Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 10
1.1. Генетические факторы предрасположенности к сердечно-сосудистым заболеваниям и ИМ 10
1.2. Подходы, используемые для выявления генетической предрасположенности 13
1.2.1.Полный геномный поиск 13
1.2.2. Подход «ген-кандидат 14
1.3. Этнология и патогенез ИМ 19
1.4. С-рсактивиый белок и его ген (CRP) 22
1.5. Интсрлсйкин-6 (1L-6) и его ген 26
1.6. Фактор некроза опухоли альфа (TNF) и его ген 28
1.7- Лимфочоксин альфа (I .ТА) и его ген 30
1.8. Трансформирующий фактор роста р" (TGFp) и его ген 31
1.9. СС-5 хемокиноиый рецептор (CCR5) и его ген 33
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 36
2.1. Клиническая характеристика больных 36
2.2. Методы исследования 39
2.3. Генетический анализ 40
2.3.1 .Выделение геномной ДНК из периферической крови 40
2.3.2.Геномноетипирование 40
2.4.Статистический анализ 43
ГЛАВА 3. Результаты исследования 45
3.1. Попарное сравнение частот аллелей п генотипов полиморфных участков отдельных. генов: С1444Т гена CRP, A252G гена LTA, w/d гена CCR5, A(-308)G гена TNF. G(-174)CrcHa/i-6*, A(-509)G rtuaTGFDJ у больных ИМ и в группе контроля 45
3.2. Комплексный анализ ассоциации полиморфизмов С1444Т гена CRP. A252G гена LTA, w/d гена CCR5, A(-308)G гена TNF, G(-174)C гена 1L-6 и A(-509)G гена TGFB1 с ИМ 51
3.3. Сравнение частот аллелей и генотипов полиморфного участка С1444Т гена CRP у больных разными формами ИМ в разных возрастных группах и при разных концентрациях С-рсактивного белка в сыворотке крови 56
3.4. Полиморфизм С1444Т гена CRP, A252G генаІГЛ, w/d гена CCR5, A(-308)G гена TNF, G<-I74)C гена IL-6, A(-509)G гена TGFB1 и прогноз для больных ИМ .58
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов 66
4.1- Влияние полиморфизма С1444Т гена CRP, A252G гена LTA, w/d гена CCR5. A(-308)G гена TNF, G<-174)C гена ЛЧ A(-509)G гена TGFB1 на риск развития ИМ.. 66
4.2. Прогностическое значение полиморфизмов С1444Т гена CRP, A252G гена LTA, w/d гена CCR5, A(-308)G гена TNF, G(-174)C гена/1-tf, A(-509)G гена TGFBJ у больных ИМ 74
Выводы 77
Практические рекомендации 78
Литература 79
- Генетические факторы предрасположенности к сердечно-сосудистым заболеваниям и ИМ
- Клиническая характеристика больных
- Попарное сравнение частот аллелей п генотипов полиморфных участков отдельных. генов: С1444Т гена CRP, A252G гена LTA, w/d гена CCR5, A(-308)G гена TNF. G(-174)CrcHa/i-6*, A(-509)G rtuaTGFDJ у больных ИМ и в группе контроля
- Влияние полиморфизма С1444Т гена CRP, A252G гена LTA, w/d гена CCR5. A(-308)G гена TNF, G<-174)C гена ЛЧ A(-509)G гена TGFB1 на риск развития ИМ..
Введение к работе
Актуальность проблемы
По данным ВОЗ сердечно-сосудистые заболевания, главным образом инфаркт миокарда (ИМ), занимают первое место среди причин смерти во всем мире, в том числе и в России [2002 Heart and Stroke Statistical Update]. ИМ заметно ухудшает качество и продолжительность жизни. Первичная профилактика ИМ является важной задачей здравоохранения. Около 50% больных, перенесших ИМ, не имеют предшествующего коронарного анамнеза. Выявление групп с высокой вероятностью развития ИМ позволит активно наблюдать этих лиц и, возможно, проводить профилактическое лечение.
