Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Взаимодействие ВИЧ с иммунной системой человека (обзор литературы) 12
1.1. Характеристика ВИЧ 12
1.2. Патогенез ВИЧ-инфекции 14
1.3. Взаимодействие ВИЧ с клетками иммунной системой 19
1.4. Высокоактивная антиретровирусная терапия 32
1.5. Российская классификация ВИЧ-инфекции 35
1.6. Проточная цитометрия при исследовании иммунного статуса ВИЧ-инфицированных лиц 37
1.7. Использование системы CytoDiff в оценке иммунного статуса ВИЧ-инфицированных лиц 40
1.8. Определение вирусной нагрузки у ВИЧ-инфицированных лиц методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени 42
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 47
2.1. Иммунологические методы 47
2.2. Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени 51
2.3. Статистические методы анализа 53
ГЛАВА 3. Результаты и обсуждение 54
3.1. Сравнительный анализ показателей иммунофенотипирования лейкоцитов у ВИЧ-инфицированных лиц и условно здоровых доноров
3.2. Анализ показателей иммунофенотипирования лейкоцитов у ВИЧ-инфицированных лиц с учетом стадии заболевания 63
3.3. Анализ показателей иммунофенотипирования лейкоцитов у ВИЧ-инфицированных лиц с учетом уровня вирусной нагрузки 67
3.4. Анализ показателей иммунофенотипирования лейкоцитов у ВИЧ-инфицированных лиц с учетом уровня Т-хелперов 76
3.5. Анализ показателей иммунофенотипирования лейкоцитов у ВИЧ-инфицированных лиц с
3.6. Анализ показателей иммунофенотипирования лейкоцитов у ВИЧ-инфицированных лиц с учетом сопутствующих патологий в виде хронического вирусного гепатита с и внутривенного употребления опиоидных наркотиков 94
Заключение 101
Выводы 107
Практические рекомендации 108
Список сокращений, принятых в диссертации 109
Список литературы
- Высокоактивная антиретровирусная терапия
- Определение вирусной нагрузки у ВИЧ-инфицированных лиц методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени
- Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени
- Анализ показателей иммунофенотипирования лейкоцитов у ВИЧ-инфицированных лиц с учетом стадии заболевания
Высокоактивная антиретровирусная терапия
В патогенезе ВИЧ-инфекции значительную роль играют антигенпрезентирующие клетки [4, 130]. Макрофаги и дендритные клетки - это основные антигенпрезентирующие клетки иммунной системы. Дендритные клетки служат наиболее важными индукторами специфического иммунного ответа и являются необходимым звеном для запуска первичных антиген-специфических иммунных реакций. Предшественники дендритных клеток мигрируют из костного мозга в периферические лимфоидные органы и подслизистый слой кишечника, мочеполовой и дыхательной систем. Они способны захватывать и процессировать растворимые антигены и мигрировать во вторичные органы иммунной системы, где активируют антиген-специфические Т-клетки. Дендритные клетки - это гетерогенная популяция клеток с различными функциональными возможностями и фенотипическими маркерами в зависимости от микроокружения и степени зрелости [119]. Незрелые дендритные клетки могут захватывать и процессировать антигены, но их способность активировать Т-лимфоциты довольно слаба. Зрелые дендритные клетки, напротив, обладают в основном иммуностимулирующей активностью. Тканевые дендритные клетки и специализированные клетки кожи и слизистых имеют незрелый фенотип и могут захватывать антиген. После этого они мигрируют в лимфоидную ткань, где приобретают зрелый фенотип [22, 28]. Для стимуляции лимфоцитов CD8 и образования антиген-специфических цитотоксических Т-лимфоцитов необходима презентация пептидного антигена в комплексе с HLA класса I. Дендритные клетки могут заражаться вирусами [146]. При этом в цитоплазме клетки синтезируются вирусные белки, которые расщепляются на пептиды и переносятся в цитозоль эндоплазматического ретикулума, где связываются с HLA класса I. Образовавшийся комплекс перемещается на поверхность дендритной клетки. Число комплексов специфический пептидный антиген—HLA класса I обычно ограничено, и поэтому антиген распознается лишь одним клоном Т-лимфоцитов из 100 000 и более. Антигенраспознающие рецепторы Т-лимфоцитов (TcR) обладают низкой аффинностью к антигену [16]. Высокая плотность дополнительных стимулирующих молекул на поверхности дендритных клеток позволяет усилить взаимодействие антигенраспознающих рецепторов с комплексом пептидный антиген-HLA и тем самым запустить пролиферацию (клональную экспансию) Т-лимфоцитов. Способность дендритных клеток активировать Т-лимфоциты зависит также от секреции стимулирующих цитокинов, в том числе ИЛ-12 - ключевого цитокина в образовании и активации Т-хелперов 1 типа и NK-лимфоцитов. Для стимуляции выраженного антиген-специфического Т-клеточного ответа достаточно небольшого числа дендритных клеток и антигена, что говорит о высокой иммуностимулирующей способности дендритных клеток. Экспрессия молекул адгезии и лектинов (в частности DC-SIGN) способствует агрегации дендритных клеток и Т-лимфоцитов и усиливает взаимодействие с антиген-связывающими рецепторами Т-лимфоцитов. Зараженные дендритные клетки мигрируют в лимфоидную ткань, где ВИЧ передается лимфоцитам CD4+ [52, 142].
