Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы. Иммуно-химическая функциональная система гомеостаза в адаптационных реакциях организма 16
1.1. Современные представления об иммуно-химической функциональной системе гомеостаза 16
1.2. Иммуно-химическая функциональная система гомеостаза при стрессорных воздействиях з
1.3. Чувствительность к гипоксии, как маркер доминирующей адаптационной стратегии 34
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 40
2.1 .Общая характеристика экспериментальной модели 40
2.2. Методы анализа изучаемых явлений 42
ГЛАВА 3. Собственные исследования 57
3.1. Уровень иммунного ответа и реакция лейкоцитарного звена системы крови у высокоустойчивых и низкоустойчивых к гипоксии животных на фоне иммобилизационнного стресса 59
3.2. Определение уровня эритропоэза у высокоустойчивых и низкоустойчивых к гипоксии животных на фоне иммобилизационного стресса и антигенной нагрузки 68
3.3. Содержание кортикостерона и активность ферментативных маркеров устойчивости к гипоксии и оксидативному стрессу (СДГ, МАО, миелопероксидаза) у высокоустойчивых и низкоустойчивых к гипоксии животных на фоне иммобилизационнного стресса и антигенной нагрузки 73
3.4. Влияние антигенной нагрузки на уровень свободнорадикального окисления в иммунных органах
стрессированных и нестрессированных животных с различной устойчивостью к гипоксии
3.5. Влияние антигенной нагрузки на уровень микросомального окисления в печени у стрессированных и нестрессированных животных с различной устойчивостью к гипоксии 96
Обсуждение 106
Заключение 115
Выводы 122
Список сокращений и условных обозначений 124
Список литературы 1
- Иммуно-химическая функциональная система гомеостаза при стрессорных воздействиях
- Чувствительность к гипоксии, как маркер доминирующей адаптационной стратегии
- Методы анализа изучаемых явлений
- Определение уровня эритропоэза у высокоустойчивых и низкоустойчивых к гипоксии животных на фоне иммобилизационного стресса и антигенной нагрузки
Иммуно-химическая функциональная система гомеостаза при стрессорных воздействиях
Во второй половине прошлого века усилились междисциплинарные связи классической иммунологии с нейрофизиологией, эндокринологией, молекулярной биологией и фармакологией. Это привело к появлению новых научных направлений, таких как нейроиммунология, иммуноэндокринология и иммунофармакология. Специалисты в области иммунофармакологии проявляли повышенное внимание к основной системе биотрансформации ксенобиотиков -системе цитохром Р450-зависимых монооксигеназ и усмотрели множество аналогий между иммунной системой и микросомальными ансамблями на основе цитохрома Р450. Это привело к формированию концепции иммунно-химической функциональной системы гомеостаза (ИХФСГ), раскрывающей основные принципы взаимодействия между иммунной и микросомальной системой цитохрома Р-450 в печени [50]. Авторы усматривают принципиальную общность между монооксигеназной и иммунной системами в их индуцибельности. Это проявляется в том, что обе системы отвечают синтезом изоформ цитохрома Р-450 или различных антител при действии различных химических соединений [69, 127. 130, 187].
Причем, воздействие антигена, помимо иммунной системы, закономерно отражается на системе цитохром Р450-зависимых монооксигеназ. Аналогично воздействие ксенобиотика, без участия микросомальных ферментов печени затрагивает и иммунную систему [49, 50, 2, 95, 135, 141].
При взаимодействии двух систем происходит превращение большинства биологически инертных химических соединений цитохромом Р-450 в высокореакционноспособные интермедиаты. Затем, данные метаболиты, ковалентно связываются с макромолекулами и формируют естественные конъюгированные антигены. В некоторых случаях ковалентное связывание вещества с самим цитохромом Р-450 может индуцировать и против него самого иммунный ответ, что является одним из вариантов регуляции монооксигеназной активности в организме [50]. Следовательно, непосредственно против определенных молекул цитохрома Р-450 происходит выработка антител, а в отношении определенных популяций гепатоцитов происходит отбор аналогичный клональной селекции антителопродуцирующих клеток [49]. Но этим дело не ограничивается, так как в результате метаболизации ксенобиотиков также формируются конъюгированные антигены с последующей индукцией иммунного ответа, направленного на связывание ксенобиотика [143]. Осуществляемая через цитохром Р-450 регуляция системы иммунобиологического надзора реализуется за счет его участия в метаболизме эндогенных регуляторов иммунологических реакций [50, 94 95].