ИМ является мультифакториальным заболеванием. Его развитие происходит под влиянием различных факторов, определяющихся как воздействием внешней среды, так и наследственной предрасположенностью. При этом многие факторы риска ИМ, как генетические, так и средовые, оказывают взаимное влияние друг на друга. Такие общеизвестные факторы риска ИМ, как артериальная гипертония, гиперхолестеринемия, сахарный диабет, во многом генетически обусловлены. Сам факт ИМ у ближайших родственников больного является независимым предиктором этого заболевания. В 1992г Cambien с соавт. продемонстрировали, что I/D полиморфизм гена ангиотензин-превращающего фермента (АПФ) связан с риском развития ИМ [Cambien и совт., 1992]. В дальнейшем были проведены сотни исследований по изучению этого и других полиморфизмов одного гена для уточнения их связи с ишемической болезнью сердца (ИБС) и ИМ. Единственный ген, который бы определял риск развития заболевания, так и не был найден. В настоящее время сложилось четкое представление, что генетической основой ИБС и ИМ как полигенных заболеваний является совместный вклад ряда взаимодействующих или независимо действующих генов, в связи с чем предпочтительным становится комплексный анализ вклада различных генов в развитие ИМ. В исследованиях, где не проводится полный геномный поиск и число выбранных генов-кандидатов не велико, как правило,
рассматриваются генетические маркеры, белковые продукты которых относятся к определенной системе организма или звену патогенеза заболевания (свертывающая система, метаболизм липидов и др.).
В основе развития острого коронарного синдрома (ОКС) и ИМ лежит концепция нестабильности атеросклеротической бляшки [Libby и соавт., 2001]. Исследования в этой области показали, что процесс дестабилизации атеросклеротической бляшки напоминает классическую воспалительную реакцию, в которой непосредственное участие принимают эндотелиальные клетки, макрофаги, Т-лимфоциты, нейтрофилы и гладкомышечные клетки. Мы посчитали важным оценить влияние генов, белковые продукты которых участвуют в воспалительной реакции, на риск возникновения и прогноз ИМ. Выбор полиморфных участков исследуемых генов определялся их функциональной значимостью.
Цель исследования:
Цель исследования - анализ связи полиморфизмов генов, относящихся к системе воспаления, а именно, генов С-реактивного белка (CRP), интерлейкина-6 (IL-6), лимфотоксина альфа (LTA), фактора некроза опухоли (TNF), трансформирующего ростового фактора pi (TGFB1) и хемокинового рецептора СС-5 (CCR5), с риском возникновения ИМ и прогнозом его течения.
Задачи исследования:
1. Провести сравнительный анализ распределения аллельных вариантов генов, белковые продукты которых вовлечены в реакцию воспаления, а именно, аллелей и генотипов однонуклеотидных полиморфизмов (ОНИ) С1444Т гена CRP, G(-174)C гена IL-6, A252G гена LTA, A(-308)G гена TNF, A(-509)G гена TGFB1 и инсерционно-делеционного полиморфизма w/d гена CCR5, у больных с ИМ и в контрольной группе.
2. Провести комплексный анализ совместного влияния носительства аллелей и генотипов исследованных полиморфных участков генов на риск развития ИМ.
3. Провести анализ связи вариантов полиморфизма С1444Т гена CRP с
уровнем CRP у больных ИМ.
4. Оценить связь носительства аллелей и генотипов исследованных
полиморфных участков генов с исходами заболевания больных ИМ по данным
двухлетнего наблюдения.
