Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 Современное состояние исследований в области изучения распыления жидкостей 11
1.1 Характеристика лекарственной формы спрей 11
1.2 Особенности упаковки спрея 14
1.3 Современное состояние исследований в области технологии лекарственной формы спрей 1.3.1 Номенклатура лекарственных средств, выпускаемых в форме спрей для наружного применения 18
1.3.2 Особенности технологии лекарственной формы спрей 24
1.3.3 Характеристики факела распыления 26
1.4 Перспективы применения солодки голой и эвкалипта прутовидного в
терапии дерматозов 28
1.4.1 Солодка голая 28
1.4.2 Эвкалипт прутовидный 30
Заключение по обзору литературы 34
Глава 2 Объекты и методы исследования 36
2.1 Объекты исследований 37
2.2 Материалы и оборудование 37
2.3 Методы исследования
2.3.1 Физико-химические методы исследования 39
2.3.2 Технологические методы исследования 39
2.3.3 Методы изучения фармакологической активности и антимикробного действия 41
2.2.1 Обработка результатов исследований
Глава 3 Технологические исследования по созданию спрея противовоспалительного действия 46
3.1 Разработка состава и технологии спрея на основе эвкалипта листьев экстракта густого и солодки корней экстракта густого 46
3.1.1 Разработка состава гидрофильной эмульсии ЭЛЭГ 48
3.1.2 Выбор вспомогательных веществ для создания спрея антимикробного и противовоспалительного действия 53
3.1.3 Разработка состава спрея на основе гидрофильной эмульсии ЭЛЭГ - вода 59
3.2 Изучение влияния вязкости композиции спрея противовоспалительного действия на характеристики факела распыла и размер капель аэрозоля... 61
3.2.1 Изучение кинематической вязкости рабочих композиций спрея... 62
3.2.2 Анализ факела распыла модельных композиций спрея 64
3.2.3 Определение размера частиц аэрозоля в рабочей зоне факела распыла спрея 69
3.4 Разработка технологии и технологической схемы спрея противовоспалительного действия 73
Выводы по главе 77
Глава 4 Разработка норм качества спрея противовоспалительного действия на основе солодки корней экстракта густого и эвкалипта листьев экстракта густого 79
4.2 Разработка методики качественного и количественного определения действующих веществ в лекарственном препарате с солодки корней экстрактом густым и эвкалипта листьев экстрактом густым 79
4.2.1 Качественный анализ 79
4.2.2 Количественный анализ
4.3 Нормы качества 88
4.4 Определение стабильности разработанного спрея в процессе хранения с целью установления срока годности 89
Выводы по главе 91
Глава 5 Изучение фармакологической активности спрея с солодки корня экстрактом густым и эвкалипта листьев экстрактом густым 92
5.1 Изучение фармакологической активности спрея 92
5.1.1 Оценка раздражающего действия спрея 92
5.1.2. Изучение специфической активности спрея с солодки корня экстрактом густым и эвкалипта листьев экстрактом густым 93
5.2 Изучение антимикробного действия спрея 98
Выводы по главе 101
Заключение 102
Список литературы
- Номенклатура лекарственных средств, выпускаемых в форме спрей для наружного применения
- Физико-химические методы исследования
- Выбор вспомогательных веществ для создания спрея антимикробного и противовоспалительного действия
- Определение стабильности разработанного спрея в процессе хранения с целью установления срока годности
Введение к работе
Актуальность исследования. Атопический дерматит – хроническое воспалительное заболевание аллергической природы, важную роль в хронизации которого играет подключение сопутствующей инфекции (И.М. Корсунская, 2006). Распространённость этого заболевания велика и составляет в развитых странах от 10% до 20%, в России по данным ЦНИИ ОИЗ на 2006-2011 гг. эта цифра – около 7,5%.
