Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА I. Обзор литературы
1.1. Современное состояние заболеваемости и своевременной диагностики опухолей ЖКТ 11
1.2. Микроэлементный гомеостаз организма человека и его связь с возникновением заболеваний 12
1.3. Роль селена в патогенезе эпителиальных новообразований 15
1 А. Роль металлов в патогенезе эпителиальных новообразований 20
1.5. Система репарации повреждений ДНК ' 25
1.6. Влияние неопластического процесса на репаративный синтез ДНК в клетках человека 30
1.7. Основные механизмы биотрансформации и детоксикации ксенобиотиков 36
1.7.1. Первая фаза биотрансформации 36
1.7.2. Вторая фаза биотрансформации 38
1.7.3. Третья фаза биотрансформации 44 1.8 Полиморфизм некоторых генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков 45 1.8.1. Полиморфизм глутатион-8-трансфераз. 47 CLASS ГЛАВА 2. Материал и методы исследования CLASS
2.1. Характеристика групп наблюдений >и клинического материала 51
2.1.1. Характеристика обследованных больных со злокачественными новообразованиями желудка и кишечника 53
2.1.2. Характеристика больных с доброкачественными заболеваниями желудочно-кишечного тракта 56
2.2. Методы исследования . 57
2.2.1. Определение активности системы репарации ДНК в лимфоцитах периферической крови 57
2.2.2. Метод выделения ДНК из лимфоцитов венозной крови 59
2.2.3. Гистологическое исследование опухолевой ткани 60
2.2.4. Анализ полиморфизма аллелей генов GSTT1 и GSTM1 60 2.2.5.0пределение содержания химических элементов в тканях 62
2.2.6. Оценка лабораторных индексов крови 64
2.2.7. Статистический анализ результатов исследования 65
CLASS ГЛАВА 3. Результаты собственных исследовани CLASS й
3.1. Микроэлементный баланс у больных с патологией желудка и толстого кишечника и здоровых лиц 67
3.1.1. Исследование баланса микроэлементов у больных раком желудка и толстого кишечника 69
3.2. Функциональная активность системы эксцизионной ДНК репарации лимфоцитов периферической крови у больных с патологией желудочно-кишечного тракта 76
3.2.1. Состояние эксцизионной системы ДНК-репарации в лимфоцитах периферической крови у больных раком желудка и толстого кишечника 77
3.3. Полиморфизм генов глутатион-8-трансфераз Ml и ТІ у больных с
онкопатологией желудочно-кишечного тракта и здоровых лиц 82
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов собственных исследований 87
Выводы 114
Список литературы 115
- Современное состояние заболеваемости и своевременной диагностики опухолей ЖКТ
- Микроэлементный гомеостаз организма человека и его связь с возникновением заболеваний
- Характеристика групп наблюдений >и клинического материала
- Микроэлементный баланс у больных с патологией желудка и толстого кишечника и здоровых лиц
Введение к работе
Россия по уровню заболеваемости злокачественными
новообразованиями среди других стран мира занимает 16 место у мужчин и 28 - у женщин. В структуре онкологической патологии населения России рак желудка прочно занимает второе место [Старинский В.В; и др;, 2000]^ рак ободочной кишки - шестое место [Трапезников Н.Н;, ДвойринВЗ., 1996]t Согласно данным НИИ онкологии ТНЦ СО; РАМН [Писарева Л.Ф. и др., 2003], в период 1990-2001 гг. в Томской области заболеваемость раком различной. локализации, в среднем более чем в 2 раза превышала аналогичный показатель по Российской Федерации, а рак желудка у томичей встречался в среднем на 26,8% (мужчины) и 30;4% (женщины) чаще, чем* по Российской Федерации в целом.
