Содержание к диссертации
Введение
1. Таргетная фармакотерапия в онкологии (обзор литературы) 11
1.1. Способы таргетной доставки лекарственных веществ 12
1.2. Магнитоуправляемый транспорт фармпрепаратов: современ ное состояние вопроса 21
1.3. Использование магнитных наночастиц в медицине: техноло гии, проблемы, перспективы 24
1.4. Липосомы как средства селективной доставки препаратов
2. Материалы и методы исследования 42
2.1. Оборудование 42
2.2. Препараты и реактивы 43
2.3. Методика получения магнитоуправляемых липосом с доксо-рубицином 44
2.4. Характеристика экспериментальных животных 48
2.5. Методика проведения магнитоуправляемого транспорта док-сорубицина 48
2.6. Методика исследования фармакокинетики доксорубицина 49
2.7. Методика исследования острой токсичности 51
2.8. Исследование гематологических и биохимических показателей 52
2.9. Методика оценка исследования эффективности противоопухолевой химиотерапии 53
2.10. Статистический анализ 54
3. Фармакокинетика и тканевое распределение доксорубицина при раз личных методах его введения 55
3.1. Системная кинетика 56
3.2. Тканевое распределение 58
4. Сравнительное исследование острой токсичности различных лекар ственных форм доксорубицина 72
4.1. Летальность экспериментальных животных на фоне введения различных лекарственных форм доксорубицина 73
4.2. Оценка массы тела и пищевые реакции 80
4.3. Макроскопические изменения во внутренних органах 85
5. Исследование эффективности противоопухолевой химиотерапии с помощью магнитных липосом с доксорубицином 97
5.1. Эффективность противоопухолевой химиотерапии . 98
5.2. Побочные и токсические эффекты химиотерапии 102
5.3. Летальность и патоморфологические изменения во внутренних органах 108
Заключение
Выводы 122
Практические рекомендации 123
Список использованных источников 124
- Магнитоуправляемый транспорт фармпрепаратов: современ ное состояние вопроса
- Методика получения магнитоуправляемых липосом с доксо-рубицином
- Методика оценка исследования эффективности противоопухолевой химиотерапии
- Побочные и токсические эффекты химиотерапии
Магнитоуправляемый транспорт фармпрепаратов: современ ное состояние вопроса
Доставка лекарственных препаратов с помощью векторов представляет собой комплекс химиопрепарата со специфическим носителем, который избирательно накапливается в опухолевой ткани. В качестве носителей веществ могут быть использованы молекулярные векторы и корпускулярные носители, которые различны и по природе, и по механизмам взаимодействия с клеткой.
Молекулярные векторы- моноклональные антитела, гормоны, онкофе-тальные белки, «троянские» пептиды представляют собой биологические молекулы, вляющиеся естественными лигандами рецепторов мембраны клеток. Они обуславливают высокую избирательность за счет рецептор-опосредованного взаимодействия. Использование данных комплексов увеличивает противоопухолевую активность многих препаратов по отношению к свободным формам лекарственных веществ, проникающих через мембрану клеток путем диффузии (Bidwell G.L., Davis A.N., Fokt I.et аl., 2006; Dubi-kovskaya E.A., Thorne S.H., Pillow T.H. et аl.,2008).
Конъюгация лекарственного вещества с белковым вектором проводится следующими способами: 1) путем химической сшивки (дисульфидная, тиоэфирная связь); 2) с использованием специальных сшивающих молекул линкеров(например, полиэтиленгликоль (polyethylene glycol – ПЭГ), поли пептиды, комплекс «авидин-биотин».
Основной особенностью конъюгации является большой выход реакции и способность внутриклеточного расщепления (Agarwal A., Gupta U., Asthana A. et аl.,2009; Suzawa T., Nagamura S., Saito H. et al., 2002). К примеру, полипептидный линкер расщепляется под влиянием клеточных протеаз. В тоже время клеточные ферменты не воздействуют на тиоэфирные, диимидные, ди-сульфидные связи, разрушение комплекса обусловлено длиной линкера, например, использованием ПЭГ, молекулярная масса которого 2 – 3 кДа. Изучены и запатентованы конъюгаты практически всех цитостатических препаратов (противоопухолевые антибиотики, антиметаболиты) (Paranjpe P.V., Chen Y., Kholodovych V.et al.,2004; Xiong X.B., Ma Z., Lai R.et al., 2010).
