Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА I. Обзор литературы 10
1.1. Основные механизмы и причины развития гестоза 10
1.2. Состояние липидного обмена и активность процессов ПОЛ при гестозах 24
1.3. Особенности состояния маточно-плацентарного комплекса при гестозе 30
ГЛАВА II .Материалы и методы исследования 38
ГЛАВА III. Клиническая характеристика, уровень эндотоксикоза и другие показатели гомеостаза у беременных при гестозе 50
3.1. Клиническая характеристика и лабораторные показатели у беременных при гестозе 50
3.2. Функциональное состояние плода у беременных при гестозе 58
3.3 Состояние плодово-плацентарного кровотока у беременных при гестозе 61
3.4. Уровень эндогенной интоксикации у беременных при гестозе 64
ГЛАВА IV. Уровень процессов липопереокисления, активность фосфолипазы и антиоксидантных ферментов у беременных при гестозе 67
4.1. Выраженность процессов ПОЛ и активности фосфолипазы А2 в плазме крови у беременных при гестозе 67
4.2. Уровень процессов липопереокисления и функциональное состояние мембран эритроцитов при гестозе 69
4.3. Содержание продуктов ПОЛ и активность антиоксидантных ферментов в ткани хориона плаценты при гестозе 73
4.4. Активность фосфолипазы А2 и процессов ПОЛ в ткани амниона при гестозе 75
ГЛАВА V. Особенности липидного метаболизма в тканях беременных при гестозе 78
5.1. Качественный и количественный спектр липидов плазмы крови у беременных при гестозе 78
5.2. Изменения липидного состава мембран эритроцитов у беременных при гестозе 82
5.3. Липидный метаболизм в ткани хориона плаценты у беременных при гестозе 86
5.4. Нарушения обмена липидов в ткани амниона плаценты у беременных при гестозе 90
Обсуждение 95
Выводы 110
Практические рекомендации 111
Список литературы 112
- Состояние липидного обмена и активность процессов ПОЛ при гестозах
- Клиническая характеристика и лабораторные показатели у беременных при гестозе
- Уровень процессов липопереокисления и функциональное состояние мембран эритроцитов при гестозе
- Качественный и количественный спектр липидов плазмы крови у беременных при гестозе
Введение к работе
Гестоз представляет собой острую, актуальную проблему современной акушерско-гинекологической службы, что обусловлено в первую очередь высокой заболеваемостью и наличием осложнений для матери и плода (Герасимович Г.И., 2000; Савельева Г.М. и др., 2001; Федоткина Е.П. и др., 2005; Брагин Ю.А. и др., 2006; Марусов А.П. и др., 2008; Vestergaard М., Secher NJ.,2001).
Преэклампсия и эклампсия являются главной причиной материнской и перинатальной смертности, нередко приводят к инвалидизации новорожденных (Андриевский А.Г., 1989; Волкова Н.Н., 1992; Буракова Д.Г., 2004; Цив-цивадзе Е.Б. и др., 2007). С целью снижения показателей перинатальной заболеваемости и смертности при гестозе специалистам приходится прибегать к вынужденному досрочному прерыванию беременности (Зильбер А.П., Шифман Е.М., 1997; Захаров Р.И. и др., 2002; Бабаев В.А. и др., 2002; Мельников В.А. и др., 2002; Adamasono К., Walach R.C., 1989; Mostello D. et al., 2002).
Использование медикаментозной терапии при гестозе не во всех случаях позволяет достичь,нужных результатов (Рогова Е.В. и др., 2004; Абду-рахманова Ф.М., 2005; Рогова Е.В. и др., 2006; Чантурия СМ. и др., 2006). Примечательно, что, несмотря на длительное изучение проблемы, патогенез этого тяжелого осложнения беременности до настоящего времени остается до конца не изученным (Гусак Ю.К. и др., 2002; Рогова Е.В. и др., 2004; Котов Ю.Б., Гурьева В.М., 2005; Сидорова И.С. и др., 2006; Качалина Т.С. и др., 2006).
