Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Современные представления о факторах персистенции вируса папилломы человека высокого риска в репродуктивном тракте женщины 13
1.1. Молекулярно-биологические факторы персистенции вируса папилломы человека высокого риска в репродуктивном тракте женщины 23
1.2. Особенности иммунного ответа у женщин с папилломавирусной инфекцией 28
Глава 2. Материалы и методы исследования 41
2.1. Материалы исследования 41
2.2. Молекулярно-биологические методы исследования 44
2.3. Иммунологические методы исследования 49
2.4.Методы статистической обработки материала 54
Глава 3. Молекулярно-биологические маркеры у женщин с транзиторным и персистирующим течением папилломавирусной инфекции 56
3.1. Молекулярное генотипирование у женщин с транзиторным и персистирующим течением папилломавирусной инфекции 56
3.2. Количественное определение вируса папилломы человека высокого риска у женщин с транзиторным и персистирующим течением папилломавирусной инфекции 66
Глава 4. Иммунологические показатели цервикальной слизи у женщин с транзиторным и персистирующим течением папилломавирусной инфекции 71
Глава 5. Корреляционный анализ взаимосвязей вирусной нагрузки вируса папилломы человека высокого риска и иммунологических показателей цервикальной слизи у женщин с транзиторным и персистирующим течением папилломавирусной инфекции 81
Глава 6. Определение маркеров риска развития и длительности персистенции вируса папилломы человека высокого риска в репродуктивном тракте женщины 92
Заключение 98
Выводы 116
Список литературы 119
- Особенности иммунного ответа у женщин с папилломавирусной инфекцией
- Количественное определение вируса папилломы человека высокого риска у женщин с транзиторным и персистирующим течением папилломавирусной инфекции
- Иммунологические показатели цервикальной слизи у женщин с транзиторным и персистирующим течением папилломавирусной инфекции
- Корреляционный анализ взаимосвязей вирусной нагрузки вируса папилломы человека высокого риска и иммунологических показателей цервикальной слизи у женщин с транзиторным и персистирующим течением папилломавирусной инфекции
Введение к работе
Актуальность исследования.
На сегодняшний день папилломавирусная инфекция (ПВИ) является актуальной социально-значимой проблемой. По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) число инфицированных за последние десять лет увеличилось более чем в 10 раз, достигнув 23,5% [Белокриницкая Т.Е. и др., 2005; Козаченко В.П. и др., 2009]. Чрезвычайно важной представляется проблема ПВИ в связи с онкогенным потенциалом вируса папилломы человека (ВПЧ) высокого риска, который признан этиологическим агентом рака шейки матки (РШМ) [WHO, 2006]. Несмотря на высокую распространенность и онкогенный потенциал ВПЧ, высокий процент самопроизвольного регресса ПВИ свидетельствуют о том, что инфицирование является необходимым, но недостаточным условием для возникновения РШМ. По данным литературы, главным фактором риска развития неопластической патологии является персистенция онкогенных типов ВПЧ [Кузнецова Ю.Н. и др., 2009; Manavi M. et al., 2008; Castle P.E., 2009; . et al., 2011]. Считается, что канцерогенез является следствием “персистентных инфекций ВПЧ высокого риска” продолжительностью более 6 месяцев [Современные подходы…, 2009; Вакцины для профилактики…, 2011; Woodman C.B. et al., 2007; J. et al., 2008; . et al., 2011]. Тем не менее, понятие “персистирующая инфекция” – это только условное определение и не включает никакого функционального критерия, который бы опирался на молекулярные события, необходимые для развития канцерогенеза, вызванного ВПЧ. И хотя в настоящее время данный термин широко используется, крайне необходимо дифференцировать клинически значимые фазы течения инфекций ВПЧ высокого риска на основе молекулярных показателей [Doeberitz M. K., 2009].
Большую важность приобретают исследования, направленные на поиск вирусологических маркеров, ответственных за развитие персистирующего течения. В настоящее время, в качестве таких вирусологических факторов рассматриваются инфекция, вызванная онкогенными типами ВПЧ, а также несколькими типами вируса одновременно, высокая вирусная нагрузка, повышенная экспрессия онкобелков Е6 и Е7 ВПЧ, сверхэкспрессия циклин-зависимых киназ p16INK4a и другие [Мынбаев О.А. и др., 2009; Вакцины для профилактики…, 2011].
