Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 11
1.1. Токсические гепатиты 11
1.2. Механизм действия тетрахлорметана 13
1.3. Фитоадаптогены как средства неспецифического действия, обладающие гепатопротекторной активностью 17
Глава 2. Материалы и методы исследований 30
2.1. Экспериментальная оценка состояния физической выносливости после введения исследуемых препаратов и на фоне подострои интоксикации тетрахлорметаном 32
2.2.Определение некоторых энзимологических и биохимических показателей в сыворотке крови экспериментальных животных 34
2.3. Определение концентрации восстановленного глутатиона в печени экспериментальных животных 35
2.4. Определение концентрации продуктов ПОЛ в печени экспериментальных животных 35
2.5. Гистологическое и гистохимическое исследование печени экспериментальных животных 37
2.6. Иммуногистохимическое исследование печени мышей 37
2.7. Визуализация результатов 39
2.8. Статистическая обработка результатов 39
Глава 3 . Влияние препаратов женьшеня и элеутерококка на некоторые показатели состояния экспериментальных животных при подострои интоксикации тетрахлорметаном в условиях повышенной физической нагрузки 40
3.1. Влияние препаратов женьшеня и элеутерококка на продолжительность плавания мышей при подострои интоксикации тетрахлорметаном 40
3.2. Влияние препаратов женьшеня и элеутерококка на динамику массы тела и на относительную массу печени мышей при подострои интоксикации тетрахлорметаном на фоне повышенной физической нагрузки 44
3.3. Влияние препаратов женьшеня и элеутерококка на некоторые энзимологические и биохимические показатели сыворотки крови мышей при подострой интоксикации тетрахлорметаном на фоне повышенной физической нагрузки 49
3.4. Влияние препаратов женьшеня и элеутерококка на концентрацию восстановленного глутатиона и продуктов ПОЛ в ткани печени мышей при подострой интоксикации тетрахлорметаном на фоне повышенной физической нагрузки 52
Глава 4. Влияние препаратов женьшеня и элеутерококка на морфологические, гистохимические, иммуногистохимические показатели печени мышей при подострой интоксикации тетрахлорметаном в условиях повышенной физической нагрузки 60
4.1. Влияние препаратов женьшеня и элеутерококка на гистоморфоло гическую картину печени мышей 60
4.2. Влияние препаратов женьшеня и элеутерококка на ряд гистохимических показателей печени мышей 68
4.3. Иммуногистохимическое исследование печени мышей при подострой интоксикации тетрахлорметаном в условиях повышенной ФН
с использованием антител к NO-синтазе 2 и TNF-a 79
Глава 5. Обсуждение результатов 88
Выводы 103
Практические рекоммендации 104
Список литературы
- Фитоадаптогены как средства неспецифического действия, обладающие гепатопротекторной активностью
- Определение концентрации восстановленного глутатиона в печени экспериментальных животных
- Влияние препаратов женьшеня и элеутерококка на динамику массы тела и на относительную массу печени мышей при подострои интоксикации тетрахлорметаном на фоне повышенной физической нагрузки
- Влияние препаратов женьшеня и элеутерококка на ряд гистохимических показателей печени мышей
Фитоадаптогены как средства неспецифического действия, обладающие гепатопротекторной активностью
В результате нарушения целостности наружной мембраны гепатоцитов в плазме крови нарастает, а в печени снижается содержание аминотрансфераз (ала-нинаминотрансфераза, аспартатаминотрансфераза), индикаторов холестаза (щелочная фосфатаза, 5-нуклеозидазы, у-глутамилтранспептидазы, изоферментов лактатдегидрогеназы, альдолазы), что может приводить к поражению тканевых структур внутренних органов (Zhang Z.F. et. al., 2014).