Научная новизна работы
Впервые исследовано влияние полиморфизмов С1444Т гена CRP, G(-174)C гена IL-6, A252G гена LTA, A(-308)G гена TNF, A(-509)G гена TGFB1, w/d гена CCR5 на риск развития ИМ и прогноз течения заболевания по данным двухлетнего наблюдения. Впервые в отечественной практике проведен комплексный анализ связи носительства аллелей и генотипов генов, относящихся к системе воспаления, а именно, генов CRP, IL-6, LTA, TNF, TGFB1 и CCR5, с риском развития ИМ. Впервые для больных ИМ, русских по этнической принадлежности, выявлена связь риска развития ИМ с генотипом Т/Т полиморфного участка С1444Т гена CRP, аллелем w и генотипом w/w полиморфизма w/d гена CCR5 и аллелем А и генотипом А/А полиморфизма A252G LTA. С помощью программного обеспечения APSampler выявлены два сочетания, носительство которых ассоциировано с риском развития ИМ -сочетание генотипа w/w гена CCR5 с аллелем (—509)Т гена TGFB1 и сочетание аллелей А252 гена LTA и (-509)Т гена TGFB1, а также ряд сочетаний, носительство которых является благоприятным фактором с точки зрения оценки риска развития этого заболевания.
Проведен анализ связи носительства аллельных вариантов полиморфизма С1444Т гена CRP с уровнем CRP у больных ИМ, русских по этнической принадлежности. Выявлена ассоциация генотипа Т/Т с более высоким уровнем CRP. Эти данные, в сочетании с наблюдавшейся нами ассоциацией носительства аллеля Т данного полиморфизма с неблагоприятным прогнозом у больных ИМ, согласуются с современным представлением, что высокий уровень CRP в крови у больных ИМ является плохим прогностическим признаком.
Выявлено прогностическое значение анализа полиморфизма С1444Т гена CRP и полиморфизма A252G гена LTA у больных ИМ, русских по этнической принадлежности.
Практическая значимость работы
Носительство генотипов Т/Т ОНИ С1444Т гена CRP, w/w полиморфизма w/d гена CCR5 и А/А ОНИ A252G LTA, а также носительство сочетаний генотипа w/w гена CCR5 и аллеля (-509)Т гена TGFB1; аллеля 252А гена LTA и аллеля (-509)Т гена TGFB1 повышает риск развития ИМ и может быть учтено при выборе кандидатов на проведение первичной профилактики ИМ у русских по этнической принадлежности.
Определение генотипа полиморфизма С1444Т гена CRP в комплексе с уровнем CRP и другими клиническими данными могут быть использованы для стратификации риска ИМ у больных ИБС русских по этнической принадлежности и определения прогноза заболевания у больных ИМ русских по этнической принадлежности.
Положения, выносимые на защиту:
І.При попарном анализе частот аллелей и генотипов полиморфного участка С1444Т гена CRP выявлена ассоциация Т/Т генотипа с риском развития ИМ. Выявлена связь генотипа Т/Т с более высоким уровнем CRP у больных ИМ в первые сутки.
2.При попарном анализе частот аллелей и генотипов полиморфного участка A252G гена LTA выявлена связь А/А генотипа с риском развития ИМ.
З.При попарном сравнении для мужчин и женщин по отдельности частот аллелей и генотипов гена CCR5 у больных ИМ и в контрольной группе носительство аллеля w оказалось ассоциированным с риском развития ИМ только в подгруппе мужчин, что может быть отражать существование полового диморфизма в генетической предрасположенности к ИМ.
4.Комплексный анализ с помощью алгоритма APSampler подтвердил описанные выше данные об ассоциации с ИМ носительства одиночных аллелей/генотипов генов CRP и LTA. Кроме того, была выявлена ассоциация
генотипа w/w инсерционно-делеционного полиморфизма w/d гена CCR5 с риском развития ИМ при сравнении общей группы больных ИМ и группы контроля, а не только подгрупп мужчин (как это было получено при попарном сравнении). Комплексный анализ выявил два сочетания аллелей и генотипо, ассоциированных с риском развития ИМ: 1) носительство генотипа w/w гена CCR5 плюс носительство аллеля (—509)Т гена TGFB1, 2) совместное носительство аллелей А252 гена LTA и того же, что и в первом сочетании, аллеля (—509)Т гена TGFB1 и ряд протективных сочетаний.