Клинические наблюдения, а также данные экспериментальных исследований свидетельствуют о ведущей роли иммунной системы в контроле возникновения, течения и исхода ПВИ [Баткаев Э.А., Рюмин Д.В., 2003, Роговская С.И., 2005; Stanley M., 2006]. Поскольку ВПЧ эпителиотропен, особо важное значение имеет состояние факторов местной защиты органов репродуктивного тракта. Несмотря на многочисленные исследования роли местного иммунитета в защите от ВПЧ, недостаточно изучены механизмы действия клеточных и гуморальных компонентов мукозального иммунитета на формирование персистенции данного вируса. Учитывая тот факт, что персистенция ВПЧ высокого риска является ключевым событием в малигнизации клеток, изучение факторов, инициирующих этот процесс, и, следовательно, способствующих реализации онкогенного потенциала ВПЧ определяет актуальность настоящего исследования.
Цель исследования
Установление иммунологических, молекулярно-биологических особенностей транзиторного и персистирующего течения папилломавирусной инфекции и выявление маркеров персистенции вируса папилломы человека высокого риска.
Задачи исследования
-
Установить типы вируса папилломы человека высокого риска, ассоциированные с транзиторным и персистирующем течением папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины.
-
Определить показатели вирусной нагрузки вируса папилломы человека высокого риска при транзиторном и персистирующем течении папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины.
-
Изучить иммунологические показатели цервикальной слизи при транзиторном и персистирующем течении папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины.
-
Определить взаимосвязь между молекулярно-биологическими и иммунологическими показателями цервикальной слизи при транзиторном и персистирующем течении папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины.
-
Установить маркеры персистирующего течения папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины.
Научная новизна
Впервые установлен широкий спектр генотипов ВПЧ высокого риска при транзиторном и персистирующем течении ПВИ длительностью 6 и 12 месяцев. Показано преобладание ВПЧ 16 типа независимо от течения и длительности ПВИ. Впервые установлено, что транзиторное течение ассоциировано с ВПЧ 52 типа и инфицированием 1 типом вируса. Персистирующее течение ПВИ характеризуется высокой частотой встречаемости микстинфекции ВПЧ высокого риска и моноинфекции ВПЧ 16 типа. Установлено, что при персистирующем течении ПВИ длительностью 12 месяцев в разном проценте случаев определяются 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типы ВПЧ высокого риска, в то время как при транзиторном течении ПВИ не установлено случаев инфицирования 35 типом ВПЧ, при персистирующем течении ПВИ длительностью 6 месяцев – 39 и 58 типами ВПЧ.
Впервые проведена комплексная оценка иммунологических факторов цервикальной слизи в зависимости от длительности персистенции ВПЧ высокого риска. Выявлены общие закономерности изменений факторов местного иммунитета, сопровождающие наличие ВПЧ высокого риска в цервикальном канале обследованных женщин: снижение активности, интенсивности фагоцитоза и фагоцитарного числа нейтрофилов, увеличение активности лизосомальных ферментов нейтрофильных гранулоцитов и уровня ИЛ-2. Установлено, что персистирующее течение ПВИ длительностью 6 месяцев характеризуется снижением лизосомальной активности нейтрофилов и повышением концентрации IgG на фоне высоких уровней ИФН- и ИФН- в цервикальной слизи относительно транзиторного течения ПВИ. Персистирующее течение ПВИ длительностью 12 месяцев сопровождается снижением интенсивности фагоцитарных реакций нейтрофилов, дефицитом ИНФ- и повышенными концентрациями sIgA, IgA и IgМ в цервикальной слизи.
Впервые получены данные по показателям вирусной нагрузки в зависимости от длительности персистенции ВПЧ высокого риска. Установлено влияние вирусной нагрузки на факторы локального иммунитета репродуктивного тракта женщины, определяющее развитие и длительность персистирующего течения папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины.
Впервые с помощью бинарной логистической регрессии определены маркеры риска развития и длительности персистирующего течения ПВИ.
Теоретическая и практическая и значимость
Полученные данные расширяют представление о роли генотипа, концентрации вируса папилломы человека высокого риска и факторов местного иммунитета цервикальной слизи в развитии и длительности персистирующего течения папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины.