Численность дендритных клеток периферической крови во время ВИЧ-инфекции несколько снижается. Последние исследования показывают, что помимо уменьшения количества дендритных клеток падает и их функциональная активность, причем функциональные нарушения сохраняются даже на фоне эффективной антиретровирусной терапии. Изучение того, как ВИЧ-инфекция влияет на созревание дендритных клеток, затруднено их малочисленностью (менее 1% от всех мононуклеаров). Плазмацитоидные дендритные клетки — основные поставщики а-интерферона, и, как следует из отдельных работ, их сохранность при развернутом СПИДе уменьшает частоту тяжелых оппортунистических инфекций [69]. Фолликулярные дендритные клетки, найденные в лимфоидных фолликулах, также захватывают и представляют антигены на своей поверхности. У нелеченных больных эти клетки часто несут на себе отдельные антигены ВИЧ, а также целые вирусные частицы. Функция фолликулярных дендритных клеток состоит в стимуляции В-лимфоцитов. 1.3.2. Взаимодействие ВИЧ с макрофагами и моноцитами
Число моноцитов в крови при ВИЧ-инфекции обычно нормальное. Однако, как уже говорилось, моноциты несут корецепторы CD4 и хемокиновые рецепторы и поэтому служат мишенями вируса. Будучи инфицированы вирусом, эти клетки погибают не так быстро, как лимфоциты CD4+. Это объясняется малым количеством корецепторов CD4 на их мембране, что значительно снижает вероятность их инфицирования, и большей продолжительностью жизни этих клеток по сравнению с лимфоцитами [24, 84].
Хотя ВИЧ не оказывает цитолитического действия на моноциты и макрофаги, при заражении этих клеток в них идет активная репликация вируса. Таким образом, зараженные моноциты и макрофаги могут служить резервуаром ВИЧ и способствовать распространению вируса по [116,126]. Выявить зараженные моноциты в крови ВИЧ-инфицированных довольно сложно, однако при аутопсии зараженные макрофаги обнаруживаются в ЦНС (клетки микроглии) и легких (альвеолярные макрофаги). Как уже говорилось, ВИЧ способен заражать костномозговые клетки — предшественники моноцитов.
Возможно, заражение этих клеток служит одной из причин гематологических нарушений, наблюдаемых при ВИЧ-инфекции. ВИЧ-инфекция сопровождается нарушением таких функций моноцитов и макрофагов, как хемотаксис, продукция ИЛ-1 и свободных радикалов, представление антигенов и активация Т-лимфоцитов, цитотоксичность, связывание иммунных комплексов рецепторами СЗ и Fc-фрагментов [37, 82]. Что приводит к этим нарушениям, пока неизвестно, однако вряд ли они непосредственно обусловлены заражением моноцитов и макрофагов ВИЧ. Возможно, что эти нарушения частично обусловлены избыточной активацией моноцитов и макрофагов в результате действия цитокинов или связывания этих клеток с вирусным гликопротеидом Щ 120[76,93].
Определение вирусной нагрузки у ВИЧ-инфицированных лиц методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени
Приказами Минздрава РФ от 26.05.2003. №220 «Правила проведения внутрилабораторного контроля качества количественных методов клинических лабораторных исследований с использованием контрольных материалов» и от 02.02.2000 №45 «О системе мер по повышению качества клинических лабораторных исследований в учреждениях здравоохранения Российской Федерации» отмечается важная роль контроля качества проводимых исследований. В связи с этим, одним из основных условий корректной оценки иммунного статуса пациентов является постоянное проведение внутрилабораторного контроля качества. Для этих целей необходимо посредством аттестованных контрольных материалов с известными значениями, контролировать состояния проточного цитометра и оценивать качество проведения пре- и аналитического этапов исследования (пробоподготовка, реакционная способность антител и т.д.).
