Введение к работе
Актуальность проблемы. Клетки, регулирующие иммунные реакции, играют важнейшую роль в поддержании иммунного баланса. Предполагается, ЧТО развитие аутоиммунных (Theofil:)poulos, Dixon 1981) и опухолевых процессов (North, Burauker, 1984), иммунных дисбалансов при старении ( Walford, 1980), аллергических воспалительных заболеваний ( Chiorazzi et al., 1977) и некоторых других патологических процессов может быть следствием генетических или приобретенных дефектов иммунорегуляторных клеток. Наиболее известными и достаточно полно изученными представителями таких клеток являются различные субпопуляции Т-димфоцитов (хелпе-ры, супрессоры, амллифайеры, контрасупрессоры и др.) и макрофаги. Свои эффекты они реализуют, главным образом, путем синтеза многочисленных медиаторов, взаимодействующих с соответствующими рецепторами на клетках-мишенях.
Относительно В-лимфоцитов также получены убедительные доказательства, что они могут быть не только эффекторными клетками, синтезирующими иммуноглобулины, но и выполнять функции регуляторов иммунных реакций. Так, среда них обнаружены супрессоры анти-телообразования (Р.В.Петров, Р.М.Хаитов с сотр., 1976, 1977; Shlmamura at al., 1982) и гилерчувствительности замедленного типа (Katz et al. 1974; АзЬегаоп, Zemhaba, 1976), клетки С хелдер-ной'активностью (В.М.Манько с соавт., 1978; И.М.Дозморов с со-авт., 1985; Djralnaki, Smith, 1977; del Guercio et al., 1980; Shenk et al., 1981; Yamamoto et al., 1984), супрессориддуцирую-ЩИЄ клетки (Caloina et al., 1980, 1982; Shlmamura et al., 1982, 1984), антигенпредставляющие клетки ( Cheanut et al., 1981; Grey et al., 1982; Krieger et al., 1985, 1986; Shlmamura, Yoohlda, 1988), клетки, синтезирующие шгаерлейіиш I ( Matsuahi-ma at al., 1985), естественные цитотоксическне клетки (Welsh
et al., 1Э86; Bersani et al., 1987).
Более того, постепенно накапливаются сведения об изменении активности иммунорегуляторных В-клеток, в частности, костномозговых супрбссоров, при аутоиммунных процессах, опухолевом росте и старении у экспериментальных животных (Р.В.Петров, Р.М.Хаитов с сотр., 1978, 1980, 1981). Эти данные, а также обнаружение дис-бактериоза кишечника у больных артритами ( Сашра, 1983) и у мышей с врожденной аутоиммунной патологией (У.В.Мадашдов с соавт. 1986), сопрововдающегося постоянно высоким уровнем в крови эндотоксинов - поликлональных активаторов Вчпвдфоцитов - указывают на необходимость всестороннего изучения иммунорегуляторных В-клеток.
В связи с этим возникают проблемы индукции таких клеток, моделирования состояний, при которых регуляторами иммунных реакций являются В-димфоциты, поиска веществ, влияющих на их активность, изучения механизма действия и разработки тестов для их оценки у человека. Следует признать, что за исключением коолю-мозговых супрессоров (Р.В.Петров, Р.М.Хаитов с сотр., 1976-1987), В-супрессоров,'индуцированных иммунными комплексами ( Ыа-suda, Uiyama-Inaba et al., 1978-1988) И, в меньшей степени, В-хелперов, синтезирующих вер - "В-клеточный усиливающий фактор" (del Guercio.Katz, 1980-1987), подобные подходы не разработаны, ' а имеющиеся в литературе сведения ограничены немногочисленными сообщениями о различных индукторах иммунорегуляторных В-клеток ( Perason, 1977; Rivas, Rogero,I983; Baker et al., 1985; Parkas et al.,1986).
Цель и задачи исследования. Цель настоящего исследования -- разработка новых подходов к индукции иммунорегуляторных В-димфоцитов, изучение их свойств, функциональной активности и
аутоиммунными заболеваниями и иммунодефивдтами.
