Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 10
1.1 Эпидемиология гестоза. Вопросы классификации 10
1.2 Патогенетические аспекты гестоза 14
1.2.1 Современные представления о патогенезе гестоза 14
1.2.2 Гомеостаз и роль эндогенных дигоксиноподобных ингибиторов Na/K-АТФазы при гестозе 17
1.3 Прогностические факторы течения гестоза. Определение тяжести гестоза 27
Глава 2. Материалы и методы исследования 36
2.1 Клинические методы 36
2.2 Инструментальные методы исследования 37
2.3 Лабораторные методы 38
2.3.1 Определение эндогенных дигоксиноподобных факторов в плазме крови беременных 38
2.3.2 Исследование эритрограммы 40
2.3.3 Определение активности Na/K-АТФазы в мембранах цельных эритроцитов крови 42
2.3.4 Расчет активности Na/K-АТФазы в цельных эритроцитах крови 43
2.3.5 Построение калибровочной кривой для определения неорганического фосфата 43
2.3.6 Использование детергентов при определении активности Na/K-АТФазы в цельных эритроцитах крови 44
2.3.7 Определение концентрации неорганического фосфата 45
2.4 Метод фармакологической коррекции действия ЭДФ 46
2.5 Статистическая обработка материала 47
Глава 3. Клиническая характеристика обследованных женщин 49
Глава 4. Оценка концентрации маринобуфагенина в плазме крови и активности na/k-атфазы в эритроцитах при физиологической беременности и при гестозе 68
4.1 Концентрация маринобуфагенина в плазме крови при физиологической беременности и при гестозе 68
4.2 Активность Na/K-АТФазы в эритроцитах при физиологической беременности и при гестозе 70
Глава 5. Оценка активности na/k-атфазы при использовании поликлональных антител к эндогенным дигоксиноподобным факторам .79
Обсуждение 87
Выводы 99
Практические рекомендации 100
Список литературы
- Современные представления о патогенезе гестоза
- Определение эндогенных дигоксиноподобных факторов в плазме крови беременных
- Концентрация маринобуфагенина в плазме крови при физиологической беременности и при гестозе
- Активность Na/K-АТФазы в эритроцитах при физиологической беременности и при гестозе
Введение к работе
Актуальность темы. До настоящего времени гестоз является одной из наиболее сложных и широко обсуждаемых проблем акушерской науки и практики, что объясняется сохраняющейся высокой частотой и отсутствием тенденции к снижению связанных с ним осложнений (Кустаров В.Н., Линде В.А., 2000; Репина М.А., 2000; Серов В.Н. и др., 2002; Сидорова И.С., 2003; Шифман Е.М., 2003; Айламазян Э.К., 2007).
Основные принципы патогенетической терапии и диагностики гестоза в настоящее время сформулированы в исследованиях известных российских ученых Г.Т. Сухих, Г.М. Савельевой, В.Н. Серова, И.С. Сидоровой, Э.К. Айла-мазяна, В.Н. Кулакова, Л.Е. Мурашко и др., которые подчеркивают сложность ранней диагностики гестоза. Состояние данной проблемы требует проведения дальнейших исследований, направленных на разработку прогностических и диагностических критериев, значимых для данного осложнения беременности. В связи с тем, что гестоз представляет собой синдром генерализованной эндотелиальной дисфункции, значительный научный интерес вызывает иссле-дование трансмембранных ферментных систем, которые являются уникаль-ными регуляторными механизмами и рецепторами, опосредующими действие эндотелий-зависимых эндогенных вазоактивных факторов (Гомазков В.А., 2003; Сидорова И.С., 2004; Chambers J.C. et al., 2001). Одной из таких уни-кальных регуляторных систем в организме человека и млекопитающих является оуабаин-чувствительная магний-зависимая Na/K-АТФаза (Болдырев А.А., 1981; 1985; Decollogne S. et al., 1993).
