотиков, гормонов и анальгетиков для парентерального применения, а также он выступает в роли активного вещества [56, 67].
В течение долгого времени препараты высокомолекулярного ПВП применялись как противошоковые кровезаменители, представляющие собой 3,5 — 4%-ные водно-солевые растворы ПВП с молекулярной массой 30000 — 40000 Да, а также препараты дезинтоксикационного действия, представляющие собой 6%-ные водно-солевые растворы ПВП с молекулярной массой 7000 — 15000 Да и водные растворы с 5%-ным содержанием глюкозы. Но впоследствии было обнаружено, что при введении в большом количестве высокомолекулярного ПВП он накапливается в организме, из-за чего данные препараты стали производится с низкомолекулярным ПВП, который легко выводится из организма. Однако высокомолекулярный ПВП все еще используется как пролонгатор лекарственных средств за счет того, что образуя комплексы между водорастворимым полимером и малорастворимыми в воде органическими молекулами лекарственного вещества, способствует увеличению растворимости последних в воде. Таким образом, ПВП увеличивает концентрацию действующего вещества в растворе, стабилизируя раствор и даже изменяя время действия вещества в организме [1]. Комплекс ПВП-йод нашел применение как антисептическое средство для лечения открытых ожоговых ран, предотвращения слипания тканей при хирургических операциях.
В последнее время проводится много исследований по применению ПВП в качестве транспортера активных веществ. Например, показано, что при изучении биоэквивалетности препаратов-дженериков на основе сарколейцина, араноза, бихлорэтилэтилнитросоура и митосанктрона, содержащих ПВП с молекулярной массой 12600 Да, в сравнении с оригинальными препаратами была выявлена более высокая противораковая активность [86]. Такой же эффект по увеличению эффективности и увеличению противоопухолевого действия наблюдается при получении наночастиц на основе ПВП с ангиостатином, эндостатином, силимарином и силибинином [57].
Отмечают, что при введении комплекса интерлейкина-2 и ПВП непосредственно в раковые клетки наблюдается резкая экспрессия интерлейкина-2. Обработанные опухоли начинают атаковать клетки-киллеры. В половине случаев клетки почек начинали отвергать опухолевые клетки, что защищает от рецидива [78].
Проводят исследования по иммобилизации активных веществ в ПВП: сначала ПВП модифицируют золем поликремниевой кислоты, получают матрицу за счет множественных водородных связей между лактамным кольцом ПВП и силальной группой золя, затем осуществляют иммобилизацию протеазы Bacillussubtilis и лизоцима белка куриного яйца в ПВП. Получают стабильные эластичные полимерные гидрогелевые раневые покрытия пролонгированного действия с высоким сохранением активностей [45]. Также в структуру ПВП осуществляют иммобилизацию бактериальных клеток Erwinia rhapontici, являющихся продуцентами фермента, который катализирует процесс биотрансформации сахарозы в изомальтулозу — изомер сахарозы. Установлено, что увеличивается скорость трансформации сахарозы в изомальтулозу и стабильность иммобилизированных клеток [24]. Кроме того, ПВП широко используется в качестве вспомогательного вещества в вакцинах [66,68,70,76, 91]. Сополимеры на основе ПВП и их применение Наряду с изучением ПВП в качестве носителя, также активно ведутся исследования его сополимеров для иммобилизации активных веществ.
Показана возможность применения сополимера поли(N-винилпирролидон)-блок-поли(D,L-лактида) для образования мицелл, которые могут растворять в себе различные гидрофобные вещества, обладающие активностью. Диаметр их колеблется от 15 до 60 нм в зависимости от активного вещества. Такие композиции помогают быстро доставлять вещества при внутривенном введении в гораздо больших количествах [81]. Были получены мицелярные формы с такими противоопухолевыми препаратами как паклитаксел, доцетаксел, тенипозид и этопозид, установлена меньшая токсичность и более равномерное распределение активных веществ в организме [74]. При этом отмечают важность показателя молекулярной массы и ее распределения для выявления свойств сополимера [73, 83].