Современный подход к терапии воспалительных заболеваний кожи зачастую сводится к наружному применению глюкокортикостероидов, обладающих выраженным противовоспалительным действием. Однако длительное и зачастую неконтролируемое применение этих лекарственных препаратов приводит к возникновению негативных побочных эффектов: стероидная розацеа, атрофия и др. (Т.А. Белоусова, 2008). В этой связи для лечения хронических больных и профилактики рецидивов целесообразно использовать лекарственные препараты растительного происхождения, традиционно считающиеся более безопасными благодаря мягкому и комплексному воздействию биологически активных веществ.
Так, экстракты эвкалипта прутовидного и солодки голой обладают выраженным противовоспалительным и антибактериальным действием, что позволит обеспечить комплексный подход к терапии атопического дерматита, хотя для них до сих пор не предложены рациональные лекарственные формы, позволяющие эффективно использовать их в терапии воспалительных заболеваний кожных покровов.
В качестве такой лекарственной формы можно рассматривать спреи. Это современная лекарственная форма особенностями которой являются: точность дозирования, удобство применения (И.Н. Гвоздева, 2001), меньшее проявление побочных эффектов (по сравнению с парентеральными и пероральными лекарственными средствами). Диспергирование частиц лекарственного вещества позволяет достичь высокой степени проникновения и скорости наступления терапевтического эффекта (М.М. Губин, 2008), что делает спреи особенно эффективными для местного применения.
Кроме того, в настоящее время недостаточно освящен вопрос методологии разработки технологии многокомпонентных спреев, содержащих растительные экстракты. Это указывает на то, что создание нового противовоспалительного лекарственного препарата на основе солодки корня экстракта густого и эвкалипта листьев экстракта густого в форме спрея является актуальной задачей.
Степень разработанности темы. Технология «спрея» как лекарственной формы разработана для многих лекарственных веществ с целью лечения и профилактики заболеваний верхних дыхательных путей. Однако практически отсутствуют данные по технологии спреев, содержащих растительные экстракты, в том числе с двумя или более компонентами. К неизученным вопросам относятся оптимизация степени вязкости спрея, влияние природы ВМС и их концентрации на вязкость спрея, размер частиц и характер их распределения в факеле распыла, и некоторые другие. Необходимо отметить, что спреи для наружного применения, содержащие экстракты эвкалипта прутовидного и солодки голой, до настоящего времени не являлись объектами изучения.
Цель исследования. Разработка состава, технологии и норм качества спрея противовоспалительного действия, содержащего эвкалипта листьев экстракт густой и солодки корней экстракт густой.
Задачи исследования:
-
Провести технологические исследования по разработке оптимального состава спрея.
-
Выявить зависимость между вязкостью спрея, концентрацией и природой ВМС.
-
Изучить влияние вязкости на характер распределения частиц спрея в факеле распыла.
-
Изучить влияние вязкости спрея на размер частиц в факеле распыла.
-
Разработать технологическую схему производства спрея.
-
Предложить нормы качества на разработанный лекарственный препарат, составить проект НД.
-
Изучить раздражающую активность, антибактериальные и противовоспалительные свойства спрея.
Научная новизна исследования. На основании проведённых исследований установлена зависимость свойств факела и размеров его частиц от степени вязкости спрея. Определен характер отпечатка факела и распределения частиц в нём по размерам при разной степени вязкости спрея.
Теоретически обоснована технология спрея, содержащего растительные компоненты с различающимися физико-химическими свойствами: гидрофильными и липофильными. Доказано, что этот вопрос может решаться путём использования эмульгатора в сочетании с модификатором вязкости. Всё это явилось научным обоснованием разработки состава и технологии спрея, содержащего эвкалипта листьев экстракт густой и солодки корня экстракт густой, причём в качестве основного технологического показателя использована вязкость композиции.
Теоретическая и практическая значимость работы. Полученный экспериментальный материал послужил основанием для создания комбинированного препарата - спрея противовоспалительного действия на основе солодки корня экстракта густого и эвкалипта листьев экстракта густого.
