Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Нефротоксичность противоопухолевых химиотерапевтических средств: методы оценки, профилактики и коррекции (обзор литературы) 9
1.1. Механизмы и маркеры нефротоксического действия противоопухолевых химиотерапевтических средств 9
1.2. Роль свободнорадикального окисления в патогенезе нефротоксического действия противоопухолевых химиотерапевтических средств 14
1.3. Методы коррекции нефротоксического действия противоопухолевых химиотерапевтических средств. Использование антиоксидантов 18
1.4. Теоретические предпосылки к исследованию арбидола в качестве нефропротективного средства при применении противоопухолевых препаратов 30
Глава 2. Материалы и методы исследования 32
2.1. Общее описание 32
2.2. Экспериментальные группы 33
2.3. Методы определения биохимических показателей мочи и плазмы .34
2.4. Гистологическое изучение почек 40
2.5. Расчеты и статистическая обработка 40
Глава 3. Влияние арбидола на структуру и функцию почек крыс 41
Глава 4. Эффективность арбидола в коррекции нефротоксического действия цисплатина 51
Глава 5. Эффективность арбидола в коррекции нефротоксического действия метотрексата 66
Глава 6. Эффективность арбидола в коррекции нефротоксического действия доксорубицина 82
Глава 7. Обсуждение результатов исследования 97
Выводы 106
Практические рекомендации 107
Список литературы 108
Приложения 130
- Роль свободнорадикального окисления в патогенезе нефротоксического действия противоопухолевых химиотерапевтических средств
- Теоретические предпосылки к исследованию арбидола в качестве нефропротективного средства при применении противоопухолевых препаратов
- Методы определения биохимических показателей мочи и плазмы
- Эффективность арбидола в коррекции нефротоксического действия доксорубицина
Введение к работе
Актуальность проблемы. Снижение токсичности цитостатических средств является важнейшей задачей, решение которой позволяет улучшить эффективность противоопухолевой терапии (Kishi S. et al., 2007; Thakur J.S. et al., 2008).
Токсическое поражение почек является побочным эффектом применения большинства противоопухолевых средств. Вызванная химиотерапией почечная дисфункция включает в себя уремический синдром, повреждение структур нефрона, снижение ренальной перфузии (Kintzel P.E., 2001). Данное грозное осложнение химиотерапии обусловливает определенный процент смертности пациентов. Кроме того, острая почечная недостаточность, вызванная применением антибластомных средств, вызывает необходимость в пересмотре плана лечения, так как требует снижения дозировки химиопрепарата либо его отмены (Darmon M. et al., 2006).
В качестве одного из важнейших механизмов нефротоксичности противоопухолевых средств в настоящее время рассматривается оксидативный стресс (Conklin K.A., 2000). В связи с этим перспективным направлением фармакологической коррекции данного побочного эффекта является использование препаратов, обладающих антиоксидантными свойствами. Однако применение антиоксидантов при онкологических заболеваниях затрудняет тот факт, что опухолевый процесс проходит, в основном, на повышенном уровне антиоксидантов, и последние проявляют свое противоопухолевое действие в высоких дозах, когда выступают в роли прооксидантов (Бурлакова Е.Б., Пальмина Н.П., 1990). Эффективность применения противоопухолевых химиотерапевтических средств прямопропорциональна степени интенсификации ими процессов свободнорадикального окисления (Пальмина Н.П., Бурлакова Е.Б., 1985). С другой стороны, опухолевая ткань, накапливая эндогенные антиоксиданты, вызывает снижение антиоксидантной защиты в других тканях организма, повышая, таким образом, содержание токсических продуктов окисления и способствуя дальнейшему опухолевому росту (Cheeseman K.H. et al, 1986).
В связи с этим большой интерес представляет арбидол – противовирусный препарат, обладающий антиоксидантными свойствами и угнетающий интенсивность процессов перекисного окисления липидов в большей степени, чем известный мощный синтетический антиоксидант эмоксипин (Глушков Р.Г. и соавт., 1996). Механизм антиоксидантного действия арбидола связан с перехватом липидных радикалов (Васильева О.В. и соавт., 1999). Помимо этого, арбидол обладает антиканцерогенными, иммуномодулирующими, интерферониндуцирующими свойствами (Суринов Б.П. и соавт., 1995; Глушков Р.Г. и соавт., 1999), которые могут иметь большое значение при наличии онкологического заболевания и применении противоопухолевых химиотерапевтических средств, вызывающих иммуносупрессию (Гершанович М.Л., 1982) и индуцирующих канцерогенез в здоровых тканях (Curtis R.E. et al., 1992; Ellis M., Lisher M., 1993; Ferguson L.R., Pearson A.E., 1996).