На основании комплексного молекулярно-биологического и иммунологического исследования оперделены основные маркеры, определяющие риск развития и длительность персистенции ВПЧ высокого риска в репродуктивном тракте женщины.
Положения, выносимые на защиту
-
Транзиторное течение папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины ассоциировано с вирусом папилломы человека 52 типа и инфицированием 1 генотипом вируса, персистирующее течение папилломавирусной инфекции характеризуется высокой частотой встречаемости микстинфекции вируса папилломы человека высокого риска и моноинфекции вируса папиллома человека 16 типа. Персистирующее течение папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины сопровождается высокими концентрациями вируса папилломы человека высокого риска и преобладанием случаев вирусной нагрузки выше 5 lg на 105 клеток человека.
-
Наличие вируса папилломы человека высокого риска в цервикальном эпителии характеризуется угнетением нейтрофильного звена местного иммунитета, в то время как развитие и длительность персистирующего течения папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины определяется состоянием гуморального иммунитета и уровнем интерферонов в цервикальной слизи.
-
Развитие персистирующего течения папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины сопровождается изменением не только показателей вирусной нагрузки и местного иммунитета, но и взаимосвязей между ними.
-
Выявленные особенности молекулярно-биологических факторов и иммунологических показателей цервикальной слизи позволяют определить маркеры риска развития и длительности персистирующего течения папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины.
Внедрение результатов в практику
Результаты исследований внедрены в клиническую практику женской консультации МУЗ ГКБ № 2 г.Челябинска, в лабораторную диагностику НИИ иммунологии ГОУ ВПО ЧелГМА Росздрава, в педагогическую практику кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии и клинической лабораторной диагностики, кафедры акушерства и гинекологии № 2 ГОУ ВПО ЧелГМА Росздрава.
Апробация работы и публикации
Основные положения диссертации доложены, обсуждены и опубликованы на: VI Всероссийской научно-практической конференции «Генодиагностика инфекционных заболеваний» (Москва, 2007); VII итоговой научно-практической конференции молодых ученых Челябинской государственной медицинской академии (Челябинск, 2009); VII Российской конференции иммунологов Урала (Архангельск, 2009); Российской научной конференции «Персистенция микроорганизмов» (Оренбург, 2009); VIII Всероссийском форуме «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге - 2009» (Санкт-Петербург, 2009); II-ом Ежегодном конгрессе по инфекционным болезням (Москва, 2010); VIII Российской конференции иммунологов Урала (Сыктывкар, 2010); межрегиональном форуме «Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии – междисциплинарные проблемы» (Санкт-Петербург, 2010); VII Всероссийской научно-практической конференции c международным участием «Молекулярная диагностика - 2010» (Москва, 2010); 4-ой Всероссийской конференции «Иммунология репродукции» (Пермь, 2010).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 24 научные работы, в том числе 9 из перечня изданий, рекомендованных ВАК РФ.
Структура и объем диссертации
Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 4-х глав собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы, включающего работы 155 отечественных и 77 иностранных авторов. Диссертация изложена на 145 страницах компьютерного текста и включает 12 таблиц, 4 рисунка.
Особенности иммунного ответа у женщин с папилломавирусной инфекцией
Результат любого инфекционного процесса определяется взаимодействием микроорганизмов с макроорганизмом, в котором основная роль принадлежит иммунному ответу, обусловливающему нейтрализацию, разрушение и элиминирование антигена [Сухих Г.Т., Ванько Л.В., 2006]. Исход такого взаимодействия зависит с одной стороны от состоятельности противоинфекционного иммунитета макроорганизма, с другой - от способности инфекционного агента противостоять механизмам иммунной защиты организма-хозяина
Во многих случаях иммунный ответ приводит к полной элиминации патогена. В некоторых случаях по тем или иным причинам инфекция не может быть устранена полностью, что приводит к персистенции микроорганизма.
В большинстве случаев инфекционные процессы, вызванные ВПЧ, контролируются естественным образом - при помощи механизмов врожденного иммунитета. Реализация механизмов врожденного иммунитета осуществляется опосредованно, например, при помощи цитокинов - интерферона, вырабатываемых эпителиальными или антигенпредставляющими клетками (АПК), а также при помощи клеток, вьшолняюших литическую функцию недифференцированных киллеров (НК) и макрофагов, которые также вырабатывают цитокины. АПК (дендритные клетки - ДК) осуществляют функцию анализа межклеточного микроокружения и передачи информации о ВПЧ-инфекции в регионарные лимфатические узлы, тем самым активируя систему адаптивного иммунного ответа [Вакцины для профилактики..., 2011; Stanley М., 2009].