На разработанный спрей составлены и утверждены нормативные документы в виде ТУ и ТИ на производство спрея "Хлорисол" для ООО НПО "Альпика",
г. Ставрополь. Получены акты технологической апробации на спрей "Хлорисол" на базе ООО НПО "Альпика", г. Ставрополь.
Основные положения, выносимые на защиту:
-
Результаты разработки технологии производства спрея.
-
Результаты оценки технологических свойств спрея.
-
Предлагается оптимальный состав спрея "Хлорисол" противовоспалительного действия на основе солодки корня экстракта густого и эвкалипта листьев экстракта густого, и технологическая схема его производства.
-
Разработка норм качества и установления сроков годности спрея.
-
Результаты фармакологического изучения спрея.
Степень достоверности и апробация результатов исследования. Достоверность полученных результатов достигается благодаря использованию современных технологических, химических и физико-химических методов, позволяющих получать воспроизводимые и однозначные результаты. Исследования физических параметров: вязкости, размеров частиц, параметров факела распыла и др. – производилось с помощью современных вискозиметров, микроскопов, фотоаппаратуры и программного обеспечения. Результаты измерений обработаны математическим методом и являются статистически достоверными. Результаты исследований были апробированы в условиях предприятия ООО НПО "Альпика", г. Ставрополь и показали высокую воспроизводимость, что также является показателем их достоверности.
Основные положения диссертационной работы были доложены и обсуждены на 66-й , 67-й и 68-й научных региональных конференциях Пятигорской государственной фармацевтической академии по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (г. Пятигорск, 2011-2013 гг.), II-международной научно-практической конференции «Молодые ученые в решении актуальных проблем науки» (г. Владикавказ, 2011 г.), Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы фармацевтической науки и практики» (г. Владикавказ, 2012 г.), региональной научно-практической конференции «Инновационные идеи молодежи Ставропольского края - развитию экономики России», проводимой в рамках программы "УМНИК" (г. Ставрополь, 2012г.).
По материалам диссертационной работы опубликовано 8 работ. В научных изданиях, входящих в перечень ВАК, опубликованы 4 работы.
Методология и методы исследований. Методология разработки лекарственной формы подразумевает научно обоснованную и целесообразно организованную последовательность действий и должна включать несколько блоков: информационно-исследовательский, технологический и стандартизационный. В этой связи нами был предложнен алгоритм исследований производства спрея противовоспалительного действия.
В ходе работы над диссертацией применялись различные методы исследований: физико-химические, технологические, биофармацевтические, комплексная оценка органолептических показателей, биологические и фармакологические исследования разработанного спрея.
Номенклатура лекарственных средств, выпускаемых в форме спрей для наружного применения
Как видно из рисунка 5, наиболее часто в виде лекарственной формы спрей для наружного применения производители выпускают противогрибковые средства, что может объясняться тем, что грибковые инфекции зачастую поражают обширные участки кожных покровов, кроме того, недостаточная обработка пораженных участков в складках кожи может привести к рецидиву инфекции. Применение спреев для наружной терапии грибковых инфекций в этом случае будет предпочтительнее, чем традиционные мягкие лекарственные формы (мази, гели, кремы и т.д.). На втором месте по частоте применения спреев стоят антисептические средства. Бензалкония хлорид и хлоргексидина биглюконат, используемые в этих лекарственных средствах, применяются для первичной, отсроченно-первичной обработки ран, гнойных инфекциях, а также при длительно незаживающих воспалительных и гнойно-воспалительных заболеваниях кожи. Использование этих препаратов в форме спрея позволяет быстро и полно обрабатывать площадь раны, а также обеспечивает более полную очистку раны при ее первичной обработке за счет давления жидкости, создаваемого при распылении препарата. Количество противовоспалительных лекарственных средств в форме спрея равно количеству антисептических препаратов. Причём стоит отметить, что два из трех препаратов этой группы были зарегистрированы в начале 2012 года, что указывает на возрастающий интерес производителей к данной лекарственной форме. Кроме того, действующим веществом спрея «Эпиген интим» является аммонийная соль глицирризиновой кислоты, получаемая из растительного лекарственного сырья, что отличает это ЛС от других препаратов данной группы, основным компонентом которых являются синтетические лекарственные вещества.