Ряд литературных данных подтверждает, что важным свидетельством стимулирующего влияния CCL4 на процессы перекисного окисления в мембранах гепатоцитов является резкое возрастание образования промежуточных продуктов пероксидации - диеновых конъюгатов (ДК) и малонового диальдегида (МДА). Концентрация МДА прямо пропорциональна интенсивности процессов ПОЛ. Снижение уровня МДА и ДК под действием какого-либо исследуемого препарата позволяет судить о его ингибирующем влиянии на процессы перекисного окисления (ДынжиноваЕ.А., 2007; Al-Harbi N.O. et al, 2014).
Контроль свободнорадикальных реакций, протекающих в организме, осуществляется благодаря многоуровневой защитной системе, которая включает в себя ферментативные и неферментативные звенья. Восстановленный глутатион (ВГ) является составной частью как неферментативного звена антирадикальной системы, обезвреживая перекиси и гидроперекиси, которые являются источниками ОН- радикалов, так и ферментативного звена, выполняя функции кофактора глутатионпероксидазной/глутатионредуктазной системы, тем самым выполняя детоксикационную и антиоксидантную функции (Агарков А.А., 2009; Iskusnykh I.Y. et al, 2013; Senft A.P. et al., 2000). Также ВГ является потенциальным источником цистеина, принимает участие в биохимических превращениях витаминов С, Е, липоевой кислоты, которые сами по себе являются антиоксидантами и оказывают защитное действие в отношении гепатоцитов (Агарков, А.А. и др., 2008; Искусных, И.Ю., 2012; Минаева Л.В., 2007).
Обращает на себя внимание тот факт, что при интоксикации четыреххлори-стым углеродом, являющимся мощным индуктором свободнорадикальных реакций, происходит снижение содержания восстановленного глутатиона в тканях печени, что лишний раз подтверждает направленное повреждающее действие CCL4 на компоненты защитной системы тканей печени (Кулагин О.Н. и др., 2009; Shim J.-Y. et al, 2010; Teare J.P. et al., 1993; Williams A.T., Burk R.F., 1990).
Необходимо также обратить внимание на важный регулятор метаболизма, оксид азота (NO), который принимает участие в патогенезе многих заболеваний, в том числе и в патогенезе ССЬ4-индуцированного токсического гепатита (Близне-цоваГ.Н и др., 2005; Степанова Н.А., 2003; Al-Shabanah О. A. et al, 2000).
Оксид азота в гепатоцитах продуцируется преимущественно индуцибельной NO-синтазой (iNOS), индукция которой происходит в ответ на воспалительное действие многих цитокинов, синтез которых, в свою очередь, повышается при ге 16 патотоксическом воздействии тетрахлорметана (Висмонт Ф.И., Степанова Н.А., 2014; Тейлор Б.С. и др., 1998). Характер изменений детоксикационной функции печени при увеличении синтеза оксида азота неоднозначен.
Так, свободнорадикальная природа NO обуславливает двоякую роль, которую он играет в развитии патологических процессов. С одной стороны, оксид азота способен активировать каскад свободнорадикальных реакций, а с другой стороны ингибировать их. При этом его защитные свойства связаны с возможностью NO повышать активность антиоксидантных ферментов, предотвращать апоптоз и ослаблять токсикоз печени, вызываемые TNF-a, а также замедлять процессы ПОЛ, выступая в качестве своего рода поглотителя активных форм кислорода. В зависимости от множества факторов (природы, количества повреждающего агента и т.д.) оксид азота будет по-разному влиять на патогенез заболевания (Нарциссов Я.Р., Серая И.П., 2002; Шупик М.А., 2012; Ai G. et al., 2013; Cho Y.K. et al, 2009; Laskin J.D. et al., 2001; Minin E.A. et al., 2006).
Кроме того, повышение образования оксида азота при токсическом повреждении печени посредством расширения сосудов и гиперемии позволяет перераспределить пластические ресурсы и кислород для восстановления нарушенных функций, выполняя тем самым адаптационную (в данном случае регенераторную) функцию (Салей А.П. и др., 2009; Matei V. et al, 2008).