Продукция и секреция цитокинов (ИФН-а, ИФН-(3, ИЛ-1, ФНО, ИЛ-6, ИЛ-8) относится к самым ранним событиям, сопутствующим взаимодействию микроорганизмов с макрофагами. Этот ранний неспецифический ответ на инфекцию важен по нескольким причинам: он развивается очень быстро, поскольку не связан с необходимостью накопления клона клеток, отвечающих на конкретный антиген; вместе с тем ранний цитокиновый ответ влияет на последующий специфический иммунный ответ [Фрейдлин И. С, 1995].
При встрече организма с вирусной инфекцией именно продукция интерферонов (растворимых факторов, вырабатываемых вирус-инфицированными клетками, способных индуцировать антивирусный статус в неинфицированных клетках) является наиболее быстрой ответной реакцией на заражение. Интерфероны формируют защитный барьер на пути вирусов намного раньше специфических защитных реакций иммунитета, стимулируя клеточную резистентность, делая клетки непригодными для размножения вирусов [Иммунный ответ..., 1998; Young-Jin S., Bumsuk H., 2010]. Интерфероны активируют макрофаги и NK-клетки, которые затем синтезируют ИФН-у, ИЛ-1, 2, 4, 6, ФНО, в результате макрофаги и NK-клетки приобретают способность лизировать вирус-инфицированные клетки [Иммунный ответ..., 1998; Новиков Д.К., 2002].
Клетки врожденного иммунитета обладают способностью к обнаружению в тканях сигнальных молекул и/или патогенов (высокомолекулярная манноза, белки теплового шока, ДНК, РНК и т.д.), появляющихся при инфекционных процессах и/или при повреждении тканей. Распознавание происходит опосредованно, за счет системы Toll-подобных рецепторов. Они экспрессируются макрофагами, лимфоцитами, нейтрофилами, дендритными и эпителиальными клетками. При взаимодействии этих рецепторов с лигандами активируются гены, кодирующие синтез цитокинов и их рецепторов. Распознавание осуществляется путем связывания нескольких рецепторов в комбинации с множеством сигнальных путей, что может приводить к высокоспецифическому сигналу, инициирующему немедленный ответ на микробную угрозу. Toll-подобные рецепторы индуцируют такие процессы врожденного иммунитета, как воспаление, лихорадка и фагоцитоз, и участвуют в приобретенном иммунитете, генерируя сигналы, необходимые для гуморального и клеточного ответа [Сухих Г.Т., Ванько Л.В., 2006; Ракофф-Наум С, Меджитов Р., 2008; Чикилева И.О. и др., 2010; Вакцины для профилактики..., 2011; Bhat P. et.al., 2011].
Особенности жизненного цикла ВПЧ, тесно связанного с процессами дифференцировки цервикального эпителия, определяют важную роль локальных механизмов иммунологического ответа шейки матки в контроле над течением инфекционного процесса.
Слизистая оболочка шейки матки, являющаяся механическим и функциональным барьером, играет роль своеобразного иммунного фильтра, в котором можно выделить гуморальные (лизоцим; иммуноглобулины, интерлейкины, интерфероны) и клеточные (Т- и В- лимфоциты, нейтрофилы, макрофаги, клетки Лангерганса) компоненты защиты [Роговская СИ., 2008]. Антиколонизационные факторы половых путей женщины включают систему фагоцитирующих клеток, комплекс белков, обладающих прямой антимикробной активностью, либо усиливающих реакции фагоцитов, выступая в роли опсонинов [Телешева Л.Ф., 1998; Рудакова Е.Б. и др., 2004]. Антиколонизационная активность цервикального секрета усиливается за счет антител, вырабатываемых, прежде всего, местной лимфоидной тканью (Ig А и Ig М) и поступающих из кровеносного русла (Ig G, Ig A, Ig М), которые также способны «ассистировать» фагоцитам в уничтожении микроорганизмов [Зароченцева Н.В., 2005; Роговская СИ., 2005]. Антитела распознают свободный вирус и зараженные вирусом клетки. Они контролируют инфекцию, нейтрализуя вирусные частицы и убивая инфицированные клетки посредством комплемент-направленной цитотоксичности или антитело-зависимой клеточной цитотоксичности. Основные белки, против которых направлены антитела,. — поверхностные гликопротеины или капсидные наружные белки, но антитела образуются и к внутренним, и к неструктурным белкам. Антитела связываются на поверхности клеток с вирусными гликопротеинами, а также- могут снижать экспрессию вирусного-генома внутри зараженной клетки [Кизей И.Н. и др., 2010].