На протяжении последних 20 лет накоплен значительный клинический и экспериментальный материал, свидетельствующий о том, что различные ткани и органы человека и других млекопитающих содержат эндогенные дигоксино-подобные лиганды натриевого насоса, то есть вещества, которые ингибируют Na/K-АТФазу и обладают дигоксиноподобной иммунореактивностью (Багров А.Я., 1997, 2009; De Wardener et al., 1985; Shoner W., 1993).
Имеются отдельные работы, в которых показана важная роль в развитии гестоза эндогенных дигоксиноподобных факторов (ЭДФ), являющихся натрийуретическими ингибиторами Na/K-АТФазы (Лопатин Д.А., 2001; Graves S.W., 1987). В процессе изучения ЭДФ появились данные, что, подобно препаратам дигиталиса, ЭДФ представлены веществами карденолидной и буфадиенолидной структуры (Bagrov A.Y., 2009). Было установлено, что маринобуфагенин, присутствующий в плазме крови, участвует в развитии системной вазоконстрикции и патогенезе гестоза (Лопатин Д.А., 2001; Bagrov A.Y., Fedorova O.V., 1998). В связи с этим, представляется перспективным изучение возможности использования антител к маринобуфагенину для восстановления активности Na/K-АТФазы при лечении гестоза.
В литературе отсутствуют данные о динамике активности Na/K-АТФазы в эритроцитах в течение физиологической беременности и при развитии гесто-за. Разработанный метод определения активности Na/К-АТФазы в эритроцитах позволяет использовать эту методику при различных патологических состоя-ниях как в эксперименте, так и в клинических условиях (Казеннов А.М., Маслова М.Н., 1984). Учитывая важную роль эндогенных дигоксиноподобных факторов в патогенезе гестоза, представляется актуальным исследовать значи-мость подобного теста в комплексной диагностике и оценке степени тяжести гестоза.
Цель исследования. Изучение активности Na/K-АТФазы в эритроцитах при физиологическом течении беременности и при гестозе.
Задачи исследования:
1. Изучить динамику активности Na/K-АТФазы в эритроцитах у женщин при физиологическом течении беременности на разных сроках гестации.
2. Оценить активность Na/K-АТФазы в эритроцитах у беременных жен-щин при различной степени тяжести гестоза.
3. Оценить уровень эндогенного ингибитора Na/K-АТФазы маринобуфа-генина в плазме крови при физиологическом течении беременности и при гестозе.
4. Изучить активность Na/K-АТФазы в эритроцитах при использовании поликлональных антител к эндогенным дигоксиноподобным факторам.
Научная новизна. Впервые изучена активность Na/K-АТФазы в эритро-цитах крови у беременных женщин при физиологически протекающей беремен-ности. Установлено, что развитие гестоза сопровождается снижением актив-ности Na/K-АТФазы в эритроцитах у беременных. Осуществлена оценка уров-ня эндогенного ингибитора Na/K-АТФазы маринобуфагенина в плазме крови при физиологическом течении беременности и при гестозе. Впервые показано, что повышение уровня маринобуфагенина в плазме крови у беременных с гестозом сопровождается угнетением активности Na/K-АТФазы в эритроцитах. Дана сравнительная оценка способности поликлональных антител к марино-буфагенину, оуабаину и дигоксину восстанавливать активность Na/K-АТФазы в эритроцитах беременных с гестозом.
Практическая значимость работы. Практическая значимость работы определяется полученными данными, позволяющими обосновать целесообраз-ность дополнительной оценки степени тяжести гестоза путем определения активности Na/K-АТФазы в эритроцитах крови беременной. Показана возмож-ность использования антител к маринобуфагенину для восстановления актив-ности Na/K-АТФазы при лечении гестоза.