Исходные и вспомогательные вещества
Сополимер ВПД и 2-метил-5-винилпиридина (МВП) со средневязкостной молекулярной массой 30 – 55 кДа проявляет высокую антигенную активность и может использоваться как адъювант в вакцинах [38]. Синтез и свойства сополимера с молекулярной массой 35 – 50 кДа и соотношением звеньев 35 – 40 мол.% были описаны в работах С.А. Кедика [19, 20]. Данные исследования показали, что иммуногенная активность сополимеров растет с увеличением содержания звеньев МВП. Однако с ростом активности снижается растворимость сополимера в воде. Так, поли-2-метил-5-винилпиридин самостоятельно является активатором иммунного ответа, стимулируя миграцию и взаимодействие Т- и В-лимфоцитов, продукцию антител в ответ на чужеродные антигены, функционирование NK-клеток и макрофагов, но данный гомополимер нерастворим в воде и разработка готовой лекарственной формы на его основе затруднительна [59, 85].
Кроме того, необходимо принимать во внимание дальнейшее выведение активного вещества из организма. По данным Платэ, Штильмана и др. [10, 16, 41, 63] выведение ПВП с молекулярной массой менее 25 кДа происходит в течение нескольких дней, а с молекулярной массой 25 – 110 кДа – в течение нескольких месяцев.
Исходя из этого, в продолжение исследований проф. Кедика С.А. для решения задач по разработке инъекционных препаратов иммуномодулирующего действия нами был выбран сополимер ВПД и МВП с молекулярной массой ниже 30 кДа, узким молекулярно-массовым распределением и содержанием звеньев МВП 25 – 31 мол.%. Предполагается, что данный сополимер будет хорошо растворяться в воде, обладать иммуномодулирующим действием и выводиться из организма в короткие сроки. Объектом исследования являлась оригинальная биологически активная субстанция, представляющая собой сополимер N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина (рисунок 10), Рисунок 10 - Структура сополимера N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина в котором количество звеньев 2-метил-5-винилпиридина составляет n = 28,0 ± 3 мол.%, и среднемассовая молекулярная масса Mw = 15 000 – 28 000 Да [37] (Приложение 2). Описание. Аморфный порошок белого или желтоватого цвета, со слабым специфическим запахом, гигроскопичный.
Растворимость. Легко растворим в воде, спирте, растворим в хлороформе. Практически нерастворим в циклогексане (ГФ XII, ч.1, с. 92).
Исходные и вспомогательные вещества N-винилпирролидон. Представляет собой прозрачную жидкость, хорошо растворимую в воде, органических растворителях. Молярная масса 115,15 г/моль, плотность 1,044 г/см3, температура кипения 212С. Производитель BASF, серия 0340510, массовая доля реактива 99,7%. 2-метил-5-винилпиридин. Бесцветная жидкость, хорошо растворимая в органических растворителях и плохо растворимая в воде. Температура кипения 186 оС, молярная масса 119,18 г/моль, плотность 0,9580 г/см3 [40]. Производитель ОАО НИИ «Ярсинтез», паспорт № 01/01/12, массовая доля реактива 91,5 %. ДАК. Динитрил азо-бис-изомасляная кислота, азобисизобутиронитрил органическое вещество класса азосоединений и нитрилов. Применяется как инициатор радикальной полимеризации и других радикальных реакций. Белый порошок, растворим в этаноле, нерастворим в воде. При нагревании распадается на свободные радикалы по схеме [55] : Рисунок 11 - Схема распада ДАК при нагревании Бутилацетат. Бесцветная или слегка желтоватая жидкость, мало растворимая в воде, смешивается с органическими растворителями и растительными маслами, обладает всеми свойствами сложных эфиров. Температура кипения 126,3 C [5].
Циклогексан. Молярная масса 84,16 г/моль. Бесцветная жидкость с характерным запахом. Температура плавления 6,5 С, температура кипения 79 – 81 С; d420 = 0,7785 [53]. По физическим свойствам аскорбиновая кислота представляет собой белый кристаллический порошок кислого вкуса. Легко растворим в воде, растворим в спирте [43].
Кислота аскорбиновая вводится при отравлении угарным газом, метгемоглобинобразователями в больших дозах — до 0,25 мл/кг 5 % раствора в сутки. Препарат является мощным антиоксидантом, нормализует окислительно-восстановительные процессы.