Целью исследования явилось снижение нефротоксических эффектов противоопухолевых химиотерапевтических средств (цисплатина, метотрексата, доксорубицина) с помощью арбидола.
Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:
-
изучить структурно-функциональные изменения в почках крыс под влиянием арбидола и противоопухолевых средств (цисплатин, доксорубицин, метотрексат);
-
изучить влияние арбидола и противоопухолевых средств (цисплатин, доксорубицин, метотрексат) на процессы свободнорадикального окисления in vivo;
-
изучить нефропротективные свойства арбидола при токсическом поражении почек крыс, вызванном противоопухолевыми средствами (цисплатин, доксорубицин, метотрексат);
-
установить закономерность действия арбидола на почки крыс при применении противоопухолевых средств (цисплатин, доксорубицин, метотрексат) в зависимости от степени поражения ими почек, изменения уровня свободнорадикального окисления, механизмов их токсического действия;
-
установить эффективный режим введения арбидола с целью снижения нефротоксичности противоопухолевых веществ (цисплатин, доксорубицин, метотрексат).
Научная новизна исследования. Впервые исследованы антиоксидантные и нефропротективные свойства арбидола in vivo в условиях применения противоопухолевых химиотерапевтических средств – цисплатина, метотрексата, доксорубицина. Установлено, что почечные канальцы более чувствительны к цитостатическим средствам (цисплатину, доксорубицину, метотрексату), а также к увеличению пероксидации по сравнению с клубочковым аппаратом. Доказано, что арбидол системно угнетает процессы перекисного окисления липидов in vivo и устраняет нефротоксические эффекты противоопухолевых средств, обладающих выраженными прооксидантными свойствами и поражающих преимущественно почечные канальцы (цисплатин, метотрексат).
Практическая значимость диссертации. Экспериментально обоснована эффективность использования арбидола с целью снижения нефротоксического действия противоопухолевых химиотерапевтических средств (цисплатин, доксорубицин, метотрексат). Результаты исследования расширяют знания относительно антиоксидантной активности арбидола и возможности коррекции нефротоксических эффектов лекарственных средств с его использованием.
Апробация материалов диссертации. Материалы диссертации доложены и обсуждены на заседаниях кафедры фармакологии и проблемной комиссии по фармакологии и фармации Алтайского государственного медицинского университета (2008, 2009 г.г.), 66-й открытой итоговой научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием (Волгоград, 2008 г.), IX конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2008 г.), Всероссийской конференции молодых ученых и III школе им. акад. Н.М. Эмануэля «Окислительный стресс, окисление и антиоксиданты» (Москва, 2008 г.), X городской научно-практической конференции молодых ученых «Молодежь-Барнаулу» (Барнаул, 2008 г.), XVI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2009 г.), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием для студентов и молодых ученых «Вопросы патогенеза типовых патологических процессов» (Новосибирск, 2009 г.).
Публикация результатов исследования. По теме диссертационной работы опубликовано 7 работ, из них 1 – в журнале, рекомендованном ВАК Минобрнауки РФ.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 132 страницах машинописного текста и состоит из введения, семи глав, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 20 рисунками и 23 таблицами. Библиографический указатель включает 194 источника, из которых 20 отечественных и 174 зарубежных авторов.
Роль свободнорадикального окисления в патогенезе нефротоксического действия противоопухолевых химиотерапевтических средств
Установлено, что среди механизмов токсического повреждения клеточных мембран при поражениях почек экзотоксической этиологии наибольшее значение имеет перекисное окисление липидов (ПОЛ), ведущее к разрушению мембран и гибели клеток [19]. По данным FDA (США) около половины применяемых противоопухолевых средств обладают способностью индуцировать оксидативный стресс, который, однако лежит в основе цитотоксических эффектов ряда средств, например, блеомицина [55, 101]. Но отдельные химиотерапевтические средства, такие, как антрациклины, индуцируют оксидативныи стресс в здоровых тканях и вызывают их «нормальное» повреждение [161, 163].