Известно, что гестоз сопровождается нарушениями в сердечнососудистой и мочевыделительнои системе, системе гемостаза, иммунитета и характеризуется выраженной эндогенной интоксикацией, которая может приводить к полиорганной недостаточности (Грищенко В.И., Щербина Н.А., 1990; Плоткин Л.Л. и др., 2000; Радзинский В.Е. и др., 2004; Кильдюшов А.Н., 2004; Сидорова И.С. и др., 2007; Pacelli F. S., 1996). Для установления основ срыва адаптационных механизмов в организме матери к развивающейся беременности необходимы углубленные сведения по происходящим патофизиологическим процессам на клеточном и мембранном уровнях (Власов А.П. и др., 2000; Робине С.Дж., 2001; Лескова Г.Ф., Луценко В.К., 2002; Гурьнев Ф.А. и др., 2002; Владимиров Ю.А., 2002; Gamejo G. et al., 1993). При экстремальных состояниях и ряде заболеваний, в том числе и гестозе, активируется процесс липопереокисления, являющийся одним из главных механизмов повреждения мембран (Бурлев В:А., 1992; Шифман Е.М., 2002; Заварзина О.О. и др., 2002; Александрович Ю.С. и др., 2000; Redman C.W., Sargent I.L., 2001; Wilhelm Filho D. et al., 2002; Lenzi A. et al. 2002). Однако до настоящего времени липидный метаболизм в различных тканевых структурах при гестоза изучен недостаточно, что побудило нас поставить следующие цель и задачи исследования.
Цель исследования;
На основе исследования количественного и качественного состава ли-пидов крови и плаценты, а также интенсивности процессов, регулирующих их состав (перекисное окисление липидов, активность фосфолипазных систем), определить роль нарушений липидного метаболизма в патогенезе гес-тоза различной степени тяжести.
Задачи исследования
В соответствии с поставленной целью решали следующие задачи.
1. Исследовать качественный и количественный состав липидов плазмы крови, эритроцитов, тканевых структур плаценты (амниона и хориона) у здоровых беременных и при гестозе различной степени тяжести.
2. Определить интенсивность свободно-радикальных реакций перекис-ного окисления липидов, активность фосфолипазы Аг плазмы крови, эритроцитов, тканевых структур плаценты у здоровых беременных и при гестозе различной степени тяжести. 3. Изучить при гестозе различной степени тяжести плодово-плацентарный кровоток и функциональное состояние эритроцитов.
4. Установить зависимость нарушений липидного метаболизма в. исследованных тканевых структурах с выраженностью эндогенной интоксикации при гестозе.
5. Определить взаимозависимость выраженности расстройств в исследованных компонентах гомеостазах тяжестью гестоза, течением беременности и родоразрешения.
Научная новизна
Установлено, что при гестозе в плазме крови, эритроцитах, тканевых структурах плаценты- (хорион, амнион) возникают выраженные расстройства липидного метаболизма, в патогенезе которых имеет значение не только интенсификация процессов липопероксидации, но и активизация фосфолипазы Аг- Пригестозе тяжелойхтепени указанные изменения наибольшие.
Выявлено, что наиболее демонстративными! изменениями со стороны, липидного обмена в исследованных тканевых структурах явилисырост уров-ня хаотропных фракций - лизоформ фосфолипидови свободных жирных кислот, снижение уровня фосфолипидов cv повышенным антиоксидантным потенциалом - фосфатидилхолина.
Доказано, что уровень гидрофильных и гидрофобных токсических продуктов в плазме крови беременных с гестозом находится во взаимосвязи с выраженностью нарушений липидного метаболизма в исследованных тканевых структурах.
Показано, что расстройства липидного обмена в плазме крови, эритроцитах, тканевых структурах плаценты сопряжены с нарушениями плодово-плацентарного кровотока и функционального состояния, эритроцитов и зависят от тяжести гестоза.
Установлено, что изменения1 липидного метаболизма" в, исследованных тканевых структурах, как проявления-мембранодестабилизирующих явлений, являются одним из важнейших патогенетических факторов, обусловливающих неблагоприятное течение беременности и родоразрешения.
Практическая, значимость работы
Результаты проведенных клинико-лабораторно-инструментальных исследований позволили установить, что одним из важнейших патогенетических компонентов при гестозе выступают расстройства липидного обмена на различном уровне: локально - в плаценте, на организменном - в плазме крови и эритроцитах. Установленный факт определяет необходимость совершенствовать терапию гестоза с акцентом нахвоевременную коррекцию расстройств липидного метаболизма, особенно при тяжелой степени.
Ряд наиболее показательных фракций липидов. (уровень свободных жирных кислот, лизоформ, фосфолипидов)" плазмы крови и эритроцитов могут быть приняты,в качестве диагностических критериев,тяжести гестоза. Внедрение в практическое здравоохранение .
Результаты, исследования внедрены в практику работы МУЗ «Городской родильный дом № 2», включены, в- программу обучения; студентов на кафедре акушерства- и гинекологии медицинского института" ГОУ ВИО «МГУ им. Н.П. Огарева».