Учитывая высокую экспрессию рецепторов некоторых опухолей (рак молочной железы, легкого, головного мозга) к трансферрину (TfrR) (Cheng Y., Zak O., Aisen P.et al.,2004; Qian Z.M., H.Li, Sun H.et al., 2002), его начали использовать в качестве направленной доставки лекарственных веществ. Данный вектор конъюгирован со следующими противораковыми препаратами- доксорубицин, даунорубицин и белковыми токсинами- СRM107, рицин (Qian Z.M., Li H., Sun H.et al., 2002). После взаимодействия TfrR с рецептором на клеточной мембране, образуя комплекс «белок-препарат», который разрушается внутриклеточно, цитостатик освобождается и осуществляет свой основной эффект. Как уже говорилось, векторами могут быть и пептидные гормоны, к которым на мембране клеток существуют рецепторы. Например, для рецепторов пептида гонадолиберина (Gonadotropin-releasing hormone - LHRH) выявлена повышенная экспрессия в клетках рака молочной железы, яичников и простаты. Следовательно, LHRH используется в качестве векторной доставки лекарств к данным неоплазиям. Исследователями в эксперименте показана высокая противоопухолевая активность конъюгата, представленного гона-долиберином, ПЭГ и камптомицином. Отмечена нетоксичность данного соединения, а так же не наблюдалось влияния на репродуктивные функции животных, связанного с высокой её концентрацией (Grundker C., Huschmand A., Emons G., 2005; S.S.Dharap, Y.Wang, P.Chandna et аl.,2005).
Моноклональные антитела (monoclonal antibody - mAB) ещё более распространены в качестве векторов лекарственных препаратов. Они способны подстраиваться к различным рецепторам к мембранам клеток (TrfR, рецептор фактора роста эпителия (Epidermal growth factor receptor – EGFR), васкуляр-ный эндотелиальный фактор роста (Vascular endothelial growth factor - VEGF), CD-рецепторы) (Cheng Y., Zak O., Aisen P.et al., 2004; Sharkey R.M., Golden-berg D.M., 2006). МAB-основа онковакцин. Существуют сведения об использовании радиомеченных mAB, имеющих в составе радионуклиды, которые и вызывают гибель клеток (Никитин Е.А., Глазкова О.И., 2007; Sharkey R.M., Goldenberg D.M., 2006). Применяют так же конъюгаты mAB с цитостатиками с помощью различных линкеров (авидин–биотин, ПЭГ) (Sharkey R.M., Gol-denberg D.M., 2006), что зачастую оказывается эффективнее, чем использование векторов, представленных естественными лигандами. К примеру, транс-ферин не может применяться при лечении опухолей мозга, так как ограниченно проникает через гематоэнцефалический барьер. При этом, антитела к трансферриновому рецептору легкоспособны проникать в ткань мозга (Moos T., Morgan E.H., 2001).
Использование в практике в качестве векторов моноклональных антител показывает хорошие результаты при лечении В-клеточной неходжкин-14
ской лимфомы (мабтера, ритуксимаб). Гарцептин (тразустумаб) может быть применен при раке молочной железы, поджелудочной железы, мочевого пузыря, легкого, для которых характерна гиперэкспрессия HER2. В 2004 г. авторами, как метод лечения поздних стадий колоректального рака, был предложен FDA препарат цетуксимаб – моноклональное антитело к рецептору эпидермального фактора роста человека (EGFR, HER1) (Никитин Е.А., Глаз-кова О.И., 2007). При этом отмечена и отрицательная черта использования моноклональных антител к раковоспецифическим антигенам, что связано с развитием различных иммунных реакций (Sharkey R.M., Goldenberg D.M., 2006).
В качестве молекулярных векторов для доставки лекарственных веществ в раковые клетки могут быть применены и онкофетальные белки, основным преимуществом которых является отсутствие иммуногенных свойств, высокая тропность к рецепторам и высокий уровень экспрессии рецепторов на онкоклетках. Примером является -фетопротеин (-FP)- гликоп-рпотеин (69 кДа), который близок по структуре к сывороточному альбумину человека, который определяется в эмбрионе млекопитающих и отсутствует у взрослого здорового человека. Появляется в крови взрослых особей при раке печени и репродуктивных органов (Grundker C., Huschmand A., Emons G.,2005). Конъюгаты -FP с различными цитотостатиками (доксорубицин, карминомицин) оказывают выраженную противоопухолевую активность (Fukuya T., Honda H., Maeda T. et al., 1995). В доклинических исследованиях показано снижение опухолевого роста и значительное повышение продолжительности жизни исследуемых животных (Li M., Liu X., Zhou S. et al.,2005; Северин Е.С., Родина А.В.,2006).