Гель-проникающая хроматография (ГПХ). Разно видность хроматографии, в ходе которой молекулы веществ разделяются по размеру за счёт их разной способности проникать в поры неподвижной фазы. Принципиальное отличие в возможности определения веществ с молекулярной массой от 100 до 108 Да. При этом первыми выходят из колонки наиболее крупные молекулы, с большой молекулярной массой, способные проникать в минимальное число пор стационарной фазы. Последними выходят вещества с малыми размерами молекул, свободно проникающие в поры. Неподвижная фаза остается химически инертной и не взаимодействует с разделяемыми веществами [46].
Газожидкостная хроматография (ГЖХ). Вид хроматографии, в которой подвижной фазой служит инертный газ, а неподвижной - жидкость, нанесенная тонким слоем на твердый носитель. Неподвижная жидкая фаза должна быть термически стабильной, химически устойчивой, иметь небольшую вязкость. Разделение основано на различиях в летучести и растворимости (или адсорбируемости) компонентов разделяемой смеси [69]. Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ). Принцип жидкостной хроматографии состоит в разделении компонентов смеси, основанном на различии в равновесном распределении их между двумя несмешивающимися фазами, одна из которых неподвижна, а другая подвижна (элюент). В высокоэффективной жидкостной хроматографии характер происходящих процессов в хроматографической колонке в общем идентичен с процессами в газовой хроматографии, отличие состоит лишь в применении в качестве неподвижной фазы жидкости. В качестве подвижных фаз обычно используют чистые растворители или их смеси. Адсорбционная хроматография осуществляется в результате взаимодействия вещества с адсорбентами, такими как силикагель или оксид алюминия, имеющими на поверхности активные центры. Различие в способности к взаимодействию с адсорбционными центрами разных молекул пробы приводит к их разделению на зоны в процессе движения с подвижной фазой по колонке. Достигаемое при этом разделение зон компонентов зависит от взаимодействия как с растворителем, так и с адсорбентом [54].
Рефрактометрия. Метод основан на измерении показателя преломления веществ. Изменение направления лучей при переходе из одной среды в другую связано с изменением скорости распространения света. Отношение скоростей света в первой среде к скорости света во второй и есть показатель преломления второй среды относительно первой [61].
Характеристическая вязкость
Изучение стабильности. Стабильность субстанции и лекарственной формы при хранении изучали методом «ускоренного старения» в упаковке, предусмотренной проектом соответствующей фармакопейной статьи предприятия Для включения разработанных методов количественного определения в нормативную документацию на субстанцию и лекарственную форму оценивалась их прецизионность (повторяемость и воспроизводимость).
Повторяемость. Проводили 6 измерений, выполненных в одинаковых условиях: в одной лаборатории, с применением одного метода, на идентичных частях одной и той же пробы, одним и тем же оператором, на одном и том же оборудовании и средствами измерения. Рассчитывали среднее значение, стандартное отклонение, дисперсию, стандартное отклонение среднего значения. Для оценки повторяемости сравнивали последнее с заданным значением: для методов количественного определение оно должно быть менее 3 %, для методов определения предельных значений - менее 5 %.
Внутрилабораторная воспроизводимость. Проводили 6 измерений как для повторяемости, только с изменением одного или нескольких условий: другой лаборант, другое оборудование и т.д. Находили те же статистические параметры, определяли повторяемость. Затем находили отношение большего значения дисперсии к меньшему и сравнивали с коэффициентом Фишера, который для данных параметров выборок и степенью достоверности 95 % равен 5,05. Если отношение дисперсий было меньше коэффициента Фишера, значит методика проходит по параметру «воспроизводимость» и ее можно включить в проект нормативной документации [6, 7, 8].
В основе разработанной технологии получения сополимера лежит реакция радикальной сополимеризации N-винилпирролидона (ВПД) и 2-метил-5-винилпиридина (МВП) с использованием динитрил азо-бис-изомасляной кислоты (ДАК) в качестве инициатора и пероксида водорода в качестве регулятора молекулярной массы (рисунок 13) с последующим выделением сополимера из реакционной массы осадительной смесью бутилацетат : циклогексан и переосаждением из этанола осадительной смесью того же состава [20].
На первом этапе технологического процесса проводили вспомогательные работы: получали воду очищенную, обрабатывали производственные помещения, технологическую одежду, оборудование, подготавливали воздух, персонал (ВР.1.) [32].
