Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ: В настоящее время внимание многих исследователей сосредоточено на поиске препаратов, специфически воздействующих на опухолевые ткани и не дающих побочных эффектов. Молекулярные, биохимические, генетические различия между нормальными и опухолевыми клетками, особенности метаболизма опухолевых тканей создают теоретические предпосылки для разработки методов направленной доставки лекарственных препаратов, радиоизотопов, цитотоксинов.
Перспективными фармакологическими препаратами направленного действия являются иммунотоксины на основе растительных или бактериальных токсинов и моноклональных антител (МА) против опухолевых антигенов (ОАА).
. Во многих случаях крайне трудно определить специфические маркеры на поверхности опухолевой клетки. Однако меланома характеризуется высоким уровнем экспрессии специфических антигенов, что делает использование ишунотоксинов для терапии меланомы весьма перспективным.
Для получения иммунотоксинов наиболее часто используют растительные рибосом-инактивирующие белки. К таким белкам относятся два основных лектина из семян Ricinus communis - рицин (Р60) и агглютинин рицина (АгРбО), каталитические субъединицы которых являются специфическими N-гликозидазами, модифицирующими 28S РНК 60S субъединицы эукариотических рибосом. Одной молекулы А-субъединицы, попавшей в цитоплазму, достаточно для гибели клетки.
Целью работы было получение иммунотоксинов на основе каталитических субъединиц рицина (РТА), агглютинина рицина (АгРТА) и моноклональных антител против меланомы кожи человека и
сравнение цитотоксической активности данных иммунотоксинов vitro.
Для достижения этой цели были поставлены следующие задачі
-
Получение моноклональных антител против меланомы кожи человека.
-
Выделение рицина и агглютинина рицина и их каталитичеі ких субъединиц.
-
Получение иммунотоксинов против меланомы кожи человеь на основе А-субъединиц рицина, агглютинина рицина и монокле нальных антител.
-
Изучение цитотоксического действия рицина, агглютшда, рицина и их каталитических субъединиц на клетки меланош чело века in vitro.
-
Сравнение эффективности действия иммунотоксинов, содер жащих разные каталитические субъединицы.
Научная новизна, теоретическая и практическая эначимост работы.
В результате проведенных исследований получена гибридом; B3F7, продуцирующая НА, которые избирательно реагируют < клеточными линиями меланомы кожи человека и с меланомньїмі клетками, выделенными из операционного материала. Определен? локализация антигена и его молекулярная масса.
Изучено действие агглютинина рицина и его А-субъединицы не клетки меланомы человека. Впервые показано, что цитотоксическое действие рицина на клетки меланош человека примерно в 100 ра; выше агглютинина, в то время как неспецифическое цитотоксическое действие изолированных каталитических
субъединиц двух токсинов практически не отличается.
Впервые получены конъюгаты моноклональных антител B3F7 с А-цепью растительного цитотоксина рицина (PTA/B3F7) и с А-цепью агглютинина рицина (ArPTA/B3F7). Изучено действие данных иммунотоксинов на клетки меланомы человека линий MS и MeWo. Показано, что PTA/B3F7 обладает высокой эффективностью и избирательностью действия.
Моноклональные антитела B3F7 изотипа IgGl, специфически реагирующие с поверхностным 35-kDa антигеном клеток меланомы кожи человека линий Вго, MeWo, MS, FM55m, FM55p, FM2, FM3, является перспективным реагентом для создания тест систем для диагностики меланомы.
Полученный в данной работе конъюгат каталитической субъединицы рицина и моноклональных антител B3F7 является высокоизбирательным цитотоксическим агентом. После изучения его фармакологических свойств он может быть использован в качестве препарата для направленной элиминации клеток меланомы кожи человека.
Предложенная модельная система, состоящая из клеток-мишеней и конъюгатов моноклональных антител и разных каталитических субъединиц, является перспективной для изучения механизма действия нативных токсинов и их производных.
Апробация.
Материалы диссертации апробированы на 9-м международном конгрессе по иммунологии (23-29 июля 1995, США), на Европейском симпозиуме по биотехнологии (29 октября - 6 ноября 1995, Анкара), на заседании кафедры клеточной физиологии и иммунологии
Биологического факультета МГУ (октябрь 1995).
Структура и объем работы. Материалы диссертаций изложены на 95 страницах машинописного текста (включая 14 рисунков, 5 таблиц) состоят из разделов: "Введение", "Обзор литературы". "Материалы и методы", "Результаты", "Обсуждение результатов", "Выводы", "Список использованной литературы" (133 источника).