Для достижения поставленной цели потребовалось решение следующих задач:
-
Разработать подходы к индукции иммунопегуляторных В-кле-ток при введении мышам тимусзависимого антигена - эритроцитов барана (ЭБ) и тимуснезависимого антигена - липополисахарида эн-теробактерий (ШС),
-
Разработать подходы к индукции ишунорегуляторяых В-кле-ток in vitro фармакологическими и биологическими препаратами.
-
Изучить иммунорегуляторные В-клетки у мышей линий NZB и MRL/MpJ-ipr/lpr (сокращенно mhl/i ) с врожденной аутоиммунной патологией.
-
Разработать подходы к индукции иммунорегуляторных В-кле-ток в периферической крови здоровых доноров и больных ревматоидным артритом, гипо- и агашаглобулинемиями.
-
На основе разработанных подходов изучить закономерности формирования, свойства, фенотип, функциональную активность и возможности ее изменения, а также механизм действия ишунорегу-ляторных В-клеток.
Научная новизна. Показано, что В-супрессоры в селезенке мышей мокно индуцировать введением субоптимальных доз ЭБ. Изучены кинетика их формирования и чувствительность этого процесса к различным ингибиторам и стимуляторам, выявлен фенотип этих клеток, исследованы чувствительность к обработке in vitro различными веществами, зависимость эффекта от дозы, скорости седиментации в поле тяжести 1 g , наличия на мембране рецепторов к лектинам, изучен механизм действия и некоторые другие свойства.
Сформулировано представление о двойном механизме действия ЭБ-индуцированных В-супрессоров, зависящим от наличия на мембране Fcjj рецептора (?cj R) : yojj й+ - В-клетки действуют непос-
родственно на клетки-мишени, а Рсу R -В-клетки - путем индукции Т-супрессоров, то есть являются оупрессориндуидрующими клетками.
Выявлены и проанализированы взаимосвязи мевду функциональной активностью иммунорегуляторных В-клеток нормальных и аутоиммунных мышей и внутриклеточным содержанием и способностью к секреции этими клетками циклических нуклеотидов и продуктов цик-лооксигеназного и лилоксигеназного путей окисления арахвдоновой кислоты. При этом с помощью ингибиторного анализа установлено, что В-супрессоры нормальных мышей, индуцированных ЭБ, оказывают эффект за счет секреции липоксигеназных продуктов, а В-супресс^-ры аутоиммунных мышей - за счет циклооксагеназных продуктов.
Впервые обнаружены способность коклюшного токсина индуцировать и усиливать супрессорную активность В-клеток и способность ЛПС индуцировать одновременно В-супрессоры и иммуностимулирующие В-клетки с превалированием последних.
Впервые выявлены В-супрессоры у больных ревматоидным артритом, гипо- и агаммаглобулинемиями.
Научно-практическая значимость. Разработан способ получения и обогащения В-супрессоров у мышей, основанный на сорбции спле-ноцитов на пластике, покрытом лектинами.
Данные о способности ЛПС Shigella aomxei индуцировать иммуностимулирующие В-клетки были использованы для разработки совместно с кафедрой микробиологии 2-го МОЛИЛИ им. Н.И.Пирогова (Зав. - проф. В.М.Коршунов) и У.В.Мадавдовш (Институт онкологии и радиологии Минздрава УзССР) способа коррекции дисбактериоза кишечника аутоиммунных мышей с помощью общей гнотобиологической изоляции с селективной деконташнацией кишечника.
При создании вакцин, содержащих выделяемый из Bordetella pertussis материал, необходимо учитывать обнаруженную в работе
способность коклюшного токсина индуцировать и усиливать активность В-супрессоров.
Выявленная зависимость функциональной активности супрессор-ных и иммуностимулирующих В-клеток у нормальных и у аутоиммунных мышей от уровня цАМФ, цГМФ, простагландинов и лейкотриенов может служить предпосылкой для поиска эффективных иммунокорректоров среда веществ, точкой приложения которых являются ключевые ферменты метаболизма циклических нуклеотидов и арахддоновой кислоты.