Оценку качества работы цитометра проводили ежедневно, включая проверку сигналов светорассеяния и флуоресценции с использованием калибровочных частиц Flow Check Fluorespheres (Beckman Coulter, США) и стандартных настроечных протоколов. Качество аналитического этапа оценивали путем окрашивания контрольного материала Immimorol Cells (Beckman Coulter, США) с заведомо известным диапазоном допустимых значений относительного и абсолютного количества для 19-ти основных популяций лейкоцитов.
Определение вирусной нагрузки проводилось методом полимеразной цепной реакции на автоматизированной системе для анализа нуклеиновых кислот «m2000rt» компании Abbott Laboratories., позволяющей осуществлять флуоресцентную детекцию результатов в реальном времени, имеющим 5 каналов детекции, автоматическую обработку данных и многоуровневый контроль качества результатов.
Для проведения исследования по определению вирусной нагрузки ВИЧ была использована плазма крови. Цельная кровь в количестве не менее 5 мл собиралась в одноразовую пробирку с K3EDTA (1,5+0,15 мг на 1 мл крови). После взятия пробирка с кровью перемешивалась переворачиванием 3-4 раза и хранилась при температуре +2-8 С не более 6 часов. Плазма крови была отобрана не позднее 6 часов после взятия крови. Для этого пробирка с цельной кровью центрифугировалась при 800-1600g в течение 20 минут.
Количественное определение уровня РНК ВИЧ в исследуемом материале Пробоподготовка осуществлялась с использованием системы ABBOTT Tm ТМ Sample Preparation и включала несколько этапов. 1. Лизис - вносили в каждую пробирку с исследуемым материалом по 100 мкл реагента mMicroparticles, 2,4 мл буфера mLysis, перемешивали и помещали в термостат на 20 минут при температуре 50С. Далее удаляли лизат. 2. Промывка - в каждую пробирку добавляли 700 мкл буфера mWashl и ресуспендировали. Помещали пробирки в магнитный штатив на 1 минуту. Удаляли из пробирок жидкость. Повторяли процедуру отмывки 3 раза. 3. Элюция - в каждую пробирку добавляли 25 мкл буфера mElutoin и ресуспендировали. Помещали пробирки в термостат на 20 минут при температуре 75С. Добавляли в каждую пробирку 63 мкл буфера mWash2, ресуспендировали и помещали в магнитный штатив на 1 минуту. Собирали элюат и помещали в чистую пробирку. Интерпретация результатов.
Результаты интерпретировались на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией, что соответствует наличию (или отсутствию) значения порогового цикла «Ct» в соответствующей графе в таблице результатов.
В процессе Realime PCR необходима постановка ДНК-калибраторов ВИЧ и ВКО для построения калибровочной кривой, с помощью которой осуществляется расчет концентрации ДНК ВИЧ и ВКО в исследуемых образцах. Построение калибровочной кривой и расчеты концентрации ДНК осуществлялись с использованием программного обеспечения используемого прибора.
Результаты исследований обрабатывались на ПК под управлением операционной системы Windows ХР с применением пакета прикладных программ «Statistica for Windows 6.0» [3].
Статистическую обработку результатов исследований проводили стандартными методами, с определением средней арифметической вариационного ряда (М) и ошибки средней арифметической (т). Результаты исследования количественных параметров в группах сравнения представлены в виде М±т, где М - средняя арифметическая, m - стандартная ошибка средней.
Объем выборок был недостаточен для применения любого из параметрических способов анализа, поэтому мы воспользовались непараметрическим аналогом. Согласно литературным данным, при применении непараметрических критериев при нормальном распределении их чувствительность составляет примерно 95% от чувствительности их параметрических аналогов, и непараметрические критерии дают больше шансов выявить реально существующие различия [7]. Достоверность отличия оценивалась по U - критерию Mann-Whitney, статистически значимыми считались изменения при р 0,05.
Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени
С помощью панели моноклональных антител CD45-FITC/CD4-RD1/CD3-РС5 установлено, что по сравнению с контрольной группой в исследованной когорте пациентов снижено относительное и абсолютное содержание Т-хелперов. Снижение уровня Т-хелперов у ВИЧ-инфицированных лиц объясняется тем, что клетки CD3+CD4+ - основные мишени вируса. Механизмы его патогенного воздействия на Т-хелперы хорошо изучены. Согласно последним представлениям, основной причиной снижения количества Т-хелперов при ВИЧ-инфекции является гибель по механизму апоптоза, причем большая часть погибших клеток не инфицирована вирусом.
С помощью системы CytoDiff установлено, что для больных ВИЧ-инфекцией характерно снижение относительного и абсолютного содержания В-лимфоцитов при одновременном повышении относительного количества незрелых В-клеток в крови. Таким образом, мы видим, что в патогенез ВИЧ-инфекции вовлечено и В-клеточное звено иммунитета. Изменение числа В-лимфоцитов при ВИЧ-инфекции - вопрос малоизученный и спорный. Некоторые ученые полагают, что нарушена лишь функция В-лимфоцитов, без снижения их концентрации в крови [128]. Ряд авторов сообщает, что количество В-клеток у ВИЧ-инфицированных обычно нормальное и снижается лишь у некоторых больных на стадии СПИДа [76]. В нашей работе зафиксировано достоверное снижение числа В-лимфоцитов у ВИЧ-инфицированных людей относительно здоровых лиц. Увеличение числа незрелых форм В-лимфоцитов может являться компенсаторной реакцией на гибель зрелых В-клеток либо отражать нарушение гемопоэза вследствие поражения костного мозга и дисбаланса цитокинов.
Согласно данным литературы [115], гибель В-клеток может быть обусловлена активационно-индуцированным апоптоза, что может быть сопряжено с усилением иммунопоэза этого звена лимфоидных клеток. Предположительно, апоптоз В-клеток при ВИЧ-инфекции происходит вследствие хронической антигенной стимуляции, как со стороны самого ВИЧ, так и сопутствующих возбудителей. Многочисленные данные, в том числе полученные при гистологическом исследовании лимфоидных органов, свидетельствуют, что при ВИЧ-инфекции апоптозу подвергаются не только лимфоциты CD4, но и лимфоциты CD8 и В-лимфоциты. Возможно, апоптоз играет роль Таблица 3.1.1 - Сравнительный анализ относительного содержания популяций лейкоцитов у ВИЧ-инфицированных лиц и условно здоровых доноров,
Примечание: - достоверность различий показателей в группе 2 по сравнению с группой 1 по U-критерию Манна-Уитни: р 0,05 неспецифического компенсаторного механизма, направленного на уничтожение избытка активированных лимфоцитов. Однако при этом он является одной из причин иммунологических нарушений, характерных для ВИЧ-инфекции [77].
Нарушение гемопоэза и дифференцировки В-лимфоцитов (как и других иммунокомпетентных клеток) при ВИЧ-инфекции является на данный момент недостаточно изученной проблемой. Крайне интересными представляются дальнейшие исследования в этой области.
В группе ВИЧ-инфицированных пациентов также наблюдалось увеличение содержания «воспалительных» моноцитов CD 16+ и незрелых гранулоцитов. Также было выявлено снижение абсолютного количества эозинофилов. Повышение уровня моноцитов CD 16+ согласуется с литературными данными. Известно, что при некоторых системных заболеваниях (гемолитическом уремическом синдроме, бактериальном сепсисе, ВИЧ), число клеток с фенотипом CD14+CD16+ увеличивается. Данные клетки называют воспалительными, так как они являются мощным продуцентами провоспалительных цитокинов ФНО-а, ИЛ-1 и ИЛ-6 и не продуцируют или продуцируют незначительные количества противовоспалительного цитокина ИЛ-10. Роль «воспалительных» моноцитов в патогенезе ВИЧ-инфекции в настоящее время активно изучается. Предполагается их участие в распространении вируса по тканям (в том числе, мозга) и поддержании вирусной персистенции [72, 145]. Некоторые ученые полагают, что моноциты CD 16+ являются более доступными для репликации ВИЧ, и их экспансия поддерживается неизвестными пока факторами вируса [101]. Аналогично этому, белок вируса Nef блокирует программу апоптоза инфицированных Т-клеток, ослабляя при этом антиапоптозные механизмы окружающих неинфицированных клеток [11]. Вероятные причины высокой репликации ВИЧ в «воспалительных» моноцитах: повышенная относительно «классических» моноцитов экспрессия CCR5 - корецептора для проникновения ВИЧ в клетку; одна из форм внутриклеточного фермента APOBEC3G, характерная для моноцитов CD 16+ и менее эффективная в супрессии вируса. Таблица 3.1.2 - Сравнительный анализ абсолютного содержания популяций лейкоцитов у ВИЧ-инфицированных лиц и условно здоровых доноров, (М±т) Показатели, клеток/мкл Группа 1 (условно здоровые доноры) Группа 2 (ВИЧ-инфицированные лица) Примечание: - достоверность различий показателей в группе 2 по сравнению с группой 1 по U-критерию Манна-Уитни: р 0,05 Снижение количества эозинофилов также объяснимо. Известно, что взаимодействие ВИЧ с эозинофилами осуществляется путем связывания gpl20 с CD4 рецептором, который представлен на плазматической мембране эозинофила и имеет такую же структуру, как и у Т-хелперов. Предшественники эозинофилов, а также зрелые клетки экспрессируют гликопротеин CD4, который изначально был обнаружен на Т-хелперах и на клетках моноцитарно-макрофагальной линии. В ряде исследований было показано, что HIV-1 in vitro может инфицировать клетки - предшественники эозинофилов. Эти данные подтверждают, что в условиях in vivo эозинофилы могут служить резервуаром для вирусов.
