Введение к работе
, Актуальность темы. Для специфичэскоа диагностики атопкчес-схоа бронхиальной астмы (АБА) применяет комплекс методсз, направленных на выязление аллергена или группа аллергенов, вызывавяих забодеззние у больного. Одним из зтапаз азларгогогаческого обследования являвтея лабораторные тесты, которые позволяет расаи^ро-вать этиопатогенетические механизмы заболевания. Обследование "*-vitro инеет ряд прекмуцеств перед методами <« *LVO (Моакезич B.C., Назаров А.А., 19*39; Федосеев Г.Б., Хлопотова Г.Л., 19о6; Фрадкин В.А., 1975; Зе-дабп. С. , 1969; Terr Л-1. , 1983).
По мнении экспертов Американской академии Аллергии и Иммунологии {In-ritro .... I9S7) наиболее перспективными для лабораторной диагностики АБА являвтея оценка пула сенсибилизированных лимфзцитоз (РБТ!) и такаю изучение свободЕоциркулирупаих йгЕ (Международный ..., I9&5; Новиков Д.К.. 1990; Дыцкиа 5.И. с соазт., 1990; Hctrrbietoi &<*- , I9dJ).
Индукция БТ1 в присутствии аллергена служит доказательством ямоввегеся ранее контакта о ним. Считает (Каніурнк А.Х., Зааце-каускайте Р.І.. 1966; Gurta. 6-. , 19Ь8; HsLeA C.-/f. et оЛ., 1987), что при пвловоз аллергии БТ1 на специфический аллерген по-энзека; у здоровых подобного феномена на наблидали. Другие авторы С Н. Halvorsien. е о. , I9S6) не обнарузили достоверного поза-аения бдастов. .
Причини таких противоречий в тон, что синтез ДНК л пролиферация - коночный рззультаг действия ряда факторов, которыз во многой зависят от сроков культивирования (Іинг Н.Р., 1971; Caof*-іо>-у .... 1983). Техническая сложность БТ1 не позволяет гироко троводкть оценку сенсибилизации лимфоцитов.
Персязктязао изучеаав ранаах амизационинх маркеров; их по-івлекао продяеетзуот сшиззу ДНК и определяет посдедупщие процесій преврааенкя клетка з лгкфобласт. К числу таких маркеров отно-іятся рецептори к Ш2. Для определения лимфоцитов, аеаудих рецепторы s И2 оптимальним является, метод, основанный на-спецвфичес-:ся связывания меченого КЇ2, поскольку позволяет выявлять не ан-'игойкаэ структура, а функционально полноценный рецептор, способна сеязыезть ЙІ2 (Черодэоэ Л.Я.,. Новальчук Л.В., 1969; /pt'etse-щ J.U Є.І а: , 19Ь7; fi-Ucz //.'. е а. t Ubo).
Клиническая картина при АН определяется наличием б сыворотке крови реагиновых ИгБ-антител, которые изучает методами радиоиммуиоэссея в энзимшшуноэссек. Последний по кногии соображениям предпочтительней, хотя чувствительность его ниже (дэантиев Б.Б., Осипова А.Г., 1957; Покровский В.И. с соавтв, ІУЬб.). Полагает, что высокий уровень алдергенспецкфичєских ИгЕ имеется в 93-96$ случаев заболевания АБА С Gvuu-in W. е а.} 1W, Jla»sfud Є. et а. , ІУ68; fkrerwb*- . -є* а. . ІУЬ5). В то же время К.А. Голыаева с соавт., 1У8Э обнарукили аллергенспецифические антитела только у 572 обследованных больных АБА.
Иммунофернентный анализ для определения аллергекспецифичес-ких антител требует дальнейпой разработки (ki&e. сЛо/сс..., I96S Перспективным представляется использование в качестве маркерного энзима фермента, который обладает лучшими биологическими и коммерческими свойствами по сравнении с традиционными маркерами - пенициллиназы и применение техники "двойного сэндвича" с обоим антивидовым коньвгатом.
Учитывая "двойственнай" характер аллергической реакции, ее клеточный и гуморальный компоненты, цальо работы была разработкі комбинации тестов» выявдявних сенсибилизацию лимфоцитов к аллергену н аллергенопецкфнческих ИгБ-антител у больных АБА. Для достижения указанной цели необходимо, решить следующие задачи:
-
разработать диагностику»» позволящий характеризовать лим.ро циты,несущие рецепторы к lil'di
-
оценить клиническое значение обнаружения активированных лимфоцитов ъ периферической крови, & также в культуре лимфоцитов, стимулированных митогепами в аллергенами;
-
разработать юшуноферментнув тест-скстему для определения ал лергешшецкфичееккх ИгЕ на основе пенициллиназы, изучить специфичность и чувствительность системы;
-
выяснить возможность использования комбинации этих двух тестов для диагностики АБА.