Основные положения, выносимые на защиту
1. При гестозе в плазме кровщ эритроцитах, тканевых структурах плаценты (хорион, амнион) возникают выраженные расстройства липидного метаболизма. При гестозе тяжелой степени указанные изменения наибольшие.
2. Степень эндогенной интоксикации при гестозе находится во взаимосвязи с выраженностью нарушений липидного метаболизма в исследованных тканевых структурах.
3..Расстройства липидного обмена в плазме крови, эритроцитах, тканевых структурах плаценты сопряжены с нарушениями плодово-плацентарного кровотока и функционального состояния эритроцитов. Изменения липидного метаболизма в исследованных тканевых структурах, как проявления мембрано-дестабилизирующих явлений, являются одним из важнейших патогенетических факторов, обусловливающих неблагоприятное течение беременности и родоразрешения.
Апробация работы
Основные положения настоящего исследования доложены на Всероссийском форуме «Мать и дитя» (Москва, 2007); на Международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке; концепции болезней цивилизации» (Москва, 2008), на научно-практической конференции «Медико-биологические науки для теоретической и клинической медицины» (М., 2008), на научно-практических конференциях Мордовского госуниверситета (Саранск, 2007-2008 гг.), Международной конференции «Новое в медицине» (Санкт-Петербург, 2009), на 44-й научно-практической межрегиональной медицинской конференции (Ульяновск, 2009), на заседаниях Мордовской республиканской комиссии по родовспоможению (Саранск. 2007, 2008).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 9 работ, из них 1 в издании, рекомендованном ВАК.
Состояние липидного обмена и активность процессов ПОЛ при гестозах
Процесс нормального функционирования клеток связан с процессами, протекающими на биомембранах. В основу представления о структуре большинства биологических мембран положена модель жидкокристаллической (мозаичной) мембраны Сингера-Никольсона. Основными компонентами мембран являются липиды и белки, дополнительными компонентами -гликопротеины и гликолипиды (Владимиров Ю.А., Арчаков А.И., 1972; Ленинджер А., 1974; Магомедова И.А., Омаров С-М.А., 2006). Из липидов в состав мембран входят: фосфоглицериды, сфинголипиды, холестерин и в небольших количествах три и диацилглицериды и свободные жирные кислоты (Власов А.П. и др., 1998, 2000; Робине С.Дж., 2001). Количественный и качественный состав липидов специфичен для каждого органа и ткани и направлен на оптимизацию функциональной активности. Фосфолипиды, неэстерифицированный холестерин и белки мембран связаны между собой гидрофобными, водородными и ионными связями, образуя при этом уникальную интегральную структуру, отличающуюся целостностью, стабильностью и метаболической активностью (Лескова Г.Ф., Луценко В.К., 2002; Camejo G. et al., 1993). В клетке фосфолипиды представлены глицерофосфолипидами и сфингофосфолипидами. Нейтральные по заряду фосфолипиды, имеющие четвертичную аммонийную группу, содержатся преимущественно в наружном липидном слое, фосфолипиды с первичной аминогруппой и не содержащие азота — во внутреннем. Такая локализация определяет липидную асимметрию мембран, которой отведена важная роль в слиянии контактирующих монослоев (Гурьнев Ф.А. и др., 2002; Kozlov М.М., 2001).
Стабильный липидный баланс служит основой для поддержания жидкостного состояния биомембран, способствует нормальному функционированию белков. Липиды, расположенные вне клеток, могут встраиваться в бислой и определять рецепторные функции и свойства мембран (Демин Д.Б., 2000; Mangum СР., Towle D.W., 1977; Camejo G. et al., 1993).
Состав липидов плазмы подвержен значительным колебаниям, к ним относятся неэстерифицированные жирные кислоты, триглицериды, фосфолипиды, неэстерифицированный и эстерифицированный холестерин. Липиды в основном циркулируют в связанным с белками (альбуминами, а- и Р-глобулинами) состоянии, что определяет их свойства (Лабзина Л.Я. и др., 2000; Семенова Н.А. и др., 2002; Fredrickson D.A. et al., 1972).