5.Выявлена более высокая частота аллеля Т и частота носительства аллеля Т ОНП С1444Т гена CRP, а также более высокая частота аллеля А ОНП A252G гена LTA в группе, перенесших ИМ, у которых на протяжении 2ух лет наблюдались сердечно-сосудистые осложнения. Таким образом, аллели Т гена CRP и А гена LTA можно рассматривать как фактор риска неблагоприятного прогноза для больных ИМ.
Апробация диссертации проведена 31 марта 2011 года на межотделенческой конференции ФГУ РКНПК Минздравсоцразвития РФ. Диссертация рекомендована к защите.
Публикации: по теме диссертации опубликовано 4 печатных работы: 3 статьи, 1 тезисы. Материалы диссертации доложены на конференции «Перспективы кардиологии России в XXI веке», Москва, июнь 2009.
Структура и объем диссертации: Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, изложения результатов исследования, обсуждения результатов, выводов и практических рекомендаций. Работа изложена на 95 страницах машинописного текста, содержит 5 рисунков и 21 таблицу. Указатель литературы включает 197 работ отечественных и зарубежных авторов.
Генетические факторы предрасположенности к сердечно-сосудистым заболеваниям и ИМ
Более 20 лет проводятся исследования, посвященные изучению генов, ассоциированных с риском развития, прогнозом и эффективностью лечения сердечно-сосудистых заболеваний. К настоящему времени изучен ряд моногенных наследственных заболеваний сердечно-сосудистой системы, приводящих к развитию артериальной гипертонии, гипертрофии миокарда, гиперлипидемии, аритмиям и внезапной смерти. Например, синдром Бругада, синдром Лиддля, удлиинего интервала QT и другие. Исследование многих других заболеваний сердечно сосудистой системы, имеющих наследственную предрасположенность, но не наследующихся но Менделевскому типу, привело к пониманию их полигенной мультифакториальной природы. Развитие таких заболеваний определяется вкладом полиморфных вариантов ряда генов и других, непаследственных, факторов; Действующих независимо друг От друга или взаимодействующих между собой. Значительные успехи достигнуты при исследовании моногенных сердечнососудистых заболеваний: В работе Brown и Goldstein описана молекулярная основа развития семейной гиперхолестеринемии. [5] Заболевание обусловлено мутациями гена, кодирующего рецептор липопротеинов низкой плотности и характеризуется высоким уровнем (холестерина в крови и ранним развитием ИБС. Выявление этих генетических нарушений привело к дальнейшему изучению метаболизма холестерина, определению роли ГМК КоА-редуктазы и созданию статинов. В последующем были изучены другие моногенные формы дислипидемий (болезнь Tangier, ситостеролемия и др), а также описаны генетические маркеры полигенных видов нарушений липидиого обмена. Характеристика генетических и молекулярных основ семейной гипертрофической кардиомионагии как моногенного заболевания сыграла важную роль в понимании патогенеза гипертрофии миокарда [6]. Известны различные мутации в нескольких генах, кодирующих белки саркомера, каждая из которых приводит к развитию одних и тех же клиническим вариантов и конечных точек гипертрофической кардиомиопатии. И наоборот, одна мутация одного и того же гена у членов одной семьи может вызывать различные фенотипические варианты этого заболевания [7]. Одно из объяснений этого феномена состоит в том, что факторы окружающей среды могут оказывать влияние на клиническое течение и прогноз семейной гипертрофической кардиомиопатии. Исследование семейных фоэм артериальной гипертонии, наследующихся по Менделевскому типу, выявило не менее 10 ОНП, определяющих развитие этой болезни [8,9]. Выявленные полиморфизмы были взаимосвязаны с гомеостазом натрия и работой- ионных каналов почки, регулирующихся мипералокортикоидами. Дальнейшие работы в этом