Цисплатин - высокоэффективный противоопухолевый препарат -инициирует снижение уровня и доступности супероксиддисмутазы, восстановленной формы глутатиона и глутатионпероксидазы, что приводит к увеличению выработки супероксиданион-радикала и других активных форм кислорода [64, 168].
Имеются указания на то, что цисплатин проявляет прооксидантные свойства и во внеклеточных системах [128]. Однако Vermeulen N.P. и Baldew G.S. [182] показали, что, в отличие от доксорубицина, цисплатин не вызывает перекисное окисление липидов in vitro в различных экспериментальных системах, а также не вызывает разрушение микросомальных и цитозольных глутатион-зависимых факторов, защищающих биомолекулы от свободнорадикального окисления.
Доксорубицин также усиливает процессы свободнорадикального окисления, как и другие химиотерапевтические антибиотики антрацикли-нового ряда [141]. Некоторые авторы указывают на то, что активные формы кислорода являются ключевыми медиаторами нефроза, вызванного доксорубицином [137]. У экспериментальных животных (крыс) адриами-цин вызывает нефротический синдром на 4-5 день после единичного внутривенного введения в дозе 7,5 мг/кг. Полная картина синдрома развивается на 13-15 день [40].
Нефротоксическое действие антрациклиновых антибиотиков связывают с метаболической восстановительной активацией до полухинона ок-сиредуктазными ферментами, такими, как NADH-4HTOXPOM-P-450-редуктаза и NADH-дегидрогеназа. Полухинон самоокисляется, генерируя при этом токсические радикалы кислорода [137]). Еще одним источником активных форм кислорода в условиях применения доксорубицина является ксантиноксидаза - фермент, указанный Сапера А. и соавторами [50] как медиатор нефротоксичности данного противоопухолевого препарата. Ксантиноксидаза в качестве акцептора электронов использует молекулярный кислород, в результате чего происходит образование супероксидани-он-радикала и пероксида водорода [129]. Кроме того, доксорубицин снижает уровень глутатиона, глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы [168]. АТФ-зависимые транспортные белки, такие как протеины, ассоциированные с мультилекарственной резистентностью (MRPs), играют важную роль в поддержании окислительно-восстановительного баланса клетки за счет переноса глутатион-конъюгированных продуктов перекисного окисления липидов во внеклеточное пространство [122]. Доксорубицин обладает способностью ингибировать эти белки, что усугубляет оксида-тивный стресс [108].
На субклеточном уровне главной мишенью доксорубицин-индуцированного оксидативного стресса являются митохондрии. Электронная микроскопия четко продемонстрировала, что препарат вызывает глубокое повреждение этих органелл: вакуолизацию, дегенерацию, разрушение мембраны. Митохондриальная ДНК - важная мишень активных форм кислорода. Ее циклическая молекула включает 16569 пар оснований, кодирует две рибосомальных , двенадцать транспортных РНК и тринадцать полипептидов, принимающих участие в окислительном фосфорили-ровании [80, 49]. По сравнению с ядерной, митохондриальная ДНК более подвержена окислительному повреждению за счет соседства с участками образования активных форм кислорода, отсутствием интронов и гистонов и лимитированной способностью к репарации [185]. Вследствие этого количество мутаций митохондриальной ДНК в 10-17 раз превосходит количество мутаций ядерной ДНК [186].
Экспериментальное изучение нефротоксичности метотрексата - противоопухолевого химиопрепарата, антагониста фолиевой кислоты - показало повышение содержания малонового диальдегида (МДА) при отсутствий значимого изменения активности прооксидантных и антиоксидантных ферментов почечной ткани [68]. Однако Uz Е. и соавторы [178] указывают на повышение активности аденозиндезаминазы и ксантиноксидазы, а также уровня оксида азота — парамагнитного соединения, участвующего в регуляции окислительного фосфорилирования и продукции активных форм кислорода в митохондриях [44, 57], потребления и транспорта кислорода в тканях [173]. Kolli V.K. и соавт. [120] в результате проведенных экспериментов отводят ключевую роль в патогенезе нефротоксического действия метотрексата интенсификации процессов свободнорадикального окисления и нейтрофильной инфильтрации.