В рамках ИХФСГ иммунная и моноксигеназные системы могут взаиморегулироваться. В настоящее время наиболее детально исследовано подавление микросомального окисления со стороны медиаторов иммунной системы [50, 194, 146, 197]. Прежде всего, на роль основных супрессоров цитохром Р450-зависимых монооксигеназ претендуют секретируемые иммунокомпетентными клетками цитокины. Они могут снижать каталитическую активность монооксигеназ, благодаря стимуляции индуцибельной NO синтазы. В свою очередь, оксид азота (NO) обладает высоким сродством к гему и, следовательно, осуществляет изоформно-неспецифическое ингибирование цитохром Р-450 [173, 180]. Помимо этого, цитокины могут ингибировать экспрессию генов определенных изоформ цитохрома Р450 [224, 123].
В свою очередь, индукторы цитохрома Р450 могут вызвать иммуносупрессию. В частности, супериндуктор изоформы CYP1A1 2,3,7,8 тетрахлор-р-бенздиоксин (ТХДД), характеризовался дозозависимой супрессией функций Т- и В - лимфоцитов [94, 166].
Механизмы, обусловливающие угнетение иммунного ответа со стороны ксенобиотиков мало изучены. Однако представляется вероятным их связь с инициируемым цитохромом Р450 свободнорадикальным окислением. Причем, здесь может быть затронут не столько цитохром Р450 в гепатоцитах, сколько цитохром Р450 в иммунных клетках. Так, в лимфоцитах в наибольшей степени экспрессируется изоформа CYP1A1 при наличии других подсемейств цитохрома, таких как CYP2B, CYP2C, CYP2F1, CYP3A [94, 95]. В макрофагах обнаружена 2,3,7,8 ТХДД-индуцируемая экспрессия изоформы CYP1A1, CYP4A, а в нейтрофилах экспрессируются CYP1A1 и CYP2D6 [221]. Многочисленные исследования роли AhR в регуляции иммунной системы доказали, что данный рецептор является не только посредником в осуществлении токсического эффекта полиароматических углеводородов, но и обладает рядом физиологических функций. В том числе показано, что активация AhR возможна при взаимодействии с эндогенными лигандами, а у AhR КО животных наблюдаются нарушения развития внутренних органов и первичного иммунного ответа [162]. Ранее было выявлено, что CYP1A1 преимущественно экспрессируется в активированных CD4+ Т-лимфоцитах; уровень ее экспрессии пропорционален интенсивности митогенеза клеток и зависит от активации через ко-стимулирующую молекулу CD28 [96].
Индукция определенных изоформ цитохрома Р450 в имуннокомпетентных клетках может провоцировать развитие оксидативного стресса с последующим развитием апоптоза в них. Реципрокные отношения не исчерпывают разнообразие связей между иммунной и монооксигеназными системами. Известны случаи, когда введение ксенобиотиков сопровождалось усилением иммунного ответа. Так, ТХДД усиливает бласттрансформацию тимоцитов мышей при их стимуляции Con А.
В связи с этим, важно отметить, что для ТХДД установлена способность одновременно стимулировать дифференцировку CD4(+)Foxp3(+) регуляторных Т cells (Tregs) при одновременной супрессии Th-І иммунного ответа [166].
Было отмечено, что в ходе иммуностимуляции, может повышаться экспрессия определенных изоформ цитохрома Р450. В частности, установлено, что активация иммунокомпетентных клеток сопровождается повышенным уровнем в них мРНК CYP1A1[202].
