Введение к работе
Актуальность проблемы
В настоящее время в России ежегодно регистрируются около 30 миллионов инфекционных больных, а в годы эпидемических подъемов их число может достигать 60 и более миллионов человек. Бактериальные и вирусные инфекции приобретают все более тяжелое течение, затяжной характер и с трудом поддаются самым интенсивным методам лечения [Захаренко С. М., 2009]. Перспективным направлением в этой связи является терапия иммуноглобулинами для внутривенного введения (ВВИГ), которые, обладая доказанной эффективностью и высокой биодоступностью, являются средствами пассивной защиты, обеспечивая опсонизацию, нейтрализацию и выведение из организма бактерий, вирусов и токсинов [Качанов Д.Ю. и соавт., 2011; Rodriguez A. еt. al. 2005]. Включение конкретного иммуноглобулинового препарата в комплекс лечебных мероприятий определяется рядом факторов, основные из которых – его безопасность и эффективность [Конюхов А.В. и соавт., 2010].
Базовым показателем иммунологической безопасности ВВИГ является отсутствие анафилактоидных реакций организма при внутривенных инфузиях, обеспечивающееся низкой антикомплементарной активностью препарата [Европейская фармакопея, 2011]. Антикомплементарная активность – это способность молекул иммуноглобулина после попадания в кровоток спонтанно активировать систему комплемента [Gardi A., 1984]. Клиническая эффективность характеризуется спектром бактериальных и вирусных антигенов, к которым ВВИГ содержит антитела, процентным содержанием иммуноглобулинов не изменивших свою мономерную структуру в процессе технологической обработки, а также длительностью их циркуляции в организме после введения пациенту [Румянцев А.Г., 2011].
Наибольшего соответствия указанным параметрам добились зарубежные производители. Их препараты «Пентаглобин», «Интраглобин», «Хумаглобин», «Биавен», «Октагам», «И.Г.Вена», «Гамимун Н» и др. широко и успешно используются в мировой практике для лечения целого ряда бактериальных и вирусных инфекций [Плахута Т.Г. и соавт., 2006; Бойко А.Н. и соавт., 2010; Сенбаева А.Д. и соавт, 2010]. В то же время в рамках направления, заданного правительством РФ в принятом документе «Концепция долгосрочного социально-экономического развития Российской Федерации на период до 2020 года», одной из актуальнейших задач российского биотехнологического сектора является создание конкурентоспособных медицинских иммунобиологических препаратов, которые по своим потребительским характеристикам не должны уступать импортным аналогам. Примером успешной реализации данной программы может служить ВВИГ «Габриглобин», разработанный сотрудниками Московского НИИЭМ им. Г.Н.Габричевского на базе фармацевтического предприятия «Иммуно-Гем». Препарат имеет низкое значение рН, производится без использования в технологическом процессе протеолитических ферментов и химических модификаторов, что позволяет полностью сохранить биологическую активность и естественные бифункциональные свойства молекулы иммуноглобулина G [Лютов А.Г., 2007]. Однако семилетний опыт промышленного производства и клинического применения лиофилизированной формы препарата «Габриглобин» выявили ряд технологических и потребительских недостатков, требующих пристального изучения и последующего устранения.
Цель работы: совершенствование технологии получения жидкой лекарственной формы габриглобина с гарантированной низкой антикомплементарной активностью и широким спектром специфических антител к бактериальным и вирусным антигенам.
Задачи исследования:
-
Изучить динамику снижения антикомплементарной активности препарата «Габриглобин-IgG» в процессе выполнения диализа-диафильтрации и оптимизировать условия проведения данной стадии.
-
Установить факторы, определяющие качество конечного продукта, и внедрить усовершенствованную технологию производства жидкой формы препарата «Габриглобин-IgG» на станциях переливания крови.
-
Оценить спектр и количественное содержание антител, присутствующих в жидкой форме препарата «Габриглобин-IgG», в сравнении с коммерческими аналогами.
-
Выявить особенности распределения антител в препарате «Габриглобин-IgG» в зависимости от региона его производства.
-
Обобщить опыт использования препарата «Габриглобин-IgG», обладающего широким спектром активности в отношении патогенов вирусной и бактериальной природы, при ряде заболеваний (состояний) инфекционного характера.
Научная новизна
Получены новые данные о динамике снижения антикомплементарной активности полуфабриката иммуноглобулина в процессе диализа.
Выявлено, что основным параметром, определяющим иммунологическую безопасность препарата, а именно, низкую антикомплементарную активность, является качество дистиллированной воды, используемой в производственном процессе.
Предложен способ снижения антикомплементарной активности методом диализа-диафильтрации, что оптимизировало технологию получения габриглобина, и позволило обеспечить гарантированную иммунологическую безопасность жидкой формы лекарственного средства.