Увеличение выработки активных форм кислорода приводит к стимуляции продукции фактора некроза опухоли-альфа (TNF-a) почечными клетками посредством активации фактора транскрипции NF-KB [35]. Ранние эффекты TNF-a в почках проявляются вазоконстрикцией, последующим уменьшением почечного кровотока и клубочковой фильтрации, что ассоциировано с активацией ренин-ангиотензин-альдостероновой системы и увеличением симпатического влияния на ренальные сосуды [118, 187]. Поздние эффекты TNF-a характеризуются увеличением продукции про-воспалительных цитокинов и хемокинов всеми типами клеток почечной ткани [157], приводящим к инфильтрации нейтрофилами, моноцитами, натуральными киллерами и Т-лимфоцитами. Данные клетки выделяют во внеклеточную среду лизосомальные ферменты, активные формы кислорода, а также цитокины, что усиливает инфильтрацию и повреждение структур нефрона [ИЗ, 153].
Теоретические предпосылки к исследованию арбидола в качестве нефропротективного средства при применении противоопухолевых препаратов
Главной предпосылкой для исследования арбидола в качестве нефропротективного соединения, способного снижать степень токсического поражения почек противоопухолевыми свойствами, являются его выраженные антиоксидантные свойства, обнаруженные Васильевой О.В. и соавт. [2]. Было обнаружено, что арбидол угнетает интенсивность процессов свободнорадикального окисления сильнее, чем известный антиоксидант эмоксипин, молекула которого, как и молекула арбидола, содержит гидро-ксильную группу у ароматического кольца. Более выраженные антиоксидантные свойства арбидола также могут обусловливаться наличием сульфидной группы. По данным Кравцова СО. [8], наличие в структуре молекулы различных реакционных центров - фенольного фрагмента и атома серы, позволяет тормозить цепной окислительный процесс как путем взаимодействия с пероксидными радикалами (антирадикальная активность), так и с гидропероксидами (противопероксидная активность). Кроме того, антиоксидантная активность тиопроизводных дополнительно повышается за счет эффекта внутримолекулярного синергизма. Следует отметить, что молекула амифостина, применяемого для профилактики гема-тотоксичности ДНК-связывающих средств, нефротоксичности препаратов платины, также, как и молекула арбидола, содержит сульфидную группу.
Учитывая то, что химиотерапия может сопровождаться иммуносу-прессией и возникновением инфекционных осложнений, важным дополнительным свойством арбидола является его иммуностимулирующий и интерферон-индуцирующий эффекты. Арбидол оказывает иммуномоду-лирующее действие, приводя к повышению общего количества Т-лимфоцитов и Т-хелперов [5]. В то же время применение арбидола не приводит к существенным изменениям абсолютного числа Т-супрессорных клеток в целом по группам, что подтверждает мнение ряда исследователей о том, что стимулирующая активность арбидола не связана с угнетением функции супрессорных клеток. Препарат не только увеличивает общее число макрофагов с поглощенными бактериями, но и повышает фагоцитарное число [5, 18]. Указанные эффекты могут также оказаться полезными для стимуляции естественных противоопухолевых механизмов защиты организма.
Эксперименты выполнены на 196 крысах линии Вистар в возрасте 2-2,5 месяцев и массой 140-200 г, выращенных в питомнике ГУ НИИ цитологии и генетики СО РАН (г. Новосибирск). Содержание крыс соответствовало требованиям Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (Страсбург, 1986).
В работе изучались влияние арбидола (этилового эфира 6-бром-5-гидрокси-1-метил-4-диметиламино-метил-2-фенилтиометилиндол-3-карбоновой кислоты гидрохлорид), противоопухолевых средств (цис-платин, доксорубицин, метотрексат) на структуру и функцию почек, а также эффективность арбидола в коррекции нефротоксического действия указанных противоопухолевых средств.
Животные помещались в индивидуальные клетки для сбора мочи. В качестве фоновых показателей, а также на 2-е и последующие четные сутки эксперимента измерялся суточный диурез, в моче определялась концентрация креатинина, общего белка, тиобарбитурат-реактивных продуктов (ТБРП), активность лактатдегидрогеназы (ЛДГ), у-глутамилтрансферазы (ГГТ), 1Ч-ацетил-3-В-глюкозаминидазы (НАГ). По окончании экспериментов в каждой из серий животные умерщвлялись путем декапитации согласно Правилам проведения работ с использованием экспериментальных животных (утверждены приказом Министерства здравоохранения СССР № 755 от 12 августа 1977 г.), в плазме животных определяли концентрацию креатинина, ТБРП, общего белка, рассчитывали скорость клубочковой фильтрации (СКФ), забирали образцы почек для гистологического изучения.