Совместно с макро- и микрогемодинамическими факторами весьма патогенетически значимыми всеми авторами признаются и метаболические сдвиги на клеточном уровне и, в частности, на уровне мембран клеток (Лазарев И.П., 1993; Савельева Г.М., 1998; Киселева Р.Е., Шубина О.С., 1999; Абрамченко В.В., 2001; Макацария А.Д. и др., 2002). Среди основных механизмов, способствующих нарушению целостности и сбалансированности состава мембран клеток Ю.А. Владимиров (2002) выделяет перекисное окисление липидов, активацию мембранных фосфолипаз, механическое растяжение мембран, снижение электрической плотности мембран вследствии адсорбции белков. Процесс перекисного окисления липидов считается самым важным в инициации липидных перестроек мембран клеток (Аширов Р.З. и др., 1998). ,
В живых клетках реакции липопереокисления начинаются при появлении в системе молекул с неспаренным электроном. Называется эта форма свободным радикалом. Такими радикалами могут быть: радикалы токсических веществ, супероксидный радикал 02—, радикал перекиси водорода Н02—, радикал гидроксила ОН-, липидные радикалы L— (Владимиров Ю.А., 2002).
В условиях нормальной жизнедеятельности ПОЛ следует считать физиологическим процессом, а перекиси — продуктами обмена метаболизирующих клеток. Низкие концентрации перекисей липидов в нормальных тканях обусловлены тем, что скорости их образования и расходования хорошо сбалансированы (Абрамченко В.В., 2001). Процессы перекисного окисления липидов играют важную роль в патогенезе многих расстройств гомеостаза. Вместе с тем, существуют отличия в течении перекисных процессов при различных заболеваниях, что может быть связано с наличием различных механизмов активации (Александрович Ю.С. и соавт., 2000).
В настоящее время доказано нарушение структурно-функциональных свойств клеточных мембран, которые играют важную роль в морфологической целостности клеток и внутриклеточных органелл в рецепции, ионной проницаемости, транспорте метаболитов, передаче нервного импульса, окислительном фосфорилировании, в осуществлении иммунологических реакций (Савельева Г.М., 1998; Lenzi А. е.а. 2002). Это подтверждает повышение микровязкости липидного бислоя мембран и снижение их гидрофобности соответственно тяжести заболевания (Шалина Р.И., 1995).
Определены причины поражения мембран, одной из которых является активация процессов свободнорадикального окисления липидов, которая может наступать вследствие развивающейся вначале локальной, а затем и генерализованной гипоксии (Айламазян Э.К., 1991; Абрамченко В.В. и др., 1995; Абрамченко В.В., 1994, 2001; Lenzi А. е.а. 2002).
Важным моментом формирования гестоза является утрата способности отдельных метаболических звеньев организма матери к детоксикации свободных радикалов, которые образуются в процессе обмена веществ во время развития беременности (Забелина Е.П., 1999). Исходя из этого вполне осмысленным выглядит предположение, что в основе развития преэклампсии лежит дефицит собственных антиоксидантных систем фетоплацентарного комплекса (Бурлев В.А., 1992; Мищенко А.Л. и др., 2002; Шифман Е.М., 2002).
При увеличении уровня активности процессов ПОЛ происходит депрессия фибринолитических механизмов (Заварзина О.О. и др., 2002). Вероятнее всего, что процесс липопереокисления изменяет агрегатное состояние крови, иммунологический гомеостаз и определяет основные клинические проявления гестоза (гипертензию, протеинурию, судорожный синдром) (Власов А.П. с др., 2000).
Инициация реакций перекисного окисления липидов в организме тесно связана с функционированием систем транспорта и утилизации кислорода (Абрамченко В.В., 2001). Определены причины поражения мембран, одной из которых является активация перекисного окисления липидов как результат первоначально локальной, а затем и генерализованной гипоксии. Активация перекисного окисления липидов по мере снижения тканевого парциального давления кислорода и нарушения процессов утилизации кислорода обусловлены также снижением антиоксидантной активности сыворотки в зависимости от степени тяжести гестоза (Савельева Г.М. 1998).
Клиническая характеристика и лабораторные показатели у беременных при гестозе
Спектрофотометрический метод определения продуктов ПОЛ основан на том, что диеновые коньюгаты. обладают характерным поглощением при длине волны 232-233 нм (Ганстон Ф.Д., 1986). Липиды из тканей экстрагировали хлороформ-метанольной смесью. Суммарный препарат липидов высушивали досуха на роторном-вакуумном испарителе и остаток липидов растворяли в гексане. Спектр поглощения регистрировали при длинах волн 190-275 нм на спектрофотометре СФ-46 (Россия). Окисленность липидов оценивали по величинам индексов окисленности, рассчитываемых на 1 мг липидов по определению отношения А 232/А 215 и А275АА215 (А - оптическая плотность при указанных длинах волн). Содержание диеновых и триеновых коньюгатов выражали в усл.ед./мг липидов.