Методика получения магнитоуправляемых липосом с доксо-рубицином
Коллоидный магнетит на основе оксида железа, стабилизированного олеинатом натрия, синтезировали методом соосаждения (реакция Элмора) (Байбуртский Ф.С., 2002). Соли сульфата железа (II) и хлорида железа (III) растворяли в очищенной деионизированной воде и соединяли в базовый раствор, затем быстро приливали раствор аммиака при интенсивном перемешивании. Осадок многократно декантировали до значения рН 8,2-9,0. Значение рН контролировали рН-метром (Анион 4100, Россия). В фарфоровой чашке к осадку магнетита добавляли олеинат натрия, нагревали до 90-95С в течение 15-20 мин. до визуального формирования однородной маслянистой жидкости. Затем приливали дистиллированную воду и нагревали до 100С в течение 10 минут при перемешивании. После охлаждения магнитная жидкость двукратно фильтровали через фильтровальную бумагу. Для дальнейшего использования и характеристики готовая магнитная жидкость в стеклянной таре помещалась на хранение при комнатной температуре.
Коллоидный раствор магнетита имел следующие характеристики: средний диаметр частиц 13,5±4,1 нм, концентрация магнетита в пересчете на Fe3O4 2,76 мг/л. 2.3.2. Получение магнитных липосом
Липосомы получали методом обращения фаз. Для этого готовили ли-пидную дисперсию следующего состава (на 20 мл): Фосфатидилхолин (PC) - 55,16 мг Холестерин (Chol) - 4,84мг Сумма липидов - 60 мг Доксорубицин - 8 мг Молярное соотношение липидов: PC:Chol=9:1,5. Весовое соотношение препарат: суммарные липиды - 0,13:1. Все манипуляции с липидами и коллоидным магнетитом выполняли в атмосфере азота.
Каждую из двух навесок – PC и Chol – растворяли в 10 мл трихлор-метана. Растворы липидов и холестерина в трихлорметане переносили в круглодонную колбу вместимостью 1000 мл и упаривали на роторном испарителе (Heidolph Laborotta eco 4000, Германия) под вакуумом при температуре 32-34 С до образования липидной пленки. Пленку сушили при 50 С под вакуумом в течение 40-50 мин. Далее липидную пленку гидратировали смесью коллоидного магнетита (соотношение липиды: магнетит 1:0,14 по массе) и водного раствора доксорубицина (соотношение 1:1 по объему). Гидратация проводилась в течение 30 мин при 40С и постоянном перемешивании. Далее образец облучали ультразвуком в УЗ-ванне Сапфир-1,3, Россия (25 кГц , 70 Вт) до образования суспензии магнитных липосом. Затем для осаждения не-инкапсулированных магнитных наночастиц к суспензии добавляли 0,9 % раствор NaCl (соотношение 1:1 по объему растворов) после чего проводили центрифугирование при 1000 g в течение 10 мин; собирали супернатант, а осадок отбрасывали.
В дальнейшем липосомы подвергались трехкратной экструзии через поликарбонатные уменьшающимся размером пор (400, 200 и 100 нм) с помощью ручного мини-экструдера Avanti Mini-Extruder (Avanti Polar Lipids, Inc., США). 2.3.3. Оценка свойств и контроль качества магнитных липосом
Перед формированием липосом, синтезированная магнитная жидкость стандартизировалась по содержанию магнетита и среднему диаметру частиц. Средний диаметр ферромагнитных наночастиц по результатам измерений методом динамического светорассеивания составлял 13,5±4,1 нм (рис 2.1).
Качество и фармацевтические свойства полученной суспензии липо-сом оценивали по нескольким параметрам: размерные характеристики (средний размер, ширина распределения); стабильность магнитных липосом; концентрация включенного магнетита, концентрация доксорубицина (степень включения препарата в %).
Размер липосомальных частиц определяли методом динамического светорассеяния на лазерном корреляционном спектрометре (анализатор NANO-flex, Microtrac, CША). Поскольку липосомальная суспензия обладает высокой мутностью, исследование проводилось после предварительного разведения 10 мкл исходного образца в 2 мл 0,9% раствора хлорида натрия.