В первой серии экспериментов изучалось влияние арбидола на структуру и функцию почек крыс. Арбидол (ОАО «Фармстандарт», Россия) вводили в виде суспензии (дисперсная среда - изотонический раствор хлорида натрия) внутрижелудочно с помощью зонда в дозе 75 мг/кг каждые сутки в течение 14 суток. Расчет дозы производился с учетом максимальных терапевтических доз для человека путем межвидового переноса [17]. Группа животных первой серии экспериментов (группа арбидола) была разделена на 2 подгруппы по 14 крыс (7 самцов и 7 самок) в каждой: опытную, получавшую арбидол, и контрольную, получавшую эквивалентный объем изотонического раствора хлорида натрия.
Во второй и последующих сериях экспериментов изучалось действие противоопухолевых химиотерапевтических средств на почки крыс и неф-ропротекторные свойства арбидола в условиях применения цитостатиков. С целью моделирования нефротоксичности химиотерапевтических средств было сформировано 3 группы (соответственно числу исследуемых цитостатиков) по 56 животных. Каждая группа была разделена на 4 подгруппы: контрольную, опытную, превентивной коррекции, постоянной коррекции (по 14 животных - 7 самок и 7 самцов - в каждой группе). Животные опытных подгрупп получали:
Методы определения биохимических показателей мочи и плазмы
Концентрацию креатинина определяли псевдокинетическим колориметрическим методом по реакции Яффе при помощи диагностического набора (ООО «Витал Диагностике СПб»).
Метод основан на способности креатинина образовывать окрашенный комплекс с 2,4,6-тринитрофенолом (пикриновой кислотой) в щелочной среде. По сравнению с широко распространенным методом определения креатинина по конечной точке, основанным на аналогичном принципе, псевдокинетический метод позволяет нивелировать наличие примесей, окрашивающих образцы.
Для определения к 0,7 мл образца (мочи, разведенной в 50 раз биди-стиллированной водой, или плазмы крови) добавляли 3,5 мл рабочего реагента, содержащего пикриновую кислоту и гидроксид натрия. Спустя минуту считывали минутное изменение адсорбции пробы при длине волны 505 нм при длине оптического пути 1 см. Концентрацию креатинина рассчитывали, исходя из изменения адсорбции пробы при добавлении рабочего реагента к стандартному (калибровочному) раствору креатинина, и выражали в ммоль креатинина на 1 л мочи или плазмы (ммоль/л).
Полученные значения использовали для расчета активности ферментов мочи, выделения тиобарбитурат-реактивных продуктов с мочой и оценки СКФ.
ГГТ - фермент щеточной каймы эпителия проксимальных канальцев почек, в норме не фильтрующийся в клубочках, поэтому увеличение его активности в моче характеризует истинное поражение эпителиоцитов проксимальных канальцев [13, 20]. Благодаря поверхностной локализации относительно других ферментов и отсутствию снижения активности ингибиторами, содержащимися в моче, ГТТ может являться ранним маркером канальцевого повреждения [6].
Активность ГГТ определяли колориметрическим методом по конечной точке при помощи диагностического набора (ООО «Витал Диагностике СПб», Россия). Метод основан на колориметрическом определении концентрации 4-нитроанилина, образовавшегося в результате реакции, катализируемой ГГТ:
Для определения активности ГГТ к 0,05 мл мочи добавляли 0,5 мл рабочего реагента, содержащего субстраты реакции. Пробы инкубировали 15 минут при 37С, реакцию останавливали добавлением 1 мл раствора уксусной кислоты (85 г/л) и 2 мл бидистиллированной воды. Оптическую плотность 4-нитроанилина измеряли при длине волны 400 нм с длиной оптического пути 1 см против контрольной пробы. Контрольная проба содержит образец в эквивалентном объеме, введенный в смесь остальных реагентов после инкубации. Активность ГГТ определяли по калибровочному графику, построенному путем измерения оптической плотности рабочих растворов 4-нитроанилина. Активность фермента выражали в единицах активности U на 1 ммоль креатинина мочи (U/ммоль креатинина).
Повышение активности в моче лактатдегидрогеназы (ЛДГ) - цито-зольного фермента канальцевого эпителия - обусловлено явлениями цитолиза и может использоваться в качестве соответствующего маркера [15].