Методика определения вторичных продуктов ПОЛ1 при спонтанном и Fe индуцированном ПОЛ. Интенсивность ПОЛ определяли по накоплению малонового диальдегида в реакции с 2-тиобарбитуровой кислотой (ТБК). Для этого к 1 мл плазмы крови или гомогената плаценты добавляли 3 мл 1% фосфорной кислоты, содержащей 0,5 ммоль ЭДТА и 1 мл 0,5% раствора ТБК. Для определения антиокислительной активности липидов предварительно проводили индукцию липопереокисления раствором сульфата железа в концентрации 5 мкмоль в течение часа. Образцы перемешивали и инкубировали 45 мин при 100 С. Затем образцы охлаждали и приливали 4 мл н-бутанола, тщательно встряхивали и центрифугировали 15 мин при 1500 g. В верхней бутанольной фазе регистрировали спектр поглощения в области 515-550 нм. Определяли оптическую плотность при 532 нм, используя в качестве базовых точки спектра при 515 и 550 нм. Концентрацию ТБК-реактивных продуктов выражали в нмоль МДА на 1 грамм белка. Содержание ТБК-реагирующих продуктов-выражали в нмоль/г белка (Егоров Д.Ю., Козлов А.В:, 1987).
Определения активности фосфолипазыА2, Активность фосфолипазы А2 оценивали в среде, содержащей 10 ммоль трис-НСЬ-буфер (рН 8,0), 150 ммоль тритон Х-100, 10 ммоль ОаСЬ и субстрат (1,2 ммоль). В качестве субстрата использовали- фосфатидилхолины яичного желтка. Регистрацию каталитической деятельности фермента проводили на установке, состоящей из иономера ЭВ-74, электродной системы (электрод сравнения ЭВЛ-1М, измерительный электрод ЭСЛ-43-07), ультра-термостата и микробюретки. Активность ФЛ Аг оценивали титрометрическим методом с помощью нейтрализации 0,02 М NaOH карбоксильных групп, выделяющихся свободных жирных кислот. Расчет проводили по калибровочной кривой, построенной по палмитиновой кислоте и выражали в мкмоль/с/г белка (Трофимов В:А., 1999).
Определение активности каталазы. Фотометрический метод определения активности каталазы основан на способности перекисей образовывать с молибдатом аммония стойкий окрашенный комплекс. К 0,1 мл плазмьъ крови или гомогената плаценты приливали 2 мл 0,03% перекиси. В холостую пробу вместо сыворотки добавляли 0,1 мл дистиллированной воды. Реакцию останавливали через 10 мин добавлением 1 мл 4% раствора молибдата аммония. Образцы центрифугировали при 8000 об/мин в течение 40 мин. Оптическую плотность измеряли на спектрофотометре при длине 410 нм. Активность каталазы выражали в мг Н202/мин/г белка (Королюк М.А., 1988).
Определение активности супероксиддисмутазы. К 500 мг ткани плаценты приливали 3 мл фосфатного буфера (рН 7,4) и гомогенизировали до появления однородной суспензии. После центрифугирования при 5000 об/мин в течение 15 минут отбирали 0,5 мл супернатанта и вносили в центрифужную пробирку, содержащую 1 мл хлороформно-спиртовой смеси (2:1, по объему). Полученную смесь охлаждали, тщательно перемешивали и для удаления гемоглобина центрифугировали. Водно-спиртовой слой, содержащий фермент , отбирали и добавляли несколько капель насыщенного раствора КН2РО4. Ферментный препарат получали разбавлением полученной фазы в 20 раз. В состав реакционной среды входили нитросиний тетразолий (57 мкмоль), НАД Н (98,5 мкмоль), феназинметасульфат (16 мкмоль) и 0,2 мл ферментного препарата. Нитросиний тетразолий используется как индикатор, способный акцептировать электроны и восстанавливаться до формазана, имеющего максимум поглощения» при 560 нм. Восстановленная форма биформазана окрашена от синего до черного цвета. Нитросиний тетразолий быстро восстанавливают в присутствии феназинметасульфата флавопротеиновые ферменты. Феназинметасульфат используется в реакциях определения активности ферментов как переносчик электронов между ферментами и молекулярным кислородом или солями тетразолия. Феназинметасульфат восстанавливается неэнзиматически NADH или NADPH и используется для стыковки дегидрогеназ с другими акцепторами электронов, например, солями тетразолия (Гуревич B.C. и др., 1990). Реакция протекала 10 минут в 0,5 моль фосфатном буфере (рН 8,3) с ЭДТА (0,1 ммоль) при 25 С в аэробных условиях (Гуревич B.C. и др., 1990). В контрольную пробу ферментный препарат не вносили. Активность СОД рассчитывали по формуле: где A - активность фермента в условных единицах, рассчитанная на 1 мг белка, Т% - процент торможения реакции восстановления нитросинего тетразолия в пробе за минуту.
