Введение к работе
Актуальность проблемы. Branhamella catarrhalis является возбудителем тяжелых инфекций: среднего отита у детей, острой пневмонии, бронхитов, синуситов и коньюктивитов (Doern G.,1986).
Этот микроорганизм долгое время описывался как нормальный представитель флоры верхнего дыхательного тракта (Feder Н, 1984), что не способствовало его изучению. В настоящее время твердо установлена роль этого микроорганизма как инфекционного агента, вызывающего заболевания не только при иммунодефицитных состояниях, но и у лиц с нормальным иммунным статусом (BluestoneC, 1992).
К настоящему времени в мировой литературе имеется достаточно много публикаций, посвященных исследованию антигенной структуры В. catarrhalis, идентифицированы некоторые ее антигены, в том числе основные белки внешней мембраны, среди которых обнаружены железорегулируемые белки. Вместе с тем, роль большинства антигенов этой бактерии в развитии заболевания, факторы, определяющие её вирулентность и патогенность, остаются малоизученными. Для решения этих вопросов наиболее целесообразно использование методов современной иммунохимии. В частности, для изучения антигенного состава большую ценность имеют препараты антител, способные специфически реагировать со строго определенными антигенными структурами микроорганизма. Наряду с препаратами поликлональных антител применяются и обладают рядом преимуществ моноклональные антитела, отличающиеся высокой специфичностью и полной гомогенностью. В современной иммунологии моноклональные антитела являются необходимым инструментом для изучения свойств антигенов различной природы, идентификации антигенов в составе различных штаммов микроорганизмов и для анализа межштаммовой антигенной вариабельности. Использование моноклональных антител позволяет более эффективно, чем с поликлональными антителами, изучать перекрестные реакции между микроорганизмами. Такого рода исследования позволяют расширить наши представления об общих для различных микроорганизмов молекулярных механизмах осуществления тех или иных функций. В частности, таксономическое сходство В. catarrhalis с другими грам-
отрицательными бактериями (Neisseria), сходство их, как этиопатогенетических факторов, позволили нам применить известные сведения об антигенах этих микробов для исследования свойств антигенов В. catarrhalis.
Отсутствие отечественных работ по В. catarrhalis приводит к тому, что исследователи, в частности, сотрудники диагностических микробиологических лабораторий, не располагают специфическими средствами выявления этого возбудителя и дифференциации его от других родственных микроорганизмов. Это, в свою очередь, не позволяет им оценить реальную частоту заболеваний, вызываемых В. catarrhalis, и патогенетическую значимость тех или иных ее антигенов и, соответственно, разработать меры профилактики и специфической терапии.
Цель исследования: Сравнительное изучение антигенного состава В. catarrhalis из коллекции штаммов НИИВС им.И.И.Мечникова РАМН.
Задачи исследования:
-
Провести сравнительный анализ профилей антигенов штаммов В. catarrhalis с применением препаратов поликлональных антител.
-
Получить панель моноклональных антител к различным антигенам В. catarrhalis.
-
Исследовать штаммовую вариабельность антигенов В. cafarrhafe с помощью моноклональных антител.
-
Определить функциональные характеристики некоторых антигенов В. catarrhalis, выявляемых моноклональными антителами.
Научная новизна и практическая значимость. Впервые получена панель моноклональных антител к антигенам В. catarrhalis с молекулярной массой 67 kDa, 41 kDa, 94 kDa, 68 kDa, 15 kDa, 53 kDa, 56 kDa, 40 kDa, 72kDa и 114 kDa.
Впервые проведен сравнительный анализ антигенного состава штаммов В. catarrhalis, выделенных в Московском регионе.
Установлен железозависимый характер экспрессии белков 67 kDa и 114 kDa В. catarrhalis.
Обнаружено антигенное сходство группы жепезорегулируемых белков и поринов Neisseria meningitidis и В. catarrhalis, поринов Eshehhia coli, N. meningitidis и В. catarrhalis, выявляемое моноклональными антителами, позволяющее предположить существование общих консервативных эпитопов этих белков у
микроорганизмов этих родов.
Полученная панель из 23-х моноклональных антител может служить инструментом для дальнейшего изучения антигенного состава штаммов В. catarrhalis.
Положения, выносимые на защиту:
-
Создана панель гибридом-продуцентов антител к антигенам В. catarrhalis с молекулярной массой 67 kDa, 41 kDa, 94 kDa, 68 kDa,15 kDa, 53 kDa, 56 kDa, 40 kDa, 72kDan114kDa.
-
С помощью полученных моноклональных антител охарактеризованы антигены B.catarrhalis из колекции штаммов НИИВС им. Мечникова, исследована их штаммовая гетерогенность. Обнаружены общие эпитопы на антигенах N. meningitidis и Е. coli, имеющих сходную функциональную роль с белками В. catarrhalis.
Структура диссертации. Диссертация изложена на )Ь страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, глав собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, включающего//^источников. Работа иллюстрирована 6 таблицами и 13 рисунками.
Апробация диссертации
Материалы диссертации доложены на конференции молодых ученых НИИ вакцин и сывороток им. Мечникова (Москва, 1994), 26-й и 27-й конференциях Скандинавского Общества Иммунологов (Ґетеборг, Швеция, 1995; Турку, Финляндия, 1996), на 8-м международном конгрессе по бактериологии и прикладной иммунологии (Иерусалим, Израиль, 1996).
Диссертация апробирована на научной конференции отдела иммунодиагностики НИИ вакцин и сывороток им. Мечникова РАМН.