В подавляющем . большинстве случаев, опухоли диагностируются в запущенной стадии, когда самые современные методы лечения оказываются малоэффективны. Так, 60-90% больных раком желудка1 в< нашей: стране выявляют в III-W стадии заболевания, причем, удельный вес IV стадии не имеет тенденции к снижению и составляет 50-60% [Давыдов ШШ,Л997; Чиссов В.И: и др., 2003]
Средш основных факторов; повышающих онкологическую заболеваемость - техногенное загрязнение окружающей среды, урбанизация питания; предшествующие заболевания. Во многих странах мира (США, Германия, Дания,-Австралия, Мексика, Таиланд и др.) проведены крупные государственные программы по оценке степени загрязнения окружающей среды и их влиянию на здоровье человека. Хром и другие тяжелые металлы включены, в списки приоритетных загрязняющих веществ: рядом-международных организаций., в том числе ВОЗ, ЮНЕП, Американским агентством по контролю за токсичными веществами и заболеваниями (GDC) и другими аналогичными государственными организациями.
Доказано, что дисбаланс микроэлементов, как токсичных, так и эссенциальных, может приводить к структурно - функциональным изменениям, инициирующим опухолевый рост [Василевская Л.С. и др., 2004; Спиваковский Ю.М., Спиваковская А.Ю., 2005; Fox,Wang, 2007]. В последнее десятилетие активно развиваются методики оценки содержания микроэлементов в организме человека по анализу волос. Результат определения микроэлементов в волосах человека дает возможность для оценки состояния его экологической ниши (жилище, вода, пища и т. д.), что позволяет своевременно провести санитарно-эпидемиологические и профилактические мероприятия, методика неинвазивна, не капризна, не требует дорогостоящего оборудования. По результатам исследования микроэлементного баланса возможен ранний, быстрый прогноз онкологического риска у больших групп людей, особенно в районах с неблагоприятной экологической обстановкой, на крупных промышленных предприятиях с вредными условиями производства. Однако, до сих пор, в литературе встречаются лишь единичные сообщения об особенностях микроэлементного статуса у онкологических больных [Fujimoto, 1987; Borella е.а., 1997; Magalova е.а., 1999; Громова О.А., 2006].
В последние годы достигнут значительный прогресс как в идентификации генов, нарушения которых ведут к развитию новообразований, так и в выяснении роли белковых продуктов таких генов в физиологии клетки. Рак желудка и кишечника, как и большинство онкологических заболеваний, по своей природе являются мультифакториальными. В их патогенез вовлекается множество функционально взаимосвязанных генов (генные сети), включающих наряду с главными генами (онкогены и гены-супрессоры), второстепенные гены (гены-модификаторы), эффект которых во многом определяется средовыми факторами [Баранов B.C. и др., 2000; Колчанов Н.А. и др., 2000]. В связи с этим, большое внимание уделяется генам, ответственным за
биотрансформацию поступающих в организм чужеродных веществ (химических агентов, лекарственных средств, вирусов и др.) и определяющим реакцию организма на неблагоприятные внешние воздействия. Так, токсический эффект промежуточных метаболитов ксенобиотиков в значительной мере определяется функциональным состоянием ферментов 2-ой фазы детоксикации. Сниженная активность или отсутствие таких ферментов способствует более длительному сохранению в организме промежуточных продуктов, доторые могут провоцировать и способствовать злокачественной трансформации клеток [Alexandrie е.а., 1994; Brockmoller е.а., 1996; Баранов B.C. и др., 2000].
Некоторыми авторами [To-Figueras е.а., 1996; Lloyd е.а., 2000; Wani е.а., 2000; Liu е.а., 2001] установлено, что в результате снижения функциональной активности белковых продуктов генов, кодирующих ферменты биотрансформации ксенобиотиков, исчезает способность гена р53 регулировать апоптоз и репарационные процессы, что в дальнейшем приводит к повреждению клетки и канцерогенезу. В литературе встречаются лишь единичные сообщения о результатах исследования функции системы ДНК - репарации и нарушений полиморфных генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков при раке желудка и кишечника [Белогубова Е.В., 2000; Spitz е.а., 2000; Spurdle е.а., 2001].
Цель исследования: определить роль дисбаланса микроэлементов, нарушений системы репарации ДНК и полиморфизма генов глутатион-S-трансфераз ТІ и Ml в патогенезе злокачественных опухолей желудка и толстого кишечника.
Задачи исследования: 1. Определить содержание жизненно важных и токсичных микроэлементов в волосах и операционном материале у больных со злокачественными опухолями и хроническими доброкачественными заболеваниями желудка и толстого кишечника.