направлении привели к выявлению большого числа генов-кандидатов, ассоциированных с регуляцией ионного гомеостаза и с ренин-ангиотензин-альдостероновойсистемой [8]. В последние годы большинство работ по поиску генетических маркеров сердечно-сосудистых заболеваниий посвящено гораздо более распространенным, чем моногенные, мультифакториальным и полигенным заболеваниям, таким как атеросклероз, ИБС, ИМ. Наиболее распространенным подходом для изучения генетической предрасположенности к полигенным заболеваниям является, популяционный анализ методом "случай-контроль". При анализе методом "случай-контроль" проводят сравнение распределения аллелей того или иного генетического полиморфного участка между репрезентативными выборками неродственных больных и неродственных здоровых индивидов. Конкретный генетический маркер считается ассоциированным с болезнью в том случае, если обнаружены статистически значимые отличия по его носительству в группах больных и здоровых. В качестве полиморфных маркеров чаще всего вступают ОНП, реже делеции/инсерции и микросателлитные повторы. У последних варьирующей по числу повторяющейся единицей является последовательность из 1 - 6, а чаще из 2 или 4 пар оснований. Иногда сравнивают распределение варьирующих по числу тандемных повторов (variable number tandem repeal, или VNTR), повторяющейся единицей которых является 15 - 35 пар оснований. Распределение полиморфных маркеров исследуют также в семьях с несколькими больными (анализ сцепления). Поиск генов, вовлеченных , в развитие полигенных заболеваний, традиционно проводят при помощи анализа ассоциации или сцепления с заболеванием отдельных "генов-кандидатов", выбранных исходя из природы заболевания и представлений о функции продукта гена в этиологии заболевания. В последнее время благодаря появлению современных методов высокопроизводительного-анализа ДНК стало возможным проводить полный геномный поиск, позволяющий анализировать сотни тысяч и даже миллионы полиморфных маркеров, распредгленных по геному, в одном эксперименте . Проведено множество работ по изучению влияния генетических факторов на риск развития и прогноз сердечно-сосудистых заболеваний. Оказалось, что в ряде случаев результаты, полученные в одной работе, не подтверждаются- в последующих исследованиях, проведенных для других этносов. Сегодня ясно, что это может быть связано с этническими особенностями структуры генома, такими как представленность различных ОНП и различающиеся частоты аллелей. Однако, противоречивые результаты иногда получают и при исследовании одной и той же популяции, что может определяться недостаточной однородностью исследуемых групп, их возрастным и половым составом, а также с наличием или отсутствием других факторов риска заболевания.
Клиническая характеристика больных
В исследование включено 254 русских больных с ИМ (52,3 + 10,3 лет), из них 185 мужчин (50,1 +10,6 леї) и 79 женщин (55,2+10,1 лет). Контрольную группу составили 174 русских без сердечно-сосудистых и других тяжелых сопутствующих заболеваний в анамнезе (60,5 + 14 лет), из них 96 мужчин (57,3+13,9 лет), 78 женщины (63,1+14 лет). Среди больных ИМ у 221 человек диагностирован HMnST, у 43 человек - MM6nST. Диагностические критерии ИМ: характерная динамика маркеров повреждения миокарда - тропонннов Т или 1, креатинфосфокиназы (КФК) и ее кардиоспецифического изофермсита MB (МВ-КФК) в сочетании с хотя бы одним из следующих критериев: 1) болевой приступ более 20 мин; 2) изменения на ЭКГ: а) для HMnST - элевация сегмента ST в двух соседних отведениях на уровне точки J на 0;2 мВ (2 мм) и более для мужчин и 0,15 мВ (1,5 мм) и более для женщин в отведениях V2-V3 и на 0,1 мВ (1 мм) и более в отведениях I, II, Ш, aVF., aVF, V.—V6. 