По данным ряда авторов, фактор некроза опухоли - а (TNF-а) также играет важную роль в развитии цитолитического действия CCL4 и оказывает влияние на продукцию оксида азота в клетках Купфера (макрофагов) и гепатоцитах. Ранее было доказано, что тетрахлорметан стимулирует выработку в печени как TNF-a, так и оксида азота (NO) (Bautista et al., 1991; Feder L.S., Laskin L.D., 1994; Tanaka N. et al, 1999; Tipoe, G.L et al, 2006). Однако, как показало исследование L.A. Mono и соав. (Morio L.A. et al., 2001), мыши с нокаутом по гену, который отвечает за биосинтез TNF-a и с блокадой рецептора TNFKl/p55 (через который опосредуются эффекты TNF-a), продемонстрировали меньшую чувствительность к гепато-токсическому действию тетрахлорметана, а подопытные животные с блокированной функцией NO-синтазы в печени (NOS 2) продемонстрировали больший гепа 17 тотоксический эффект CCL4 по сравнению с контрольными животными (wildype), что подтверждалось гистологическим исследованием тканей печени и уровнем АЛТ и ACT в сыворотки крови мышей.
Также было обнаружено, что оксид азота может влиять на выработку TNF-а, уменьшая его активность, при воздействии на печень различных токсических агентов, в том числе и CCL4 (Гарбузеко Д.В., 2008; Bohlinger I. et al., 1995; Flor-quin S. et al, 1997; MacMicking J.D. et al, 1997). В свою очередь и фактор некроза опухоли в ряде случаев контролирует активность NO-синтазы в печени, что было продемонстрировано на мышах с нокаутом по гену, который отвечает за биосинтез TNF-a. У таких животных после введения четыреххлористого углерода задерживалась экспрессия NOS 2 по сравнению с контрольной группой. Хотя эти результаты не однозначны и существуют данные, демонстрирующие, что после введения тетрахлорметана трансгенным мышам с блокадой рецептора TNFKl/p55 активность NO-синтазы в печени сходны с таковой у контрольных животных (Jones В.Е., CzajaM.J., 1998;Yap G.S. et al, 1998).
Таким образом, проведя анализ доступной литературы, можно сделать вывод о том, что четыреххлористый углерод обладает сложным патогенетическим механизмом гепатотоксического действия, затрагивающим многие звенья защитных систем печени. Несмотря на достаточно большое количество публикаций по этой теме, многие вопросы остаются недостаточно изученными.
Одним из путей решения актуальной задачи современной медицины - разработки действенных и безопасных методов профилактики и лечения токсических поражений печени, является использование лекарственных средств, защищающих печень от воздействия повреждающих факторов и ускоряющих ее восстановление после него - гепатопротекторных препаратов (Корсун В.Ф. и др., 2005; Лебедев В.А.,2014). По современным представлениям фармакологический эффект гепатопро-текторного средства может реализовываться с помощью следующих механизмов (Саратиков А.С. и др., 2005): - посредством его антиоксидантного действия - витамины (ретинол, а токоферол, пантотеновая кислота и др.), средства на основе растительных поли фенолов (легалон, силибор, фламин и т.д.), тиолы (цистеин, N - ацетилцистеин); - засчет способствования репарации мембран гепатоцитов - препараты фос-фолипидов (эссенциале, липостабил); - через стимуляцию регенерации паренхимы печени (метионин, кальция пангамат, цитидин, оротовая кислота). Для профилактики и лечения печеночных поражений в настоящее время рекомендуются к использованию множество лекарственных средств, в том числе и растительного происхождения. Благодаря своему гепатопротекторному действию они предотвращают и/или нормализуютфункциональные нарушения функционирования печени и способствуют ее структурной сохранности, обладая при этом высокой безопасностью даже при длительном систематическом применении (Аб-дурахманов Т.М. и др., 1997; Венгеровский А.И. и др., 2004).