2. Выявить особенности системы ДНК-репарации лимфоцитов
периферической крови: у больных с хроническими доброкачественными ^
заболеваниями, злокачественными опухолями желудка- и толстого,
кишечника в зависимости от гистологического типа и распространенности
опухоли. :
3. Изучить соотношение нормальных и патологических генотипов генов
глутатион-8-трансфераз ТІ и MI (GSTT1 и GSTM1) у пациентов с
хроническими доброкачественными заболеваниями и злокачественными
опухолями желудка, и толстого кишечника^ установить их взаимосвязь с
клинико - морфологическими особенностями опухолевого процесса.
4. Определить взаимосвязь между особенностями микроэлементного статуса, нарушениями системы репарации ДНК и полиморфизмом генов GSTT1 и GSTM1 в патогенезе злокачественных опухолей желудка, и толстого кишечника.
Научная новизна. В настоящей работе проведена комплексная оценка активности ДНК-репарации лимфоцитов периферической крови у больных раком желудка и толстого кишечника с учетом клинических особенностей; злокачественного процесса и гистологического типа опухоли. Установлено, что опухолевый процесс сопровождается нарушением эксцизионной системы ДНК-репарации. Обосновано, что при раке желудка и толстого кишечника выраженное угнетение репаративного синтеза ДНК ассоциируется с прогрессированием опухолевого процесса и с недифференцированным типом опухоли (как наиболее злокачественной гистологической формой; заболевания). Впервые проведено исследование у больных раком желудка и толстого кишечника полиморфизма генов ферментов, участвующих в биотрансформации ксенобиотиков (глутатион-S-трансфераз ТІ и Ml). Показано, что у данных пациентов функционально неполноценные генотипы GSTT1 и Ml регистрируются чаще, чем в популяционном контроле. При этом при недифференцированной форме рака
отмечается более высокая частота патологических генотипов GSTT1 и Ml по сравнению с аденокарциномой и перстневидноклеточным раком. Обнаружено значительное увеличение частоты патологических генотипов генов GSTT1 и МІ у больных с распространенным онкологическим процессом по сравнению с аналогичным показателем у пациентов с локализованным ростом опухоли. При прогрессировании рака желудка и толстого кишечника выявлен дефицит эссенциальных минеральных веществ в организме (селен, железо, медь) и перераспределение канцерогенных металлов (кадмий) в опухолевую ткань. Обнаружена обратная корреляционная зависимость активности репарации ДНК лимфоцитов крови от уровня накопления шестивалентного хрома в организме.
Теоретическая и практическая значимость. Полученные данные фундаментального характера расширяют представления о механизмах возникновения и прогрессирования рака желудка и толстого кишечника. Результаты исследования могут быть положены в основу разработки принципиально новых направлений патогенетически обоснованной профилактики, ранней диагностики и терапии злокачественных новообразований желудка и толстого кишечника. Основные положения, выносимые на защиту:
Частота патологических генотипов GSTT1, GSTM1 при раке желудка и толстого кишечника выше, чем при доброкачественных заболеваниях данных органов и максимальна при недифференцированной форме опухоли и развитии метастатического процесса.
Среди больных раком желудка и толстого кишечника преобладают пациенты со снижением и угнетением способности лимфоцитов к репарации поврежденной ДНК. Нарушения эксцизионной системы ДНК-репарации более выражены при недифференцированном типе опухоли и в условиях метастазирования.
При прогрессировании рака' желудка и кишечника формируется дефицит эссенциальных минеральных веществ (селен, железо, медь) в организме больного и перераспределение канцерогенных металлов (кадмий) в опухолевую ткань.
Маркер лейкоцитов CD95, индекс стимуляции репарации ДНК в лимфоцитах крови и содержание микроэлементов в волосах (селен, шестивалентный хром) являются информативными неспецифическими показателями прогрессирования злокачественных неоплазий желудка и толстого кишечника.
Реализация и апробация работы. Основные положения диссертации докладывались и обсуждались на международной научной конференции «Новые технологии в интегративной медицине и биологии» (Таиланд, Бангкок, 2006, год), на VI Всероссийской научно - практической конференции «Молекулярная диагностика - 2007» (Москва, 2007 год).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 работ, из них 4 статьи в центральных реферируемых журналах.