2) образование патологического зубца О: любого в отведениях V-Vj и продолжительностью 0,03 с и более в отведениях 1, II, III, aVL, aVF, V4-V6; б) для ИМбпЭТ - горизонтальная и косо ни сходящая депрессия сегмента ST на 0,1 мВ (1 мм) и более, ко со вое ходящая депрессия на 0,2 мВ (2 мм) и более, инверсия зубца Т 1 мм в отведениях I, II, III, aVL, aVF, V,-V6. В контрольную группу включались лица, не имеющие коронарного анамнеза и перенесенного инсульта, у ближайших родственников которых в возрасте моложе 55 лет у мужчин и 65 лет у женщин не было ИМ, стенокардии, инсульта, окклюзирующего поражения периферических или сонных артерий. Критериями исключения для больных и лиц, включенных в контрольную группу, являлись тяжелые заболевания, влияющие на прогноз: анемия, тяжелый сахарный диабет, тирсотоксикэз, почечная недостаточность (повышение креатинина крови больше, чем в два раза от существующей нормы), печеночная недостаточность (уровень аланиновой аминотрансферазы в крови в три раза больше нормы), онкологические заболевания и др.; инфекционно- воспалительные заболевания в период обострения; аутоиммунные заболевания; длительное лечение кортикостероидами; тяжелые хирургические операции в течение двух месяцев перед ИМ или перед включением (для контрольной группы); проведение транслюминалыюй баллонной коронарной ангиопластики (ТБКА) или аорто-коронарного шунтирования (ЛКШ) в течение шести месяцев перед ИМ. " Больные с ИМ и лица контрольной группы были сопоставимы по частоте факторов риска ИБС (курение, артериальная гипертония, гиперлипидемия). Лица контрольной группы были старше больных ИМ. В группе больных ИМ было относительно больше мужчин и чаще встречались больные сахарным диабетом, чем в контрольной группе (таблица 2.1). Большинству больных с ИМпЭТ- проводилась реперфузионная терапия (тромболитическая терапия 73,3%, первичная ТБКА 9,1%, спасительная ТБКА 8,6%). У 7,7% имелись признаки спонтанной реперфузии соответствующей. коронарной артерии. Тромболитическая тираним проводилась пациентом либо в стационаре, либо, на этапе скорой медицинской помощи догоспитально. Реперфузионная терапия, не проводилась в связи с поздними сроками поступления 9,9% больных. Больные с HMnST при отсутствии противопоказаний получали терапию дезагрегантами, антикоагулянтами, статинами, ингибиторами АПФ или антагонистами рецепторов ангистензина II (АРА). Часть из них получала лечение спиронолактоном, петлевыми диуретиками, нитратами, антиаритмическими препаратами. В связи с сопутствующей артериальной гипертонией некоторые пациенты лечились тиазидными диуретиками или антагонистами кальция (таблица 2.2). Больным с ИМбпЭТ была назначена стандартная лекарственная терапия, основой которой являлись антитромботическис, антиангинальные препараты и статины (таблица 2.2). Помимо консервативного лечения, части пациентов этой группы проведена экстренная или плановая ТБКА (53,0%).
Попарное сравнение частот аллелей п генотипов полиморфных участков отдельных. генов: С1444Т гена CRP, A252G гена LTA, w/d гена CCR5, A(-308)G гена TNF. G(-174)CrcHa/i-6*, A(-509)G rtuaTGFDJ у больных ИМ и в группе контроля
Для каждого из исследуемых полиморфных участков мы проводили сравнение частот аллелей и генотипов выбранных полиморфных участков у больных ИМ и в группе контроля. Далее такое сравнение мы будем для краткости именовать попарным. Распределение частот аллелей и генотипов каждого из рассматриваемых полиморфных участков для больных ИМ и индивидов контрольной группы соответствует равновесию Харди-Вайнберга. Частоты аллелей и генотипов полиморфного участка С1444Т гена CRP у больных с ИМ и в группе контроля приведены в таблице 3.1. Выявлено значимое различие (р=0,006, ОШ 0,3, 95%ДИ:0,15-0,74) в частоте носительства аллеля СХЛ4Л (сумма гепотнікш С/С н С/Т), которая в контрольной