Введение к работе
Актуальность проблемы.
В последние годы все более приоритетным становится изучение адаптационных процессов в раннем неонатальном периоде (Володин Н.Н., 1988; Самсыгина Г.А., 1990). Одной из наиболее важных и сложных проблем современной неонатологии остается исследование закономерностей становления иммунной системы и ее влияния на состояние здоровья новорожденного ребенка, внедрение в клиническую практику новых информативных и доступных методов оценки функционирования неонатальной иммунной системы (Шабалов Н.П., Шаба-лова Н.Н. , 1987; Торубарова Н. А., Самохвалова А.В., 1987; Самсы-гин С.А. и соавт.. 1988; Вельтищев Ю.Е., 1989: Исаков Ю.Ф. и со-авт.. 1989; Вельтищева Е.Ю., 1993; Austgulen R. et al, 1993; Bessler Н. et al. 1987, 1993; Вгу К., 1994; Buck С, 1994).
В настоящее время предложен новый, патогенетический подход к оценке состояния иммунной системы человека, учитывающий динамическое развитие иммунного ответа через стадии распознавания и презентации антигена, активации, пролиферации и дифференцировки иммунокомпетентных клеток и через иммунорегуляторное звено (Ковальчук Л. В., Чередеев А.Н.. 1990). Предложен набор тестов, наиболее полно характеризующих каждую из стадий (там же; Федосеева В.Н. и соавт.. 1993). Иммунорегуляторное воздействие реализуется на всех этапах иммунного ответа через изменение соотношения им-мунорегуляторных субпопуляций лимфоцитов и посредством выработки целого ряда иммуноцитокинов, среди которых ванными считаются ин-терлейкин-1-бета (ИЛ-1), фактор некроза опухолей - альфа (ФНО) и интерлейкин-2 (ИЛ-2). ИЛ-1 и ФНО являются секреторными продуктами моноцитов, запускающими развитие иммунного ответа. Помимо функций медиаторов иммунитета, они обладают еще и мощным и многоплановым действием на ЦНС, гипоталамус, гипофиз, надпочечники, печень, органы гемопоэза, костную и соединительную ткань, индуцируют секрецию ряда гормонов, белков острой фазы воспаления, влияют на клеточный состав крови и содержание в ней некоторых ферментов и микроэлементов, оказывают антимикробный и тумороцид-ный эффект (Абрамов В.В., 1988; Ковальчук Л.В., Чередеев А.Н., 1991; Кетлинский С.А. и соавт., 1992; Dlnarello С.A. et al, 1981; Aggarval В. В., Pocsik Е.. 1992;- Foxwell B.M.J, et al, 1992). ИЛ-2 является секреторным продуктом лимфоцитов, Т-клеточ-
ным фактором роста, влияет на активацию и пролиферацию Т- и В-лимфоцитов. цитотоксичность, секрецию иммуноглобулинов и имму-ноцитокинов (Ярилин А.А., 1987; Кондратенко И.В. и соавт., 1992; McNamara J., Komp D.M., 1989; Punnonen J., 1989; Andersson U. et al, 1990).
Несмотря на бурное развитие клинической иммунологии, в современной литературе отсутствуют комплексные работы, анализирующие состояние активационно-пролиферативного звена иммунологического реагирования у здоровых новорожденных детей и в случаях осложненного течения неонатального периода. Немногочисленные работы в зарубежной литературе посвящены исследованию отдельных элементов системы иммуноцитокинов у новорожденных детей.
В то же время применение иммуноферментного анализа уровня ИЛ-1 и ФНО в сыворотке крови новорожденных детей для оценки состояния иммунитета и прогнозирования течения раннего периода адаптации представляется перспективным. Полученные данные позволят уточнить некоторые звенья патогенеза постгипоксического поражения ЦНС у доношенных новорожденных детей.
Цель и задачи исследования.
Целью настоящей работы явилось комплексное изучение ряда наиболее важных этапов (продукция, отвечаемость, циркуляция) в системе провоспалительных цитокинов (ИЛ-1, ФНО), их влияния на функциональное состояние лимфоцитов у новорожденных детей и разработка на основании полученных результатов прогностических критериев патологии неонатального периода.
Задачи:
1. Разработать методические подходы и оценить продукцию ци
токинов и отвечаемость на них пролиферацией в культуре In vitro,
а также определить циркулирующий пул цитокинов в сыворотке пупо-
винной крови у здоровых доношенных новорожденных детей и при ос
ложненном течении раннего неонатального периода.
2. Изучить динамику экспрессии маркеров активации (CD 25,
CD 71) интактными и активированными фитогемагглютинином (ФГА) In
vitro лимфоцитами пуповинной крови у здоровых новорожденных де-
тей и при осложненном течении раннего неонатального периода.