На рис 2.2 приведена гистограмма распределения по размерам магнитных липосом. Рисунок 2.2 Распределение магнитных липосом по размерам (диаметру)
Стабильность (степень агрегации) оценивалась по изменению среднего размера частиц в динамике. Концентрация магнетита в липосомальных суспензиях определялась методом электронного парамагнитного резонанса после предварительной калибровки ЭПР-спектрометра стандартными образцами магнетита (Замышляев П.С., 2013). Концентрация доксорубицина определялась методом УФ- спектрофотометрии, рассчитывалась степень включения доксорубицина (Тазина Е.В., 2010). Измерения проводились для каждой свежеприготовленной суспензии не менее 3 раз (n=3). Некачественные суспензии исключались из дальнейшего анализа.
Эксперименты проводили на нелинейных половозрелых лабораторных крысах обоего пола массой 210-250 г. Лабораторные животные содержались в стандартных условиях вивария со свободным доступом к питьевой воде на стандартном рационе из брикетированного корма для крыс с соблюдением правил и Международных рекомендаций Европейской Конвенции по защите прав животных, используемых при экспериментальных исследованиях (1997). На проведение экспериментов получено разрешение локального этического комитета при Медицинском институте ФГБОУ ВПО им.Н.П.Огарева. Эвтаназия животных осуществлялась путем мгновенной декапитации.
Принципы рандомизации животных на группы, характер проводимой терапии и сроки определения показателей для удобства восприятия материала приведены в соответствующих главах.
Животных фиксировали в специальном станке, над опухолью создава Рис. 2.1. Установка для фиксации животного ли магнитное поле с помощью постоянного магнита (рис.2.1.).
Для исследования использовали цилиндрический бор-неодимовый постоянный магнит NdFeB N38 диаметром 4 см и высотой 2 см, создающий поле с силой отрыва 900 Н. Магнит размещался непосредственно под опухолью. Магнит плотно прижимался к коже плоской поверхностью. Время экспозиции магнитного поля составляло 3 часа.
Исследуемые препараты вводили в хвостовую вену в необходимой дозе, растворенной в объеме 0,4 мл с помощью шприца объемом 1,0 мл и поли-этиленого катетера фирмы Braun D=27G.
Методика оценка исследования эффективности противоопухолевой химиотерапии
При использовании дозы препарата 3 мг/ кг не отмечалось каких-либо видимых изменений внешнего вида животных и изменений в потреблении кормов.
У выживших животных в подгруппах с использованием препарата в дозе 6,0 и 9,0 мг/кг отмечалась незначительная гематурия, повышение потребления воды в первые сутки после инъекции. Потребление корма значительно снижалось (табл. 4.6). Появлялась гиперпигментация кожи и слизистых оболочек. В ряде случаев развивалась частичная алопеция. Животные становились вялыми, двигательная активность снижалась, координация движений нарушалась. В дальнейшем, у выживших крыс через 3-5 дней, поведенческие реакции изменялись - животные становились агрессивными, окраска кожи и слизистых, потребление корма и воды приходило в норму.
В подгруппе 1.4 у выживших крыс наблюдалась гематурия до 7-х суток, гиперпигментация, сыпь, выраженная потеря массы тела (табл.4.7). У одной крысы на вторые сутки наблюдения отмечалось некротическое поражение хвоста, что связано, вероятно, с дефектом введения препарата (экстра-вазальное введение).
Также отмечалась адинамия и нарушения координации, увеличивалось потребление воды, снижалось количество потребляемого корма. В дополнение к системной токсичности, при патологоанатомическом вскрытии наблюдались язвы желудка и двенадцатиперстной кишки. Таблица 4.6
Во всех подгруппах, в том числе и в контроле, на 7-е сутки наблюдения отмечалось снижение массы тела животных, причем в опытных подгруппах степень снижения веса зависела от дозы вводимого препарата. На 30-е сутки исходный вес животных в подгруппах 1.1, 1.2, 1.3 восстанавливался. Вероятно, изначально снижение массы тела в данном случае было обусловлено стрессом, получаемым животными в ходе болезненных процедур. В подгруппе 1.4 к концу эксперимента отмечалась незначительная прибавка в массе тела, что можно объяснить выведением доксорубицина из организма и уменьшением стресс-опосредованных реакций у животных. В подгруппах 1.5 и 1.6 отмечался более выраженный дефицит массы тела на 7-е сутки, на 30 сутки проследить изменение не представлялось возможным в виду гибели всех животных.