группе была выше. Соответственно, в группе больных ИМ генотип Т/Т встречался значимо чаще, чем в контроле ( =0,006, ОШ=ЗД 95%ДИ: 1,3-6,5). При делении больных ИМ и лиц контрольной группы по полу значимых различий в вариантах генотипа и частоте носительства аллелей полиморфизма С1444Т гена СВР выявлено не было: Частоты аллелей, и генотипов полиморфного участка A252G гена LTA у больных с ИМ и в контроле приведены в таблице 3.2. Частота аллеля А была значимо выше у больных ИМ в сравнении с группой контроля (р=0,040, ОШ-1,4, 95%ДИ: 1,0-2,0). Генотип А/А полиморфизма A252G значимо связан с риском развития ИМ (р=0,034, ОШ=1,6,95%ДИ: 1,0-2,5): При делении больных ИМ и лиц контрольной группы по полу значимых различий в вариантах генотипа и частоте носительства аллелей участка A252G гена/,ГЛ выявлено не было. Попарное сравнение частот аллелей и частот носитсльства аллелей и генотипов полиморфизма w/d гена CCR5 в группе больных ИМ и в контроле не выявило значимых различий (таблица 3.3). Однако, при делении групп больных ИМ и лиц контрольной группы на подгруппы мужчин и женщин у мужчин наблюдалось значимое различие в частоте встречаемости аллелей (таблица 3.4). Частота аллеля w была значимо выше в подгруппе мужчин, больных ИМ 0?=0,035, ОШ=2,1, 95%ДИ:1,1-4,0), а частити встречаемости аллели d достоверно выше у мужчин а контрольной группе 0 =0,035, ОШЮ.48, 95%ДИ:0,25-0,90). Между подгруппами женщин, больных ИМ, и в контроле значимых различий в частоте встречаемости, носительствс аллелей и вариантах генотипов значимых различий выявлено не было (таблица 3.5). Таким образом, выявлен половой диморфизм в распределении генотипов гена CCR5 у больных ИМ и здоровых. Попарное сравнение частот, аллелей, частот іюсительства аллелей и генотипов полиморфизма С(-509)Т гена TGFBJ, полиморфизма A(-308)G гена TNF и полиморфизма G(-174)C гена IL-6 в обшей группе больных ИМ и здоровых (таблицы 3.6-3.8), а также в подгруппах мужчин и женщин, не выявило достоверных различий. Комплексный анализ влияния носительства сочетаний аллелей/генотипов исех исследованных полиморфных участков i-енов воспаления на риск развития ИМ проведен с помощью алгоритма APSampler. Выявлена значимая ассоциация с ИМ носительства;. сочетаний аллелей/генотипов всех шести исследованных генов (табл. 3.9).
Влияние полиморфизма С1444Т гена CRP, A252G гена LTA, w/d гена CCR5. A(-308)G гена TNF, G<-174)C гена ЛЧ A(-509)G гена TGFB1 на риск развития ИМ..
Полученные в нашей работе данные об участии в формировании предрасположенности к ИМ генов, белковые продукты которых вовлечены в развитие воспаления, согласуются с современной концепцией о дестабилизации атеросклеротической бляшки в результате классической воспалительной реакции, как основной причине ИМ. Выявлены ассоциации полиморфизмов гена CRP, гена провослалительного цитокина LTA и гена рецептора хемокинов CCR5 с риском развития ИМ. С помощью программного обеспечения APSampIer, анализирующего совместный вклад аллелей и генотипов всех исследованных в работе генов, Быявлены два сочетания, носительство которых ассоциировано с риском развития ИМ - сочетание генотипа w/w гена CCR5 с аллелем ( 509)Т гена противовоспалительного цитокина TGFBI и сочетание аллеля А252 гена LTA с тем же аллелем (-509)Т гена TGFBJ (таблица 3-Ю). Таким образом» в состав этих сочетаний входит генотип w/w гена ССЯ5 и аллель А252 гена LTA, связь.