В ряду растительных средств, с выраженным гепатопротекторным действием, особое место занимают лекарственные препараты, повышающие неспецифическую резистентность и адаптационные возможности организма - фитоадапто-гены (экстракты родиолы розовой, элеутерококка, женьшеня, аралии, лимонника и др.) (Лазарев Н.В., 1959).
Определение концентрации восстановленного глутатиона в печени экспериментальных животных
Показатель динамики массы является еще одним важным интегральным показателем, характеризующим состояние здоровья экспериментальных животных (Валика В.В. и др., 2014; Козин СВ., 1998; Huang L.Z. et al, 2011; Zhang Y. et al, 2006). В связи с этим, в ходе эксперимента по изучению гепатопротекторного действия препаратов женьшеня и элеутерококка при подострой интоксикации тетрахлорметаном мы проводили еженедельное взвешивание мышей.
Подопытных животных взвешивали перед началом эксперимента, и эта масса была принята за 100 %, в дальнейшем динамика массы мышей выражалась в процентах от первоначальной. Последующие взвешивания проводили еженедельно, в определенный день недели и время суток (см. таблицу 3, рис. 2).
В группе «Пассивный Контроль» на протяжении всего эксперимента наблюдалась стабильная прибавка в массе мышей. На последней неделе эксперимента при взвешивании было выявлено, что за 5 недель животные в условиях относительного функционального покоя прибавили в массе в среднем на 27 % от первоначальной. Однако у животных группы, находящейся в условиях повышенной ФН («Пассивный Контроль (ФН)»), наблюдалась устойчивая тенденция к замедлению прироста массы тела и к 4-й неделе это показатель имел достоверное отличие (р 0,05) от мышей, не получавших ФН.
Введение тетрахлорметана привело к достоверному (р 0,05) снижению массы тела мышей, начиная с первой недели введения гепатотоксина. Отрицательная динамика данного показателя сохранялась в течение последующих двух недель эксперимента. Необходимо отметить что, сочетание ФН с интоксикацией тетрахлорметаном достоверно (р 0,05) вело к более выраженному снижению массы экспериментальных животных, достигая к концу эксперимента 87,62±1,02 % и 90,28±0,80 % для групп «Активный Контроль (ССЬ4+ФН) и «Активный Контроль (CCL4) соответственно. Таблица 3. Влияние препаратов женьшеня и элеутерококка на динамику массы мышей при подострой интоксикации CCL4 в условиях повышенной физической нагрузки. Время от начала эксперимента, недели Масса животных в % от исходного значения, М±т, п=12. достоверное отличие от групп «Активный Контроль (ССЬ4+ФН)» и «Активный Контроль (CCL4 ) (р 0,05); # - достоверное отличие от группы «Пассивный Контроль (ФН)» (р 0,05); ## - достоверное отличие от группы «Активный Контроль (ССЬ4+ФН) (р 0,05); - жирным шрифтом выделены результаты, полученные на фоне введения CCL4. 130 Пассивный Контроль
Примечание: результаты с 3-й по 5-ю неделю получены на фоне введения CCL4. Ежедневное введение как изучаемых препаратов (настойки женьшеня и экстракта элеутерококка), так и препарата сравнения (карсил), хотя и не полностью, но в значительной мере, предупреждало снижение массы тела мышей при интоксикации CCL4 на фоне повышенной ФН, причем и элеутерококк, и женьшень по этому действию не уступали препарату сравнения - карсилу (97,40%, 96,87% и 99,50% для групп мышей, получавших женьшень, элеутерококк и карсил соответственно, к 5-й неделе эксперимента).
Одним из важнейших показателей состояния гепатобилиарной системы при экспериментальных исследованиях на моделях печеночной патологии является относительная масса печени подопытных животных (Венгеровский А.И. и др., 2012).
Забор печени и ее взвешивание проводились сразу после выведения мышей из опыта на 36-е сутки эксперимента. Относительная масса печени рассчитывалась как отношение массы печени к массе тела мыши, в процентах.