Эти данные целесообразно обсуждать с учетом роли цитохрома Р450 в метаболизме липофильных антибиотиков, к которым отонсятся глюкокортикоиды, сэкс-стероиды и ненасыщенные жирные кислоты [211]. Впервые обнаружили, что способность иммуностимулятора беталейкина, представляющего из себя препарат рекомбинантного IL-1 бета, избирательно снижать активность одних изоформ цитохрома Р450 и усиливать активность других изоформ. Важно отметить, что беталейкин прежде всего повышал активность моноксигеназ из семейства CYP3A. Известно, что изоформы CYP3A осуществляют метаболическую инактивацию глюкокортикоидов путем бр гидроксилирования атома углерода кортизола и кортикостерона [199, 205].
Чувствительность к гипоксии, как маркер доминирующей адаптационной стратегии
Оценка бактерицидной активности посредством НСТ-теста [75] НСТ-тест проводился в двух параллельных вариантах - "спонтанном" и "индуцированном". "Спонтанный" НСТ-тест отражает исходное, базальное состояние радикал-продуцирующих систем фагоцитов, не контактирующих с объектами фагоцитоза In vitro и не подвергающихся другим видам стимуляции за пределами организма. "Индуцированный" НСТ-тест характеризует собственно "респираторный взрыв" фагоцитов, т.е. усиленное образование свободнорадикальных интермедиатов, сопряженное с поглощением клетками чужеродного корпускулярного материала. Расчёт соотношения показателей "индуцированного" и "спонтанного" НСТ-теста позволяет характеризовать "функциональный резерв" фагоцитов, который отражает способность этих клеток к интенсификации образования свободных радикалов в ответ на дополнительную стимуляцию in vitro.
Для определения показателей "спонтанного" НСТ-теста к монослою "прилипших" клеток добавили 0,5 мл 0,28 % раствора нитротетразолиевого синего и 1 мл среды 199. Чашки инкубировали при t=37C в течение 30 минут, затем жидкость, содержащуюся в чашке,сливали, препараты промывали, высушивали и фиксировали. На заключительном этапе препараты окрашивали сафранином и исследовали с помощью световой микроскопии при соблюдении вышеуказанных условий.
Активность НСТ-теста выражали в виде процентной доли диформазан -положительных клеток, интенсивность (в условных единицах) рассчитывали по формуле G.Astaldl и L. Verga (1957):
Постановка "индуцированного" НСТ-теста отличается только тем, что инкубационная среда дополнительно включает латекс в конечной концентрации 10 частиц на 1 мл. Поэтому среда 199, вносимая в чашку Петри, должна содержать латекс в концентрации 1.5x10 частиц на 1 мл. Подсчет количества эритроцитов, лейкоцитов и ядросодержащих клеток в периферической крови и иммунных органах
Изучение периферической крови заключалось в подсчете эритроцитов и лейкоцитов в камере Горяева. Лейкоцитарную формулу изучали в мазках, окрашенных по Романовскому-Гимзе (проводился подсчет не менее чем 200 клеток). Мазки периферической крови перед окраской фиксировали метанолом. Ретикулоцитыизучали в мазках крови, окрашенных суправитально бриллианткрезиловым синим. Количество ретикулоцитов выражали в промилле, поскольку их счет шел на 1000 встретившихся эритроцитов.
Клеточные суспензии тимуса и селезёнки получали при помощи стеклянного гомогенизатора, осторожно "выжимая" клетки пестиком. Костный мозг забирали из диафиза бедренной кости, промывая костномозговой канал 0,9% раствором NaCl после удаления эпифизов. Суспензию миелокариоцитов перемешивали пипетированием.
