Введение к работе
Актуальность проблемы. Среди Оронхо-легочных инфекций человека значительную роль играют заболевания, вызываемые пневмококком. В связи с этим остается актуальным вопрос о разработке различных методов лабораторной диагностики, позволяющих выявить возбудитель заболевания. Раннее применение антибиотиков снижает диагностическую значимость бактериологических методов анализа. С другой стороны, серологические методы, основанные на выявлении антител к возбудителю, могут применяться на более поздних стадиях заболевания. Наиболее информативными и эффективными в данном случае представляются методы определения бактериальных антигенов на основе реакций ко- и латексагглютинации. Реакция ко агглютинации позволяет использовать свойство клеток стафилококка сорбировать, благодаря наличию на поверхности протеина А, иммуноглобулины и получать высокоактивные и чувствительные диагностикумы. Применение в качестве носителя клеток стафилококка ограничено тем, что на них можно сорбировать только иммуноглобулины класса с. Преимуществом латексних диагностикумов перед коагглютинационными является возможность использования частиц с заданным размером и физико-химическими характеристиками. Кроме того, использование инертных частиц латекса уменьшает количество неспецифических реакций, связанных со взаимодействием биологических образцов с клетками стафилококка. На частицах латекса можно сорбировать не только иммуноглобулины разных классов, но и антигены белковой и небелковой природы, что значительно расширяет область применения диагностикумов данного вида.
Целью настоящей работы явилась разработка научно-технологических основ приготовления диагностикумов на основе методов ко- и латексагглютинации для определения антигенов
пневмококка.
Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:
1. Разработать метод приготовления и изучить свойства
коагглютинационных диагностикумов на основе антипневмококковых
сывороток различной специфичности для диагностики капсульних и
бескапсульных штаммов пневмококка.
-
Разработать метод получения латексных диагностикумов для определения антигенов пневмококка на основе моно- и поливалентных сывороток различной специфичности.
-
Изучить некоторые закономерности сорбции иммуноглобулинов на латексных частицах с различными типами поверхности, используя моноклональные антитела, оптимизировать процесс сенсибилизации латексов путем количественного контроля процесса адсорбции иммуноглобулинов.
Научная новизна работы. В результате проведенных исследований разработан метод изготовления коагглютинационных диагностикумов для идентификации как капсульних, так и бескапсульных штаммов пневмококка.
Разработана оригинальная методика приготовления латексных диагностикумов на основе моно- и поливалентных антипневмококковых сывороток различной специфичности.
Изучены закономерности сорбции моноклональных антител на поверхности полистроловых латексов различных типов. Выявлена зависимость эффективности сорбции антител на латексных частицах от соотношения рН среды и изоэлектрической точки сорбируемых антител. Показано, что контроль сорбции иммуноглобулинов на латексах может быть осуществлен путем измерения электрофоретической подвижности частиц и определения агрегативной устойчивости суспензии при сенсибилизации.
Положения, выносимые на защиту. Способ диагностики
пневмококковой инфекции, основанный на использовании коагглютинационных диагностикумов различной специфичности, позволяющий идентифицировать капсульные и Оескапсульные штаммы пневмококка.
Универсальный принцип изготовления и контроля диагностикумов для латексагглютинации, основанный на физико-химических закономерностях взаимодействия иммуноглобулинов с поверхностью латексних частиц.
Практическая значимость работы. Полученные данные легли в основу изготовления коагглютинационных диагностикумов для идентификации пневмококка. На разработанный способ определения антигенов в реакции коагглютинации получено Авторское свидетельство (n 1762242). Оформлен Лабораторный регламент по изготовлению и контролю системы диагностической для определения s.pneumoniae в реакции коагглютинации, утвержденный на Ученом совете НИИ ВС им.Мечникова 14.II.1991. Диагностикумы апробированы при исследовании клинического материала в лаборатории микробиологии и клинической иммунологии НИИ Педиатрии РАМН, в лаборатории эпидемиологии острых менингитов НИИ ЭМ им. Гамалеи. При клинической апробации показана высокая чувствительность и специфичность диагностикумов.
Разработаны научно-технологические основы изготовления диагностикумов на основе полистироловых латексов с различными типами модификации поверхности. Получены латексные диагно'стикумы, эбладающие специфической активностью по отношению к различным антигенам пневмококка.
Апробация работы. Отдельные фрагменты диссертационной работы 5ыли доложены на 2-ой Всесоюзной конференции по актуальным юпросам микробиологии в неинфекционной клинике (Москва, 1988), на сонференции "Современные направления создания медицинских
диагностикумов" (Москва, 1990), на 6-ой международной конференции по быстрым методам диагностики в микробиологии и иммунологии (Хельсинки, 1990), на конференции молодых ученых ШШВС им.Мечникова (Москва, 1988). Диссертация апробирована на научной конференции отдела иммунохимической диагностики НИИ ВС им.Мечникова РАМН.
Объем и структура диссертации, диссертация включает введение, две главы обзора литературы, три главы собственных исследований, заключение, выводы и список литературы. Работа содержит 130 страниц машинописного текста, 15 таблиц и 21 рисунок. Список литературы содержит 100 источников.