В данном эксперименте значимого влияния ФН в виде еженедельного плавания до полного утомления в течение 5-ти недель на изучаемый показатель выявлено не было: различий в относительной массе печени мышей групп «Пассивный Контроль и «Пассивный Контроль (ФН)» не наблюдалось (см. таблицу 4).
Подострая интоксикация четыреххлористым углеродом вызывала у мышей групп «Активный Контроль (CCL4)» и «Активный Контроль (ССЬ4+ФН)» достоверное (р 0,05) повышение относительной массы печени по сравнению с группами «Пассивный Контроль (ФН)» и «Пассивный Контроль» почти в 2 раза, что обусловлено не только направленным токсическим действием CCL4 на печень, но и его отрицательным влиянием на массу тела экспериментальных животных (см. таблицу 4). При этом наблюдалось достоверное (р 0,05) увеличение относительной массы печени мышей, получавших CCL4 на фоне повышенной ФН, по сравнению с группой «Активный Контроль (CCL4) , находившихся в условиях относительного функционального покоя, что свидетельствует о выраженной тенденции повышенной ФН потенцировать действие гепатотоксина CCL4. Таблица 4.
Хотя применение протекторных средств (настойки женьшеня, экстракта элеутерококка и карсила) полностью не предупреждало повышение относительной массы печени, но значительно и достоверно (р 0,05) снижало его. Аналогичное действие продемонстрировал и препарат сравнения - карсил: в группах животных «Женьшень», «Элеутерококк» не было отмечено достоверных отличий данного показателя от его значений в группе «Карсил».
Таким образом, на основании полученных экспериментальных данных можно сделать вывод о том, что исследуемые препараты женьшеня и элеутерококка оказали положительное влияние как на динамику массы тела, так и на относительную массу печени мышей при подострой интоксикации тетрахлормета-ном в условиях интенсивной физической нагрузки. 3.3. Влияние препаратов женьшеня и элеутерококка на некоторые энзимологические и биохимические показатели сыворотки крови экспериментальных животных при подострой интоксикации тетрахлорметаном на фоне повышенной ФН
На 36-е сутки от начала эксперимента по изучению гепатопротекторных свойств изучаемых препаратов женьшеня и элеутерококка при подострой интоксикации четыреххлористым углеродом в условиях интенсивной физической нагрузки нами было проведено исследование сыворотки крови мышей по некоторым энзимологическим и биохимическим показателям.
В ходе эксперимента было установлено, что у животных, не получавших-тетрахлорметан, еженедельное плавание до полного утомления, приводило к достоверному (р 0,05) повышению активности ЛДГ (218,9±7,40 ед./л и 260,3±12,18 ед./л для групп «Пассивный Контроль» и «Пассивный Контроль (ФН)» соответственно). По показателям АЛТ и ACT наблюдалась лишь подобная тенденция (р 0,05) (см. таблицу 5). Влияние повышенной ФН на остальные изучаемые показатели выявлено не было.
Подострая интоксикация экспериментальных животных четыреххлористым углеродом на фоне относительного функционального покоя привела к значительному повышению как энзимологических, так и биохимических показателей сыворотки крови мышей по сравнению с группой, не получавшей гепатотоксин: АЛТ в 28 раз, ACT в 9 раз, ЩФ в 4 раза, ЛДГ в 2,5 раза, общего билирубина в 4 раза, холестерина более чем в 2 раза.
Влияние препаратов женьшеня и элеутерококка на динамику массы тела и на относительную массу печени мышей при подострои интоксикации тетрахлорметаном на фоне повышенной физической нагрузки
Введение изучаемых протекторных препаратов достоверно предупреждало снижение массы тела мышей на фоне интоксикации тетрахлорметаном, причем оба изученных фитоадаптогена не отличались от препарата сравнения - карсилу (96,8%, 97,40% и 99,50% для групп «Элеутерококк», «Женьшень», «Карсил» соответственно).