В виде лекарственной формы спрей применяется один препарат, являющийся местным анестетиком, применяемый в основном в стоматологии, и два препарата, предназначенные для нанесения на волосистую часть головы. Выбор лекарственной формы в этом случае обусловлен удобством применения по сравнению с другими лекарственными формами.
К сожалению, большинство производителей не раскрывают информацию о точном соотношении вспомогательных веществ, входящих в состав их продукции, а также технологические приёмы и операции, используемые в процессе производства.
Тем не менее, проанализировав состав вспомогательных веществ, указанный в инструкции к препарату, можно составить представление о типе дисперсной системы препарата (по наличию или отсутствию эмульгаторов, физико-химическим свойствам действующих и вспомогательных веществ) и технологических операциях, применяемых при производстве. Анализ данных таблицы 1 и литературных данных о свойствах использованных вспомогательных веществ позволяет разделить их на следующие группы:
Растворители. В эту группу входят вспомогательные вещества, способные образовывать истинные растворы с действующими веществами лекарственного средства. К этой группе относятся пропиленгликоль, изопропиловый спирт, этиловый спирт, вода очищенная.
Модификаторы вязкости. К этой группе относятся полимерные соединения, повышающие вязкость водных растворов, используются для механической стабилизации суспензий и эмульсий, а также для придания необходимых потребительских свойств (препятствие быстрому растеканию препарата). Сюда относятся такие соединения, как макрогол-300, макрогол-400, цетомакрогол-1000, поливинилпрролидон (ПВП) и изопропилмиростат.
Эмульгаторы. Вспомогательные вещества, применяемые для стабилизации геторогенных систем (суспензий, эмульсий). В составе спреев для наружного применения встречаются полисорбат 60, полисорбат 80, проксанол 268.
Стабилизаторы, корригенты и др. К этой группе отнесены вспомогательные вещества, непосредственно не влияющие на стабильность суспензий либо эмульсий и не влияющие на растворимость действующих веществ. Их используют для продления срока годности (антиокислитель бутилгидрокситолуол), в качестве корригентов (ментол), пеногасителей (карбамид). 14 препаратов, приведённых в таблице 1, предположительно являются растворами, что составляет 82% от общего количества приведённых лекарственных средств. Примечательно, что при изготовлении данных лекарственных средств всегда используются комплексные растворители. Например, при производстве спрея «Хлоргексидин» используется смесь воды очищенной и этилового спирта, несмотря на то, что действующее вещество хлоргексидина биглюконат хорошо растворимо как в этиловом спирте, так и в воде. Это объясняется повышением эффективности хлоргексидина биглюконата в растворах этилового спирта.
Только 18% лекарственных средств, зарегистрированных в ГРЛС в форме спрея для наружного применения, предположительно являются гетерогенными системами (суспензиями либо эмульсиями), дисперсионной средой в которых является вода очищенная. Об этом свидетельствует тип эмульгатора, используемого для стабилизации (полисорбат 60, полисорбат 80 и проксанол 268 относятся к эмульгаторам первого типа).
47% анализируемых лекарственных средств имеют в своём составе вспомогательные вещества, относящиеся к группе модификаторов вязкости. В их число входят препараты двух фармакотерапевтических групп противогрибковых и противовоспалительных препаратов. Применение загустителей в данных фармакотерапевтических группах обоснованно необходимостью снизить текучесть препарата после его нанесения на обрабатываемую поверхность, что способствует более экономичному расходу лекарственного средства. Наиболее часто в качестве модификатора вязкости используются производные полиэтиленоксидов (макрогол-300, макрогол-400, цетомакрогол-1000).Это связанно со способностью этой группы веществ выступать в роли сорастворителей.