У выживших животных при введении препарата в дозировке от 9,0 до 12,0 мг/кг, каких либо поведенческих реакций и функциональных нарушений не отмечалось. В подгруппах 2.5,2.6 у выживших животных наблюдалось повышение потребления воды в первые сутки после инъекции, потребление корма уменьшалось. Двигательная активность снижалась, животные стано вились вялыми. У ряда особей отмечена гематурия непосредственно после инъекции. В дальнейшем, у выживших крыс через 3-5 дней поведенческие реакции, диурез, потребление корма и воды нормализовались. отличие показателей от контроля; достоверных различий между показателями подгрупп нет
Как видно из таблицы, во всех опытных подгруппах на 7-е сутки наблюдения отмечалась тенденция к снижению массы тела, что может быть связано со стрессовой реакцией организма на фиксацию животного и болезненную инъекцию. При этом максимальное уменьшение веса в подгруппах 2.6 и 2.7, скорее всего, обусловлено интоксикацией. На 30-е сутки исходный вес животных, получивших минимальные дозы вещества, восстанавливался. В подгруппах 2.1 и 2.2 к концу эксперимента наблюдался прирост массы тела, сопоставимый с таковым в контроле; в подгруппе 2.3 также регистрировался незначительный прирост массы тела.
В подгруппах 2.6, 2.7 на 7-й день отмечался наиболее выраженный дефицит массы тела с последующей тенденцией к нормализации к 30-м суткам у выживших животных. Это, возможно, обусловлено элиминацией липосом с доксорубицином из организма животных. У всех животных подгруппы 2.7 в той или иной степени наблюдались явления дыхательной недостаточности в виде увеличения частоты дыхания, цианоза слизистых, тахикардии.
Магнитные липосомы с доксорубицином У выживших животных при введении минимальных доз препарата до 15 мг/кг каких либо поведенческих реакций и функциональных нарушений не было отмечено. У животных из подгруппы 3.5 наблюдалась гиперпигментация, увеличивалось потребление воды, снижалось количество потребляемого корма. В целом, двигательная активность исследуемых крыс не менялась. У выживших животных подгруппы 3.6 отмечались адинамия и нарушения координации. В первые сутки после инъекции так же, как и в других группах, увеличивалось потребление воды, при этом снижался диурез, но уже к концу первой недели пищевые и поведенческие реакции приходили в норму.
При введении 21 мг/кг исследуемого препарата большая часть животных погибла в поздние сроки эксперимента. У большинства крыс, так же как и при ведении немагнитных липосом с доксорубицином, наблюдались явления дыхательной и сердечно-сосудистой недостаточности в виде увеличения частоты дыхания, чередующихся с эпизодами апноэ, цианоза слизистых, тахикардии. Высыпания на коже крыс в таком объеме, как при введении водного раствора доксорубицина, не отмечалось. Важной особенностью было то, что в первые сутки не погибло ни одно животное.
Как и в двух предыдущих экспериментах, при введении МЛ с доксору-бицином в первые сутки у животных наблюдалось снижение массы тела (табл. 4.9).
На первой неделе регистрировалось уменьшение веса в подгруппах 3.5, 3.6 и 3.7, но уже к 30 суткам у выживших крыс отмечалась нормализация питания и даже незначительный прирост в весе-3,7; 3,92 и 1,0 % (р 0,05) соответственно.
Побочные и токсические эффекты химиотерапии
Анализ показателей обмена и морфофункционального состояния внутренних органов у экспериментальных животных свидетельствовал о том, что липосомальный и магнитолипомальный ДРЦ практически не различаются по токсичности между собой и имеют меньшую токсичность по сравнению водорастворимой формой препарата.
Заключительным этапом нашего исследования было установление эффективности и безопасности противоопухолевой химиотерапии магнитных липосом с ДРЦ. Исследование проводилась на крысах с трансплантированной холангиоцеллюлярной карциномой РС-1. Для перевивки холангиоцел-люлярной карциномы РС-1 (опухолевый банк НИИ Экспериментальной диагностики и терапии опухолей ГУ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН) на 28-е сутки роста опухоли животное-опухоленосителя забивали путем мгновенной декапитации. Интактным животным по достижении массы 80-100 г перевивали штамм холангиоцеллюлярной карциномы РС-1 под кожу передней брюшной стенки. В зависимости от характера проводимой терапии животные были разделены на 5 групп (1 контрольную и 4 опытных), по 10 особей в каждой. В опытных группах на 14-й день после перевивки начинали лечение. Препараты вводили внутривенно трехкратно с интервалом в 2 суток. В 3-й и 4-й группах непосредственно после введения препарата над областью опухоли создавали МП с помощью постоянного магнита NdFeB N38 с силой отрыва 900 Н. Для проведения магнитоуправляемого транспорта доксорубицина животных фиксировали в специальном станке, который позволял размещать магнит непосредственно под опухолью. Магнит плотно прижимался к коже плоской поверхностью. Время экспозиции магнитного поля составляло 3 часа. На 35-е сутки после начала лечения животных забивали.