Повышение уровня незрелых гранулоцитов может быть связано с различными грибковыми и бактериальными заболеваниями, которые встречаются в группе ВИЧ-инфицированных лиц (кандидоз, туберкулез, бактериальный эндокардит и др.).
Снижение абсолютного числа Т-хелперов, Т- и NK-клеток CD 16+ и В-лимфоцитов приводит к снижению общего числа лимфоцитов в группе ВИЧ-инфицированных лиц. Гистограммы, характеризующие наиболее яркие различия в популяциях лейкоцитов, представлены на рисунках 3.1.1.-3.1.4.
Таким образом, показано, что при ВИЧ-инфекции количественным изменениям подвержены практически все популяции и субпопуляции лейкоцитов периферической крови. Наиболее существенные изменения касаются концентрация лимфоцитов CD4+. Однако, помимо этого выявлено достоверное увеличение числа моноцитов CD 16+ и незрелых гранулоцитов, а также снижение количества зрелых В-лимфоцитов при повышенном уровне незрелых В-клеток в группе ВИЧ-инфицированных лиц.
Анализ показателей иммунофенотипирования лейкоцитов у ВИЧ-инфицированных лиц с учетом стадии заболевания
В результате выявлены отрицательные корреляционные связи уровня Т-хелперов с вирусной нагрузкой, относительным числом незрелых В-клеток, процентным содержанием моноцитов (в том числе, CD 16+) и нейтрофилов. Выявлены положительные связи с общим числом лейкоцитов, относительным и абсолютным количеством лимфоцитов (в том числе Т-лимфоцитов), Т- и NK-клеток, относительным числом Т-хелперов, абсолютным числом В-лимфоцитов. Сила корреляционной связи во всех случаях оценивается как средняя. В целом, результаты корреляционного анализа подтверждают закономерности соотношения абсолютного числа лимфоцитов CD4+ и состава лейкоцитов, которые были получены мною в ходе проведения сравнительного анализа групп пациентов, разделенным по концентрации Т-хелперов (200-500 клеток/мкл).
В группе пациентов с IVA стадией ВИЧ-инфекции были выявлены тенденции, схожие с таковыми у пациентов с III стадией (таблицы 3.4.4-3.4.5). Так, снижение числа Т-хелперов сопровождается снижением относительного и абсолютного числа лимфоцитов, В-лимфоцитов, Т- и NK-клеток, увеличением доли нейтрофилов. Для ВИЧ-инфицированных лиц с IVA стадией также был проведен анализ корреляционных связей числа Т-хелперов с вирусной нагрузкой и субпопуляционным составом лейкоцитов (таблица 3.4.6). В результате были выявлены отрицательные связи средней силы между количеством Т-хелперов и незрелых В-клеток, при этом отмечены положительные связи средней силы с числом зрелых В-лимфоцитов. Выявлены сильные положительные связи между числом Т-хелперов и общим числом лимфоцитов, Т-лимфоцитов, Т- и NK-клеток, относительным числом Т-хелперов. Отметим, что связь уровня Т-хелперов с количеством Т-лимфоцитов и лимфоцитов среди пациентов с III стадией ВИЧ-инфекции была средней силы, что можно связать с частичной компенсацией числа Т-клеток за счет увеличения концентрации лимфоцитов CD8. Вероятно, концентрации лимфоцитов CD4, зрелых и незрелых В-клеток имеют косвенную взаимосвязь через вирусную нагрузку, о чем говорилось в соответствующем разделе данной работы.
