Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ: Проблема структурно-функциональноіі организации молекулы хорионического гонадотропний (ХГ) продолжает привлекать к себе внимание исследователей вследствие ее большого теоретического її практического значения.
Известно, что хорионический гонадотропин выполняет в организме ряд функций. Для мно1 их полифункционадьных молекул показано шш предполагается налітчие нескольких участков, каждый из которых опосредует определенный вид биологической активности, присущий целой молекуле. Данные по изучению функционально значимых участков в молекуле ХГ являются неполными, поэтому проблема поиска таких участков остается актуальной.
Структурно-функциональные исследования молекулы хорионического гонадотропнна могут способствовать созданию новых молекул, обладающих более узким спектром биологической активности, чем ХГ, и являющихся потенциальными препаратами для клинического использования. С этой целью применяются рахпнчные методы, такие как конструирование гибридных молекул, направленный мутагенез, протеолитпческая фрагментация или химическая модификация молекулы. Одним из подходов к решению подобных задач является использование синтетических пептидных фрагментов молекулы хорионического гонадотропина.
Цель исследования: выявить биологическое действие синтетического пептида — фрагмента р-субъединицы хориошгческого гонадотропина человека со 128 по 145 аминокислотный остаток ("СТР") и сравнить активность данного пептида с активностью нативной молекулы ХГ в тестах in vitro.
Задачи исследования включали в себя: 1) Выявить биологическое действие пептида "СТР" в сравнении с ХГЧ: а) на пролиферацию моноігуклеарньгх клеток периферической крови человека, индуцированную поликлональным активатором; б) на пролиферацию клеток промлелоидной линии HL-60; в) на пролиферацию клеток карциномы яичника человека CaOv. 2) Изучить рецепцию пептида "СТР" и ХГЧ различными популяциями клеток периферической крови человека, а также клетками линий HL-60 и CaOv; определить параметры связывания. 3) Выяснить, взаимодействуют ли пептид "СТР" и ХГЧ с общими рецепторними структурами на поверхности клеток линии HL-60.
НАУЧНАЯ НОВИЗНІ ИССЛЕДОВАНИЯ. В результате проведенных диссертантом исследовании впервые была обнаружена способность синтетического пептида, фрагмента р-субъединицы хориошгческого гонадотропина человека ("СТР"), подавлять пролиферацию мононуклеарных
клеток периферической крови, индуцированную поликлональным активатором.
Хорионический гонадотропин человека и его синтетический пептидный фрагмент специфически взаимодействуют с рецепторними структурами на поверхности моноцитов периферической крови, но не Т-лимфоцитов. Таким образом, впервые показано, что антнпролифератпвное действие ХГЧ и пептида "СТР" опосредуется моноцитами.
Впервые была выявлена анишролифератнвшя активность ХГЧ и синтетического пептида "СТР" в экспериментальной модели клеточных линий различного происхождения. Обнаружена способность ХГЧ и "СТР" специфически связываться со структурами на мембране клеток промиелоидной линии HL-60. Впервые было показано, что пептид "СТР" к ХГЧ конкурируют за общие участки связывания на поверхности клеток линии HL-60.
Было впервые обнаружено, что на мембране клеток карциномы яичника человека CaOv находятся два типа структур, взаимодействующих с ХГЧ с разной аффіашостью. Показано, что пептид "СТР" также взаимодействует с клетками линии CaOv.
Полученные результаты позволяют заключить, что синтетический пептид "СТР" является активным участком молекулы хорионнческого гонадотропина человека. Полученные результаты также свидетельствуют о том, что антнпролифератпвное действие ХГЧ и пептида "СТР" на мононуклеарные клетки периферической крови опосредуется моноцитами.
Дальнейшее изучение биологической активности синтетического фрагмента р-субъединнцы ХГЧ необходимо не только для исследования механизмов действия молекулы хорионнческого гонадотропина, но и дія возможной разработки ..селективных иммунорегуляторпых препаратов для клинического применения, а также для изучения молекулярных механизмов регуляции активности различных категорий иммунокомпетентных клеток.
АПРОБАЦИЯ. Материалы диссертации апробированы на 9-ом Международном иммунологическом конгрессе (23-29 июля 1995, Сан-Франциско) и на 23-ей конференции Федерации европейских биохимических обществ (13-18 августа 1995, Базель).
СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ. Материалы диссертации изложены на 110 страницах машинописного текста (включая 12 рисунков), состоят из разделов: "Введение", "Обзор литературы", "Материалы и методы", "Результаты", "Обсуждение результатов", "Выводы", "Список цитируемой литературы" (200 источников).
