Введение к работе
Актуальность проблемы. Со времени открытия общего адаптационного синдрома Н. Selye (1936) интерес к исследованию особенностей функционального состояния иммунной системы при стрессорных воздействиях не утратил своей остроты. В значительной степени это обусловлено её ключевой ролью в обеспечении генетического постоянства внутренней среды организма (Ярилин, 1999; Хаитов и др., 2000; Хаитов, 2006). Многочисленными исследованиями, выполненными к настоящему времени, показано, что длительные и (или) интенсивные стрессорные воздействия нарушают функционирование различных звеньев иммунной системы, что создает реальную угрозу развития инфекционной патологии, аутоиммунных и опухолевых заболеваний (Корнева, 1993; Пшенникова, 2001; Owen et al., 2003; Purcell et al., 2003). В связи с этим разработка подходов, направленных на предупреждение или ограничение подобных негативных последствий стресса, является актуальной задачей иммунологии.
Несмотря на обнадеживающие результаты, достигнутые в ее решении (Корнева и др., 2000, 2002, 2004; Волчегорский и др., 2000; Шилов и др., 2000, 2005; Немирович-Данченко, Фомичева, 2001, 2003; Пиванович, 2002; Пономарев и др., 2005; Daynes et al., 2003; Wintergerst et al., 2006), дальнейшее развитие данного направления продолжается. При этом все более заметное место в нем занимает использование синтетических и природных веществ, обладающих тропностью к иммунной системе (Хаитов, Пинегин, 2000). Среди последних пристального внимания заслуживают тритерпе-ноиды - вещества специализированного обмена, обладающие широким спектром биологического действия. Продемонстрированная в ряде работ способность тритерпенои-дов к стимуляции гуморального и клеточного иммунного ответа (Ильичева и др., 2001; Behboudi et al., 1996; Villacres-Eriksson et al., 1997; Morein et al., 1998; Bernhardt et al, 2000; Logambal, Michael, 2000) характеризует их как перспективные средства иммунотерапии. Вместе с тем эти исследования практически не коснулись оценки эффективности тритерпеноидов при их использовании для профилактики дисфункций иммунной системы в условиях экстремальных воздействий на организм. Это положение относится и к милиацину - тритерпеноиду растительного происхождения, обладающему способностью стимулировать лимфопоэз, проявлять адъювантную активность и оказывать мембранопротекторное действие (Кириллова, 2004).
Отсутствие ясности в данном вопросе не позволяет оценить перспективы использования милиацина в качестве иммунопротекторного средства при дестабилизирующих воздействиях, что с учетом его доступности, крайне низкой токсичности
4 (LD5o > 1000 мг/кг) и побочных эффектов в широком диапазоне доз (Олифсон и др., 1991) могло бы иметь важное прикладное значение.
Цель настоящего исследования - экспериментальное изучение протективного влияния милиацина при стрессиндуцированной иммуносупрессии, а также выяснение некоторых механизмов такого влияния.
Основные задачи исследования
Изучить особенности формирования гуморального и клеточного иммунного ответа при стрессе в условиях применения милиацина или без его применения.
Оценить влияние милиацина на выраженность стрессорной реакции.
3.Проанализировать влияние милиацина на состояние внутрииммунных регу-ляторных механизмов при стрессорном воздействии.
Определить эффект тритерпеноида в отношении глюкокортикоидиндуциро-ванного апоптоза тимоцитов и лимфоцитов селезенки.
Исследовать способность милиацина к ограничению стрессорной активации перекисного окисления липидов.
Научная новизна. Впервые определено протективное влияние милиацина в отношении стрессорной дисфункции иммунной системы. В экспериментах на мышах (CBAxC57Bl6)Fi установлена способность тритерпеноида отменять стрессорное угнетение формирования АТОК и эффекторов ГЗТ. Показано, что влияние милиацина на стрессорную супрессию первичного гуморального иммунного ответа зависит от срока воспроизведения стрессорного воздействия относительно фазы развития иммунной реакции. Установлено, что милиацин обеспечивает восстановление уровня ответа в случае воспроизведения комбинированного стресса перед иммунизацией животных и не влиет на выраженность иммуносупрессии при стрессорном воздействии на 3 сутки после иммунизации. Впервые обнаружены механизмы, обеспечивающие защитное влияние милиацина при стрессиндуцированных нарушениях функций иммунной системы. В их числе - ослабление антигенспецифической и антигеннеспецифической супрессии и повышение устойчивости лимфоцитов селезенки к апоптогенному действию глюкокортикоидов. Выявлена антиоксидантная способность милиацина, проявляющаяся в ограничении индуцируемого стрессом перекисного окисления липидов и накопления в крови продуктов липопероксидации.