Количественное определение вируса папилломы человека высокого риска у женщин с транзиторным и персистирующим течением папилломавирусной инфекции
Благодаря современным разработкам стало возможным определение точного количества копий ДНК вируса методом полимеразной цепной реакции в реальном времени при условии правильного и стандартизированного забора клинического материала. Вирусную нагрузку рассматривают в качестве одного их факторов риска персистенции высокоонкогенных типов ВПЧ, и, как следствие прогрессии патологических изменений [Шипицына Е.В. и др., 2004; Кубанов А.А., 2005; Золотоверхая Е.А. и др., 2008; Мынбаев О.А. и др., 2009; Комплексная борьба..., 2010; Вакцины для профилактики..., 2011]. Учитывая широкую распространенность ВПЧ высокого риска и высокую вероятность самостоятельного клиренса вируса, был установлен порог клинической значимости, который принимается равным 3 логарифмам геномов ВПЧ на 105 клеток человека, и порог прогрессии - 5 логарифмов ВПЧ на 105 клеток человека.
Нами была проведена ретроспективная оценка концентрации ДНК ВПЧ высокого риска у 152 женщин с ПВИ, среди которых 68 женщин - с транзиторным течением ПВИ (группа I), 32 женщины — с персистирующим течением ПВИ длительностью 6 месяцев (группа II) и 52 женщины с персистирующим течением ПВИ длительностью 12 месяцев (группа III). Результаты полученных концентраций ДНК ВПЧ выражались в lg (ВПЧ на 105 клеток человека) и трактовались следующим образом: менее 3 lg -малозначимая, от 3 до 5 lg - значимая и более 5 lg — повышенная вирусная нагрузка.
Концентрация- вирусной ДНК и распределение вирусной нагрузки ВПЧ высокого риска в исследуемых группах представлена в таблице 3,2.1.
При изучении вирусной нагрузки ВПЧ высокого риска установлено, что средняя концентрация вируса в группе с транзиторным течением ПВИ была 3,26±0,32 lg ВПЧ на 10 клеток. У женщин с персистирующим течением ПВИ длительностью 6 месяцев средний показатель вирусной нагрузки составил 5,64±0,22 lg ВПЧ на 10 клеток, и был достоверно выше, чем в группе с транзиторным течением ПВИ. При персистирующем течении ПВИ длительностью 12 месяцев средняя концентрация вирусной ДІЖ определялась на уровне 4,28±0,33 lg ВПЧ на 105 клеток, что достоверно выше относительно группы с транзиторным течением ПВИ, но ниже по сравнению с персистирующим течением ПВИ длительностью 6 месяцев.
Анализ распределения вирусной нагрузки показал, что в группе с транзиторным течением ПВИ малозначимая нагрузка была обнаружена в 41,2%. Значимая и повышенная концентрации ДНК ВПЧ высокого риска в данной группе выявлены в равном проценте случаев (29,4%).
У женщин с персистирующим течением ПВИ длительностью 6 месяцев малозначимая, нагрузка не обнаружена, частота встречаемости значимой составила 34,4%, повышенной - 65,6%. У женщин с персистирующим течением ПВИ длительностью 6 месяцев повышенная вирусная нагрузка встречалась чаще, чем у женщин с транзиторным течением ПВИ.
В группе с персистирующим течением ПВИ длительностью 12 месяцев малозначимая вирусная нагрузка встречалась в 28,8% случаев, значимая — в 42,4%, повышенная вирусная нагрузка - в 28,8%. При персистирующем течении ПВИ длительностью 12 месяцев по сравнению с персистирующим течением ПВИ длительностью 6 месяцев частота встречаемости повышенной вирусной нагрузки была ниже.
Результаты анализа вирусной нагрузки ВПЧ высокого риска в зависимости от количества выявляемых типов вируса отражены в таблице 3.2.2. В группе с транзиторным течением ПВИ вирусная нагрузка ВПЧ высокого риска при моноинфекции составила 3,27±0,55 lg на 10 клеток человека, при микстинфекции - 3,81±0,59 lg на 105 клеток человека.