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 140 страницах машинописного текста и состоит из введения, 4-х глав, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 17 таблицами и одним < рисунком. Библиографический указатель включает 248 источников, из них - 160 отечественных и 88 зарубежных.
Современное состояние заболеваемости и своевременной диагностики опухолей ЖКТ
Теоретическая и практическая значимость. Полученные данные фундаментального характера расширяют представления о механизмах возникновения и прогрессирования рака желудка и толстого кишечника. Результаты исследования могут быть положены в основу разработки принципиально новых направлений патогенетически обоснованной профилактики, ранней диагностики и терапии злокачественных новообразований желудка и толстого кишечника. Основные положения, выносимые на защиту:
1. Частота патологических генотипов GSTT1, GSTM1 при раке желудка и толстого кишечника выше, чем при доброкачественных заболеваниях данных органов и максимальна при недифференцированной форме опухоли и развитии метастатического процесса.
2. Среди больных раком желудка и толстого кишечника преобладают пациенты со снижением и угнетением способности лимфоцитов к репарации поврежденной ДНК. Нарушения эксцизионной системы ДНК-репарации более выражены при недифференцированном типе опухоли и в условиях метастазирования. 3. При прогрессировании рака желудка и кишечника формируется дефицит эссенциальных минеральных веществ (селен, железо, медь) в организме больного и перераспределение канцерогенных металлов (кадмий) в опухолевую ткань.
4. Маркер лейкоцитов CD95, индекс стимуляции репарации ДНК в лимфоцитах крови и содержание микроэлементов в волосах (селен, шестивалентный хром) являются информативными неспецифическими показателями прогрессирования злокачественных неоплазий желудка и толстого кишечника.
Реализация и апробация работы. Основные положения диссертации докладывались и обсуждались на международной научной конференции «Новые технологии в интегративной медицине и биологии» (Таиланд, Бангкок, 2006, год), на VI Всероссийской научно - практической конференции «Молекулярная диагностика - 2007» (Москва, 2007 год).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 работ, из них 4 статьи в центральных реферируемых журналах.
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 140 страницах машинописного текста и состоит из введения, 4-х глав, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 17 таблицами и одним рисунком. Библиографический указатель включает 248 источников, из них - 160 отечественных и 88 зарубежных.
Опухолевые заболевания желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) остаются одной из наиболее актуальных проблем современной онкологии в связи с высокой заболеваемостью и смертностью от них. При этом частота встречаемости данных новообразований в Томске выше, чем в среднем по России. Согласно данным НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН, уже в период с 1990 по 2001г. г. среди населения г. Томска рак желудка встречался в среднем на 26,8% (мужчины) и 30,4% (женщины) чаще, чем по Российской Федерации в целом, причем, интенсивный рост заболеваемости наблюдался среди населения начиная с 45 лет [Писарева Л.Ф. и др., 2003]. Поздняя выявляемость рака желудка приводит к 54%-ной одногодичной летальности, низкой пятилетней выживаемости больных и за последнее столетие ситуация улучшилась незначительно [Зырянов Б.Н.и др., 1998; Давыдов М.И. и др., 2004]. Аналогичным образом обстоит и ситуация с диагностикой опухолей толстого кишечника - в большинстве случаев заболевание диагностируется в запущенной стадии. Основным резервом повышения эффективности лечения больных со злокачественными новообразованиями остается поиск методов ранней диагностики, так как выживаемость больных прямо коррелирует со стадией опухолевого процесса на момент установки диагноза. Разработанные до настоящего времени методики скрининга злокачественных опухолей желудка и кишечника не работают нигде, кроме Японии [Мерабишвили В.М., 2001]. Успехи в ранней диагностике рака желудка, достигнутые японскими специалистами, во многом определяются очень высокой стоимостью проводимых профилактических обследований с применением высокотехнологичного оборудования, позволяющего проводить диагностику на основе нуклеарных и структурных критериев в отсутствии инвазии.
В связи с этим разработка, фундаментальное обоснование и внедрение новых подходов в системе комплексной диагностики и прогнозирования опухолевых заболеваний, а также методов их профилактики представляются чрезвычайно актуальными задачами.