Теоретическое и практическое значение работы. Представленные данные расширяют представление о степени выраженности протективного влияния милиацина в отношении стрессиндуцированных нарушений функций иммунной системы и о механизмах такого влияния. Раскрываются новые аспекты действия милиацина на
5 организм, что расширяет существующие представления о его биологических эффектах, в том числе о способности тритерпеноида реализовывать не только иммунотроп-ную активность, но и проявлять антиоксидантное действие как важных составляющих его протективного влияния при экстремальных воздействиях. Выявление защитного действия милиацина в отношении стрессорной дисфункции иммунной системы раскрывает новые возможности для изыскания иммунотропных лекарственных средств -протекторов среди соединений стероидной природы естественного происхождения или осуществления их синтеза с избирательным влиянием на различные звенья иммунной системы. Установленная в работе возможность ограничения стрессорных нарушений функций иммунной системы с помощью милиацина служит экспериментальным обоснованием для исследования данного тритерпеноида в качестве иммуно-протектора при действии на организм экстремальных факторов.
Результаты диссертационной работы включены в учебный курс для студентов Оренбургской государственной медицинской академии. По материалам работы получен Патент на изобретение РФ № 2244548 "Средство, повышающее иммуногенные свойства столбнячного анатоксина". Зарегистр. в Госреестре изобретений 20.01. 2005.
Основные положения, выносимые на защиту
Тритерпеноид растительного происхождения милиацин оказывает защитное действие в отношении стрессорного угнетения функциональной активности иммунной системы. Данная протекция распространяется как на гуморальную, так и на клеточную (ГЗТ) формы иммунного ответа.
Протективное влияние милиацина не связано с ограничением стрессорной мобилизации гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной системы. Механизмы этого влияния реализуются, по меньшей мере, в трех направлениях: путем ослабления антигенспецифической иммуносупрессии, развивающейся в ходе формирования иммунного ответа; через снижение стрессиндуцированной антигеннеспецифической супрессии; путем повышения устойчивости лимфоцитов к апоптогенному действию глюкокортикоидов.
Протективная активность милиацина сочетается с его антиоксидантной способностью, проявляющейся ограничением перекисного окисления липидов в условиях действия на организм стрессорного фактора.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на Региональных научно-практических конференциях молодых ученых и специалистов, Оренбург, 1999, 2000; II Съезде патофизиологов России, Москва, 2000; II Конференции иммунологов Урала, Пермь, 2002; Международной научно-
практической конференции «Цитокины, воспаление, иммунитет», Санкт-Петербург, 2002; V Конгрессе РААКИ «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии», Москва, 2002; Всероссийской конференции «Молекулярные механизмы типовых патологических процессов», Санкт-Петербург, 2003; III Конференции иммунологов Урала, Челябинск, 2003; III Съезде иммунологов России, Екатеринбург, 2004; Межрегиональной научно-практической конференции с международным участием «Типовые патологические процессы», Уфа, 2005; IV Конференции иммунологов Урала, Уфа, 2005.
Публикации. Материалы диссертации обобщены в 20 научных работах, в том числе в статьях, опубликованных в рецензируемом научном журнале «Бюллетень экспериментальной биологии и медицины». Получен Патент на изобретение РФ №2244548.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 163 страницах машинописного текста, содержит введение, обзор литературы, главу «Материалы и методы исследования», 3 главы собственных исследований, обсуждение, выводы и указатель цитируемой литературы, включающий 170 отечественных и 131 зарубежных источников. Иллюстрации представлены 11 таблицами и 21 рисунком.
