Введение к работе
Актуальность проблемы. Вирулонтность патогенных бактерий определяется способностью микроорганизмов к осуществлению целого ряда этапов аграоопи: пропикновantra, размножению в тканях организма хозяина и выбросу токоинов. Многие исследователи основную патогенетичеокуго роль при чумной инфекции отводят продукции токсинов, способных в .отсутствие микроба вызывать сходные о заболеванием патологические изменения в тканях мэк-рооргзнизшз и его гиболь (Заболотний Д.К., 1956; Донсков В.В,, 1978; Schar М. , Meyer К.Р. , 1956; Scheidegger S. ,1957).
К настоящему времени у чумного микроба выявлено несколько токсических компонентов (Домарэдский И.В., 1966; Burrows т.в., 1963), из которых особенно ваяно в зна.чанио придается белковому токсину (II фракция Байкера или "мышиный" токоин). и липополисахаридноыу эндотоксину. Хотя'эти токсические фракции были выделены, очищены и подробно охарактеризованы, многое д . проблема чушюй интоксикации остается невыясненным. Не определены ТОЧКИ ПрИЛОЯОШШ ДОЙСТВИЯ Т0К0И30В ( VTeuaerstr'dm D.K. et аі.,
1977), не установлена причина резистентности некоторых видов кивотных к "мышиному" токсину чуйного микроба. Эти и еще многие другио на районные иопрооы являются серьезным ограничением сегодняшних попыток понять генез и механизм чумной интоксикации.
- Несомненный вклад в. решение проблемы чумной интоксикации доляны внести исследования, связанные о выяснением механизмов устойчивости отдельных видов животных к разным токсичоским компонентам чумного микроба.
. . -Цель работы. Изучить ферментный опактр сыворотки крови и состояние лизосомного аппарата у животных чувствительных и нечувствительных .к различным по химическому составу, токсинам чумного микроба для раскрытия некоторых патогенетических механизмов резистентности к чумной интоксикации.
.Задачи работы.. На подели чувствительных и розистентных к токспам чумного микроба аивотных определить:
I. Еозмокность использования данных об изыонянии эктиг-
ности ряда ферментов сиворотки крови для получения оводепий о преимущественном повреадении отдельных органов или систем sn-вотных различными гокоичеокими фракциями чумного микроба.
.. 2. Способность токсинов чуйного микроба вызывать высвобождение гидролитических ферментов из лпзосои печени чувствительных и устойчивых аивотных.
-3. Способность бооклагочных экотрактов тканой ЕИВ02ПЫХ, содорзащих гидролитические ферменты лизосом, инактивировать in vitro токсины чумного микроба.
4. Возыошшоть иоолодовать токоические фракции чумного, микробе но приоутотвио в них активных ферментативных белков.
Научная новизна:
- проведано первое систематическое экспериментальное, изу
чение ферментного профиля сыворотки крови у животных, отрав
ленных двумя разными токсическими фракциями чумного микроба -
белковым токсином и липополисахарядныц эндотоксином, и дана
оценка диагностического и патогенетического значения методу
ферментной диагностики бактериальных интоксикаций;
... .- впервые показать что лизосовдшЕ аппарат клеток ретйку-лозндоЕОлиальной сігтеїш является одной из точек приложения действия токсинов чумного микробе в организме аивотных;
- установлены видовые различия в отапоии лабильности.. .
мембран и активности гидролитических формантов лизосом.клеток
ретикулоэндотвлиальной системы у чувствительных и резистент
ных к белковому, токсину чумного микроба животных, коррелирую
щие с чувствительностью животных к "мышиному" токсину.
Теоретическая и прзктлчаская знзчишотъ. Проведен анализ результатов исследования активности 15 формантоЕ сыворотки крови при действии двух токсических фракций чуыного.шкробо, различных по.химическому составу. Обнаружено, что энзимный . профиль лизоооыных гидролаз цаняется неоднотишш и.зависит как от химичоокого состава токоичеокой фракции, ток и от чувствительности животных к ной.
- Установлена взаимосвязь ыокду видовой чувствительностью
животных к "мышиному" токсину чумного микроба и степенью ла-
билыюсти мембран лнзосом, характерной для данного вида.
Получаны новыа данные о том, что белковый и липополиса-харидный токсины чумного микроба вызывают у белых крыс и морских свинок различающиеся изывнашш активности гидролити- чаоких фариантов оышротки крови и овободной и общей активности гидролитичеоких ферментов лизооои з печени,
Показано, что лизосишша гидролазы пачани белых крыс опособны in vitro детокоицировать "шшиный" токсин чуйного микроба.
Установленные факты вносят новыа представления о причинах резистентности отдельных видов яивотных к "мышиному" токсину чумного микроба.
. - По результатам проведанных исследований разработаны ме-тодичеокис рекомендации определения резистентнооти нивотных к токсический фракциям чуйного микроба. Методические рекомендации утверждены Ученым Советом Ростовокого-на-Дону государственного нэучно-исслздовательского противочумного института и внедрены в практику в ряде лабораторий института.
На защиту выносятся следующие положения;
- - I. Токсические фракции чумного микроба, имеющие разный химический состав - белковый токоии и липополисахаридний эн-дотокоин - вызывают как ряд одинаковых изменений ферментного опектра сыворотки крови животных, связанных или с наспацифи-неокиыи реакциями организма, или являющихся вторичными, так и различные изменения, обусловленные особенностями патогенеза этих интоксикаций.
-
Белые крысы и морские свинки имеют достоверные видовые отличия в активности ряда кислых гидролаз сыворотки крови и печени.
-
Введение ннвотным токсических фракций чумного микроба вызывает изменения овободной и.общей активности ферментов ли-зосом печени, уровень активности которых зависит как от химической природы токсина, так и от степени чувствительности животных к нему.
-
Фракция лизосом печени белых крыс облздаот способ-
- б -
воотыо инактиваровать ід vitro белковый токоин.но не инак-тивирует липополисахаридный эндотоксин Y.peBtis . Фракция ли-зосом пачани белых крыо, предварительно получивших 3 ID^q "шийного" токсина, утрачивав! способность ішактивиров-ть in vitro белковый токсин чумного микроба.
.5. В токоичеоких фракциях чумного, холерного и брюшнотифозного микробов, полученных общепризнанными методами, достаточно хорошо очищенных и подробно охарактеризованных, содержится ряд ферментов разных классов.
Апробация работы. Основные полонения и выводы диссарта-- ционной работы были изложены и обсундены на общеинститутских и иаклабора торных научных конференциях Росговского-нз-Дону государственного нэучно-исследовательского противочумного института, Ростов-на-Дону, 1973-1976 гг. На ІУ Северо-Кавказской биохимической конференции, Нальчик, 1979 г. На 2 Всесоюзной симпозиуме ."Структура и функции лизосом", Новосибирск, 1980 г. Диасертауіяобсуадана и одобрена на научной конференции Противочумного института, Ростов-на-Дону, 1989 г.
.. Публикация результатов исследования. Результаты исследования опубликованы в 5 печатних работах.
Объем и структура работы. Текст работы.изложен на.165 страницах машинописі-, иллюстрирован II таблицами, II рисунками. Работа состоит из введения, обзора литературы,"описания материалов и методов исследования, изложения собственных исследований (5 глав), заключения и выводов..Библиографический указатель содержит 165 источников отечественной іг29 - зарубежной литературы.