Активность ЛДГ определялась оптимизированным кинетическим методом, основанным на реакции окисления NADH в NAD+, при помощи диагностического набора (ООО «Витал Диагностике СПб», Россия) Для определения активности ЛДГ 0,02 мл образца смешивали с 1 мл рабочего реагента (буферный раствор, содержащий NADH) и через 1 минуту считывали минутное изменение экстинкции в течение 3 минут (длина волны - 340 нм, длина оптического пути - 1 см). Затем вычисляли среднее изменение экстинкции за 1 минуту и активность фермента, используя формулы производителя диагностического набора. Активность фермента выражали в единицах активности U на 1 ммоль креатинина мочи (U/ммоль креатинина).
Ы-ацетил-Р-Б-глюкозаминидаза (НАГ), по мнению ряда авторов [12], является наилучшим маркером поражения почек. Повышение активности НАГ мочи при патологических состояниях отражает скорее функциональные нарушения почек, чем нарушение клеточных структур нефрона [162].
Активность НАГ определяли колориметрически по конечной точке реакции ферментативного разложения 4-нитрофенил-]М-ацетил-Р-В-глюкозаминида по методике Лавреновой Т.П. [11].
Для этого 0,1 мл образца мочи, разведенной в 20 раз, смешивали с 0,1 мл 0,5 М цитратно-фосфатного буфера (рН 4,5), содержащего 7,5 мМ 4-нитрофенил-ТЧ-ацетил-р-О-глюкозаминида (Sigma-Aldrich, США) и инкубировали 30 минут при 37С. Реакцию останавливали добавлением 3 мл 0,1 М раствора карбоната натрия. Оптическую плотность образовавшегося 4-нитрофенола измеряли при 400 нм при длине оптического пути 1 см против контрольной пробы, для приготовления которой вместо образца мочи была взята бидистиллированная вода. Концентрацию 4-нитрофенола определяли по калибровочному графику, построенному путем измерения оптической плотности стандартных растворов 4-нитрофенола (Sigma-Aldrich, США). Активность фермента выражали в единицах активности U на 1 ммоль креатинина мочи (U/ммоль креатинина).
Концентрацию общего белка в моче определяли колориметрическим методом при помощи диагностического набора (ООО «Витал Диагностике СПб», Россия). Метод основан на способности белка образовывать окрашенный комплекс с красителем бромфеноловым синим в кислой среде (рНЗ,0).
Для определения смешивали 0,5 мл образца мочи с 2,5 мл рабочего реагента (цитратно-фосфатный буфер, содержащий бромфеноловый синий). Полученную смесь инкубировали 30 минут, затем измеряли оптическую плотность окрашенных комплексов при 620 нм с длиной оптического пути 1 см против контрольной пробы, для приготовления которой вместо образца была использована бидистиллированная вода в эквивалентном объеме. Концентрацию общего белка мочи определяли, исходя из оптической плотности продуктов инкубации рабочего раствора и раствора калибратора (альбумин 0,25 г/л) и выражали в граммах белка на литр образца (г/л).
Эффективность арбидола в коррекции нефротоксического действия доксорубицина
Результаты измерения активности НАГ в моче крыс группы доксоруби-цина приведены в табл. 17. В подгруппах животных, получавших препараты, активность фермента значимо повышается на 6-е сутки эксперимента (Р = 0,018, Р 0,001 иР = 0,003 соответственно для опытной подгруппы, подгрупп превентивной и постоянной коррекции в сравнении с контролем), в опытной подгруппе высокая ферментурия относительно контроля наблюдается до 18-х суток. В подгруппе превентивной коррекции нормализация показателя наблюдается уже на 16 сутки, в подгруппе постоянной коррекции - на 14-е. Следует отметить, что в подгруппе постоянной коррекции на 10-е сутки активность НАГ в моче ниже, чем в опытной подгруппе, но на 16-е сутки наблюдается повышение показателя (Р = 0,008 в сравнении с контролем), которое, однако, носит транзиторный характер.
Динамика активности ГГТ носит более скудный характер (табл. 18). Повышение активности фермента после однократного введения доксоруби-цина наблюдается на 8, 10 и 12 сутки (Р = 0,037, 0,023, 0,024 в сравнении с контрольной подгруппой). В подгруппе превентивной коррекции высокая ферментурия наблюдается лишь на 10-е сутки, в подгруппе постоянной коррекции значимое изменение показателя относительного контроля не наблюдается на протяжении всего эксперимента.
