Содержание к диссертации
Введение
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 39
4. СОБСТВЕННЫЕ ДАННЫЕ 49
4.1. Сравнительный анализ эффективности способов приготовления и использования реактивов антирезус 49
4.1.1. Сравнение способов приготовления реактивов антирезус по частным критериям 52
4.1.2.'Определение значений показателя эффективности способов изготовления и использования реактивов антирезус 62
4.2. Разработка способа приготовления и применения сухих сывороток для экспресс-определения резус-принадлехности крови на плоскости без подогрева 67
4.3. Применение различных методов фракционирования белков сыворотки крови для получения универсальных реактивов антирезус (лишенных анти-А и анти-В естественных изогемагглю-тининов) 77
4.4. Влияние способов хранения и консервирования на иммунологические и физико-химические свойства "сырья антирезус" 84
4.4.1. Влияние борной кислоты на иммунологические и физико-химические свойства
"сырья антирезус" при хранении 85
4.4.2. Влияние консервирования мертиолатом на иммунологические и физико-химические свойства "сырья антирезус" при хранении 88
4.4.3. Влияние замораживания и лиофилизации на иммунологические и физико-химические свойства "сырья антирезус" при хранении 91
4.4.4. Исследование "сырья антирезус", консервированного борной кислотой (3$), лиофилизированного в присутствии сорбита-Д (2$) или полиглюкина (2%). 95 4.5. Использование растворов низкой ионной силы
(РНИС) в реакции гемагглютинации 100
5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ И ВЫВОДЫ 104
6. ЛИТЕРАТУРА 125
- МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
- Сравнительный анализ эффективности способов приготовления и использования реактивов антирезус
- Разработка способа приготовления и применения сухих сывороток для экспресс-определения резус-принадлехности крови на плоскости без подогрева
Материалы и методы исследования
Объектом исследования служили: 1) сыворотки крови доноров, намеренно иммунизированных антигеном Kho(D) системы Резус, консервированные несколькими способами и хранившиеся при различных температурах; 2) стандартные типирующие реактивы для различных методов определения резус-принадлежности крови; 3) принятые в стране способы изготовления и использования стандартных сывороток антирезус.
Иммунное "сырье антирезус" получали из крови намеренно иммунизированных резус-отрицательных доноров-добровольцев. Кровь брали в отделе заготовки крови в простерилизованные флаконы без консерванта. На второй день после взятия крови у донора из флакона отделяли сыворотку от сгустка, добавляли консервирующие вещества и через одни сутки расфасовывали в про-стерилизованные пенициллиновые флаконы емкостью по 3-5 мл. Флаконы плотно укупоривали и хранили при различных условиях. На всех этапах заготовки сыворотки соблюдалась асептика.
Для изучения иммунологических и физико-химических изменений, происходящих в "сырье" антирезус во время длительного хранения, было заготовлено 30 образцов сывороток различных групп крови: 0(1) - 6 образцов, А(П) - 17, В(Ш) - 7 образцов с титром антирезус антител не менее 1:32 (табл. 3.1).
Сравнительный анализ эффективности способов приготовления и использования реактивов антирезус
В настоящее время на практике применяется несколько способов приготовления и использования стандартных сывороток антирезус. Наиболее распространенными являются желатиновый способ и экспресс-метод в пробирках без подогрева. Наряду с этим некоторые СПК определяют резус-принадлежность на плоскости с подогревом и без подогрева, а также на чашках Петри. В ряде случаев перепроверку резус-принадлежности осуществляют непрямой реакцией Н мбса.
При приготовлении и использовании сывороток антирезус имеет значение ряд факторов, поэтому для проведения сравнительной оценки эффективности указанных способов необходимо в первую очередь выявить признаки сравнения (частные критерии).
Анализ операций по приготовлению реактивов антирезус для различных способов определения резус-принадлежности крови, по нашему мнению, целесообразно проводить по следующим частным критериям, обозначенных символом w
- процент неясных результатов (необходимость перепроверки резус-принадлежности), что отражает точность или чувствительность метода - Yfj »
- время определения резус-принадлежности - w2 ;
- потребность в аппаратуре - щ ;
- количество определений на 100 мл реактива - Y/4. ;
- стоимость 100 мл реактива - W5 ;
- время приготовления реактива - /g#
В литературе отсутствуют данные о сравнении различных способов приготовления и использования стандартных сывороток антирезус по указанным параметрам. Имеются только некоторые сведения о точности определения резус-принадлежности различными способами.
Для проведения оценки существующих способов изготовления и использования реактивов антирезус по частным критериям и вычисления обобщенного показателя эффективности нами была проделана следующая работа: для каждого метода было рассчитано время, требуемое для исследования резус-принадлежности образцов крови; потребность в аппаратуре и оборудовании; сделан расчет приблизительной стоимости реактивов с учетом применяемых разводителей; произведен расчет времени, затраченного на приготовление реактивов. Результаты этой работы приведены ниже в соответствующих разделах по определению приоритетов способов по частным критериям.
Для сравнительного анализа эффективности приготовления и использования реактивов антирезус предлагается методика решения многокритериальной задачи (рис. 4.1.1), в которой на основе учета частных критериев производят обобщенную оценку способа, т.е. определяют значение показателя эффективности разработок.
Разработка способа приготовления и применения сухих сывороток для экспресс-определения резус-принадлехности крови на плоскости без подогрева
Настоящим разделом работы было предусмотрено упрощение способа приготовления сывороток для экспресс-метода определения резус-принадлежности на плоскости без подогрева и разработка способа их лиофилизации. Исходным сырьем служили на-тивные сыворотки антирезус, получаемые путем разведения сырья, содержащего антирезус антитела, "универсальным" стандартным разводителем (приготовленным по методу О.В.Успенской, 1966).
При разработке способа приготовления реактива для экспресс-метода на плоскости без подогрева сыворотки были разделены на три группы: 1 - нативные сыворотки антирезус; П -те же сыворотки, что в группе 1, с добавлением в/о раствора полиглюкина в соотношении 2:1 после высушивания; Ш - сыворотки антирезус с добавлением сухого полиглюкина в конечной концентрации 6.
Высушивание производилось по режиму сушки плазмы на аппаратах "Юзифруа" или КС-30 в объемах по 2 или 5 мл.
Перед употреблением высушенные сыворотки доводили до первоначального объема 6/& раствором полиглюкина (1 группа) или дистиллированной водой (П-Ш группы).
После высушивания сывороток антирезус в 1 группе сывороток с исходными титрами 1:32 и ниже наблюдалось изменение характера их агглютинации со стандартными эритроцитами (табл. 4.2.1). Последняя становилась мелкодисперсной или исчезала совсем. Добавление о/о раствора полиглюкина к тем же сывороткам до высушивания (П группа) способствовало сохранению первоначального характера агглютинации сывороток, растворенных дистиллированной водой после высушивания. Однако в части образцов сывороток П группы (в двух из 20 через 1-Ю дней и в четырех через 18-24 месяца после сушки) стала появляться неспецифичность реакции агглютинации.