Определено, что в препарате «Габриглобин-IgG» содержится широкий спектр антител в высоком титре к следующим возбудителям инфекционных заболеваний: дифтерийной палочке, коклюшному токсину, вирусам семейства Herpesviridaе, вирусам гриппа, клещевого энцефалита, респираторно-синцитиальному вирусу. Кроме того, во всех изученных образцах «Габриглобин-IgG» обнаружено достаточно большое количество антител к антигену CagA Helicobacter pylori.
Выявлена тесная взаимосвязь между титрами антител к возбудителям краснухи и клещевого энцефалита в препарате «Габриглобин-IgG» и заболеваемостью населения, проживающего на территориях сбора донорской плазмы как исходного сырья для получения иммуноглобулина.
Практическая значимость
Предложенный способ уменьшения антикомплементарной активности путем диализа-диафильтрации, позволивший сократить длительность данной стадии в 4-6 раз, внедрен в технологический процесс производственного получения препарата «Габриглобин-IgG» на Ивановской областной станции переливания крови.
Внесены изменения в нормативную документацию на препарат «Габриглобин-IgG» (ЛС-000412) – каждая серия препарата по требованиям фармакопейной статьи (ФСП № 42-8743-07) титруется на содержание антител к ЦМВ, вирусу простого герпеса и вирусу гриппа. Данная информация указывается на упаковке препарата, что позволяет адекватно использовать его, отбирая серии габриглобина с повышенным титром антител к тому или иному возбудителю.
Отечественный препарат внутривенного иммуноглобулина «Габриглобин-IgG» по разнообразию и величине титров антител не уступает, а по ряду показателей превосходит импортные аналоги.
Внедрение результатов исследования в практику
Организовано серийное производство жидкой формы иммуноглобулина для внутривенного введения с торговым названием «Габриглобин-IgG, раствор для инфузий» (ЛС-000412) на ГУЗ «Ивановская ОСПК» с июня 2009 г., а ГУЗ «Самарская областная клиническая станция переливания крови», ГУЗ «Тамбовская ОСПК», ОГУП «Челябинская областная станция переливания крови» зарегистрированы в качестве производственных площадок выпуска препарата «Габриглобин-IgG".
Внесены изменения в нормативную документацию на препарат «Габриглобин» (ФСП № 42-8743-07), касающиеся дополнительного указания на упаковке препарата титра антител к ЦМВ, вирусу простого герпеса и вирусу гриппа.
Данные о спектре и титрах антител, присутствующих в препарате «Габриглобин-IgG», характеризующие его клиническую эффективность, обобщены в информационном письме «Использование поливалентного иммуноглобулина для внутривенного введения «Габриглобин-IgG» при лечении бактериальных и вирусных инфекций» (утверждено на заседании Ученого совета ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора 16.12.2010 г.).
Положения, выносимые на защиту
-
Оптимизированная технологическая схема, включающая стадию диализа-ультрафильтрации и использование высококачественной дистиллированной воды, позволяет получать жидкую форму габриглобина («Габриглобин-IgG») с гарантированной низкой антикомплементарной активностью, что обеспечивает его высокую иммунологическую безопасность.
-
Отечественный нормальный иммуноглобулин для внутривенного введения «Габриглобин-IgG» содержит широкий спектр антител к бактериальным и вирусным патогенам в достаточно высоких титрах, в связи с чем препарат может использоваться как для профилактики, так и терапии различных видов инфекционной патологии.
Апробация работы
Диссертация апробирована на совместном заседании секций Ученого совета «Медицинская биотехнология» и «Общая и прикладная иммунология»
МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского 15 февраля 2012 г. Основные положения диссертационной работы были доложены на Международной научно-практической конференции по донорству крови (Архангельск, 2001), на «Научно-практической конференции по иммунологии» (Москва, 2003), на научной конференции «Актуальные вопросы трансфузиологии и клинической медицины» (Киров, 2005), на научно-практической конференции молодых ученых «Вопросы трансфузиологии и клинической медицины» (Киров, 2007), на Всероссийской научно-практической конференции «Вакцинология 2008. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней» (Москва, 2008), на Всероссийской научно-практической конференции «Современные представления об иммунокоррекции» (Пенза, 2008), на научно-практической конференции молодых ученых и специалистов научно-исследовательских учреждений Роспотребнадзора «Биологическая безопасность в современном мире», (Оболенск, 2009), на Санкт-Петербургском Международном форуме по фармацевтике и биотехнологиям (Санкт-Петербург, 2011).
Публикации
По материалам диссертации опубликовано 21 работа, в том числе 6 в изданиях, рецензируемых ВАК РФ.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 138 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, трех глав с изложением результатов собственных исследований, заключения и выводов. Список литературы включает 203 источника, из них 148 отечественных и 55 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 15 рисунками и 16 таблицами.