Иммунологические показатели цервикальной слизи у женщин с транзиторным и персистирующим течением папилломавирусной инфекции
Прогноз в отношении протекания начальных, стадий инфекционного процесса определяется, главным образом, степенью выраженности первичного иммунного ответа. Именно механизмы врожденного иммунитета выступают в качестве первой линии обороны при контакте организма с патогенными факторами. Кроме того, активация системы адаптивного» иммунитета происходит только в случае получения- соответствующего сигналаиз системы врожденного иммунитета [Вакцины для профилактики..., 2011]. Особенности жизненного цикла ВПЧ высокого риска (отсутствие цитопатических свойств, фазы вирусемии, наличие механизмов, позволяющих уйти от контроля иммунной системы) увеличивают значение механизмов локального иммунологического контроля [Современные подходы..., 2009].
Нами было проведено изучение клеточных и гуморальных факторов цервикальной слизи у женщин с ПВИ, которые ретроспективно были разделены на 3 группы. Группу I составили женщины с транзиторным течением- ПВИ (п=68), группу II - женщины с персистирующим течением ПВИ длительностью 6 месяцев (п=32). В группу III вошли, женщины с персистирующим течением ПВИ длительностью 12 месяцев (п=52). Контрольную группу составили женщины без ВПЧ высокого риска, клинико-морфлогических изменений на шейке матки и иной гинекологической патологии (п=32). Нейтрофилы обладают функциональными возможностями, которые обусловливают пусковые механизмы развития воспаления и ранние защитные реакции, а. также позволяют активировать, регулировать адаптивный иммунитет и способствовать его полноценной реализации [Ярилин Е.Е., 1999; Игнатов П.Е., 2002; Нестерова И.В. и др., 2009, 2010]. При изучении клеточных факторов врожденного иммунитета цервикальной слизи в исследуемых группах нами была проведена оценка общего количества, абсолютного и относительного содержания нейтофильных гранулоцитов в слизщ, их фагоцитарнош и лизосомальной активностей, кислородзависимого метаболизма и функционального резерва в НСТ-тесте [Методы изучения местного..., 1999JL
Характеристика; клеточного состава- и функционального состояния нейтрофилов цервикальной; слизи представлены в таблице 4. Г. При сравнении показателей с контрольной группой; установлено что у женщин с транзиторным течением ПВИ отмечается достоверное увеличение общего количества; и абсолютного, содержания жизнеспособных нейтрофилов, их лизосомальной активности на фоне достоверного снижения активности, интенсивности фагоцитоза и фагоцитарного числа нейтрофилов.
В группе с персистирующимї течением ПВИ длительностью 6 месяцев относительно; группы контроля установлено достоверное увеличение лизосомальной активности при снижении активности, интенсивности фагоцитоза и фагоцитарного числа нейтрофилов.
У женщин с персистирующим течением ПВИ длительностью 12 месяцев по сравнению с контрольной группой выявлено достоверное увеличение общего количества и абсолютного содержания жизнеспособных нейтрофилов, активности лизосомальных ферментов полиморфноядерных лейкоцитов при достоверном снижении всех показателей фагоцитарной реакции нейтрофилов: активности, интенсивности фагоцитоза и фагоцитарного числа.
При персистирующем течении ПВИ длительностью 6 месяцев относительно транзиторного течения ПВИ установлено достоверное снижение абсолютного количества жизнеспособных нейтрофилов и их лизосомальной активности. У женщин с персистирующим течением ПВИ длительностью 12 месяцев при сравнении с группой транзиторного течения ПВИ выявлено достоверное снижение абсолютного количества жизнеспособных нейтрофилов и интенсивности их фагоцитарной реакции. Отсутствовали достоверно значимые различия между группами с персистирующим течением ПВИ длительностью 6 и 12 месяцев.
Базисная антиколонизационная активность цервикального секрета усиливается, за счет антител, вырабатываемых, прежде всего, местной лимфоидной тканью (Ig А и Ig М) и поступающих из кровеносного русла (IgG, Ig A, Ig М), которые способны нейтрализовать внеклеточно расположенные вирусы и «ассистировать» фагоцитам в их уничтожении [Маянский А.Н. и др., 1998; Роговская СИ., 2005; Иммунология и аллергология..., 2006; Евстигнеева Н.П., Левчик Н.К., 2007].