Физико-химические методы исследования
Фармакологические исследования включали в себя изучение раздражающего действия, противовоспалительной и ранозаживляющей активности разработанного спрея. Все работы выполнялись на кафедре клинической фармакологии Пятигорской ГФА. Изучение раздражающего действия проводили на куриных эмбрионах белых кур породы Leggron возрастом 9-10 суток.
Исследования противовоспалительной и ранозаживляющей активности проводили на белых половозрелых крысах-самцах. Животные содержались в обычных условиях вивария Пятигорской ГФА при температуре окружающего воздуха 22±2Ссо свободным доступом к воде и пище.
Опытные группы животных получали исследуемую композицию спрея в виде лекарственной формы наружно. В качестве препаратов сравнения использовали гель эфкамон (производства Покровский завод биопрепаратов, Россия)и мазь метилурацил (производства Татхимпрепараты, Россия). Все экспериментальные работы проводили согласно «Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (под редакцией Р.У. Хабриева) [118].
Оценку раздражающего действият situ проводили тестом на хорион-аллантоисной оболочке куриного эмбриона (ХЕТ-КАМ тест) [99]. Хорион-аллантоисная оболочка представляет собой тонкую прозрачную оболочку, пронизанную большим количеством кровеносных сосудов и капилляров. Целью исследования биологически активных веществ на модели хорион-аллантоисной оболочки куриного эмбриона является предварительная оценка вероятного раздражающего действия на слизистые оболочки млекопитающих. Полученные в ходе опыта результаты позволяют предположить, что тестируемое вещество может обладать или не обладать раздражающим действием на слизистые оболочки млекопитающих. В том случае, если исследуемое вещество не обладает раздражающим действием, проводят дальнейшие изучения по определению фармакологической активности.
Эксперимент проведен на куриных эмбрионах белых кур возрастом 9-10 суток. Исследуемый спрей тестировали в 18повторностях (12 - опыт, 6-контроль). Эмбрионы выдерживали в инкубаторе при t=37,8 С и влажности 62,5%. Перед началом работы яйцо укрепляли на фиксирующей подставке тупым концом вверх; скорлупу вскрывали в центре тупого конца, освобождали от скорлупы всю воздушную камеру, после чего поверхность открытой воздушной камеры смачивали изотоническим раствором натрия хлоридатемпературой 37С. После этого яйцо помещали в термостат на 30 минут, затем раствор отсасывали микропипеткой, удаляли увлажненную жесткую подскорлуповую оболочку без повреждения нежной хорион-аллантоисной оболочки. Наносили исследуемую композицию спрея и наблюдали за действием 120 секунд. По результатам наблюдения определяли, к какому классу веществ по степени раздражения относитсякомпозиция спрея.
Результаты эксперимента наблюдали с помощью бинокулярного микроскопа и фиксировали при использовании цифрового фото на основе компьютерной программы Intel(R) Play(tm) QX3(tm) Computer Microscope.
Острую воспалительную реакцию (отек) воспроизводили интарплантарным введением 0,1мл 1% суспензии каолина дорсовентрально в правую заднюю конечность крысы. Метод прост, легко воспроизводим, прибор дает возможность регистрировать изменение объема конечности в динамике, исключается необходимость использования наркоза исследуемым животным. Онкометрически измеряли объем конечности крысы в динамике по объему вытесненной воды. Выраженность экссудативного воспаления оценивали в максимуме объема и через сутки после индукции воспаления каолином. [118].
Противовоспалительную эффективность исследуемых образцов экстрактов рассчитывали по формуле [89]: р = С х100 (1) где Р - процент угнетения воспаления; V0 - среднее увеличение объема отечной конечности у опытных животных; Vk - среднее увеличение объема отечной конечности в контроле. Ранозаживляюшую активность оценивали на модели термического ожога [124, 125]. Данный метод заключается в следующем. Животным тщательно выстригали участок кожи в верхней части туловища. Для ограничения площади ожога на опытный участок кожи накладывался лист фольги с отверстиями одинакового размера (1x1 см), начальная площадь ожога, таким образом, составляла 100мм . Затем наркотизированным животным наносили термический ожог контактным способом; температура составляла 100С, время воздействия 20 сек. Таким образом, достигались ожоги одинакового размера и степени тяжести.
