Содержание к диссертации
Список сокращений 4
1. Введение 5
2. Обзор литературы 9
2.1. Общие представления о структуре и функции 9 цитокинов
2.2. Характеристика исследуемых цитокинов 15
2.2.1. Фактор некроза опухоли-сс 15
2.2.2. Интерферон-а 20
2.2.3. Интерферон-у 21
2.2.4. Интерлейкин-4 25
2.3. Роль цитокиновых взаимодействий в дифференцировке субпопуляций Т-хелперов
2.4. Характеристика основных видов фагоцитов 34
2.4.1. Гранулоцитарная система фагоцитоза 35
2.4.2. Мононуклеарные фагоциты 36
2.5. Функциональная активность клеток-фагоцитов 3 6
2.5.1. Уровень внутриклеточного Са2+ и 37 полимеризация актина
2.5.2. Адгезивные свойства фагоцитов 38
2.5.3. Распознавание и поглощение объектов фагоцитоза
2.5.4. Дегрануляция и кислород-независимые антимикробные факторы фагоцитарных клеток
2.5.5. Кислород-зависимые антимикробные факторы фагоцитарных клеток
2.5.6. Апоптоз 46
2.6. Иммуномодуляторные пептиды тимуса 49
3. Материалы и методы 60
3.1. Доноры 60
3.2. Выделение мононуклеарных лейкоцитов из периферической крови
3.3. Определение цитокинов в супернатанте культур ононуклеаров
3.4. Определение внутриклеточных цитокинов 62
3.5. Оценка поглощения бактерий гранулоцитами и моноцитами периферической крови методом проточной цитометрии
3.6. Оценка образования активных форм кислорода 64
4. Результаты 67
4.1. Влияние синтетических аналогов пептидов тимуса на секрецию цитокинов
4.2. Влияние синтетических аналогов пептидов тимуса на синтез цитокинов
4.3. Влияние синтетических аналогов пептидов тимуса на фагоцитоз
5. Обсуждение 80
6. Выводы 90
7. Список литературы 91
Введение к работе
Межклеточные взаимодействия играют ключевую роль на всех этапах становления и функционирования иммунной системы. Многими исследованиями показано, что эти взаимодействия происходят как путем прямого контакта клеток моноцитарно-макрофагальной системы и иммунокомпетентных лимфоцитов, осуществляемого с помощью соответствующего рецепторного аппарата, так и дистационно с помощью низкомолекулярных медиаторов, вырабатываемых клетками ММС и лимфоцитами. Среди этих медиаторов наиболее полно были охарактеризованы различные цитокины, среди которых выделяют интерлейкины, интерфероны, факторы некроза опухолей, колониестимулирующие факторы и хемокины [Ярилин, 1997]. Спектры биологических активностей большинства цитокинов хорошо охарактеризованы, показан механизм их действия, ряд цитокинов успешно применяется в медицинской практике.
Начиная с семидесятых годов прошлого столетия, началось исследование низкомолекулярных пептидных медиаторов, содержащихся в экстрактах иммунокомпетентных органов (тимуса, селезенки, костного мозга). Выделение индивидуальных пептидов, установление их химической структуры и исследование биологических свойств представляло, несомненно, актуальную, хотя и довольно сложную задачу. В те годы были изолированы, охарактеризованы и синтезированы тимозины, тимопоэтины, сывороточный тимусный фактор (тимулин) и ряд других пептидов. В результате многочисленных исследований было установлено, что тимические пептиды и их аналоги способны оказывать выраженное действие практически на все звенья дифференцировки Т-лимфоцитов: от стволовой клетки до эффекторов клеточного иммунитета. Однако, роль тимических пептидов в функционировании иммунной системы изучена значительно слабее, чем роль системы цитокинов. Тем важнее для нас осмысление роли и места каждого открываемого соединения этого класса в иерархии иммунорегуляции, создание лекарственных препаратов на их основе, теоретическое обоснование их активности, структурно-функциональные исследования молекул и их аналогов с модифицированными свойствами. Одним из крупнейших достижений общей и клинической иммунологии последних лет является открытие двух субпопуляций CD4+ Т-клеток, продуцирующих цитокины с различным механизмом действия и обозначенных как ТЫ- и Тп2-клетки. ТЫ-клетки продуцируют преимущественно провоспалительные цитокины и отвечают в основном за развитие клеточного иммунного ответа. Тп2-клетки продуцируют преимущественно противовоспалительные цитокины и отвечают в основном за развитие гуморального иммунного ответа. Важным моментом в данном открытии явилось установление факта взаимного супрессорного эффекта субпопуляций Т-хелперов, а именно, цитокины ТЫ-клеток являются супрессорами для Th2, а цитокины Тп2-клеток - супрессорами для ТЫ. Выделяют также и третью субпопуляцию CD4 Т-хелперов — Th3-клетки, синтезирующие трансформирующий фактор роста-Р и обладающий выраженной способностью подавлять продукцию как провоспалительных, так и противовоспалительных цитокинов. Открытие дихотомии CD4+ Т-хелперов имело громадное значение для иммунологии, так как оно смогло объяснить ряд неясных до настоящего времени иммунологических феноменов, например конкурентные взаимоотношения между гуморальным и клеточным иммунным ответом, выявленные еще в начале 20-го века. Изучение влияния различных тимических пептидов и их аналогов на субпопуляции Т-клеток дает нам важные сведения о функции и механизме действия индивидуальных пептидных медиаторов, продуцируемых тимусом.
Таким образом, воздействуя на лимфоциты, находящиеся на разных стадиях дифференцировки, низкомолекулярные пептиды тимуса оказывают свое действие, стимулируя или угнетая выработку определенных цитокинов. Однако, необходимо учитывать и возможность прямого воздействия тимических пептидов на клетки нелимфоидной природы, например, на фагоциты. Детальное исследование влияния низкомолекулярных регуляторных пептидов тимуса на разные стадии фагоцитоза поможет нам оценить вклад этих медиаторов, например, в процессы иммунорегуляции на разных стадиях развития инфекционного процесса.
Таким образом, целью данного исследования явилось изучение влияния иммуноактивного препарата тимогена и его модифицированных аналогов неогена и тимодепрессина на параметры функционирования лимфоцитов и фагоцитов человека.
В ходе исследования были поставлены следующие задачи:
1. Исследовать влияние тимогена, неогена и тимодепрессина на спонтанную и стимулированную секрецию ФНО-а, ИФН-а и ИФН-у мононуклеарными клетками периферической крови.
2. Определить уровень ИФН-у-содержащих и ИЛ-4-содержащих Т-клеток и его изменение под влиянием тимогена, неогена и тимодепрессина.
3. Изучить влияние тимогена, неогена и тимодепрессина на поглотительную способность фагоцитов.
4. Исследовать влияние тимогена, неогена и тимодепрессина на продукцию активных форм кислорода в фагоцитах.
5. Изучить влияние тимогена, неогена и тимодепрессина на интенсивность образования перекиси водорода в фагоцитах.