В начале процесса мономеры перегоняли под вакуумом для удаления стабилизаторов. На стадии ТП.2.1. в перегонный аппарат помещали МВП со стабилизатором и проводили перегонку в среде аргона. Контроль за ходом перегонки вели по термометру и манометру. Предгон отбирали до температуры 79 оС при 19-20 мм рт.ст. Основную фракцию МВП отгоняли при температуре 79 – 81 оС и давлении 19 – 20 мм рт.ст. и собирали в сборник. Чистоту мономера определяли хроматографически. Содержание МВП должно быть не менее 96,0 %.
После проводили перегонку ВПД в среде аргона (ТП.2.2). Контроль за ходом перегонки вели по термометру и манометру. Предгон отбирали до температуры 95 оС при 10 – 12 мм рт.ст. Основную фракцию ВПД отгоняли при температуре 95 – 97 оС и давлении 10 – 12 мм рт.ст. и собирали в сборник. Чистоту мономера определяли хроматографически. Содержание ВПД должно быть не менее 98,5 %. При проведении стадии сополимеризации (ТП.3) было известно, что для получения сополимера с молекулярной массой 35 – 50 кДа и содержанием звеньев МВП 35 – 40 мол.% в качестве реакционной массы используют смесь циклогексана, пероксида водорода, ДАК и мономеры в мольном соотношении ВПД:МВП 1:0,026, которую нагревают и каждые 20 минут разбавляют подпиточной смесью с содержанием мономеров ВПД:МВП 3:2 [20].
Для проведения данной стадии была создана установка (рисунок 14) с использованием современных контролирующих устройств и систем управления, что исключило изготовление нестандартного оборудования, используемого ранее в синтезе сополимеров [20] (Приложение 3).
Емкость 2 заполняли подготовленной подпиточной смесью. Емкость 5 заполняли этанолом для последующего растворения пробы. При комнатной температуре в реактор 1 сначала загружали перегнанный мономер ВПД, включали мешалку со скоростью 2 об/сек и при перемешивании загружали перегнанный мономер МВП до соотношения ВПД:МВП 97:3, циклогексан, 30 % раствор перекиси водорода и ДАК. Для проведения реакции в инертной атмосфере смесь барботировали аргоном в течение часа. Скорость подачи аргона задавали 150 – 200 пузырьков в минуту. За время барботажа проводили калибровку исходной реакционной смеси на хроматографе ВЭЖХ, определяя зависимость отношения интенсивностей сигналов мономеров исходной реакционной смеси от разбавления элюентом. После получения калибровочных данных прекращали барботаж аргона и включали систему обогрева реактора до 65 – 70 оС. Через 10 минут и далее каждые 20 минут после начала реакции анализировали реакционную смесь с помощью хроматографа ВЭЖХ VARIAN ProStar (США) с УФ-детектором РS325 с одной длиной волны 273 нм на колонке для ВЭЖХ С8 5 мкм, 150x4,6 мм фирмы "IВМ", Великобритания.
Программное обеспечение на компьютере 8 по управляющему сигналу 1 (УС1) координирует отбор пробы реакционной массы в узел 6 с управляемого пробоотборника 4. Посредством управляющего сигнала (УС2) начинался хроматографический анализ пробы на определение соотношения непрореагировавших мономеров. Хроматограф с помощью программного обеспечения проводил расчет необходимого количества подпиточной смеси и подавал соответствующий аналитический сигнал (АС) на компьютер. Через управляющий сигнал (УС3) дозатором 3 осуществлялась подача подпиточной смеси из емкости 2 в реактор 1 [39]. Рассчитанное количество подпиточной смеси компенсировало убыль исходных мономеров МВП и ВПД в реакционной массе. Реакцию заканчивали по достижении 20 % конверсии по ВПД. По окончании реакции реакционную массу охлаждали до температуры 20 - 25 С.
Необходимость контроля соотношения мономеров ВПД и МВП связана с существенным различием их реакционной способности. Проведение синтеза с постепенным добавлением смеси реакционноспособных мономеров обеспечивало постоянное их соотношение в реакционной массе на протяжении всего процесса, что позволяло получать сополимеры с узким распределением по мономерному составу и молекулярной массе.