Животным ежедневно наносили на раневую поверхность разработанный спрей, плацебо (основа спрея) и препарат сравнения. Полученные данные сравнивали с группой животных, не получивших лечения. Площадь ожога оценивали в динамике на 1, 3, 6, 8, 10,12, 14, 16 и 18 дни лечения. Отмечали общее состояние животных, время отхождения струпа, состояние дефекта и окружающих тканей, скорость регенерации.
Полученные данные обрабатывали статистически. Изучение антимикробной активностиспрея с солодки корня экстрактом густым и эвкалипта листьев экстрактом густымпроводилив соответствии с требованиями ГФ XI изд., вып. 2 и Изм. от 28.12.1998 r.invitro методом диффузии в агар [41, 42]. Посевы культур микроорганизмов осуществляли в чашках Петри. Стерильные чашки Петри устанавливали на строго горизонтальную поверхность, заливали расплавленный и охлажденной до 48-50С агаризованной средой в количестве 20 мл для создания оптимальной толщины слоя. Чашки с посевами инкубировали при температуре 30 ± 1С в течение 72 часов.
Выбор вспомогательных веществ для создания спрея антимикробного и противовоспалительного действия
Как следует из данных таблиц 6 и 7, стабильность системы ЭЛЭГ - вода возрастала с повышением концентрации раствора карбопола. Для образцов с концентрацией выше 0,8% расслоения эмульсии не наблюдалось даже при центрифугировании. Однако от дальнейшего исследования этой композиции было решено отказаться из-за высокой вязкости систем, что помешало бы извлечению композиции из упаковки спрея.
Для стабилизации системы ЭЛЭГ - вода при помощи МЦ использовали растворы МЦ с концентрацией от 0,5% до 2,0%. Эмульсию ЭЛЭГ - вода получали по следующей схеме. В реактор 1 помещали отвешенное количества порошка МЦ, к которому приливали 20% от общего объема воды очищенной, нагретой до температуры 80-90С, смесь перемешивали до набухания МЦ и охлаждали до комнатной температуры. До необходимого объёма раствор МЦ доводили водой очищенной, охлаждённой до 5С. В реакторе 2 готовили эмульсию ЭЛЭГ с Твин-80 по приведенной выше схеме, раствор МЦ подавали в реактор 2, смесь гомогенизировали. Полученные таким образом композиции испытывали на коллоидную стабильность и стабильность в процессе хранения. Результаты исследований приведены в таблицах 8 и 9.
Как следует из данных таблиц 8 и 9, использование при изготовлении композиции ЭЛЭГ - вода в качестве вспомогательного вещества растворов МЦ не позволило достичь необходимой стабильности системы. Композиции, полученные таким образом, в зависимости от концентрации МЦ расслаивались в интервале от нескольких часов до суток, расслоившиеся эмульсии с трудом восстанавливались при встряхивании. Образцы эмульсий, разделенные центрифугированием при испытании на коллоидную стабильность, не восстанавливались при встряхивании.
ПЭО-400 является низкомолекулярным полимером и в растворах с водой не образует гелей, поэтому для создания композиций на его основе можно использовать ПЭО-400 в интервале концентраций от 10% до 100%. Композиции на основе ПЭО-400 получали по следующей методике. В реактор загружали отвешенное количество ЭЛЭГ и Твин-80, диспергировали до получения однородной массы, затем небольшими порциями добавляли рассчитанное количество ПЭО-400, после чего добавляли воду очищенную до необходимого объема. Смесь тщательно перемешивали до получения гомогенной смеси. Полученные таким образом образцы эмульсий испытывали на коллоидную стабильность и устойчивость в процессе хранения. Результаты исследований приведены в таблицах 10 и 11.