Показатели онкологической заболеваемости, как и ее структура, существенно зависят от климато-географических условий, этнического состава, образа жизни населения, особенностей питания и других условий. Важной задачей становится выявление, факторов риска возникновения онкологических заболеваний у населения, характерных для той или иной отдельно взятой территории [Писарева Л.Ф. и др., 2003].
Микроэлементный гомеостаз организма человека и его связь с возникновением заболеваний
Минеральные элементы играют роль в формировании целого ряда важнейших адаптивных механизмов, включая поддержание функции всех жизненно важных систем: сердечно - сосудистой, эндокринной, иммунной и т.д. [Авцын А.П. и др., 1991]. Максимальная гомеостатическая емкость свойственна таким элементам как Be, As, Ni, V, Pb, Li, Na. Исходя из понятия гомеостатической емкости, организм человека относительно мало чувствителен к колебаниям перечисленных элементов, несмотря на то, что некоторые из них обладают при накоплении токсическим и даже канцерогенным эффектами (As, Ni, Pb). К элементам с минимальной гомеостатической емкостью относят Se, Zn, Cr, Fe, P. Незначительные отклонения в их содержании приводят к сбою физиологических процессов [Скальный А.В., Быков А.Т., 2003]. Поэтому полноценное содержание эссенциальных микроэлементов и минимальное содержание токсичных и условно - токсичных элементов составляют один из важнейших компонентов здоровья современного человека.
Оценка содержания микроэлементов в различных тканях организма человека составляет одну из важных задач современной медико-биологической экспертизы.
В целях выработки новых направлений в профилактике различных заболеваний, включая рак желудка и толстого кишечника, применяют определение микроэлементов в плазме или сыворотке крови [Fujimoto, 1987; Magalova е.а., 1999]. Тем не менее, известно, что многие химические элементы переносятся клеточными элементами крови в большей степени; чем ее жидкой частью [Лифшиц В.М:, Сидельникова В;И, 1998]. Так, в цельной крови у взрослых людей селена содержится, в среднем, на 57 % больше, чем в сыворотке крови. Находясь в кровяном русле, селен включается в эритроциты и лейкоциты, липопротеины, фибриноген, урокиназу, фибриназу. Далее -селен проникая через капилляры, накапливается в органах в еще больших количествах, чем его содержание в цельной крови [Ермаков В.В., Ковальский В;В;, 1974].
В связи с этим, содержание микроэлементов в крови при доброкачественных и злокачественных неоплазиях, в том .числе, при: новообразованиях ЖКТ, значительно варьирует вследствие многофакторных взаимоотношений целого организма т опухолевой ткани [Magalova е.а., 1999; Громовая 0;А., 2006], что затрудняет интерпретацию результатові В последнее десятилетие активно развиваются методы, оценки минерального гомеостаза организма и его взаимосвязи с различными заболеваниями по уровню химических элементов в волосах [Скальный А.В., Быков А.Т., 2003]. Однако,, в случае онкологических заболеваний подобные исследования единичны [Borella е.а., 1997; Громова О.А., 2006].
Содержание микроэлементов в волосах отражает микроэлементный статус организма в целом и пробы волос являются интегральным показателем минерального обмена. По мнению А.В.Скального, А.Т. Быкова (2003), по содержанию минеральных элементов в волосах можно судить о деятельности сердечно-сосудистой, эндокринной, иммунной и антиоксидантной систем, системы кроветворения, о состоянии опорно-двигательного аппарата. Как правило, гипоэлементозы связаны с недостатком жизненно важных элементов, таких как железо, цинк, медь, селен, а гиперэлементозы - с накоплением в организме кадмия, свинца, мышьяка, титана, ванадия, бериллия. Вместе с тем, официальные границы "нормального" содержания большинства химических элементов в волосах до сих пор не установлены [Скальный А.В., Горбачев А.Л., Велданова М.В., 2004], в частности, вследствие их зависимости от региона проживания человека [Скальный А.В., Быков А.Т., Серебрянский Е.П., Скальная М.Г., 2003].