Результаты исследования внедрены в практическую работу СПб ГУЗ «Родильный дом № 9», СПб ГУЗ «Женская консультация № 7», СПб ГУЗ «Женская консультация № 22». Материалы диссертационного исследования используются при чтении лекций и проведении практических занятий для студентов, интернов, клинических ординаторов кафедры акушерства и гинеко-логии ГОУ ВПО СПбГПМА Минздравоцразвития России.
Апробация работы. Материалы диссертации представлены и обсуждены на VIII Всероссийском форуме «Мать и Дитя» (г. Москва, 2006 г.), Межре-гиональной научно-практической конференции «Артериальная гипертензия у беременных – от теории к практике» (г. Пенза, 2011 г.), X Всероссийской уни-верситетской научно-практической конференции молодых ученых по медицине (г. Тула, 2011 г.), а также на заседании кафедры акушерства и гинекологии ГОУ ВПО СПбГПМА Минздравсоцразвития России (24 марта 2011 г.).
Работа выполнена в соответствии с плановой темой НИР № 01200711183 ГОУ ВПО СПбГПМА Минздравсоцразвития России.
По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе 2 – в журналах, рецензируемых ВАК РФ.
Личный вклад автора. Автором самостоятельно проведен аналитичес-кий обзор отечественной и зарубежной литературы по изучаемой проблеме. Личное участие автора в получении научных результатов, изложенных в дис-сертации, осуществлялось на всех этапах работы и заключается в планировании и проведении исследований по всем разделам диссертации. Выполнено лично автором: анкетирование, сбор сведений, выкопировка данных из первичной медицинской документации, анализ отчетных данных. Все лабораторные иссле-дования по определению активности Na/K-АТФазы в эритроцитах крови были проведены автором лично в лаборатории сравнительной биохимии ферментов НИИ эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова РАН.
Составление программы математико-статистической обработки материа-ла и сама обработка данных проводились с личным участием автора. Проме-жуточные результаты исследования систематически проверялись научным ру-ководителем. Анализ, интерпретация, изложение полученных данных, форму-лирование выводов и практических рекомендаций в основном выполнены ав-тором лично. Доля участия автора в сборе информации – 100%, в математико-статистической обработке – 100%, а в обобщении и анализе материала – 95%.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту
1. При физиологическом течении беременности наблюдается снижение активности Na/K-АТФазы в эритроцитах крови.
2. Повышение содержания маринобуфагенина в плазме крови у беремен-ных женщин с гестозом сопровождается угнетением активности Na/K-АТФазы в эритроцитах, по сравнению с данным показателем при физиологически проте-кающей беременности. Наибольшее снижение активности фермента наблюда-ется при тяжелых формах гестоза.
3. Поликлональные антитела к маринобуфагенину обладают способно-стью полностью восстанавливать активность Na/K-АТФазы в эритроцитах беременных женщин с гестозом.
Заключение этической комиссии
Методы работы были одобрены этической комиссией ГОУ ВПО СПбГПМА Минздравсоцразвития России. Протокол № 14/1 от 07 декабря 2010 г.
Объем и структура диссертации. Работа изложена на 125 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, клинической характеристики обследованных женщин, 2 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Диссертация иллюстрирована 4 рисунками и 36 таблицами. В библиографический указатель включено 252 наименования, из них 130 работ принадлежат отечественным авторам, 122 – зарубежным.
Современные представления о патогенезе гестоза
Гестоз представляет собой симптомокомплекс, возникающий при патологическом течении беременности, который включает в себя повышение артериального давления, протеинурию и возникновение отеков. Впервые был описан W. Zangemeister в 1928 году. До настоящего времени эта патология остается одной из наиболее сложных и широко обсуждаемых проблем акушерской науки и практики, что объясняется сохраняющейся высокой частотой и отсутствием тенденции к снижению вызванных ею осложнений (материнская и перинатальная смертность) [21, 89, 115, 157, 201, 203, 229, 231].