Кариоциты КМ и лимфоидных органов подсчитывали в камере Горяева после ресуспензирования в 0,1% растворе метиленового синего в 3% уксусной кислоте. Содержание кариоцитов в тимусе и селезёнке рассчитывали на весь орган, на 1 мг массы органа и на 1 г массы тела [19]. Количество миелокариоцитов рассчитывали на 1 бедренную кость. В мазках-отпечатках КМ, окрашенных по Романовскому-Гимзе, подсчитывали количество эритроидных клеток-прекурсоров, малодифференцированных клеток грануло-моноцитарного ряда (т.е. миелобластов, промиелоцитов, миелоцитов, метамиелоцитов), нейтрофилов, моноцитов-макрофагов и лимфоцитов. Расчет показателей миелограммы проводили не менее чем на 500 клеток. Аналогичным образом изучалась морфология клеток на мазках-отпечатках селезёнки.
Уровень кортикостерона в сыворотке оценивали флюорометрическим микрометодом [5, 150]. К100 мкл сыворотки добавляли 1,5 мл хлористого метилена, встряхивали на лабораторном шейкере и быстро замораживали при -30С. Метиленхлоридный экстракт переносили в чистую пробирку, а затем добавляли 500 мкл флюорогенного реактива (смесь концентрированной серной кислоты: абсолютный этанол, 7:3). Пробы встряхивали на шейкере, после 5 минутного отстаивания удаляли верхний слой хлористого метилена и через 1,5-2 часа измеряли флюоресценцию нижнего слоя на флюориметре при длине волны возбуждения флюоресценции 405 нм, эмиссии 546 нм.
Определение активности миелопероксидазы [88] Определение миелопероксидазы проводили по модифицированному методу [88]. К 1 мл ацетатного буфера рН=4,9 добавляли 1 мл 0,0005М раствора индигокармина и 0,5 мл цельной крови, разведенной в 1000 раз. Пробы инкубировали на водяной бане (30С) в течении 5 мин. Затем к опытным пробам добавляли 0,5 мл 0,03М Н202, а к контрольным - 0,5 мл Н20. Ровно через 2 мин к опытным и контрольным образцам добавляли 3 мл 20% H2S04. Измерение проводили спектрофотометрически на длине волны 610 нм. Оптическая плотность контрольной пробы выше, чем опытных проб. Расчет производился по формуле: ЛЕ ЕУ 10б sT AV где,
Определение активности сукценатдегидрогеназы в печени [20] В центрифужные пробирки наливали по 1 мл 0,1 М фосфатного буфера (рН 7,8) и по 0,1 мл растворов янтарной кислоты (0,1М, рН 7,8), ЭДТА (25 мМ, рН 7,8), азида натрия (150 мМ) и дистиллированной воды. К пробам добавляли по 0,5 мл гомогената ткани, разведенного в соотношении 1:10 на 0,9% NaCl, пробы инкубировали при комнатной температуре в течение 15 минут для ингибирования цитохромоксидазы азидом натрия. Реакцию начинали добавлением к пробам 0,1мл 25мМ раствора феррицианида калия. Пробы инкубировали 15 минут при температуре 30С. После инкубации реакцию останавливали погружением проб в лед и добавлением к пробам по 2 мл 20% ТХУ. В контрольные пробы, содержащие все компоненты инкубационной смеси, ТХУ добавляли перед внесением гомогената. Таким образом, СДГ в контрольных пробах сначала инкубации полностью денатурирована, и специфического восстановления феррицианида сукцинатом не происходит. После остановки реакции и охлаждения пробы центрифугировали при 2000 об/мин в течение 15 минут для осаждения денатурированного белка. Надосадочнуюю жидкость фотометрировали на спектрофотометре при 420 нм. Оптическим контролем служила смесь 20% ТХУ и 0,1М фосфатного буфера.
Методы анализа изучаемых явлений
Следовательно, иммунизация привела к повышению уровня ПОЛ в костном мозге. При этом у НУ иммунизированных животных более высокий уровень ПОЛ, чем у ВУ иммунизированных животных.