Проводили динамический контроль следующих показателей: динамика роста опухолей в каждой группе животных; индекс массы опухоли; индекс торможения роста опухоли, рассчитываемый по формуле: ИТРО=(Mк – Мо)/Мк 100, где Мк и Мо – средняя масса опухоли соответственно в контрольной и опытных группах.
При оценке эффективности противоопухолевой химиотерапии получены следующие результаты. Исследуемый штамм карциномы РС-1 проявил достаточную чувствительность к доксорубицину: в 1-й опытной группе (водный раствор доксорубицина в дозе 6 мг/кг) индекс торможения роста опухоли составил 65,4 %.
Противоопухолевый эффект, эквивалентный эффекту водного раствора доксорубицина в дозе 6 мг/кг, достигался при использовании магнитолипо-сомального доксорубицина без применения магнитного поля (2-я опытная группа). ИТРО в данной группе был равен 70,6%; ИМО-17,2% и достоверно отличался от такового в контрольной группе.
Эффективность магнитолипосомального доксорубицина в дозе 6 мг/кг с применением магнитного поля (3-я опытная группа) была несколько большей. ИТРО был равен 82,5%, что в 1,2 раза больше показателя 1-й опытной группы.
МЛ без доксорубицина (4-я опытная группа) практически не обладали противоопухолевой эффективностью: ИТРО в данной группе составил 1,2%.
Анализ побочных и токсических эффектов химиотерапии показал, что встречаемость и выраженность осложнений при ее проведении различалась в сравниваемых группах.
Выраженность токсических эффектов химиотерапии была наибольшей при введении водного раствора доксорубицина в дозе 6 мг/кг. У всех крыс регистрировалась анемия и выраженная миелосупрессия, тромбоцитопения. Выявлено повышение билирубина относительно исходных значений в 1,7 раза, печеночных трансаминаз (АсТ, АлТ) - в 2 раза, кардиоспецифических ферментов (ЛДГ, МВ-КФК) - в 5 раз. Всего в процессе лечения пало четыре крысы (40%). Причиной их гибели стал язвенно-некротический энтероколит.
При введении магнитолипосомального доксорубицина в дозе 6 мг/кг без МП (2-я опытная группа) выявлены менее выраженные токсические эффекты со стороны показателей красной крови и белой крови и тромбоцитар-ного ростка кроветворения. На 7-е сутки эксперимента отмечалось повышение уровня АлТ и АсТ (на 33 и 32 %), ЛДГ (в 3,3 раза), МВ-КФК (в 2,8 раза). Но при этом выраженность гиперферментемии была меньшей, чем при использовании водного раствора доксорубицина.
В 3-й опытной группе (МЛ с доксорубицином в дозе 6 мг/кг + МП) у животных отмечалось изменение показателей, аналогичное таковому во 2-ой опытной группе, а именно: снижение гемоглобина на 34 %, эритроцитов – на 25 %, лейкоцитов – на 54%, тромбоцитов – на 49 % по сравнению с исходным этапом. Показатели АлТ и АсТ на заключительном этапе увеличивались соответственно на 40 и 27%. Уровень ЛДГ и МВ-КФК повышен в 2,5 и 2,8 раз соответственно.
Во 2-й и 3-й опытных группах (МЛ+ДРЦ с применением и без МП) летальность составила по 10%. При этом, на секции у павших животных регистрировались атрофия слизистой кишечника, участки кровоизлияния в ткань поджелудочной железы.
При введении МЛ в условиях создания МП (4-я опытная группа) частота и выраженность побочных эффектов химиотерапии была минимальной. Отмечалось незначительное увеличение в динамике печеночных трансаминаз относительно исходных значений, аналогичное таковым в контрольной группе. Летальность в данной группе не регистрировалась.
Таким образом, проведенные исследования продемонстрировали возможность увеличения избирательности действия доксорубицина при введении в МЛ при условии создания МП над опухолью и показали перспективность проведения дальнейших исследований в этом направлении.
