Введение к работе
Актуальность проблемы
В течение последних 75 лет иммунология, генетика и биология вируса гриппа интенсивно изучается. (Sissons, 1993). Несмотря на это, вирус фиппа до сих пор может представлять весьма серьезную опасность для человека. Как известно, меняются не только антигенные характеристики вируса, что делает невозможным создание эффективной вакцины, существенные изменения претерпевает и клиническая картина фиппозной инфекции, что создает значительные проблемы для практической медицины (Burt el al. 1989).
Тяжелое течение фиппозной ицфекции особенно характерно для детей, пожилых людей (Tamura et al. 1993), и лиц с иммунодефицитами различной природы (Peggy et al, 1988). Развитие иммунного ответа на вирус фиппа у указанных групп людей существенно отличается от иммунного ответа на вирус фиппа взрослого полностью иммунокомпвтентного организма (Allan et al, 1990). У людей с иммунодефицитами могут развиваться различные иммунопатологические реакции, способствующие поддержанию вирусной персистенции. Изучение механизмов иммунопатологических реакций необходимо для разработки методов иммунокоррекции тяжелых форм фиппозной инфекции.
В этой связи представляется весьма перспективным изучение иммунопатологии, индуцированной вирусом фиппа на модели врожденной фиппозной инфекции (ВГИ), разработанной в НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи (Зуев, 1978; Зуев, 1988 ). Ранее проведенные иммунологические исследования были направлены на изучение неслецифичесхих иммунных реакций у мышей с ВГИ (Пронин и соавт.,1984; 1989). Предметом исследований в настоящей работе стало изучение специфических иммунологических нарушений, протекающих на фоне врожденной фиппозной инфекции.
Целью нашего исследования было изучить особенности специфических иммунологических реакций на вирус фиппа при врожденной фиппозной инфекции, а также вероятность возникновения иммунологической толерантности к возбудителю при ВГИ.
Задачи исследования: . 1. Изучить особенности количественного и субпопуляционного состава лиифоидных клеток тимуса и селезенки мышей с ВГИ.
-
Оценить уровень специфической иммунореактивности у мышей с ВГИ In situ.
-
В реакциях адоптивного переноса определить наличие вирусспеци-фичоских иммунокомпетектных клеток у мышей с ВГИ.
-
Изучить особенности неспецифической иммунореактивности мышей с ВГИ in vitro.
б. Определить наличие пнмфоидной персистенции вируса при врожденной гриппозной инфекции.
6. Изучить особенности взаимодействия клеток лиифоидных органов мышей с ВГИ и лиифоидных органов сингенных роципизнтов о условиях локального переноса тимоцитов и спленоцитов мышой с ВГИ интактным сингенным реципиентам.
Впервые показана экспрессия антигенов вируса гриппа клетками лимфоидных органов мышей с ВГИ.
Впервые на клеточном уровне проанализирован характер специфической ареактивности при врожденной гриппозной инфекции. У мышей с ВГИ выявлена специфическая ареактивность in situ, выражающаяся в снижении количества вирусспецифических антителообргзующих клеток в ответ на иммунизацию вирусом гриппа, а также в подавлении реакции ГЗТ на вирус гриппа. В тоже время в реакциях адоптивного переноса было показано, что вирусспецифические иммунокомпотентныо клетки у мышей с ВГИ сохранены. Следовательно, у мышой с ВГИ нет "истинной" толерантности, связанной с делецией специфических иммунокомпотентных клеток. Показано, что дефект специфической иммунореактивности у мышей с ВГИ можот быть связан с наличием вирусспецифических супрессорных клеток.
Установлено, что у мышей с ВГИ снижено количество CD4* Т клеток и увеличено количество у5- Т клеток в селезенке. Выявлено также появление двойных негативных Т клеток (CD4 CD8 ) в селезенке.
Впервые показано, что у мышей с ВГИ сохранялся нормальный уровень бласттрансформации на аллогвнныв клетки в смешанной культуре лимфоцитов, наблюдался высокий уровень спонтанной пролиферации in vitro, что свидетельсаует об относительной сохранности неспецифических иммунных реакций у мышей с ВГИ при выраженных нарушениях специфической иммунореактивности.
