Введение к работе
Актуальность проблемы
Вульвовагинальный кандидоз (ВВК) является оппортунистической инфекцией слизистых нижнего отдела генитального тракта, вызванной грибами рода Candida (Прилепская В Н, 2007) Наиболее частым возбудителем является вид Candida albicans, который с легкостью демонстрирует свои дуалистические способности с одной стороны - это уверенный комменсал (временный или постоянный) вагинальной слизистой, ротовой полости, желудочно-кишечного тракта, кожных покровов, а с другой — успешный оппортунист этих же анатомических мест (Бурмистрова АЛ, 2007, Calderone R.A., 2001, Gow NA, 2002; Sturtevant J, 1997, Verstrepen К J , 2004)
Начиная со второй половины XX столетия, во всем мире отмечен рост не только системных, но и поверхностных форм кандидоза, в том числе, вульвовагинального (Fidel PL, 2004, Flanagan PG, 1998) Несмотря на значительные успехи в диагностике и лечении, у 75% женщин, по крайней мере, однократно в течение репродуктивного периода жизни наблюдается ВВК (Ashman RB, 1995, Sobel JD, 1998) И хотя количество работ, посвященных изучению поверхностных кандидозов, постоянно возрастает, многие вопросы и проблемы остаются не решенными
До конца не определены формы иммунной защиты при вагинальном кандидозе - клеточный/гуморальный, врожденный/адаптивный иммунный ответ Часть авторов отводят главную роль Т-клеточному иммунитету (Calderone R А, 2001, Nawrot U, 2000, Romany L, 2004, Tuite A, 2004) Однако при иммунодефицитах, в частности при ВИЧ-инфекции, частота вагинального кандидоза не повышается, а СПИД-ассоциированной инфекцией является орофарингеальный кандидоз (Fidel PL, 1999, Gruber А, 2003, Lewandowski D, 2006) Многие исследователи указывают на важную роль клеток врожденной иммунной системы, что определяется анатомическими особенностями строения нижнего отдела генитального тракта (Ashman R.B, 1995, Bellocchio S , 2004, Bernardis F, 2006; Fidel P.L , 1999, Romany L , 2004) Важнейшим механизмом защиты вагинальной слизистой считается выселение в толщу эпителия и на его поверхность лейкоцитов, в основном, нейтрофилов, которые первыми и очень рано выходят из циркулирующей крови в очаг инфекции (Долгушин И И, 2001, Лебедев К А, 2006, Маянский Д Н, 1996, Телешева Л Ф, 2000, Fidel Р L, 2003; Nathan С F, 2006; Wira С R, 2005) Особый интерес представляют данные, подтверждающие функциональную гетерогенность популяции нейтрофильных гранулоцитов Показано, что часть нейтрофилов отвечает немедленной эффекторной реакцией на встречу с инфекционным агентом, осуществляя фагоцитоз, секреторную дегрануляцию бактерицидных продуктов во внеклеточную среду и формируя NETs - нейтрофильные экстраклеточные ловушки (Brinkmann V, 2004, Martinelh S, 2004, Mayer-Scholl A, 2004; Urban С F , 2006) А другая часть нейтрофилов становится продуцентами различных медиаторов, цитокинов и хемокинов, играя связующую иммунорегуляторную
роль между врожденным и адаптивным иммунитетом (Ellis Т N, 2002, Ethuin F , 2004, Yeaman G R.,1998)
До сих пор нет четких представлений не только об инициаторах различных клинических форм вагинального кандидоза, но и о патогенетических механизмах, определяющих развитие острых и хронических форм ВВК Известно, что острые формы ВВК характерны для молодых, сексуально-активных женщин, у которых манифестация вагинального кандидоза связана, в основном, с эстрогенными факторами риска, либо острый ВВК развивается у иммунокомпрометированных лиц (Гейро О А, 2006; Прилепская В Н, 2007) Тогда как хронические формы ВВК, в том числе рецидивирующие, более чем в половине случаев не связаны с предрасполагающими факторами и встречаются у иммунокомпетентных женщин детородного возраста (Шабашова Н В , 2006, Fidel Р L , 2004, Romany L , 2000, Sobel J.D, 2002, Tuite A , 2004) Остается не достаточно изученным и влияние патогенетических факторов риска, таких как бактериальный вагиноз или системная нейтропения, на течение различных клинических форм вульвовагинального кандидоза
Существует еще одна проблема За последние два десятилетия среди возбудителей ВВК доля грибов Candida поп-albicans увеличилась до 15-30%. Многие авторы объясняют данный факт ростом во всем мире популяции иммунокомпрометированных лиц, для которых характерен довольно высокий процент колонизации ротовой полости, кишечника, кожи, в том числе промежности, грибами поп-albicans видов - С glabrata, С tropicahs, Ckrusei, Сguilhermondu (Сергеев А Ю, 2000, Fidel Р L , 2003, Flanagan Р G, 1998, Sullivan D, 1998), способных выступать в качестве эндогенных источников вагинального кандидоза В связи с тем, что механизмы иммунной защиты нижнего отдела генитального тракта до конца не ясны, особенно в отношении грибов Candida поп-albicans, но хорошо известна устойчивость последних к современным антифунгальным препаратам, то перед клиницистами стоят серьезные проблемы, связанные с разработкой методов профилактики и лечения таких оппортунистических инфекций