Таким образом, показано, что иммунологические нарушения, которые характерны для ВИЧ-инфицированных лиц в сравнении со здоровыми людьми, усугубляются по мере истощения популяции лимфоцитов CD4+. Это проявляется в увеличении числа моноцитов CD 16+ и незрелых В-клеток, в снижении концентрации В-лимфоцитов. Также был проведен сравнительный анализ показателей иммунофенотипирования лейкоцитов ВИЧ-инфицированных лиц, разделенных на группы по числу Т-хелперов согласно принятой в мире градации числа Т-хелперов ( 500 клеток/мкл, 200-500 клеток/мкл, 200 клеток/мкл). Установлены достоверные различия между группами по числу зрелых и незрелых В-клеток, моноцитов CD 16+. Уместно предположить, что причиной наблюдаемых изменений является нарастание вирусной нагрузки, что приводит к пропорциональному усугублению иммунологических нарушений у ВИЧ-инфицированных лиц.
В настоящее время основным компонентом лечения больных ВИЧ-инфекцией является высокоактивная антиретровирусная терапия - одновременное использование трех или более препаратов, направленных на подавление репликации ВИЧ. Снижение концентрации вируса в крови приводит к повышению уровня Т-хелперов. С помощью ВААРТ можно добиться контролируемого течения заболевания: остановить прогрессирование заболевания, предотвратить развития вторичных заболеваний или добиться их регресса, увеличить продолжительность жизни пациента.
Как было показано в предыдущих разделах, в патогенез ВИЧ-инфекции тем или иным образом вовлечены различные популяции и субпопуляции лейкоцитов. В научных же работах, посвященных ВААРТ, в основном исследуется влияние тех или иных антиретровирусных препаратов на уровень лимфоцитов CD4+. Аналогично, в клинической практике внимание врачей сконцентрировано на одной субпопуляции лейкоцитов - Т-хелперах. Влиянию же ВААРТ на другие иммунокомпетентные клетки уделяется гораздо меньше внимания. Изучению данного вопроса и посвящен настоящий раздел.
На данном этапе мы проводили оценку влияния высокоактивной антиретровирусной терапии на субпопуляционный состав периферической крови ВИЧ-инфицированных лиц. Подавляющее большинство исследуемых ВИЧ-инфицированных лиц, получающих ВААРТ, - пациенты с IVA стадией заболевания. Таким образом, в группу 1 вошли 22 ВИЧ-инфицированных лица с IVA стадией, не получающих ВААРТ, в группу 2-62 ВИЧ-инфицированных лица с IVA стадией, регулярно получающих терапию.
Средний возраст пациентов, не получающих ВААРТ, был 32,0±5,0 лет, регулярно получающих терапию - 36,9 ±8,8 лет. Данные представлены в таблицах 3.5.1-3.5.2.
Прежде всего, было выявлено снижение количества копий РНК вируса в крови пациентов, регулярно получающих терапию (23061 копий/мл против 445060 копий/мл). Снижение вирусной нагрузки является первичной целью ВААРТ (вирусологический ответ на терапию).
В опытной группе было выявлено снижение относительного количества Т-лимфоцитов. При этом повышено относительное и абсолютное число Т-хелперов. Увеличение уровня Т-хелперов (иммунологический ответ на терапию) происходит после снижения вирусной нагрузки. Считается, что начальное повышение числа лимфоцитов CD4+ в периферической крови на фоне ВААРТ происходит за счет выхода Т-хелперов из лимфатической системы в кровь. Вторая стадия характеризуется притоком клеток памяти CD4+ со сниженной способностью к активации и улучшенным иммунным ответом при повторном контакте с антигеном. На третьей стадии, не менее чем через 12 недель ВААРТ, происходит повышение уровня наивных клеток. Через 6 месяцев антиретровирусной терапии восстанавливаются все разновидности лимфоцитов CD4+ [2].
В группе ВИЧ-инфицированных лиц, получающих ВААРТ, зафиксировано повышение относительного и абсолютного числа В-клеток. Интересно отметить, что относительное и абсолютное количество незрелых В-лимфоцитов было снижено. Вероятно, улучшение состояния В-клеточного звена связано со снижением количества вируса в крови, что сопряжено со снижением хронической стимуляции лимфоцитов (фактора апоптоза).
