Введение к работе
Актуальность проблемы.
Изучение связи состояния системы комплемента (СК) организ-э. с патогенезом различных заболеваний является одной из ак->мьных проблем современной клинической иммунологии. Один из :пектов этой проблемы состоит в регуляции активации классичэс->го пути (КП) комплемента Это относится, в первую очередь, к ірокому распространению аутоиммунных заболеваний, характеризу-аихся формированием аутоагрессивных антител и" иммунных комп-ї.чсов, зызызаюших активацию КП СК.
Одним из важных факторов регуляции СК на ранних стадиях
стивации, принадлежащих самой системе, является Ci-инг. Это
[инственный известный ингибитор серкновых прогеиназ С1г и Cis
ірвого компонента СК. В то же вреш, принадлежа к классу сер-
шов, С1-инг успешно инактивируег такие компоненты калликре-
[-кининовой, свертывающей и фибрикодитической систем крови,
ire. активированный фактор Хагемана, XI If, XIa, Xaf факторы
ертывания, плазмин и калликреин- (Arlaud,1984;
hu!raker,1987). Количественные и функциональные дефициты этого мпонента СК являются патогномоничными признаками насяедствен-го ангионевротического отека Квинке (АБО)или приобретенных фицитов аутоиміїїунного кли инфекционного характера при различ-х заболеваниях. Сходство клинической картины этих заболевши ангиояевротическиш отеками аллергической природы и повышен-я частота встречаемости дефищітов Cl-янг при.системной крас-й волчанке и СКВ-подобных состояниях требует разработки спо-бов их дифференциальной диагностики.
Помимо' диагностической и прогностической ценности оценки стояния КП СК, мониторинг отдельных компонентов СК позволяет ущеетвлять подбор дозы некоторых иммунокоррегиругадих препара-в, применяемых при лечении различных заболеваний, в том чнс-, инсулинзависииого сахарного диабета, а также способствует эмированкю современных представлений о механизмах развития и Ценностях течения аутоиммунных заболеваний. При- этом для ;нки уровня и активности С1-инг и содержания Clq применимы зстые лабораторные тесты: радиальная иммунодиффувия по Шнчи-и кммуяофермэктный анализ. Современная отечественная лабораторная практика располага-
- 2 -ет моноспецифической антисывороткой и стандартом для измерения количества СЗ компонента СК, а также комплектом реагентов для. определения активности С1, С2, СЗ, С4 и С5 компонентов комплемента. Однако, дія оценки процессов регуляции КП активации комплемента перечисленных реагентов недостаточно. .
Другим аспектом проблемы являетяся и то, что разработка способов получения очищенных компонентов СК невозможна без им-мунохимического контроля качества получаемых препаратов, осуществляемого, в частности, с помощью разнообразных методов, предполагающих использование моноспецифических антисывороток и соответствующих стандартов.
В связи с вышесказанным, ЦЕЛЬ настоящей работы заключалась в теоретическом и экспериментально-производственном обосновании получения Cl-инг, Clq и набора иммунохимических реагентов для их характеристики в клинике АНО различного генеза и некоторых других заболеваний, сопровождающихся нарушениями ранних этапов активации КП СК.
При этом в качестве сырья, помимо дефицитной и дорогостоящей нормальной донорской плазмы, использовали бросовые осадки IV-1 и А8, получаемые в процессе производства препаратов гамма-глобулина человека спиртовым методом Кона (Curling,1980), и содержащие некоторые белки плазмы крови (Mitra.1986), в частности, СІ-Зи-.а^—заатор, и Clq (соответственно). Применение балластных белковых фракций в качестве источника антигеннного материала оправдано для целого ряда гликопротеинов (Bing.1980), особенно, при получении антисывороток, т. к. позволяет, Ео-пер-вых, эконоиггь более ценное сырье: кровь человека; во-Еторых, сами фракции является частично очищенным сырьем, обогащенный или обедненный по отдельным компонентам крови, что упрощает . процесс очистки белков.