Наряду с показателем динамики массы тела мы оценили один из важнейших показателей состояния гепатобилиарной системы экспериментальных животных -относительную массу печени мышей (Венгеровский А.И. и др., 2012).
Направленное токсическое действие тетрахлорметана на печень и его отрицательное влияние на массу тела экспериментальных животных привело к практически двукратному повышению относительной массы печени мышей по сравнению с группами, не получавшими гепатотоксин («Пассивный Контроль» и «Пассивный Контроль (ФН)»).
При этом нами впервые экспериментально было показано, что сочетание ФН с гепатотоксином в группе «Активный Контроль (ССЬ4+ФН)» приводит к более выраженной отрицательной динамике изучаемого показателя по сравнению с группой ««Активный Контроль (CCL4) , не получавшей повышенную нагрузку.
Во всех группах, получавших протекторные препараты («Женьшень», «Элеутерококк», «Карсил») в условиях данного эксперимента, наблюдалось уменьшение ССЬ4-индуцированной гипертрофии печени.
В рамках изучения ряда энзимологических и биохимических показателей сыворотки крови мышей было обнаружено, что повышенная ФН влияет на уровень активности ЛДГ, биомаркера повреждения тканей, что является свидетельством наибольшей чувствительности данного показателя к воздействию ФН. Так активность ЛДГ в группах, не получавших физическую нагрузку («Пассивный Контроль» и «Активный Контроль (CCL4)»), составила 218,9 ед./л и 536,0 ед./л соответственно и достоверно (р 0,05) отличалась от таковой у групп, получавших ФН («Пассивный Контроль (ФН)» и «Активный Контроль (ССЬ4+ФН)») - 260,3 ед./л и 612,4 ед./л соответственно. Также наблюдалась тенденция к увеличению активности ферментов АЛТ (55,4 ед./л и 51,1 ед./л соответственно) и ACT (147,5 ед./л и 136,3 ед./л соответственно) у группы мышей, получавшей повышенную ФН («Пассивный Контроль (ФН)»), по сравнению с группой, находившейся в условиях относительного функционального покоя («Пассивный Контроль»).
Одним из наиболее специфичных признаков, свидетельствующих о поражении печени различными токсическими агентами, является повышение активности АЛТ (Саратиков, А.С. и др., 2001; Stephens, С. et al, 2014; McCuskey, R.S. et al, 2010).
Нами было продемонстрировано, что подострая интоксикация тетрахлорме-таном приводила к резкому повышению активностей не только АЛТ, но и всех остальных изучаемых показателей (ACT, ЩФ, ЛДГ, общий билирубин, холестерин). Причем в группе «Активный Контроль (ССЬ4+ФН)», получавшей CCL4 на фоне повышенной ФН, активности АЛТ, ACT и ЛДГ достоверно выше по сравнению с группой «Активный Контроль (CCL4) , что свидетельствует о значительно более выраженных нарушениях функций печени.
Применение фитоадаптогенов (настойки женьшеня и экстракта элеутерококка) при сочетанном воздействии подострой интоксикации CCL4 и повышенной ФН продемонстрировало выраженное защитное действие в отношении изучаемых энзимологических и биохимических показателей сыворотки крови мышей, что коррелирует с имеющимися данными научной литературы (Крендаль Ф.П. и др., 2007; Bak, M.J. et al., 2012; Murthy, H.N. et al, 2014; Shim, J.-Y. et al, 2010)
Как известно, значимым звеном в гепатотоксическом механизме действия тетрахлорметана является активация процессов ПОЛ, что приводит к нарушению функционирования различных биохимических систем и негативно сказывается на морфологическом и функциональном состоянии печени (Агарков, А.А., 2009; Alhassan, A.J. et al, 2009; Khan, R.A. et al., 2012; Rezende, T.P. et al, 2014).
В ходе эксперимента нами было выявлено, что интоксикация CCL4 вызывала активацию процессов ПОЛ и снижение активности эндогенной антиоксидант 92 ной системы организма, что проявлялось в изменении уровня таких показателей как: восстановленный глутатион, малоновый диальдегид, диеновые конъюгаты.