которых с риском развития ИМ была выявлена при попарном сравнении, а также аллель (—509)Т гена TGFB1. При попарном сравнении частот аллелей и генотипов ОНП С(-509)Т гена TGFB1 ассоциации полиморфизма с риском развития. ИМ выявлено не было. Комплексный анализ показал также негативную ассоциацию с риском развития ИМ еще двух генов, кодирующих цитокины - JL-6 и TNF. Выявлены только аллели ( 174)G IL-6 и (-308)G TNF в составе протективных сочетаний. Среди генов системы воспаления, рассмотренных в нашей работе, наиболее значимый вклад для риска развития ИМ вносит ген CRP. Распределение аллелей и генотипов полиморфизма С1444Т гена CRP в контрольной группе индивидов русской этнической принадлежности близко к данным, полученных для других европейских популяций. Так, частота предрасполагающего к ИМ генотипа Т/Т, по нашим данным составляющая в контрольной группе 4,6%, колеблется в популяциях европеоидов из Северо-Западной-Европы и США (штат Юта) в пределах от 4,3% до 7,3% [97J. Данных по анализу этого полиморфизма в русской этнической группе в литературе мы не обнаружили. В нашем исследовании при сравнении групп больных ИМ и контроля выявлена значимая позитивная ассоциация ИМ с генотипом Т/Т полиморфного участка С1444Т гена CRP. Соответственно, носителей аллеля С (С/С+С/Т) было достоверно больше в контрольной группе. Кроме того, носители генотипа Т/Т характеризуются более высоким уровнем CRP в плазме крови больных ИМ. То есть генотип, обуславливающий более высокую концентрацию CRP в крови, связан с риском развития ИМ. Эти данные подтверждают сложившиеся представление о GRP как о факторе риска развития атеросклероза и его осложнений - ИМ, ишемического инсульта, перемежающейся хромоты-[190], Носитсльство генотипа Т/Т С1444Т гена CRP можно рассматривать как генетический маркер риска развития ИМ. Поскольку различий в частотах этого генотипа у больных с ИМбпЭТ и больных HMnST не наблюдается, можно заключить, что генотип Т/Т явт.яется маркером риска обеих этих форм ИМ. Также не различаются по частотам носитсльства аллелей/генотипов участка CI444T подгруппы больных 40 лет и 40 лет. Ассоциации ИМ с генотипом Т/Т и носительством С наблюдаются в обеих возрастных подгруппах. То есть на двух независимых выборках нами были получены одинаковые результаты, что можно рассматривать как валидацию вывода о вовлечении гена CRP в развитие ИМ. Полиморфизм С1444Т располагается в З -нетранслируемой области гена CRP и, следовательно, не может напрямую изменять эффективность связывания транскрипционных факторов с промоторной частью гена и кодировать измененный белок. \ Высказывалось предположение, что функциональная роль этого полиморфизма связана с влиянием на стабильность мРНК, что приводит, у носителей аллеля Т, к более высокому уровню CRP в крови [97]. Подобный механизм был показан для полиморфизма в 3 -нетранслируемой области гена протромбина [191]. Однако, нельзя исключить и того, что полиморфизм С1444Т находится в неравновесном сцеплении с другой функционально важной областью гена CRP. По данным литературы, генотип Т/Т (или аллель Т) также ассоциирован с более высокой концентрацией CRP в крови у европеоидов - здоровых и больных ИБС [95-97]. Однако, такой ассоциации не было обнаружено у здоровых японцев [192]. Эти данные, вероятно, свидетельствуют об этнических различиях в функциональной значимости полиморфизма С1444Т гена CRP и не позволяют без экспериментальной проверки, переносить результаты, полученные для одной популяции, на другие популяции. Между тем, и другие полиморфизмы, гена CRP, такие как триаллельный полиморфизм (-390)С\Т\А, G(-7 .7)A и др., изучаются на предмет ассоциации с уровнем CRP в крови и с развитием сердечно-сосудистых заболеваний [96,97,98,100]. Некоторые из этих полиморфизмов, также как и полиморфизм CI444T, оказывают влияние на.уровень.концентрации GRP в крови [96,100]. В ряде исследований, как ив нашем,.обнаружено влияние генотипа CRP на риск развития- ИМ. В других исследованиях подобные связи не прослеживаются [100]. Нужны более масштабные исследования-на однородных популяциях, чтобы окончательно судить о ро и генотипов -.CRP в.развитии ИМ.