Цель исследования
Оценить профиль изменений иммунных параметров, характерных для немедленной эффекторной реакции микоцидного ответа лейкоцитов периферической крови здоровых и больных вульвовагинальным кандидозом в отношении живых изолятов грибов рода Candida различных экологических ниш (клинические вагинальные С albicans и природные С guilhermondii) в условиях in vitro, с целью выделения иммунологических маркеров острых и хронических клинических форм вульвовагинального кандидоза
Задачи исследования
1 Изучить характер немедленной эффекторной фазы (показатели фагоцитарной реакции, экстраклеточный киллинг непоглощенных фагоцитами грибов, уровень цитокинов в супернатантах экстраклеточной среды) микоцидной активности лейкоцитов периферической крови здоровых лиц при
культивировании с живыми клиническими вагинальными изолятами С albicans в условиях in vitro
Оценить иммунные параметры немедленной эффекторной фазы микоцидного ответа лейкоцитов периферической крови здоровых лиц при культивировании с живыми природными изолятами С guilliermondn в условиях т vitro
Определить иммунные параметры немедленной эффекторной фазы (показатели фагоцитарной реакции, экстраклеточный киллинг непоглощенных фагоцитами грибов, уровень цитокинов в супернатантах экстраклеточной среды) микоцидной активности лейкоцитов периферической крови больных вульвовагинальным кандидозом при культивировании с живыми клиническими вагинальными изолятами С albicans
4 Изучить профили иммунных параметров, характеризующие
немедленную эффекторную реакцию микоцидного ответа лейкоцитов
периферической крови больных в зависимости от клинических форм
вульвовагинального кандидоза - острые и хронические с редкими и частыми
рецидивами, при культивировании с живыми клиническими вагинальными
изолятами С albicans
5. Оценить влияние патогенетического фактора риска — наличие вагинальных бактериальных ассоциантов в этиологически значимых титрах, на реализацию немедленной эффекторной фазы микоцидной активности лейкоцитов периферической крови больных при различных клинических формах вульвовагинального кандидоза
Научная новизна
Впервые в условиях т vitro при культивировании лейкоцитов периферической крови (ЛПК) здоровых лиц с живыми изолятами грибов рода Candida различных экологических ниш (природные С guilliermondn и клинические вагинальные С albicans) и контрольным штаммом С albicans АТСС10231 определены особенности немедленной эффекторной реакции (с 15 по 60 минуту) микоцидного ответа показатели этапов фагоцитоза, выживаемость непоглощенных фагоцитами грибов в экстраклеточной среде, содержание основных цитокинов с про- и противовоспалительным эффектом в супернатантах экстраклеточной среды
Установлено, что киллинг живых непоглощенных фагоцитами природных грибов С guilliermondn и клинических вагинальных изолятов С albicans происходит, в основном, внеклеточно - в среде культивирования с лейкоцитами периферической крови здоровых и больных ВВК в ходе развития немедленной эффекторной фазы микоцидного ответа (с 15 по 60 минуту) Выживаемость клинических вагинальных изолятов С albicans в среде культивирования с ЛПК здоровых лиц достоверно выше, чем природных изолятов С guilliermondn, достоверно нарастает к 60 минуте инкубации и сопровождается достоверно более высокими показателями индекса поглощения лейкоцитами во все сроки наблюдения
Установлены профили иммунных параметров, характеризующие особенности начального этапа развития (в течение первых 15 минут) немедленной эффекторной фазы микоцидной активности лейкоцитов периферической крови больных в зависимости от клинических форм ВВК -острые и хронические с редкими и частыми рецидивами, при культивировании с живыми клиническими изолятами С albicans
Показано, что профиль иммунных параметров немедленной эффекторной фазы микоцидного ответа ЛПК имеет различия по содержанию цитокинов в экстраклеточной среде в зависимости от наличия/отсутствия у больных с различными клиническими формами ВВК вагинальных бактериальных ассоциантов в этиологически значимых титрах При наличии бактериальных ассоциаций у больных острым ВВК наблюдается достоверное снижение уровня IFN-y и повышение уровня IL-lRa, а при хроническом ВВК с редкими и частыми рецидивами наблюдается достоверное повышение уровней TNF-a, IFN-y, и снижение уровня IL-lRa по сравнению с имеющими кандидозную моноинфекцию