Определение общего белка плазмы крови. В 1976 году Бредфорд предложила метод фотометрического определения белка, окрашивая его красителем кумасси бриллиантовым голубым G-250. 0,34% (вес/объём) маточный раствор готовится в смеси двух объемных долей 16 М фосфорной кислоты и одной объёмной доли 94% (вес/объём) этанола, в которой краситель кумасси бриллиантовый голубой G-250 хорошо растворим и стабилен при комнатной температуре в течение длительного времени. Рабочий реагент состоит из 0,01-0,02% (вес/объём) красителя G-250 в 1,6 М фосфорной кислоте, содержащей 4,7% (вес/объём) этанола. Для приготовления рабочего реагента 30 мл маточного раствора смешивают с 80 мл 16 М фосфорной кислоты и 37,5 мл 94% (вес/объём) этанола и объём доводят до 1 л диет, водой. Оптимальная концентрация красителя в рабочем реагенте соответствует А55о= 1,0-1,1. Величину А550 коррелируют, варьируя объём маточного раствора красителя в смеси. Рабочий реагент приливается к определяемому образцу в отношении 1:20; Измерение проводили при 595 нм через 5 мин после смешивания реагента и образца. Для расчета содержания белка использовали калибровочный график, построенный в пределах концентраций от 0,01 до 0,10 мг стандартного образца белка.
Уровень процессов липопереокисления и функциональное состояние мембран эритроцитов при гестозе
Срыв адаптационных механизмов в организме матери к развивающейся беременности необходимо изучать на клеточном и мембранном уровне (Власов А.П. и др., 2000; Робине С.Дж., 2001; Лескова Г.Ф., Луценко В.К., 2002; Гурьнев Ф.А. и др., 2002; Владимиров Ю.А., 2002; Camejo G. et al., 1993). При экстремальных состояниях активируется процесс липопереокисления, являющийся одним из главных механизмов повреждения мембран (Бурлев В.А., 1992; Шифман Е.М., 2002; Заварзина О.О. и др., 2002; Александрович Ю.С. и др., 2000; Redman C.W., Sargent I.L., 2001; Wilhelm Filho D.e.a., 2002; Lenzi A. e.a. 2002). Однако, на данном этапе, липидный метаболизм и роль процессов перекисного окисления липидов в патогенезе гестоза недостаточно изучены, что побудило нас поставить следующие цель и задачи исследования.
Целью данной работы явилось определение роли нарушений липидного-метаболизма в патогенезе гестоза различной степени тяжести на основе. исследования количественного и качественного состава липидов крови и плаценты, а также интенсивности процессов, регулирующих их г состав (ПОЛ, активность фосфолипазных систем).
Для осуществления цели исследования и решения поставленных в работе задач нами методом случайной выборки были отобраны 112 беременных женщин , которых распределили по группам. Была выделена группа сравнения в количестве 25 здоровых беременных с физиологическим течением беременности. Величины изученных показателей, полученные в этой группе, были использованы в качестве отправной точки сравнения как физиологически нормальные значения. В состав исследуемой группы вошло 87 беременных с гестозом, разделенных на три подгруппы соответственно степени тяжести гестоза, проходивших лечение в отделениях патологии беременности МУЗ «Городской родильный дом № 2» г. Саранска.
Оценку степени тяжести гестоза при поступлении в стационар проводили при помощи шкалы Г.М. Савельевой (2001), составленной на основе модифицированной шкалы и учитывающей в качестве критериев клинические проявления (гипертензия, протеинурия, отеки).
Первую подгруппу составили 35 беременных с гестозом легкой степени тяжести. Вторая подгруппа состояла из 28 беременных, у которых была диагностирована средняя степень тяжести заболевания. В последнюю, третью подгруппу, вошли 24 беременные женщины с гестозом тяжелой степени тяжести.
У всех беременных учитывали наличие и характер жалоб, тщательно собирали анамнез, выявляли особенности социально-бытового статуса, наследственности, наличие и характер профессиональных вредностей. Изучали общеклинические анализы крови и мочи, выраженность эндогенной интоксикации по ее гидрофильному и гидрофобному компонентам в плазме крови, качественный и количественный состав липидов, интенсивность ПОЛ, активность фосфолипазы Аг, каталазы, супероксиддисмутазы в плазме крови, эритроцитах и тканях плаценты.
