Введение к работе
Актуальность проблемы. Несмотря на то, что в последнее время имеются значительные достижения в области антибиотике— и иммунотерапии, лечение больных с гнойной раневой чшфекпией продолжает оставаться одной из основных проблем хирургии (Кузин М.И., Костю-ченок В.М., 1990). Ведущая роль в защите от гнойной инфекции принадлежит опсоно-фагецптарной системе (0ЇС), которая представляет собой функциональное единство клеточных и сывороточных факторов. Будучи филогенетически наиболее древней, 0С обеспечивает сохранность макроорганизма и именно от ее активности во многом зависит течение и исход гнойной инфекции (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1989). Поэтому принщшиальное значение тлеет разработка и включение в комплексное иммунологическое обследование этой категории больных новых и высокоинфор?*ативных методов оценіси ОЗС. Тяжесть состояния пациентов, полиэтаологичность и быстро ыенянцаяся картина гнойно-септических заболеваний, экстренность принимаемых врачом мер диктуют повышенные требования к лабораторзым службам, что обосновывает необходимость внедрения объективных и точных экспресс-методов оценки 0<Ю.
Нейтрофил, как часть опсоно-фагопитарной системы, выступает в качестве первой линии защиты от большинства инфекционных агентов (Адо А.Д., Маянский А.Н., 1983). В настоящее время существует довольно много способов определения функциональной активности нейтрофялов. Например, изучают их хемотаксис, адгезию к различным поверхностям, фагоцитоз частиц микробного и немикробного происхождения, бактерицидноеть клеток по высеву на агар. Но с помощью фагоцитоза учитываются живые на данный момент тестмикробы, но н<э учитываются убитые и ранее дезинтегрированные. Прямое определеіше
1-211/У
і
бактерицидности по высеву на агар - это чрезвычайно трудоемкий тест, результаты которого читаются не ранее, чем через 18-24 часа, что ограничивает его применение в клинике для рутинных исследований (Гордиенко СМ., 1984). Кроме того, субъективность в учете результатов этих тестов существенно снижает их информативную ценность и затрудняет сравнение данных, полученных разными авторами. Всех этих недостатков лишен метод хемилшинесцентного анализа (ХЛ), который можно использовать для регистрации респираторного взрыва нейтрофиов, т.е. совокупного уровня активных радикалов кислорода, являющихся ооновныыи микробицвдными агентами фаго-цитирувдей клетки (Зенков Н.К., Куликов В.Ю., 1985). Высокая корреляция ХЛ-свечения с бактерицидным потенциалом нейтрофила (Но-, ran T.D.I982; Solberg CO., 1982), доступность и простота постановки данного теста, небольшие объемы исследуемого материала и малое время проведения анализа (2-3 часа), строгая объективность получаемых данных и возможность полной автоматизации при постановке реакции и учете результатов - все это делает тест ХД перспективным для массового обследования как больных, так и здоровых льэдей.
Стимулированная ХП позволяет получить кинетическую характеристику процесса взаимодействия клетки и фагоцитируемого объекта. Она дает возможность изучить все фазы непосредственного контакта фагоцита с микробом, начиная от ранних стадий экзоцитоза, т.е. мембранно-рецепторных взаимодействий (прилипание,.прикрепление, интернализацкя) и кончая заключительным эг*фактом - эндоцитозом
(образование фагосомы и цитотоксическое воздействие активных метаболитов кислорода) (Яр'кова Л.Н. и соавт., 1986-, Briheim G. et
al., 1984).
Однако в настоящее время имеются лишь единичные работы, где
освещается связь респираторного взрыва фагоцитов, измеренного методом ХЛ, с формами и динамикой развития гнойной инфекции, т.е. отсутствует клзшико-биологическая характеристика теста (Разживин А..П., 1987; VerUiie J. et ai.t 1988). Поэтому актуальным является выяснение закономерностей изменения ХЯ-ответа нейтрофилов применительно к данной группе пациентов, разработка соответствущей тест-системы и оценка ее информативности.
Цель работу. Разработать способ оценки функциональной ак- . тивности нейтрофилов человека методом лшинолзависимой хемилкми-несценции и использовать его для мониторинга опсоно-фагоцитарной системы больных с гнойной раневой инфекцией и для прогноза течения заболевания.
Задачи исследования:
-
Используя клетки здоровых доноров, выяснить методические особенности реакции XI в ответ на различные убиквнтарные микроорганизмы и разработать оптимальную тест-систему для оценки кислороде- зависимого метаболизма нейтрофилов.по уровню ХЛ.
-
Определить клиническую значимость этих показателей применительно к гнойной раневой инфекции.
-
Использовать тест-систему для характеристики функционального состояния ОФС больных с местной и генерализованной формами гнойной раневой инфекции, для оценки эффективности проводимого лечения и для прогноза дальнейшего течения заболевания.