При введении мышам тетрахлорметана наблюдалось резкое уменьшение уровня ВГ в ткани печени, который является одним из компонентов защитной ан-тиоксидантной системы организма. Его концентрация в группах, получавших тет-рахлорметан, снижалась более чем в 2 раза, что может быть вызвано расходованием ВГ на обезвреживание свободных радикалов, образующихся в процессе метаболизма гепатотоксина, наиболее активно протекающее в ткани печени (Iskusnykh I.Y. et al, 2013). При этом отмечался значительный рост ДК и МДА, являющихся продуктами ПОЛ.
Необходимо обратить внимание на ряд литературных данных, свидетельствуют о том, что экстремальные факторы различной природы, в том числе, повышенная физическая нагрузка, увеличивают интенсивность протекания свобод-норадикальных процессов в ткани печени (Kan, N.-W. et al., 2013; Mikami, Т et al., 2004; Venditti, P. et al, 1999). Это нашло подтверждение и в настоящем исследовании. Еженедельное плавание мышей до полного утомления с грузом 7 % от массы тела животного (группа «Пассивный Контроль (ФН)») приводило к достоверному повышению концентраций МДА и ДК в ткани печени по сравнению с животными, содержавшимися в условиях относительного функционального покоя («Пассивный Контроль»). При этом наблюдалась тенденция к снижению содержания ВГ в ткани печени мышей в условиях повышенной ФН.
Сочетанное воздействие на печень тетрахлорметана и повышенной ФН, как и следовало ожидать, приводило к более выраженным повреждениям печени, в связи с чем наблюдалось предельное истощение восстановленного глутатиона и значительный рост продуктов ПОЛ в ткани печени экспериментальных животных (1,77±0,18 мкмоль/г ткани и 2,35±0,14 мкмоль/г ткани для групп «Активный Контроль (ССЬ4+ФН)» и «Активный Контроль (ССЬ4)»соответственно).
Влияние препаратов женьшеня и элеутерококка на ряд гистохимических показателей печени мышей
При изучении ткани печени контрольных животных, получавших гепато-токсин CCL4 на фоне относительного функционального покоя (группа «Активный Контроль (CCL4) ) было обнаружено, что в данном случае в участках дегликогенизации гепатоциты центральной зоны печеночной дольки имели зернистую, сильно вакуолизированную цитоплазму. В то время как периферические гепатоциты содержали значительно больше гликогена. Четко прослеживалась тенденция постепенного изменения интенсивности окрашивания печеночных долек от бледно-розового в центральных участках, соответствующих зоне максимального повреждения, до ярко-малинового в периферических, наиболее сохранных участках печеночной паренхимы (см. рисунок 16 а,б).На фоне повышенной физической нагрузки, интоксикация CCL4 (группа «Активный Контроль (ССЬ4+ФН)») приводила к более выраженной, по сравнению с группой «Активный Контроль (CCL4) , дезорганизации цитоплазмы и снижению содержания в ней гликогена. При этом на препаратах печени просматривались обширные зоны дегликогенизации, которые характеризовались бледно-розовом окрашиванием при проведении ШИК-реакции (см. рисунок 17 а,б).
Гистоморфологическая картина печени животных, получавших женьшень, при подострой интоксикации CCL4 на фоне ФН (группа «Женьшень»); (ШИК-реакция). а - увеличение 100, б - увеличение 200. Изучение микропрепаратов ткани печени мышей, получавших карсил при подострой интоксикации CCL4 на фоне интенсивной ФН (группа «Карсил»), дало следующие результаты: в ткани печени по-прежнему присутствуют участки повреждения паренхимы, однако выраженной вакуолизации (как в случае контрольных групп) не наблюдалось; цитоплазма гепатоцитов в целом гомогенна и присутствуют зоны с достаточно высоким содержанием гликогена (ярко-розовое окрашивание).