Беременным первой и частично второй подгруппы помощь оказывали в отделении патологии беременных и дневном стационаре. Часть женщин со средней степенью гестоза и беременные с тяжелой формой заболевания получали почасовое лечение в палате интенсивной терапии. У беременных третьей подгруппы проводили интенсивную терапию и оценивали эффект от лечения в течение 4—6 часов, после чего решали вопрос о пролонгировании беременности либо прерывании беременности.
Средний срок пребывания в стационаре составил 14,8±1,8 койко-дня, при этом до родов обследованные лечились в стационаре 6,8±1,9 койко-дней. Было выявлено, что срок нахождения беременных женщин в стационаре увеличивался в зависимости от выраженности патологического процесса, а сроки нахождения беременных до родоразрешения, напротив, укорачивались. По группам эти сроки составили: у беременных с гестозом легкой степени - 12,5±2,4 и 7,7±2,3 койко-дней, с гестозом средней степени — 16,3±3,9 и 6,2±3,8 койко-дней, с гестозом тяжелой степени — 17,6±4,8 и 6,4±4,1 койко-дней соответственно. Уменьшение сроков пребывания в стационаре беременных с тяжелыми формами гестоза до родов произошло за счет необходимости перевода части беременных этой подгруппы на досрочные программированные роды.
Анализ клинической характеристики показал, что гестоз чаще развивался у женщин активного репродуктивного возраста. Основную часть беременных (более 50 %) составляли лица моложе 25 летнего возраста. В возрастную группу 25-35 лет входило 38 % беременных. Среди беременных были преимущественно первородящие, страдающие заболеваниями почек и нейроциркуляторной дистонией.
Развитие гестоза сопровождалось гемоконцентрацией, проявлявшейся увеличением показателей гемоглобина, эритроцитов и гематокрита. Эти изменения известны и достаточно подробно описаны в литературе (Зильбер А.П., Шифман Е.М., 1997; Зеневич И.В., 1999) и в большей степени выражены при тяжелой степени гестоза. В наших исследованиях содержание эритроцитов достоверно увеличивалось в I подгруппе на 18,9 % (р 0,05), во II подгруппе - на 26,8 % (р 0,05) и в III подгруппе - на 35,4 % (р 0,05). Уровень гемоглобина был повышен при гестозе тяжелой степени на 13,1 % (р 0,05). Отмечали значительный рост гематокрита, значение которого было выше физиологической нормы на 26,4 %. Характерным признаком гестоза было значительное (на 28,4 %) снижение количества тромбоцитов. С увеличением степени тяжести гестоза возрастало содержание мочевины и креатинина в сыворотке крови на 24,6 % при легкой степени гестоза, на 34,4 % - при средней и на 69,4 % - при тяжелой степени (р 0,05), что также согласуется с данными литературы (Кулаков В.И. и др., 2000; Сидорова И.С. и соавт., 2007). Потеря белка с мочой у большинства беременных с гестозом вела к умеренной гипопротеинемии за счет снижения альбуминов (Зильбер А.П., Шифман Е.М., 1997; Стрижова Н.В., 1998).
Качественный и количественный спектр липидов плазмы крови у беременных при гестозе
Несомненно, что процесс нормального функционирования клеток связан с процессами, протекающими на биомембранах (Владимиров Ю:А., Арчаков А.И., 1972; Магомедова И. А., Омаров С-М.А., 2006). Свободнорадикальное окисление липидов считается основным в дезрегулировании мембранных свойств (Владимиров Ю.А., 2002). Нами была исследована активность перекисного окисления липидов в тканях плаценты, в плазме крови и эритроцитах - основных показателях гомеостаза. Первичными продуктами реакций окисления липидов являются диеновые коньюгаты, которые при нарушении нормального метаболизма превращаются в еще более токсичные соединения - вторичные продукты ПОЛ (МДА и Fe-МДА) (Евстигнеева Р.П., Волков И.М., Чудинова В.В., 1998; Власов А. П. и др., 2003). В результате исследования мы установили,что у беременных с гестозом происходит интенсификация процессов ПОЛ в структурах ткани плаценты, плазме крови и эритроцитах. В ткани хориона уровень ДК превышал норму на 48,0-128,0 % (р 0,05), концентрация вторичных продуктов ПОЛ - на 31,3-48,5 % (р 0,05). В структурах амниона при гестозе легкой степени нарушений не определялось, а во второй и третьей подгруппах уровень продуктов ПОЛ превышал показатели контрольной группы на 24,1-74,4 % (р 0,05).