Проведенный анализ уровней иммуноглобулинов А, М, G и секреторного иммуноглобулина А в цервикальной слизи (табл. 4.2) показал отсутствие достоверно значимых изменений в группах с транзиторным и персистирующим течением ПВИ длительностью 6 месяцев относительно контрольных показателей. При персистирующем течении ПВИ длительностью 12 месяцев установлено достоверное повышение концентраций slg А и Ig А по сравнению как с группой контроля, так и с группой транзиторного течения ПВИ. У женщин с персистирующим течением ПВИ длительностью 6 месяцев при сравнении с группой транзиторного течения ПВИ зарегистрировано достоверное увеличение уровня Ig G.
Корреляционный анализ взаимосвязей вирусной нагрузки вируса папилломы человека высокого риска и иммунологических показателей цервикальной слизи у женщин с транзиторным и персистирующим течением папилломавирусной инфекции
Важным патогенетическим фактором формирования хронического инфекционного процесса является нарушение иммунного гомеостаза. Помимо определения изменений количественных параметров иммунной системы одной из существенных характеристик иммунной системы является ее структурная связанность. Для изучения связей, возникающих между компонентами иммунной системы, можно - применить ряд статистических методов, один из которых является корреляционный анализ [Кологривова Е.Н. и др., 2005; Петленко СВ. и др., 2010]. Функционирование любой биологической системы определяется, с одной стороны, количеством существующих корреляционных связей, с другой стороны, — их характером. При формировании патологических процессов, как правило, отмечается увеличение числа корреляционных связей, в тоже время, при ряде заболеваний могут отмечаться обратные явления, обусловленные снижением числа связей на фоне появления новых, нехарактерных для данного процесса взаимосвязей [Михайленко А.А., 2000].
Ведущую роль в цепи патофизиологических событий играют индуцированные возбудителем эндогенные реакции, реализующие иммунные и воспалительные механизмы.
Характер воспалительного ответа, направленность противовирусного иммунитета в значительной мере определяются особенностями межклеточной кооперации иммуноцитов как моделируемыми в ответ на вирусную агрессию, так и являющихся генетически детерминированными [Рязанцева Н.В. и др., 2006].
Ключевая роль в регуляции межклеточных взаимодействий и активации всех звеньев иммунной системы принадлежит цитокинам [Ярилин А.А., 1999; Новиков Д.К., Новиков П.Д., 2009]. Для более глубокого изучения механизмов противовирусной защиты нами был проведен анализ взаимосвязей между цитокинами и иммунологическими показателями цервикальной слизи. Количество установленных взаимосвязей и их характер представлены в таблице 5.1.
При анализе взаимосвязей в группе женщин с транзиторным течением ПВИ выявлено 23 корреляционные связи, из них 14 положительных и 9 отрицательных. Положительные взаимосвязи определяются между ИФН-а и ИЛ-4 (R=0,69), Ig G (R=0,59); между ИФН-у и ИЛ-2 (R=0,31), ИЛ-10 (R=0,57), РАИЛ-1 (R=0,32), ФНО-а (R=0,64); между ИЛ-lp и Ig A (R=0,54), ИЛ-4 (R=0,37), ИЛ-8 (R=0,81); между ИЛ-2 и ИЛ-10 (R=0,35); между ИЛ-4 и Ig A(R=0,54); между ИЛ-8 и фагоцитарным числом нейтрофилов (R=0,53), РАИЛ-1 (R=0,31); между ФНО-а и РАИЛ-1 (R=0,46). Отрицательные корреляционные связи установлены между ИФН-у и sig A (R=-0,79), IgG (R=-0,71); между ИЛ-2 и Ig G (R=-0,71); между ИЛ-10 и slgA (R=-0,86), Ig A (R=-0,53), Ig G (R=-0,76); между ФНО-а и ИФН-а (R=-0,39), ИЛ-4 (R=-0,33), sig A (R=-0,55).