Научная новизна. Впервые проведен сравнительный анализ хеми-лшинесценции нейтрофилов периферической крови здоровых лздей в ответ на ряд микроорганизмов - возбудителей гнойной инфекции. Показано, что профиль ХЯ-реакции однозначно определяется видовой принадлежностью стимулятора. Изучено влияние втаммовых различий-золотистого стафилококка на его способность генерировать ХЛ-ответ.
Обнаружено, что наряду с общими закономерностями, обусловленными свойствами штаммов s.aureus it высота ХЛ-ответа зависит также от индивидуальных особенностей клеток донора. Впервые изучено влияние первичного гнойного очага инфекции на состояние опсонс— фагоцитарной системы, измеренное в тесте лкминолзависимой хеми-лшинесцеїшии. Доказано, что уровень ХЛ-ответа нейтрофилов периферической крови прямо коррелирует со степенью микробной обсеме-ненности гнойного очага.
', Практическая ценность. В ходе исследования разработан способ оцешш функциональной активности нейтрофклов человека при помощи лкминолзависимой XI. Создана оптимальная тест-система, поз-воляэдая в короткий срок дать характеристику ОФЗ больных с гнойной раневой инфекцией и выявить источник нарушений ее работы: дисфункцию клеток или дефицит опсонинов. Выведенные параметры реакции ХЛ в норме и при различных формах гнойной инфекции; определена их клиническая значимость. Проанализирована связь.между ХЛ свечением нейтрофилов больных и а) характером оперативного вмешательства, б) шлмунокорригируплей терапией препаратом лейкин-ферон. Для постановки рутинного теста ХЛ обосновано применение препарата "Стафилококковый реагент, содержащий белок А, сухой" в качестве.стандартного стимулятора.
Предложенный способ внедрен в практику лабораторных исследований в Институте хирургии игл. А.В.Вишневского АМН СССР, в Институте общей реаниматологии AMI СССР, в Институте микробиологии и вирусологии им. Д.К.Заболотного АН УССР.
Основные положения, выносимые на защиту;
I. 7 больных с гнойной раневой инфекцией наблюдается стимуляция респираторного взрыва нейтрофилов периферической крови, определяемая в тесте XJI. С помощью разработанной тест-системы реак-
дни ляминолзависимой хемилкминеоценции можно выявить степень и источник нарушений работы (Ж3«
-
По мере увеличения концентрации микробов в первичном гнойном очаге нарастает стимуляция нейтрофилов';, периферической крови, что сопровождается снижением их бактерицидного потенциала.
-
Хирургическое вмешательство на первичном очаге, а также иммунокоррекция препаратом лейкинферон, нормализует состояние ОФС, измеренное в тесте ХЛ.
-
При гнойной раневой инфекции обнаруживается тесная корреляция показателей ХЛ нейтрофялов периферической крови с клинической и бактериологической картиной заболевания, что позволяет использовать разработанную тест-систему в качестве критерия эффективности лечебных мероприятий и для прогноза дальнейшего течения заболевания.
Дпробздия работы, диссертация апробирована на совместной научной конференции Лаборатории микробиологии о группами иммунологии и юшнической фармакологии и отделения ран и раневой инфекции Института хирургии им. А.В.Вишневского МИ СССР 28 февраля 1990 г. и на заседании подсекции Ученого,совета "Общая и прикладная иммунология" МНЮШ им. Г.Я.Габричевсксго МЗ РС2СР 15 июня 1990 г.
Материалы диссертация доложены на Всесоюзной конференции "Теоретические проблемы зпэдешюлогии и иммунологии на современном этапе" (Нальчик, 1986), И Всесоюзной конференции "Актуальные вопросы теоретической и прикладной иммунологии: механизмы цротп-воинфекционного иммунитета" (Саратов, 1987), X региональном симпозиуме социалистических стран по интерферону - "Интерферон-88" (Крмала, 1988), П Всесоюзной конференции "Хирургический сепсис" -. (Тула, 1989), Всесоюзной конференции по сепсису "Актуальные воп-
2-211/У
S
росы сепсилогии" (Тбилиои, 1990), конференции молодых ученых Ив-отитута хирургии им. А.В.Вшшавского АМН СССР (Москва, 1990), конференции по применению интерферона - "Интерферон-90" (Ленинград, 1990), заседании Всесоюзного научного 'общества иммунологов (22,01.90), заседании Общества хирургов г. Москвы и Московской области (05.04.90);
Публикации. По теме диссертации опубликовано II печатных работ; список приведен в конце автореферата.
' Объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов, указателя литературы, включающего 91 отечественный и 166 иностранных источников. Работа иэдавева на 116 листах машинописного текста и содержит 10 рисунков и 17 таблиц.