Активность ЛДГ в моче крыс опытной подгруппы значимо повышается относительно контроля на 4-е сутки (Р 0,001; табл. 19). В подгруппе превентивной коррекции происходит аналогичное, хотя и менее выраженное повышение (Р = 0,008 в сравнении с контролем, Р = 0,026 в сравнении с опытным показателем). У крыс обеих подгрупп нормализация показателя происходит на 18-е сутки. В подгруппе постоянной коррекции ферментурия значимо возрастает только на 6-е сутки (Р = 0,002 ) и нормализуется к 16-м суткам. Обращает на себя внимание то, что на 4-е, 6-е и 14-е сутки активность ЛДГ в моче крыс подгруппы постоянной коррекции меньше, чем таковая у крыс опытной подгруппы (Р = 0,007, 0,043 и 0,041 соответственно).
У крыс опытной подгруппы на 4-е сутки эксперимента наступает оли-гурия (Р 0,003), которая уже на 6-е сутки сменяется полиурией (Р 0,001), продолжающейся до 18-х суток включительно (табл. 20). В группе превентивной коррекции наблюдается аналогичная картина, отличающаяся отсутствием стадии олигурии. В группе постоянной коррекции стадия олигурии также отсутствует, а диурез не отличается от контрольных значений уже на 18-е сутки.
Олигурия у крыс опытной подгруппы на 4-е сутки сопровождается снижением суточной экскреции креатинина (Р = 0,036; табл. 21). Транзитор-ное снижение этого показателя наблюдается также на 6-е сутки у крыс группы превентивной коррекции и на 14-е - у крыс группы постоянной коррекции (Р = 0,048 и 0,005 соответственно по сравнению с контролем). Т.е. образом, изменения суточной экскреции креатинина у крыс группы доксоруби-цина не имеют выраженной динамики, характеризующейся какой-либо закономерностью . Однократное введение доксорубицина приводит к выраженной стойкой протеинурии, проявляющейся на 4-е сутки (Р 0,001), достигающей пика на 10 сутки (Р 0,001) и сохраняющейся до конца эксперимента (Р = 0,004 на 20-е сутки в сравнении с контролем; табл. 22). В коррекционных подгруппах наблюдается похожая закономерность, отличающаяся лишь более ранним приближением к контролю и менее выраженной протеинурией по сравнению с опытными показателями. Как видно из табл. 23, повышение удельной концентрации ТБРП в моче наблюдается только у крыс опытной подгруппы на 6-е и 8-е сутки (Р = 0,046 и 0,048 соответственно по сравнению с контролем). Несмотря на отсутствие выраженного повышения удельной концентрации ТБРП в моче крыс опытной подгруппы, при измерении плазменной концентрации ТБРП на 20 сутки эксперимента наблюдается значимое ее повышение по сравнению с контролем (Р 0,001; рис. 16). В подгруппе превентивной коррекции показатель также повышен (Р = 0,027), однако ниже, чем в опытной подгруппе (Р = 0,027). В подгруппе постоянной коррекции концентрация ТБРП в плазме значимо не отличается от контрольной. Измерения концентрации креатинина в плазме крови и расчет СКФ по клиренсу креатинина не выявили статистически значимых различий между изучаемыми подгруппами (рис. 17, 18). Выраженная протеинурия, наблюдаемая у крыс опытной подгруппы, по-видимому, привела к значимому снижению концентрации общего белка плазмы крови (Р = 0,011; рис. 19). Введение арбидола как в режиме превентивной, так и в режиме постоянной коррекции предотвратило развитие ги-попротеинемии. Гистологически в опытной подгруппе доксорубицина наблюдается грубая деформация почечного тельца с выраженной инфильтрацией сосудистого клубочка и паракапсулярным отложением белка. Эпителиоциты канальцев дистрофически изменены, некоторые из клеток слущены (рис. 20, а). В подгруппе превентивной коррекции значительные отличия от опытной подгруппы отсутствуют (рис. 20, б). В группе постоянной коррекции имеется менее выраженная деформация почечного тельца, однако инфильтрация клубочка и юкстагломерулярного пространства сохраняется. Патологические изменения канальцев представлены только дистрофией (рис. 20, в).