Теоретическая и практическая значимость работы
Результаты оценки характера немедленной эффекторной фазы микоцидного ответа лейкоцитов периферической крови больных ВВК в отношении живых клинических вагинальных изолятов С albicans (показателей этапов фагоцитоза, экстраклеточного киллинга непоглощенных фагоцитами грибов, уровней основных цитокинов с про- и противовоспалительным эффектом в супернатантах экстраклеточной среды) позволили установить наличие ассоциаций между клиническими формами ВВК и профилем изменений отдельных иммунных параметров (в первые 15 минут после контакта ЛПК с грибами С albicans), что позволяет считать их иммунологическими маркерами острых и хронических клинических форм заболевания
Полученные данные могут быть использованы не только в качестве информативных диагностических тестов в лабораторной практике при дифференциальной диагностике хронических форм вульвовагинального кандидоза, но и служить лабораторными маркерами, позволяющими определить подходы к лечению острых и хронических форм ВВК
Основные положения, выносимые на защиту
Киллинг живых непоглощенных фагоцитами грибов природных С guilhermondu и клинических вагинальных С albicans изолятов происходит внеклеточно — в среде культивирования с лейкоцитами периферической крови здоровых и больных вульвовагинальным кандидозом в ходе развития немедленной эффекторной фазы микоцидного ответа (с 15 по 60 минуту)
Определенные профили иммунных параметров, характеризующие немедленную эффекторную фазу микоцидного ответа (показатели фагоцитарной реакции, экстраклеточный киллинг не фагоцитированных грибов, уровень основных цитокинов в супернатантах среды культивирования) лейкоцитов периферической крови больных вульвовагинальным кандидозом при культивировании с живыми клиническими вагинальными изолятами С albicans в
условиях in vitro, могут использоваться в качестве патогенетически значимых иммунологических маркеров острых и хронических форм вульвовагинального кандидоза
Апробация работы
Основные положения работы доложены и обсуждены на III конференции иммунологов Урала (Челябинск, 2003), Научно-практической конференции «Актуальные проблемы микологии» (Челябинск, 2004), TV конференции иммунологов Урала (Уфа, 2005), юбилейной конференции с международным участием «Современные проблемы науки и образования», посвященной 10-летию Российской Академии Естествознания (Москва, 2005), V конференции иммунологов Урала (Оренбург, 2006), Всероссийской конференции молодых ученых, посвященной памяти профессора НН Кеворкова «Иммунитет и аллергия от эксперимента к клинике» (Пермь, 2006) Участие в работе Всероссийского конгресса по медицинской микологии (Москва, 2003, 2004, 2005 и 2006), научной конференции «Климат и окружающая среда» (Амстердам, 2006), конференции, посвященной 25-летию ЦНИЛ Челябинской государственной медицинской академии (Челябинск, 2006); Российской научно-практической конференции «Современные технологии в иммунологии иммунодиагностика и иммунотерапия» (Курск, 2006), Российском национальном конгрессе аллергологов и иммунологов (Москва, 2006) XI Всероссийском научном форуме с международным участием имени академика В.И Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2007)
Публикации
По теме диссертации опубликовано 19 печатных работ
Внедрение результатов исследования
Результаты работы используются в учебном процессе при преподавании вопросов инфекционной иммунологии, как в лекционном материале, так и на практических занятиях на кафедре микробиологии ГОУ ВПО «Челябинский государственный университет»
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 130 страницах машинописного текста, включает 11 рисунков, 8 таблиц Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, главы материалы и методы исследования, 3-х глав собственных исследований, заключения, выводов, библиографического списка литературы, включающего работы 52 отечественных и 84 иностранных авторов, и приложения, включающего 2 рисунка и 4 таблицы
Похожие диссертации на Характер немедленной эффекторной реакции микоцидного ответа лейкоцитов периферической крови здоровых и больных вульвовагинальным кандидозом
![Жизнеспособность лейкоцитов и гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови [Электронный ресурс]](/i/i/4492/185644.png "Жизнеспособность лейкоцитов и гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови [Электронный ресурс] Абдуллаев Руслан Тагирович")