Для осуществления поставленной цели было необходимо решить следующие задачи: 1) разработать оптимальные способы выделения и очистки Cl-инг и Clq из плазмы крови здоровых доноров, а такие из бросовых осадков А8 и IV-1, получаемых в процессе производства гамна-глобулина спиртовым методом Кона; 2) осуществить иммунохимический контроль и анализ биологической активности Cl-инг и Clq, выделенных из различных видов сырья; 3) создать
op иммунохимических реагентов для качественного чг'каличзст-ного анализа названных гликопротеинов; 4) использовать полу-ные моноспецифические антисьшороткн к Clq и С1-инг для ха-теристикч состояния Ю1 активации СК в клинике ангионевроти-кого отека Квинке различного генеза и инсулинзавискмэго са-ного диабета.
Научная новизна работы.
Разработаны оригинальные способы выделения и очистки кнг и Clq компонентов СК из нормальной донорской сиворотки ви человека.
Проанализировано содержание названных гликопротеннов в личных видах сырья: балластных осадках А8 и IV—1, получаемых
производстве препаратов крови человека спиртовым фракциони-анием по мзтоду Кона
Показана принципиальная возможность использования в качес-
дополкителыюго источника антигеннного материала СІ-инг и
балластных осадков А8 и IV—1.
Получены- новые ишунохимические реагенты для качественной зличественной характеристики С1-инг и Clq в сыворотках крови эвека: поликлояальныэ моноспецифические кроличьи азтисыво-т к С1-ИНГ и Clq, а также стандартные сыворотки крови. Определены уровни Clq и С1-инг в сыворотках крови нормаль-доноров населения России.
Исследованы активность и содержание СІ-инг', а такп: уро-ь Clq в сыворотках крови больных врожденным (приобретенным) гионевротическиы отеком Квинке и отеками аллергической при-і. Проведен анализ состояния регуляторного звена ЕП СК по ми и активности С1-инг у больных инсулинэависимым сахарным 5етом I тина (КЗСД). Показана диагностическая и прогности-сая ценность оценки ВП активацій СК у этих групл Сольных. На ізании проведениного обследования больных АНО возмоша диф-!пщ:альная диагностика приобретенных, врожденных и алдерги-етх форм отеков.
Практическая значимость работа
На основе предварительно разработанных способов выделения
тетки СІ-инг и Clq из различных видов сырья' получены и
і - 4 -
внедрены в биотехнологическую практику новые иммунохимические реагенты для определения С1-инг и Clq: 1) "Антисыворотка диагностическая против Clq компонента комплемента человека сухая преципитируюЕэя" (Инструкция по изготовлению и контролю, утверждена 28. Сб. 1988 г., протокол N3, Комитет по аллергенам и биопрепаратам); 2) "Антисыворотка диагностическая против С1-илг человека прецшшгирухх^я сухая" ( экспериментально-производственный, регламент 379-92, временная фармакопейная статья 42-332 ВС-92, утверджено 8.07.92 г., протокол N5, Комитет по ЫИБП ГИСК им. Тарасевича).
Оформлено одно рационализаторское предложение "Способ выделения Clq" (10.03.88 г., N 185-432).
Подана зазвка на авторское свидетельсво и получена приоритетная справка на "Способ получения С1-инг",( 24.07.92 г., N 5043741).
Структура и объем диссертации. Работа изложена на страницах машинописи, включает \7> страниц текста, J-L таблиц и \(з рисунков'и состоит из введения, четырех глав, заключения, выводов и списка литературы, включая 5.3 отечественных и &.\ Ч иностранных литературных источника.
Апробация работы проведена на заседании секции Ученого Совета ЫНИИЭМ кх Г, Е Габричевского "Иммунология и медицинская биотехнология" в K>vtis 1994 г.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ.
![Оптимизация получения лейкофильтрованных эритроцитных гемокомпонентов и их применения в трансфузионной терапии операционной кровопотери [Электронный ресурс]](/i/i/4498/200249.png "Оптимизация получения лейкофильтрованных эритроцитных гемокомпонентов и их применения в трансфузионной терапии операционной кровопотери [Электронный ресурс] Пугина Наталья Вячеславовна")