Результаты испытаний на коллоидную стабильность и устойчивость в процессе хранения композиций на основе ПЭО-4 Композиция№ Вид испытания Коллоидная стабильность, осадок, мм Устойчивость при хранении
Как следует из данных таблиц 10 и 11, при увеличении концентрации ПЭО 400 в растворе стабильность системы ЭЛЭГ - вода существенно увеличивалась. При концентрации ПЭО-400 в эмульсии свыше 40% система ЭЛЭГ - вода не расслаивалась при хранении в течение 7 суток. При испытании на коллоидную стабильность эмульсии с концентрацией ПЭО-400 в интервале 40-60% наблюдалось незначительное расслоение системы, восстанавливающей свою однородность при встряхивании. Смеси с концентрацией ПЭО-400 более 60% при центрифугировании не расслаивались.
Проведенные исследования по стабилизации ЭЛЭГ в воде показали, что использование наиболее распространенных эмульгаторов, а также сочетание их с соэмульгатарами не позволяет получить стабильную эмульсию ЭЛЭГ в воде, что приводит к необходимости использования дополнительных вспомогательных веществ, из которых наибольшую эффективность показали растворы ПЭО-400 в различных концентрациях. Это позволило отобрать модельные образцы эмульсий ЭЛЭГ - вода на основе растворов ПЭО-400 в качестве базовых для проведения дальнейших исследований.
Следующим этапом в разработке состава спрея является введения в эмульсию ЭЛЭГ второго компонента разрабатываемой лекарственной формы СКЭГ и изучения его влияния на стабильность эмульсии. Для чего был составлен ряд рабочих композиций спрея, представленных в таблице 12.
Воды очищенной до 100.0 До 100.0 ДО100.0 ДО 100.0 До 100.0 ДО100.0 ДО 100.0 ДО 100.0 ДО100.0 Технология получения рабочей композиции спрея принципиально не отличалась от получения эмульсии ЭЛЭГ - вода на основе растворов ПЭО-400, отличием стало получение смеси СКЭГ с водой очищенной до введения её в концентрат эмульсии ЭЛЭГ. Полученные таким образом композиции спрея испытывали на коллоидную устойчивость и стабильность в процессе хранения, результаты приведены в таблице 13.
Как следует из таблицы 13, введение в состав эмульсии ЭЛЭГ - вода СКЭГ повлияло на стабильность всей системы в целом. Так, в композициях с концентраций ПЭО-400 от 10% до 30% выросла высота столба осадка, наблюдаемая после центрифугирования, по сравнению с аналогичными образцами эмульсии ЭЛЭГ - вода без добавления СКЭГ, однако плотность осадка снизилась, а способность эмульсии к восстановлению возросла.
Стабильность образцов 4, 5 и 6 заметно возросла по сравнению с аналогичными без СКЭГ, при испытании на коллоидную стабильность в этих композициях не наблюдалось образования осадка, но для образца под номером 6 был отмечен кремаж (1-2 мм) эмульсии после центрифугирования. При испытании образцов 7, 8 и 9 на коллоидную стабильность также было отмечено появление кремажа эмульсии, усиливающегося при повышении концентрации. Для образца под номером 10 не удалось получить однородной смеси с СКЭГ, поэтому испытания на коллоидную стабильность и устойчивость в процессе хранения для него не проводили.
Определение стабильности разработанного спрея в процессе хранения с целью установления срока годности
Оценку раздражающего действия спрея солодки корня экстрактом густым и эвкалипта листьев экстрактом густым проводили тестом на хорион-аллантоисной оболочке куриного эмбриона, НЕТ - САМ test. Лабораторные образцы спрея тестировались на 18 куриных эмбрионах белых кур породы Leggron возрастом 9-10 суток, содержащихся в течение 7 дней в термостате t37.8C, при постоянной относительной влажности воздуха 62,5% [118]. Для опыта были подготовлены 6 образцов основы спрея, 12 образцов спрея по 0,3 мл, подогретых в термостате до 37С.
