Введение к работе
Актуальность проблемы
По современным данным, большое число патологий беременности, таких как бесплодие, невынашивание и преэклампсия являются следствием иммунного конфликта на границе организмов матери и плода. Для борьбы с этими опасными состояниями ученые возлагают большие надежды на дендритные клетки (ДК) как на потенциальный рычаг управления иммунными реакциями. Располагаясь в местах наиболее вероятного контакта с антигеном, именно они первыми контактируют с ним и определяют процесс дальнейшего развертывания ответа. Хорошо известна способность ДК влиять на баланс цитокинов спектра Тх-1 и Тх-2 в зависимости от условий микроокружения и, таким образом, выбирать преобладающий тип иммунных реакций (Kalinski P. et al, 1999, Moser М., Murphy К.М., 2000). Также известно, что баланс между Тх-1 и Тх-2/Тх-З цитокинами влияет на исход беременности (Dealtry G.B., et al, 2000). Вышесказанное свидетельствует об обоснованности предположения о вовлечении ДК в сохранение плода и создание условий, благоприятствующих его развитию, а также важности исследования взаимодействия ДК и клеток цитотрофобласта плаценты - носителей антигена плода, контактирующих с клетками матери.
По нашему мнению, понимание роли дендритных клеток в сложных процессах поддержания толерантности к плоду позволит создать новые средства и методы лечения патологий беременности, что приобретает особое значение в нынешней сложной демографической ситуации. Также изучение механизмов, предотвращающих ответ на генетически чужеродный плод при нормальных физиологических условиях, имеет принципиальное общенаучное значение для иммунологии как науки, изучающей самозащиту организма от чужеродных веществ и сохранение биологической индивидуальности.
Цель исследования
Изучить влияние клеток цитотрофобласта плаценты человека на морфологические, функциональные и фенотипические свойства моноцитарных дендритных клеток в экспериментальных условиях, воспроизводящих элементы фето-плацентарного микроокружения in vitro.
Задачи исследования
Создать in vitro экспериментальную модель фето-плацентарного микроокружения, включающую клетки цитотрофобласта человека и дендритные клетки человека.
Исследовать влияние цитотрофобласта плаценты на морфологические свойства дендритных клеток.
Оценить фенотип дендритных клеток, созревавших в присутствии цитотрофобласта.
Оценить влияние сокультивирования с цитотрофобластом на продукцию дендритными клетками ИЛ-ір, ИЛ-6, ИЛ-10 и ИЛ-12р70.
Исследовать действие цитотрофобласта на способность дендритных клеток индуцировать пролиферацию и продукцию цитокинов лимфоцитами.
Оценить влияние дендритных клеток, культивировавшихся в присутствии цитотрофобласта, на экспрессию молекул, отвечающих за миграцию Т-лимфоцитов.
Научная новизна
Установлено впервые, что дендритные клетки человека участвуют в формировании цитокинового сдвига и изменении миграционных свойств Т-клеток при беременности.
Создана in vitro экспериментальная модель фето-плацентарного микроокружения, включающая клетки цитотрофобласта, дендритные клетки, лимфоциты и, в ряде экспериментов, децидуальные фибробласты.
Проведено исследование влияния цитотрофобласта на морфологические, функциональные и фенотипические свойства дендритных клеток.
Установлено, что сокультивирование дендритных клеток и цитотрофобласта приводит к повышению адгезивности дендритных клеток и существенному изменению их морфологии в культуре.
Продемонстрировано, что дендритные клетки, росшие в присутствии цитотрофобласта, частично сохраняют экспрессию моноцитарного маркера CD 14, в то время как экспрессия HLA-DR и количество несущих данную молекулу клеток снижается.
Показано, что в смешанных культурах лимфоцитов дендритные клетки, росшие с цитотрофобластом, в значительной степени утрачивают способность стимулировать продукцию интерферона-у Т-лимфоцитами, сохраняя способность поддерживать их пролиферацию.
Продемонстрировано, что Т-лимфоциты, стимулированные дендритными клетками, росшими с трофобластом, слабее утрачивают молекулу CD62L, отвечающую за миграцию Т-клеток в лимфатические узлы.
Практическая значимость
Получение новых данных о защитных механизмах, реализуемых при взаимодействии клеток плаценты и иммунной системы матери, необходимо для понимания процессов поддержания толерантности к плоду при нормальной беременности, а также для разработки методов диагностики и коррекции патологий беременности, в основе которых лежат нарушения иммунных процессов.
Внедрение результатов работы
Материалы диссертационной работы вошли в аналитический обзор "Методы выделения, культивирования и оценки функциональной активности дендритных клеток новорожденных".
Апробация материалов диссертации
Диссертация апробирована на совместном заседании 1) Ученого Совета
ФГУН "Нижегорордский научно-исследовательский институт
эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н. Блохиной" Роспотребнадзора, 2) кафедры молекулярной биологии и иммунологии биологического факультета ГОУ ВПО «Нижегородский Государственный Университет им. Н.И. Лобачевского» Федерального агентства по образованию 3) расширенного межлабораторного научного семинара ФГУН "Нижегорордский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н. Блохиной" Роспотребнадзора (протокол №11 от 30.06.10).
Основные материалы работы были доложены на 14-й Нижегородской сессии молодых ученых (Нижний Новгород, 2009 г.) и на XVII международной конференции студентов, аспирантов и молодых учёных «Ломоносов-2010» (Москва, 2010 г.).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 18 научных работ, в том числе 9 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, 2 публикации в сборниках статей и 7 публикаций в материалах отечественных конференций.
Объем и структура диссертации