Необходимо отметить тот факт, что в центральных зонах печеночных долек, наиболее подверженных гепатотоксическому действию тетрахлорметана, присутствуют островки сохранной печеночной ткани, которые имеют яркое ШИК-позитивное окрашивание за счет присутствия в них большого количества гликогена (см. рисунок 18 а,б).
У подопытных животных, получавших элеутерококк на фоне введения ге-патотоксина при повышенной ФН (группа «Элеутерококк»), повреждения печеночной ткани достаточно выраженные - с зонами дезорганизации, «комковатости», цитоплазмы гепатоцитов и участками утраты гликогена, что обусловлено комплексным гепатотоксическим воздействием CCL4 и ФН. Как и у мышей, получавших препарат сравнения - карсил, у данной экспериментальной группы наблюдались зоны с сохранной паренхимой, насыщенной гликогеновыми включениями, расположенными преимущественно в периферических отделах долек (см. рисунок 19 а,б).
При изучении препаратов печени мышей, получавших женьшень при интоксикации CCL4 на фоне повышенной ФН, было отмечено характерное нарастание дегенеративных изменений гепатоцитов от периферии к центральным участкам печеночной паренхимы, и соответствующее снижение интенсивности малинового окрашивания гликогеновых включений (см. рисунок 20 а, б). Однако по сравнению с контрольными группами картина печени мышей, получавших женьшень, демонстрировала достоверные гликогенсберегающие и гепатопротекторые свойства. Таким образом, во всех группах экспериментальных животных, получавших CCL4 на фоне повышенной ФН, отмечалась неравномерная утрата гликогена гепа-тоцитами, преимущественно в центральной зоне печеночной дольки. Применение исследуемых фитоадаптогенов (элеутерококка и женьшеня) и препарата сравнения - карсила в значительной степени способствовало сохранению гликогена в гепатоцитах, а также уменьшению поврежденных участков печеночной ткани, что подтверждалось изменением интенсивности малинового окрашивания.
Для визуализации общего белка, содержащегося в ткани печени экспериментальных животных, был использован метод окрашивания сулемовым раствором бромфенолового синего (Елисеев В.Г. и др., 1967; Hornatowska J., 2005). Данная методика позволила оценить степень белковой дистрофии ткани печени при введении исследуемых фитоадаптогенов (элеутерококка и женьшеня) и препарата сравнения - карсила, при подострои интоксикации тетрахлорметаном на фоне интенсивной ФН. Оценить степень изменения содержания суммарного белка позволяет интенсивность окраски бромфеноловым синим, которая прямо коррелирует с количеством белка в тканях (чем больше белка, тем интенсивнее окрашивание).
В группе «Пассивный Контроль» наблюдалось достаточно однородное насыщенно-синее окрашивание, что свидетельствовало о сохранности печеночной паренхимы и высоком содержании в ней белка. Рис. 21. Гистоморфологическая картина печени животных, получавших ФН (группа «Пассивный Контроль (ФН)»); (окрашивание бромфеноловым синим); увеличение 200.
Гистохимическая картина печени мышей группы «Пассивный Контроль (ФН)» не имела достоверных отличий от таковой в группе «Пассивный Контроль» (см. рисунок 21).
Изучение по этому показателю ткани печени животных групп «Активный Контроль (ССЬ4+ФН) и «Активный Контроль (CCL4)» выявило существенное негативное влияние подострой интоксикации тетрахлорметаном на гистохимическую картину микропрепаратов печени мышей: наблюдалась обширная вакуолизация печеночной паренхимы, а также низкое содержание белка в некротизиро-ванных перипортальных зонах (бледно-голубое окрашивание). При этом не было отмечено достоверной разницы между мышами, получавшими CCL4 в условиях относительного функционального покоя (группа «Активный Контроль (CCL4)»), и животными, подвергнувшимися сочетанному воздействию гепатотоксина и повышенной ФН (группа «Активный Контроль (ССЬ4+ФН)») (см. рисунок 22).