-
Определить уровни спонтанной и стимулированной ФГА пролиферации лимфоцитов пуповинной крови, продукции ими ИЛ-2 у здоровых новорожденных детей и при осложненном течении раннего неонатального периода.
-
Охарактеризовать фенотип лимфоцитов пуповинной крови у здоровых новорожденных детей и у детей с осложненным течением раннего неонатального периода.
-
Исследовать динамику концентраций ИЛ-1 в сыворотках периферической крови у детей с перинатальным поражением ЦНС и при инфекционных заболеваниях в течение первого месяца жизни.
Научная новизна работы.
Впервые апробирован новый методический подход к оценке функционального состояния иммунной системы новорожденных детей, основанный на последовательном и комплексном исследовании актива-ционно-пролиферативного звена иммунологического реагирования (продукция моноцитами ИЛ-1, ФНО, динамика количества лимфоцитов, экспрессирующих на клеточной, поверхности маркеры активации (CD 25, CD 71), спонтанная и стимулированная ФГА пролиферация лимфоцитов, их отвечаемость на ИЛ-1 и ИЛ-2 и продукция ими ИЛ-2, фенотип лимфоцитов пуповинной крови).
Впервые определены количественные характеристики продукции цитокинов и отвечаемости на них в культуре in vitro, циркулирующего пула провоспалительных цитокинов. процент лимфоцитов пуповинной крови, экспрессирующих активационные молекулы, у здоровых доношенных новорожденных детей и изменения этих показателей при осложненном течении раннего периода адаптации.
Установлено, что среди определяемых параметров концентрации ИЛ-1 и ФНО являются высоко информативными, имеют прогностическое значение по отношению к возникновению перинатального поражения ЦНС и коррелируют с его тяжестью, что указывает на участие этих иммуноцитокинов в патогенезе перинатального поражения ЦНС.
Впервые установлено, что на первом месяце жизни динамика содержания ИЛ-1 в сыворотке периферической крови новорожденных детей с инфекционной и неинфекционной патологией различна и свидетельствует о максимальной выраженности воспалительных реакций
в различные сроки.
Практическая значимость.
Разработан и осуществлен новый методический подход к оценке иммунного статуса новорожденных детей, позволяющий на этапе родильного дома из каждой пробы пуповинной крови одновременно получить количественные параметры, последовательно отражающие состояние активационно-пролиферативного звена иммунологического реагирования. Полученные количественные показатели могут быть использованы в дальнейшей научно-исследовательской и практической работе в данном направлении.
Установлено, что результаты определения продукции ИЛ-1 и ФИО в культуре клеток In vitro сопоставимы с результатами определения концентраций данных цитокинов в сыворотках крови.
Определены более низкие концентрации ИЛ-1 и ФНО в сыворотках пуповинной крови большой группы здоровых доношенных новорожденных детей по сравнению со здоровыми взрослыми донорами.
Зарегистрировано повышение уровней ИЛ-1 и ФНО в сыворотках пуповинной крови новорожденных детей, у которых впоследствии в раннем неонатальном периоде были констатированы синдром повышения нервно-рефлекторной возбудимости или синдром угнетения ЦНС; при этом концентрации данных иммуноцитокинов были выше у детей с тяжелым перинатальным поражением ЦНС.
Результаты настоящей работы позволяют рекомендовать использование твердофазного иммуноферментного метода определения сывороточных концентраций ИЛ-1 и ФНО-альфа в родильных домах и отделениях патологии новорожденных детей с целью улучшения ранней диагностики и прогнозирования осложнений неонатального периода как информативного, экономичного, относительно простого в исполнении и не требующего больших объемов крови, что будет способствовать уточнению терапевтической тактики.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Материалы диссертации доложены и обсуждены на совместной научно-практической конференции кафедры детских болезней N 2 педиатрического факультета РГМУ и городских' врачей ДКБ N 13 имени Н.Ф.Филатова (сентябрь 1991 г.), на 1-ом Всероссийском съезде акушеров-гинекологов и - педиатров (Челябинск, 1992), на 1-ом съезде иммунологов России (Новосибирск, 1992), на
совместной конференции кафедры детских болезней N 2 педиатрического факультета, кафедры неонатологии факультета усовершенствования врачей и кафедры иммунологии медико-биологического факультета РГМУ (январь 1995 года).
ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 6 работ.
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертационная работа изложена на ... страницах машинописного текста и состоит из введения, глав "Обзор литературы", "Материалы и методы исследования", 3 глав по результатам собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы. Работа иллюстрирована 3 рисунками, 25 таблицами и 14 графиками, выписками из истории родов и развития новорожденных, историй болезни. Библиография включает 299 источников, из которых 85 работ отечественных и 214 - зарубежных авторов.