При нанесении на хорион-аллантоисную оболочку куриного эмбриона основы спрея наблюдалось отсутствие воздействия: не нарушенная прозрачная тонкая оболочка с нормально функционирующей сетью кровеносных сосудов и капилляров. При испытании спрея также не отмечалось каких-либо изменений в тонкой хорион-аллантоисной оболочке. Проведенные исследования позволяют отнести исследуемую основу спрея и спрей к 1 классу согласно классификации веществ по степени раздражения [119]. Таким образом, спрей и основа спрея безопасны по действию на слизистые оболочки млекопитающих и могут быть допущены к дальнейшим исследованиям на теплокровных животных.
Изучение антиэкссудативной активности спрея Антиэкссудативную активность лабораторных образцов спрея изучали на модели каолинового отека конечности крыс. Эксперимент проводили на 30 половозрелых крысах-самцах массой 250±10 г. Измерения проводили онкометрически при помощи механического онкометра по А.С. Захаревскому. Регистрировали исходный объем правой задней конечности, после чего моделировали острую воспалительную реакцию путем интраплантарного введения в дорсовентральную часть конечности крысы 1% водного раствора каолина в количестве 0,1 мл [118]. Затем наружно наносили спрей в количестве 0,5 мл, основу спрея или препараты сравнения.
В качестве препаратов сравнения использовали мазь эфкамон (производства Покровский завод биопрепаратов, Россия) и мазь метилурацил (производства Татхимпрепараты, Россия). Мазь эфкамон была использована в качестве препарата сравнения как растительное средство, обладающее противоотечным, анальгезирующим, отвлекающим и противовоспалительным действием, снижающее отек в фазу экссудации. Мазь метилурацил - классический ранозаживляющии препарат, который оказывает противовоспалительное действие, связанное со способностью подавлять активность протеолитических ферментов. Изучали изменение объема конечности крысы в динамике, проводя измерения каждый час, фиксировали пик отека конечности крыс. Окончательное измерение проводили на стадии затухания острого воспаления спустя сутки после индукции каолином. Результаты представлены в таблицах.
Серияэкспериментальныхживотных (п=6) Приростобъемаконечностина пике (%к исходномуобъему) %кконтролю Противовоспалительная эффективность
В группе животных, получавших спрей, пик отека зафиксирован спустя 3 ч от начала опыта. Прирост объема конечности к исходному значению составил 47,25%, что на 36,3% ниже аналогичного показателя в контрольной группе животных.
Следует отметить, что в группах животных, получавших препараты сравнения (мазь эфкамон и мазь метилурацил), пик отека также равен 3 ч. Прирост объема конечности в группе, получавшей мазь эфкамон, равен 61,03%, мазь метилурацил - 53,47%, что достоверно отличается от показателя группы животных, не получивших лечения.
Проанализировав результаты эксперимента, установили, что в группе животных, не получивших лечение, формирование капиллярной сети произошло на 12 день, в то время как в группе животных, получавших препарат сравнения (мазь метилурацил), этот показатель равен 10 дням. Струп отошел на 7 день в группе, получавшей разработанный спрей, что на 3 дня превышает препарат сравнения.
Установлено, что в группе, не получавшей лечения, площадь ожоговой раны на 8 день от начала лечения равна 61,67±2,25 мм2. При применении основы спрея этот показатель составил 57,5±7,71 мм2, этот показатель незначительно превышает препарат сравнения метилурацил.
В группе животных, получавшей лечение спреем, площадь ожоговой раны на 8 день от начала лечения составила 34,33±3,50 мм , что на 44,3% достоверно ниже, чем в группе контроля, и на 40,8% достоверно ниже препарата сравнения. Полная эпителизация в группах животных, получавших лечение разработанным спреем и мазью метилурацил, наступила на 13 и 14 день от начала лечения соответственно. При этом в группе контроля полное заживление наступило лишь на 18 день.