Изменения свободнорадикального окисления в костном мозге у стрессированных животных после завершения иммунизации в определенной степени связаны с уровнем их чувствительности к гипоксическому воздействию. У ВУ крыс наблюдалось повышение содержания гептан-растворимых, а также изопропанол-растворимых диеновых конъюгатов. Кроме того, отмечено повышение содержания гептан-растворимых кетодиенов и сопряженных триенов по сравнению с иммунизированными, но не стрессированными животными. Кроме того, у стрессированных ВУ животных после иммунизации повышался уровень металл-индуцированного карбонилирования белков.
У НУ животных в костном мозге после завершения иммобилизации снижался уровень гептан-растворимых диеновых конъюгатов, а также кетодиенов и сопряженных триенов. Кроме того наблюдалось снижение содержания изопропанол-растворимых кетодиенов и сопряженных триенов, при одновременном повышении шиффовых оснований.
У стрессированных животных после завершения иммунизации изменения свободнорадикального окисления в костном мозге сопряжены с уровнем их толерантности к гипоксическому воздействию. У ВУ крыс по сравнению с НУ животными содержание гептан - растворимых и изопропанол - растворимых кетодиенов и сопряженных триенов оказалось выше. Кроме того, у стрессированных ВУ животных после иммунизации уровень Fe /аскорбат индуцированного ПОЛ и металл-индуцированного карбонилирования белков так же был выше (таблица .3.12)
Следует отметить, что у пострессорноиммунизированных животных повышен уровень изопропанол растворимых и гептан-растворимых продуктов ПОЛ относительно интактных и неиммунизированных животных. Следовательно, в данном случае также имеет место усиление ПОЛ в костном мозге.
В селезенке гипоксическое воздействие характеризовалось снижением содержания гептан-растворимых, изопропанол-растворимых продуктов ПОЛ и карбонилированных белков у ВУ животных. У НУ животных наблюдалась аналогичная тенденция, но при этом, по сравнению с интактными животными был повышен уровень изопропанол растворимых кетодиенов и сопряженных триенов. Постгипоксическое стрессирование привело к дальнейшему снижению содержания гептан-растворимых и изопропанол-растворимых продуктов ПОЛ у ВУ и НУ животных при сопоставлениями группами сравнения и интактными животными (таблица 3.13).
В селезенке иммунизированных НУ и ВУ крыс наблюдался более высокий уровень гептан-растворимых диеновых конъюгатов, кетодиенов и сопряженных триенов и более низкий уровень изопропанол-растворимых продуктов ПОЛ при сопоставлении с интактными животными и группой сравнения. При этом уровень изопропанол-растворимых кетодиенов и сопряженных триенов Fe /аскорбат-индуцированного ПОЛ у ВУ животных был выше , чем у НУ крыс.
У НУ крыс постстрессорная иммунизация сопровождалась снижением уровня ПОЛ. При этом снижалось содержание гептан-растворимых диеновых конъюгатов и кетодиенов с сопряженными триенами, а также изопропанол-растворимых диеновых конъюгатов (таблица 3.13).
Постстрессорная иммунизация у ВУ крыс в селезенке сопровождалась снижением содержания изопропанол-растворимых шиффовых оснований, а так же снижением мелалл-индуцированных изопропанол-растворимых кетодиенов и сопряженных триенов при одновременном снижении металл-индуцированного карбонилирования белков.
Постстрессорная иммунизация у ВУ животных характеризовалась приростом содержания гептан-растворимых продуктов ПОЛ при Таблица 3.12 - Влияние иммунизации на некоторые показатели свободнорадикального окисления в костном мозге у животных с различной устойчивостью к гипоксии в условиях хронического стресса
Постстрессорная иммунизация у НУ животных характеризовалась приростом содержания гептан-растворимых продуктов ПОЛ при одновременном снижении изопропанол растворимых продуктов по сравнению с интактными животными. В этой группе, по сравнению нестрессированными животными подвергнутыми иммунизации, наблюдалось снижение гептан-растворимых и изопропанол растворимых продуктов ПОЛ, а по сравнению с постгипоксически стрессированными животными, отмечен повышенный уровень гептан-растворимых продутов ПОЛ, а также изопропанол растворимых диеновых конъюгатов.