Согласно взглядам А.В. Бгатова и др. [1999], любая болезнь есть следствие нарушения внутренней среды организма (его гомеостаза), минеральная сбалансированность определяет устойчивость к заболеваниям. Значение дисбаланса микроэлементов при различных заболеваниях представлено в огромном числе научных публикаций. Задачи данного обзора литературы мы решили ограничить описанием известных механизмов действия и основных эффектов тех веществ, концентрации которых активно менялись в проведенном исследовании злокачественной патологии желудка и кишечника.
Действительно, основным источником микроэлементов в организме является пища, всасывание протекает в желудке и тонком кишечнике [Авцын А.П. и др., 1991], и соответственно, нарушается при заболеваниях и расстройствах пищеварительного тракта. Дефицит или избыток микроэлементов (медь, цинк, железо, селен, хром) инициирует и провоцирует патологические процессы, в том числе структурно-функциональные изменения слизистых оболочек ЖКТ [Василевская Л.С. и др., 2004; Спиваковский Ю.М., Спиваковская А.Ю., 2005], которые способны провоцировать опухолевые заболевания [Fox, Wang, 2007].
Характеристика групп наблюдений >и клинического материала
В основу настоящей работы положены результаты комплексного клинико-лабораторного обследования 90 больных с патологией желудка и толстого кишечника, из них - 60 пациентов со злокачественными новообразованиями и 30 пациентов с доброкачественными заболеваниями данных локализаций. Исследование проводилось с разрешения комитета по этике Сибирского государственного медицинского университета (заключение № 583 от 19.03.2007г.) на базе хирургического отделения Томского областного онкологического диспансера, главный врач к.м.н. С.А. Коломиец, и в клинике научно-исследовательского института гастроэнтерологии СибГМУ, директор д.м.н., профессор Г.К. Жерлов.
Диагноз в каждом случае подтверждался результатами клинического, морфологического, эндоскопического и рентгенологического обследования, все пациенты подвергались оперативному лечению, при проведении которого уточнялась степень распространенности патологического процесса. Удаленные во время операции ткани забирались для дальнейшего исследования. Гистологические исследования проводились в отделении патологической морфологии Томского областного онкологического диспансера, заведующая д.м.н., профессор Севостьянова Н.В. и в отделении патологической морфологии МСЧ-81 (г.Северск), заведующий Некрасов Г.Б. По окончания лечения пациенты с доброкачественными образованиями переходили на диспансерное наблюдение гастроэнтеролога либо хирурга по месту жительства. У пациентов со злокачественными новообразованиями хирургическое лечение дополнялось химиотерапией либо лучевой терапией, при наличии показаний, в дальнейшем данная группа пациентов поступала на амбулаторное наблюдение и лечение в Томский областной онкологический диспансер.
Из исследования были исключены пациенты с тяжелой степенью анемии, больные с наследственными, аутоиммунными и психическими заболеваниями, а также больные, проживавшие на момент обследования на территории г. Томска и Томской области менее 6 месяцев. Забор волос для определения микроэлементного баланса организма проводился до начала лечения.
Группу сравнения составили 100 практически здоровых человека, не предъявлявших на момент обследования жалоб соматического профиля, выполнявших полный объем профессиональных обязанностей и ведущих привычный образ жизни. В ее состав были включены работники ЗАО «Метанол», медицинские работники клиник, участвовавших в исследовании, добровольцы.
Дополнительно была сформирована группа сравнения из 14 пациентов с доброкачественными новообразованиями эпидермиса, гистологически верифицированными как папилломы.
Во все обследованные группы больных и в контрольную группу здоровых были включены индивидуумы только европеоидного происхождения, поскольку существуют значительные межрасовые различия в распределении исследуемых генотипов и аллелей [Martinson J.J. et al., 1997; Галеева A.P. и др., 1998; Yudin N.Vet al., 1998; Коршунова Т.Ю. и др., 2004].
В исследование были включены 60 больных со злокачественными заболеваниями ЖКТ, прошедших лечение в клинике НИИ гастроэнтерологииv СибГМУ (г.Северск, директор, д.м.н., профессор Г.К.Жерлов) и хирургическом отделении Областного онкологического диспансера г.Томска (главный врач, к.м.н. С.А.Коломиец) за 2005-2007 годы. Среди этих пациентов мужчин - 34 чел. , женщин -26 чел. , средний возраст -61,8 года. Распределение больных по локализации и стадиям злокачественных неоплазий ЖКТ представлено в табл. 2.