В группе с персистирующим течением ПВИ длительностью 6 месяцев определено 47 корреляционных связей, при этом 24 связей были положительными, a 23 - отрицательными. Положительные взаимосвязи установлены между ИФН-у и РАИЛ-1 (R=0,70); между ИЛ-ір и активностью (R=0,58), интенсивностью (R=0,53) активированного НСТ-теста нейтрофилов, ИЛ-2 (R=0,72), ИЛ-8 (R=0,85), sig A (R= 0,77), Ig A (R=0,77), Ig M (R=0,74), Ig G (R=0,89); между ИЛ-2 и интенсивностью спонтанного НСТ-теста (R=0,49), активностью активированного НСТ-теста (R=0,65) нейтрофилов, Ig G (R=0,60); между ИЛ-4 и функциональным резервом нейтрофилов (R=0,68), ИЛ-8 (R=0,55); между ИЛ-8 и sig A (R=0,77), Ig А (R=0,77), Ig М (R=0,74), Ig G (R=0,71); между ИЛ-10 и ИФН-у (R=0 48), ИФН-а (R=0,74); между ФНО-а и активностью , фагоцитоза (R=0,73), активностью (R=0;64) и интенсивностью (R=0,58) спонтанного НСТ-теста нейтрофилов, РАИЛ-1 (R=0,60). Отрицательные взаимосвязи определены между уровнем ИФН-а и относительным количеством жизнеспособных нейтрофилов (R=-0,83), активностью (R=-0,81) и интенсивностью (R=-0,67) фагоцитоза, активностью (R=-0,76) и интенсивностью (R=-0,59) спонтанного НСТ-теста, интенсивностью активированного НСТ-теста нейтрофилов (R=-0,55), Ig G (R=-0,70); между ИФН-у и функциональным резервом нейтрофилов (R=-0,53), лизосомальной активностью нейтрофилов (R=-0,79), Ig М (R=-0,74); между РАИЛ-1 и функциональным резервом нейтрофилов (R=-0,62), sig A (R=-0,71), Ig A (R=-0,71); между ИЛ-4 и активностью (R=-0,60), интенсивностью (R=-0,54) спонтанного НСТ-теста; между ИЛ-8 и РАИЛ-1 (R=-0,53); между ИЛ-10 и относительным количеством жизнеспособных нейтрофилов (R=-0,60), активностью фагоцитоза нейтрофилов (R=-0,69), Ig G (R=-0,71); между ФНО-а и общим количеством лейкоцитов (R=-0,63), абсолютным содержанием жизнеспособных нейтрофилов (R=-0,69), slg A (R=-0,77), Ig A (R=-0,77).
При анализе корреляционных связей в группе женщин с персистирующим течением ПВИ длительностью 12 месяцев выявлено 33 взаимосвязи, среди которых 23 — положительные и 10 - отрицательные. Положительные взаимосвязи установлены между ИФН-а и ИФН-у (R=0,42); между ИФН-у и РАИЛ (R=0,46); между ИЛ-2 и активностью спонтанного НСТ-теста (R=0,54), интенсивностью активированного НСТ-теста нейтрофилов (R=0,43), их лизосомальной активностью (R=0,52), ИФН-а (R=0,60), ИФН-у (R=0,71), ИЛ-10 (R=0,53); между ИЛ-4 и Ig A (R=0,69); между ИЛ-8 и ИЛ-ір (R=0,71), РАИЛ-1 (R=0,35); между ИЛ-10 и ИФН-а (R=0,74), ИФН-у (R=0,72), PAKJI-1(R=0,35); между ФНО-а и абсолютным (R=0,69), относительным (R=0,42) содержанием жизнеспособных нейтрофилов, активностью (R=0,62), интенсивностью (R=0,68) фагоцитоза нейтрофилов, активностью (R=0,69), интенсивностью (R=0,64) спонтанного НСТ-теста, активностью (R=0,66), интенсивностью (R=0,61) активированного НСТ-теста нейтрофилов, их лизосомальной активностью (R=0,60). Отрицательные корреляционные связи зарегистрированы между ИФН-а и ИЛ-8 (R=-0,49), ИЛ-10 (R=-0,56); между ИФН-у и ИЛ-lp (R=-0,59); между ИЛ-2 (R=-0,56) и ИЛ-lp (R=-0,56); между ИЛ-8 и интенсивностью фагоцитоза (R=-0,68) и фагоцитарным числом нейтрофилов (R=-0,69); между ИЛ-10 и функциональным резервом нейтрофилов (R=-0,55), ИЛ-8 (R=-0,35), KH-ip(R=-0,52).