При воздействии постстрессорной иммунизации уровень гептан-растворимых и изопропанол-растворимых диеновых конъюгатов и кетодиенов с сопряженными триенами у ВУ животных выше, чем у НУ. Особенно интересен факт более низкого металл-индуцированного карбонилирования белков у постстрессорноиммунизированных ВУ крыс по сравнению с НУ крысами, (таблица 3.13).
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о разнонапаправленных изменениях содержания продуктов ПОЛ в иммунных органах в ходе иммунизации у животных с различной устойчивостью к гипоксии. У ВУ животных после иммунизации наблюдалось снижение содержания молекулярных продуктов ПОЛ в костном мозге и повышение в селезенке. Напротив, у НУ животных иммунизация сопровождалась повышением содержания молекулярных продуктов ПОЛ в костном мозге и понижением их содержания в селезенке. В связи с этим, необходимо отметить, что молекулярные продукты ПОЛ обладают способностью регулировать пролиферацию и дифференцировку гемопоэтических клеток [129]. Это интересное свойство молекулярных продуктов ПОЛ связано с их способностью выступать в роли вторичных мессенджеров при трансдукции различных сигнальных факторов, включая цитокины.
Определение уровня эритропоэза у высокоустойчивых и низкоустойчивых к гипоксии животных на фоне иммобилизационного стресса и антигенной нагрузки
МАО принадлежит ключевая роль в метаболизме биогенных аминов-нейротрансмиттеров [195]. Поэтому, ингибиторы МАО нашли применение в качестве лекарственных препаратов-антидепрессантов. За счет гиперпродукции Н2Ог МАО вовлечена в индукцию окислительного стресса. Это становится особенно заметным при таких нейродегенеративных заболеваниях как болезнь Паркинсона. Ингибиторы МАО также нашли применение при лечении этого заболевания. Однако умеренная активация МАО может играть позитивную роль в формировании устойчивости к гипоксии [16]. В частности, продукты МАО-реакции, так называемые жирно-ароматические альдегиды, могут ингибировать активность ряда ферментов цикла Кребса и ограничивать транспорт электронов в дыхательной цепи электронов и таким образом, ограничивать потребление кислорода [30]. Авторы этого исследования предполагают, что умеренная активация МАО может быть одним из факторов перехода от первоначальной стрессорной к толерантной стратегии адаптации. Установлено, что у нестрессированных и неиммунизированных НУ животных уровень активности церебральной МАО-Б выше для НУ животных.
Принципиально важно, что в отношении активности МАО-Б данные полученные на животных с различной устойчивостью к гипоксии сопоставимы с данными полученными на медленных и на быстрых метаболизерах. Оказалось, что более высокий уровень МАО-активности характерен для НУ животных и для быстрых метаболизеров. Это хорошо согласуется с данными О.Р.Грека [34] о том, что у животных с низкой устойчивостью к гипоксии наблюдается повышенный уровень микросомального окисления.