Диагноз злокачественного новообразования основывался на данных рентгенологического, эндоскопического и морфологического исследований. Для формирования групп больных без метастазов (T1-4N0M0, 18,3% случаев) и больных, имевших очаги метастазирования в регионарных лимфоузлах и/или в отдаленных органах (T1-4N0-2M0-1, 81,7% случаев) использовалась международная классификация рака по системе TNM (1997г.).
Микроэлементный баланс у больных с патологией желудка и толстого кишечника и здоровых лиц
Гематологические (общее количество лейкоцитов- и эритроцитов;, гемограмма, скорость, оседания эритроцитов, содержание4 гемоглобина): и биохимические индексы,крови (уровни глюкозы,, холестерина, общего белка, мочевины, креатинина; общего; прямого и непрямого билирубина, активность амилазы, аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы и щелочною фосфатазы)і определяли общепринятыми методами [Елисеев: ЮШ:,2006].
В периферической; крови определяли мембранный» маркер лейкоцитов CD95 методом проточной цитометриш (комплекс GoulterEPIGS-XE-MGE) с использованием; флюоресцирующих моноклональных антител в условиях автоматической пробоподготовкиі
Количественное: содержание онкомаркеров; ЄА19-9 и СА-242, циркулирующих в сыворотке крови; концентрацию кортизола и« соматотропного; гормона: (С1) оценивали; методами иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием наборові специфических, моноклональных антител [Фатех-Могхадам; А., Єтиебер» ПІ, 1993]. Применяли основной принцип ИФА; в котором используется . конкуренция? между немеченым антигеном и фермент-меченым антигеном? за ограниченное число мест связывания на антителах. Количество меченого ферментом антигена, связавшегося- с антителами, обратно пропорционально концентрации присутствующего немеченого аналита. Не связавшиеся материалы удаляются? прш промывке: ячеек;. После.- измерения оптической5 плотности в. ячейках расчет результатов проводился- с помощью- программного обеспечения с использованием четырех-параметрической регрессии..
В других случаях использовался принцип двухстадийного иммуноанализа типа «сэндвич». Измеренная: оптическая плотность прямо пропорциональна концентрации анализируемого субстрата в образце. Набор стандартов использовался для построения калибровочного графика зависимости поглощения от концентрации вещества в образце, расчет велся автоматических помощью аппроксимации сплайнами. Цитохимическую оценку содержания восстановленных сульфгидрильных-(SH); групп в эритроцитах проводили согласно ферри-ферроцианидному методу [ХейхоуФ.Г.Дж., Кваглино Д., 1983]. При оценке полученных данных были использованы методы статистического описания, а также методы проверки статистических гипотез [ЛакинКФ:, 1980]: Для анализа имеющихся выборок данных использовали гипотезу нормальности распределения (критерий Колмогорова-Смирнова).
При соответствии нормальному закону распределения; признака в исследуемых выборках проверку гипотезы о равенстве:средних выборочных: величин- проводили с использованием t-критерия Стьюдента. Для оценки достоверности различий выборок, не подчиняющихся критерию нормального распределения, использовали непараметрический критерий Манна-Уитни (U-тест). Различия считались достоверными при уровне: значимости р 0,05 [ЛакинГ.Ф., 1989].
При сравнении частот генотипов использовался стандартный критерий % Пирсона, при условии, когда объем выборки не превышал 5 случаев; использовали двусторонний критерий Фишера. Относительный риск (OR) развития заболевания при определенном: генотипе. рассчитывался по стандартной формуле OR=a/b х d/c, где а и Ь - количество больных, имеющих и не имеющих мутантный генотип, соответственно, и d и с -количество человек в контрольной группе, имеющих и не имеющих мутантный генотип. OR указан с 95%-ным доверительным интервалом [ФлейсДж., 1989].
С целью обнаружения связи между исследуемыми показателями проводили корреляционный анализ путем вычисления коэффициента ранговой корреляции Спирмена (г). Коэффициент корреляции считали значимым, если вероятность ошибки не превышала 0,05 (5%).