Впервые показано, что локальное введение слленоцитов и тимоцитов мышей с ВГИ интактным сингенным реципиентам приводит к увеличению регионарного лимфатического узла. Реакция зависела от уровня экспрессии вирусных антигенов на клетках донора, Показана корреляции между увеличением веса регионарного лимфатического узла сингенмого донора и увеличением количества уб и CD4* Т клеток в регионарном лимфатическом узле реципиента.
Исследование особенностей специфической и неспецифичесхой иммунореактивности мышей с ВГИ важно в связи с имеющимися случаями выявления лимфоидной персистенции вируса гриппа у детей, чьи матери перенесли грипп во время беременности (Зуев, 1990 ). Вирусная персистенция часто сопровождалась выраженными нарушениями иммунореактивности у потомства, а также медленно прогрессирующей патологией центральной нервной системы (Зуев, 1990).
В проведенной работе изучена роль лимфоидной персистенции вируса гриппа в развитии иммунных нарушений при вертикальной передаче вируса.
Практическую ценность могут представлять ряд методических подходов, примененных в данной работе: решить вопрос о наличии специфической толерантности к возбудителю можно только в результате тщательного изучения сохранности и количества специфических иммунокомлетентных клеток у экспериментальных животных. В работе для этого были использованы реакции адоптивного переноса, а также предобработка экспериментальных животных
4 низкими дозами циклофосфамида. Сохранность неспецифического иммунного ответа у мышей с ВГИ была выявлена в смешанной культуре лимфоцитов с использованием аллогенной стимуляции. Важным является также изучение уб Т-клеток в иммунном ответе на вирус гриппа в условиях вертикальной передачи вируса.
Материалы диссертации вошли в монографию Л.Н.Фонталина 'Молекулярно-клеточные механизмы иммунологической толерантности", опубликованную в 1994 ("Наука*, Москва). ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ. ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:
-
У мышей с ВГИ наблюдается снижение специфической иммунореактивности in situ.
-
У мышей с ВГИ сохранен репертуар вирусслецифических иммунокомпотентных клеток.
-
Наблюдаемая вирусслецифическая среактшзиость 1л sttu частично связана с наличием специфических супроссорных клеток.
-
Между клетками лимфоидных органоэ мышей с ВГИ и клетками лимс'видных органов сингенных мышей существуют антигенные различия, способные вызвать увеличение регионарного лимфатического узла у сингвнного реципиента при переносе ему спленоцитов и тимоцитов мышей с ВГИ. Частично эта реакция связана с присутствием антигенов вируса гриппа на клетках лимфоидных органов мышей с ВГИ.
-
Уменьшение клеточности лимфоидных органов, изменения субпопуляционного состава Т клеток селезенки, а также выявленные нарушения специфической и неспецифической иммунореактивности у мышей с ВГИ может быть саязано с длительным инфицированием лимфоидных органов и реакцией на зараженные клетки сохранившихся иммунокомпотентных лимфоцитов.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные положения диссертации были представлены на:
- на Всесоюзном Конгрессе общества эпидемиологов, микробиологов, паразитологов и инфекционистов памяти И.И.Мечникова (Алма-Ата, 1969);
на конференции лаборатории клинической иммунологии Всероссийского Центра Акушерства, Гинекологии и Перинатологии (РАМН, Москва, 1991)
на Международном Симпозиуме по аллергологии и клинической иммунологии (Алма-Ата. 1992);
на Второй Международной Школо имени Джона Хамфри по иммунологии инфекционных заболеваний (Пущино, 1994).
По теме диссертации опубликованы 3 печатных работы.
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА РАБОТЫ
![Индукция локального и системного иммунного ответа патогенными и аттенуированными вирусами гриппа А [Электронный ресурс]](/i/i/4286/206226.png "Индукция локального и системного иммунного ответа патогенными и аттенуированными вирусами гриппа А [Электронный ресурс] Петухова Галина Дмитриевна")