В плазме крови и эритроцитарных мембранах накопление продуктов ПОЛ было более выражено. В плазме крови уровень ДК превышал данные группы сравнения на 29,2-104,2 % (р 0,05), МДА - на 32,0-111,2 % (р 0,05), Fe-МДА - на 21,0—53,7 % (р 0,05) соответственно тяжести гестоза. В эритроцитах концентрация ДК превышала показатели контрольной группы на 29,4-82,4 % (р 0,05), МДА - на 94,3-128,3 % (р 0,05), Fe-МДА - на 18,3-59,5 % (р 0,05). Достоверное увеличение ДК и Fe-МДА прослеживалось у беременных первой подгруппы.
Гестоз сопровождается некоторой утратой способности организма матери к детоксикации свободных радикалов во время развития беременности (Забелина Е.П., 1999). При преэклампсии регистрируется относительный дефицит внутриклеточных антиоксидантных ферментов, что может быть использовано в качестве прогностического критерия развития заболевания (Савельева Г.М., 1998, 2001; Аккер Л.В., Варшавский Б.Я., 2000; Мищенко А.Л. и соавт., 2002; Шифман Е.М., 2002). По полученным нами данным в тканях амниона и хориона активность каталазы не имела достоверных отличий от показателей группы сравнения даже при гестозе тяжелой степени. В плазме крови беременных второй подгруппы уровень активности каталазы превышал показатели контрольной группы на 65,7 % (р 0,05), что, повидимому, связано с выходом фермента из тканей. При гестозе тяжелой степени ее уровень активности был снижен на 25,7 % (р 0,05), указывая на дефицит фермента. В эритроцитах депрессия активности каталазы прослеживалась у беременных второй подгруппы на 20,0 % (р 0,05). Активность супероксиддисмутазы в клетках хориона плаценты при гестозе средней и тяжелой степени была угнетена на 24,9 и 48,4 % (р 0,05). В ткани амниона картина выглядела практически идентичной. Активность супероксиддисмутазы в плазме крови и эритроцитах была зарегистрирована сниженной у беременных всех трех подгрупп: в плазме крови - на 16,6-35,6 % (р 0,05); в эритроцитах - на 20,4-34,3 % (р 0,05).
Активация фосфолипазы Аг является одним из ведущих звеньев в расстройстве гомеостаза (Тарасова Т.В., 1998; Eguchi Н. et al., 1994). Активированная ФЛА2 является мощным усилителем влияния процессов липопереокисления на биологические мембраны (Тимушева Ю.Т. и др., 1998). По нашим данным, полученным при исследовании , в ткани хориона активность ФЛА2 была повышенной на 73,6-195,8 % (р 0,05), в ткани амниона - на 78,0—124,2 % (р 0,05). В хорионе изменения достоверно появлялись у беременных первой подгруппы. Активность фосфолипазы в плазме крови была повышена в 3-6 раз (р 0,05), в эритроцитах - в 2,5—3,4 раза (р 0,05) у всех подгрупп беременных.
При эндотоксикозе эритроциты способны образовывать агрегаты и изменять свою форму, а так же адсорбировать ряд веществ за счет огромной суммарной площади (Федорова З.Д. и др., 1989; Эстрин В.В. и др., 1993; Бессемельцев С.С. и др., 1997). При проведении исследования было выявлено, что при гестозе легкой степени деформабельность и неспецифическая проницаемость эритроцитов практически не изменялись. У беременных второй и третьей подгрупп пластичность клеток была снижена на 26,6—48,6 % (р 0,05), а проницаемость эритромембран повышена - на 42,4-62,0 % (р 0,05).
Стойкий липидный баланс является основой для поддержания жидкостного состояния биомембран, способствует нормальному функционированию белков (Демин Д.Б., 2000; Camejo G. et al., 1993). При повышении активности фосфолипазы А2 происходит гидролиз фосфолипидов с образованием лизофосфатидилхолина и свободных жирных кислот, обладающих хаотропным действием, что приводит к нарушению свойств мембранных рецепторов. Вероятно, это связано с понижением уровня фосфатидилхолина (Смурова Е.А., Нестерова Л.А., Манухин Б.Н., 1996). В наших исследованиях также подтверждено повышение концентрации лизоформ фосфолипидов и свободных жирных кислот в исследуемых тканях и снижение уровня фосфатидилхолина.