Разработан способ индукции В-супрессоров в периферической крови людей, основанный на кратковременной инкубации мононуклеа-ров (МНК) с кальциевым ионофором A23I87 (авторское свидетельство по заявке & 4467871/28-14 Кл.СОНЭэ/53 от 28.07.88 г.). Этот способ применяется в настоящее время для оценки иммунного статуса больных в Институте иммунологии Минздрава СССР, Университете дружбы Народов игл. Л.Лумумбы, Институте онкологии и радиологии Минздрава УзССР, Самаркандском медицинском институте им. акад. И.Л.Павлова, Киевском НИИ нейрохирургии.
Результаты, полученные в диссертации, использованы в преподавании на курсе иммунологии Факультета усовершенствования врачей в Институте иммунологии Минздрава СССР, на кафедре микробиологии 2-го МСЛГМИ им, Н.И.Пирогова, в лекциях, прочитанных автором аспирантам ж ординаторам Института иммунологии Минздрава СССР (1986-1989), слушателям Всесоюзного совещания по молекулярной иммунологии (Петрозаводск, 1987), практическим врачам (Москва, 1986, 1988, 1989).
Работа выполнена в рамках Государственной программы 0.69.07, утвержденной Постановлением ГКНТ СССР и Госплана СССР J* I8I/I28 от 16.07.81 г.
2- U23
_ 8 -
Основные полонення, выносимые на. защиту.
1. Индукция иммунорегуляторяых В-клеток у мышей возможна
следующими путями: А) введением субоптимальных доз ЭБ и ЛПС;
Б) обработкой пнтактных В-клеток селезенки мышей кальциевым ионо-фором А23І87 или агглютинином из проростков пшеницы (АШ) на фоне предварительной блокады синтеза простагландинов, а также обработкой коклюшным токсином; В) обработкой МНК периферической крови людей А23І87.
2. Функциональная активность иммунорегуляторных В-клеток за
висит от: А) внутриклеточного содержания циклических нуклеотидов
и циклооксигеназных и липоксигеназных продуктов окисления арахг-
доновой кислоты; Б) диаметра клеток; В) наличия на мембране 1"су R
и рецепторов к лектинам. При этом Усу R+ -В-клетки действуют пу- ,
тем подавления активации предшественников В-клеток памяти, специ
фичных к носителю Т-хелперов и ангителообразующих клеток (АОК),
a Fey R~ -В-клетки - путем индукции Т-супрессоров.
-
В селезенке аутоиммунных мышей обнаружены В-супрес<. ,>ры, активность которых связана с секрецией простагландинов.
-
Разработан способ индукции В-супрессоров в периферической крови людей, который используется для оценки иммунного статуса.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены на Ш и ІУ Всесоюзных симпозиумах "Регуляция иммунного гомеостаза" (Ленинград, 1982; Суздаль, 1986), I Всесоюзной конференции "Теоретическая и прикладная иммунология" (Москва, 1982), I Белорусской иммунологической конференции (Витебск, 1982), У Всесоюзном симпозиуме по целенаправленному изысканию физиологически активных веществ (Рига, 1983), Всесоюзном симпозиуме "Медиаторы иммунного ответа в эксперименте и клинике" (ІЬрький, 1983), УД и IX научных конференциях "Факторы клеточного и гуморального иммунитета
- 9 *
при различных физиологических и патологических состояния" (Челябинск, 1984, 1988), 5 Всесоюзном биохимическом съезде (Киев, 1985), семинаре "Актуальные проблемы иммунологии" в АН СССР (Москва, 1987), научной конференции "Гнотобиология в теоретической и практической медицине" (Москва, 1987), Международной конференции "Возрастные изменения в иммунном балансе" (Ташкент, 1987), Объединенном Пленуме научного совета по иммунологии АМН СССР и проблемной комиссии "Общая и прикладная иммунология" (Киев, 1988).