При изучении влияния антигенной нагрузки на уровень активности церебральной МАО мы учитывали данные И.А.Волчегорского и соавторов [14] о способности выделенного из IL-1 пептидного фрагмента усиливать активность МАО-Б головного мозга в условиях in vitro. Кроме того, основываясь на классические данные нейроиммунологии, мы учитывали возможность повышения уровня кортикостерона в ходе иммунизации. Между тем, кортикостерон усиливает экспрессию МАО-Б. Поэтому, мы исходно предполагали, что на фоне антигенной нагрузки усилится активность МАО-Б в головном мозге. Это оказалось правомерным только для ВУ животных. Для них на фоне антигенной нагрузки характерно усиление активности МАО-Б как для стрессированных, так и для нестрессированных животных. Для объснения роста активности СДГ на фоне антигенной нагрузки можно предположить повышение продукции в ходе иммунизации гетерологичным антигеном продукции транскрипционного фактора HIFla. Данные изменения могут вполне иметь цитокинзависимый характер. Известно, что цитокины участвуют в стабилизации и в ядерной транслокации HIFla [39]. В свою очередь провоспалительные цитокины могут сами по себе влиять на уровень свободнорадикального окисления [68]. Вероятно, в условиях антигенной нагрузки наблюдаемые изменения содержания продуктов ПОЛ карбонилированных белков имеют цитокин-зависимый характер. В связи с этим интересно отметить, что после иммунизации у НУ крыс по сравнению с ВУ крысами существенно повысился уровень ПОЛ в костном мозге. У стрессированных животных, вне зависимости от устойчивости к гипоксии в костном мозге, после иммунизации повысилось содержание карбонилированных белков. У ВУ крыс, последующая иммунизация привела к повышенному уровню ПОЛ в костном мозге. Это ассоциировалось с повышением чувствительности стрессированных ВУ животных к последующей иммунизации в виде более высокого уровня АОК. Вполне возможно, что повышенный уровень иммунного ответа у ВУ животных имеет цитокин 113 зависимый характер. В свою очередь, трансдукция цитокинового сигнала через NF-kB сопряжена с усилением свободнорадикального окисления.
Отдельного обсуждения заслуживает факт более высокого содержания цитохрома Р450 в печени НУ животных после постстрессорной иммунизации. В данном случае воспроизведены реципрокные отношения между иммунной системой и системой цитохромР450-зависимых монооксигеназ в рамках иммуно-химической функциональной системы гомеостаза [50]. Согласно этим представлениям, иммунная система и система микросомального окисления направлены на поддержание химического гомеостаза. Причем, иммунная система обеспечивает высокомолекулярный блок, а микросомальное окисление низкомолекулярный блок химического гомеостаза. Автором этой оригинальной концепции рассматриваются различные варианты взаиморегуляции со стороны иммунной и монооксигеназных систем, среди которых имеет место угнетение микросомального окисления при иммуностимуляции. Цитокины играют существенную роль в супрессии цитохром Р450-зависимых монооксигеназ [95, 70]. В частности, препарат рекомбинированного интерлейкина 1 бета (беталейкин) вызывал супрессию цитохрома Р450-зависмых монооксигеназ [211]. И те же самые цитокины, что угнетают микросомальное окисление -стимулируют имунный ответ. Скорее всего, у стрессированных НУ животных развилась десенситизация к провоспалительным цитокинам, что привело к одновременному усилению микросомального окисления и снижению иммунного ответа относительно ВУ животных. Стимуляция микросомального окисления в печени в свою очередь усиливала свободнорадикальное окисление в органе, так как супероксиданион является побочным продуктом микросомального окисления. Вполне возможно, что у ВУ животных, напротив, наблюдается повышенная чувствительность к провоспалительным цитокинам, что проявляется в более низком уровне микросомального окисления и более высоком уровне иммунного ответа. Одновременно более высокий уровень иммунного ответа и более высокий уровень микросомального окисления наблюдался у иммунизированных НУ животных. Возможно, в этой группе животных активация микросомального окисления распространялась помимо печени на другие внутренние органы и проявлялась в иммунных клетках. Исходя из этого, мы предположили, что в определенных условиях иммуностимуляция повышает чувствительность к индукторам микросомального окисления. Это подтвердилось в экспериментах, в которых введение высокой дозы иммуностимулятора пирогенала привело к усилению ТХДД-зависимой индукции изоформы цитохрома Р450 CYP1A1. Но при этом ограничивалась ТХДД зависимая инволюция тимуса.
Механизмы, обуславливающие способность стресса и пирогенала ограничивать негативные эффекты ТХДД в отношении печени и тимуса, требуют дальнейших исследований. Вероятно, они так или иначе связаны с ограничением трансдукции сигналов через Ah -рецептор, лигандом которого является ТХДД [95]. Не исключено, что пирогенал усиливает продукцию транскрипционных факторов, для которых мишенью является промоторный участок гена CYP1A1.