В результате применения такой методики и последующего выделения из реакционной смеси можно получать сополимеры с различным соотношением звеньев мономеров и молекулярной массой. Они представляют собой белые гигроскопичные аморфные порошки со слабым специфическим запахом.
Условия проведения сополимеризации и некоторые свойства синтезированных образцов представлены в таблице 2. Для выделения сополимера была разработана технология осаждения/переосаждения, позволившая исключить стадию водной экстракции труднодоступным хладоном 114В2.
Разработка технологии получения лекарственной формы
Исследования проводились на базе ФГБУН Институт Токсикологии ФМБА России под руководством к.м.н. Колбасова С.Е. по руководствам, разработанным Р.У. Хабриевым и А.Н. Мироновым [26, 58].
Изучена фармакологическая активность, которая показала, что сополимер стимулирует развитие гуморального иммунного ответа у слабоотвечающих мышей линии С57В1/6 в дозах 5 и 50 мг/кг и у сильноотвечающих мышей линии F1(СВАС57В1), иммунизированных субоптимальной дозой антигена, выявлена способность сополимера стимулировать завершенность фагоцитоза перитонеальных макрофагов при в/б введении в дозах 5 и 50 мг/кг, а при в/ж введении в дозе 50 мг/кг способность увеличивать число фагоцитирующих клеток в перитонеальном экссудате. При 10-дневном в/ж введении в дозе 50 мг/кг сополимер предотвращает снижение гуморального иммунного ответа и нарушение функции макрофагов, вызываемые эмоциональным стрессом (Приложение 10). 4.6. Выводы по главе В ходе разработки лекарственной формы был установлен состав раствора для внутримышечных инъекций с содержанием сополимера 10 мг/мл и стабилизатора натрия сульфита 1,5 мг/мл при доведении 0,1 М раствором уксусной кислоты до рН 5,0 – 6,0.
Была разработана технология получения лекарственной формы, в том числе подобраны условия розлива и ампулирования в присутствии инертного газа аргона.
Были подобраны параметры для стандартизации полученного продукта и разработан метод количественного определения сополимера при помощи спектрофотометрии. Предложена упаковка в ампулы нейтрального стекла, изучена стабильность раствора в них методом «ускоренного старения» и заложены образцы для изучения стабильности в естественных условиях.
На биологических моделях показана иммуномодулирующая активность сополимера.. Разработана технология получения оригинальной субстанции сополимера N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина с содержанием звеньев 2-метил-5-винилпиридина 28 ± 3 мол.% и значением молекулярной массы от 15 000 до 28 000 Да методом радикальной сополимеризации с автоматизированным контролем за соотношением концентраций мономеров. Установка защищена патентом РФ на полезную модель № 110743, сополимер с заданными характеристиками – патентом РФ на изобретение № 2430932. 2. Изучено соотношение звеньев мономеров в сополимере методом потенциометрического неводного титрования, характеристическая вязкость с помощью вискозиметрии и молекулярно-массовое распределение методом ГПХ. Разработаны методики качественного анализа на подлинность субстанции сополимера N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина, определены параметры посторонних примесей: N-винилпирролидона и -пирролидона методом ГЖХ, перекисных соединений титрованием, остаточных органических растворителей: циклогексана и бутилацетата методом ГЖХ и количественного определения сополимера в субстанции методом рефрактометрии для ее стандартизации. 3. Составлен проект НД на субстанцию и изучена стабильность методом «ускоренного старения». 4. Проведены доклинические исследования по острой, подострой и хронической токсичности субстанции сополимера и доказана ее безопасность. 5. Разработана инъекционная лекарственная форма субстанции сополимера: определены концентрация и рН сополимера в лекарственной форме, в качестве стабилизатора выбран сульфит натрия. 6. Разработаны технологические параметры по розливу, ампулированию и стерилизации ампул лекарственной формы и технология получения инъекционной лекарственной формы субстанции сополимера для внутримышечного введения. Разработан метод определения количественного содержания сополимера в лекарственной форме, проведена стандартизация лекарственной формы и составлен проект НД, по которому изучена стабильность методом «ускоренного старения». 8. Изучена фармакологическая активность лекарственной формы, которая показала стимуляцию гуморального иммунного ответа и завершенности фагоцитоза перитонеальных макрофагов.