Положения, выносимые на защиту
-
Разработанный метод определения лимфоцитов, несущих рецептор к ИІ2 позволяет выявлять их как в периферической крови, так и после стимуляции культуры лимфоцитов митогенаки и аллергенами.
-
Специфическая активация лимфоцитов аллергеном домавней пыли, оцениваемая по экспрессии ііІНР обнаруживается у 83,4л больных атонической бронхиальной астмой, сенсибилизированных к адльргеї
$)~ Новый вариант ИФА тест-системы на основе пеницилликазы позволяет выявить аллергенспецифическиэ ИгБ-антитела у 91, больных АБА, сенсибилизированных к аллергену домаяней пыли. 4) При комбинированном применении разработанных кетодов секси-снбилнзация к аллергену домашней пыли подтверждается у 97,63 больных атонической бронхиальной астмой с гипорчувствительностьв к аллергену.
Научная новизна Впервые разработаны диагностикум для определения активированных лимфоцитов, несущих рецепторы к ИЛ2 и разработана техника ускоренной оценки РБТЛ при воздействии как митогенов, так и аллергенов. Показано высокое клиническое значение определения такой активации лимфоцитов в диагностике АБА. Впервые разработан новый вариант имнукоферментной тест-системы для определения Игй, специфических к аллергену домаяней пыли, с использованием фермента пе-кицилдиназы, которая обладает более эффэктивками коммерческими и биологическими свойствами. Установлено, что применение комбинации 2-х методов - индукция ИЛ-2?-позитквных лимфоцитов аллергеном до-маиней пыли и выявление аллергекспецйфИческих ИгЕ - позволяет более эффективно днагносцироваїь АБА в сравнении с другім» иетэдама. Практическая ценность
-
Разработан нотод определения лимфоцитов, несущих рецепторы в интзрлейкину 2. Индукция ИЛ2Р-позитивных лимфоцитов под влиянием аллергена дог ікеЯ пыли может использоваться в качестве лабораторного, теста для изучения специфической сенсибилизации у больных АЕА. ,
-
7повень лзмфоцигов, экспрессирувзнх рецептори к Ш2 в- периферической крози и культуре, стимулированной митогенами может служить для характеристики иммунного статуса.
-
Предлагается новый вариант иммучоферментной тест-системы для определения специфичных к аллергену дояапнея пыли ЙгЕ антител.
-
Комбинированной применение двух методов рекомендуется для оценки клеточной и гуморальной сенсибилизации к аллергену домапией пыли у больных АБА.
Внэдрвниа'полученных результатов Разработанный диагностикум для определения ликдоцнтоз, несучих рецепторы к ИЗ-2 пр:з«эвязтся для оценки уровня активированных лимфоцитов s периферической крови как одного из показателей иммунного статуса и в культуро иг vib-o под.влиянием патогенов и оллартзиоз з оедевонаяя тсраяззтзчгского и хирургического срора-
л-ей Витебской областной клинической больницы, кафедрах неонатолс-гии s>JB и урологии донецкого медишгасксго института, клинико-диагностической лаборатории Донецкой областной клинической больницы, центральной научно-исследовательской лаборатории БелГКУВ. Разработанная шжуносзеркентная. тест-система определения адлергекспецн-фмческих -ИгЕ применяется в аллергологическок отделєьии Витебском областной «ушинческой больница.
Совместно с проф. Новикоэзм д.К., асе. Колосовой Т.С., Са>і-соновым Н.й. издана информационная справка Р01Ш МЗ БССР "Принципы лабораторной диагностики аллергических заболеваний", 1991; Минск. Получено авторское свидетельство 1607574 на изобретение "Способ виявления..лик|іоцитов периферической крови, несущих рецепторы к иктерлейкику-2" (в соавторстве с Д.К. Новиковым) и утверждены 'd рационализаторских предложения.
Натериалы работы докладывались на Республиканских и Всесопэ-ных конференциях, используется в учебном процессе кафедры клинической аллергологии Витебского медицинского института. Апробация работы Материалы работы доложены и обсуждены на Пленуме правления Белорусского научного общества кнмунодогов, Витебск, 19bd г.; на Всесоозной конференции молодых ученых "Актуальные проблемы экспериментальной и клинической икнунологии", Москва, I9U9 г.; на пленуме правления Всесовзного обцества и»шунологов "Экология и аллергия", Витебск, 19Ь9 т.; ва Всееоозной научней конференции "еакторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях", Челябинск, ІУе-9 г.; на І іікмунологическои съезде Белоруссии, Ашск, 1990 г.; на Международном симпозиуме "Регуляция и клиническое значение иммуноглобулина ".
Основные полоазная диссертации иэлокены в 9 работах, получено авторское свидетельство на нзобрзтение.
Объем и структура диссертации