В общей популяции беременных частота гестоза составляет 8-10%, а частота развития такой тяжелой его формы, как эклампсия - 0,05% [176, 201, 223, 229, 236]. По данным ВОЗ, ежегодно более 160000 женщин умирают от осложнений беременности, связанных с гестозом; у каждого 5-го ребенка, родившегося у матери с гестозом, в той или иной степени нарушено физическое и психо-эмоциональное развитие, значительно выше уровень заболеваемости в младенческом и раннем детском возрасте [109, 226]. В течение последних десяти лет в Российской Федерации наблюдается увеличение частоты гестоза до 17-24% от общего количества беременных и рожениц. В структуре причин материнской смертности гестоз стабильно занимает 3-е место и остаётся основной причиной заболеваемости и смертности новорождённых [27, 32, 65, 83, 97, 115, 117, 118].
В Северо-Западном регионе России эта патология выявляется у 12-14% всех беременных женщин после 20 недель гестации и является одной из ведущих причин синдрома внутриутробной задержки развития плода, преждевременных родов, заболеваний и гибели новорождённых [5, 53, 85].
Следует отметить, что в экономически развитых странах показатели материнской и перинатальной смертности, связанной с гестозом, на порядок ниже. По данным ВОЗ, такое осложнение беременности, как гестоз, встречается в пропорции 1: 2000 родов в европейских и развитых странах и в пропорции от 1:100 до 1:1700 родов в развивающихся странах. По мнению академика РАМН В.Н. Серова, вероятность развития данной патологии во многом зависит от социально-экономических условий, экологии и других факторов, которые входят в понятие «качество жизни», в рамках которого формируется здоровье женщин репродуктивного возраста [89, 96, 176, 183, 218]. Это наглядно свидетельствует об управляемости данной проблемой и о возможности эффективного влияния на её исход при системном подходе.
Концепция гестоза была сформулирована более века назад, однако причины развития гестоза до сих пор остаются неизвестными. В ряде исследований показано, что возникновение гестоза наиболее характерно для первобеременных [43, 145, 158, 159]. Установлено, что риск гестоза в последующих беременностях коррелирует с интергенстическим интервалом. ч В тех случаях, когда период между родами превышал 10 и более лет, риск возникновения гестоза у ранее рожавшей женщины был равен риску у первородящей [197, 232, 239]. Значимыми факторами риска являются многоплодная беременность, пузырный занос [216]. Так, гестоз может осложнять до 45-50% многоплодных беременностей. При этом, как правило, гестоз возникает рано и имеет более тяжелое течение, чем при одноплодной беременности. По мнению ряда авторов, это объясняется увеличением объема плацентарной ткани [101, НО, 161, 175].
Семейный анамнез в возникновении гестоза играет существенную роль. Частота развития преэклампсии и эклампсии у сестер женщин, в прошлом перенесших гестоз, составляет 58%, у их дочерей - 48,9%. Существуют данные о влиянии эмбрионального генотипа на риск формирования гестоза при беременности [132, 175, 220].
Все большее количество публикаций в последние годы посвящено роли различных генетических дефектов в причинах развития гестоза. К ним относятся изменения 7ц23-гена ангиотензин-превращающего фермента, N0S3 и N0S2-reH0B NO-синтетазы, АТР2Р1-гена рецептора ангиотензипа II, системы HLA [73, 132, 149, 174, 177, 179, 205, 238, 248, 249, 252].
Доказанным фактором риска развития и прогрессирования гестоза являются наследственные и приобретенные тромбофилические состояния [59, 60, 185, 213]. Эта тенденция прослеживается у женщин с антифосфолипидным синдромом, дефицитом фактора V Лейдена и гипергомоцистеинемией [140, 204, 213]. Дефицит фактора V Лейдена также связан с повышенным риском развития гестоза. Мутация Лейдена делает фактор V менее чувствительным к деактивации активным белком С, период циркуляции которого увеличивается в 10 раз, что приводит к повышенному образованию тромбина. Это наиболее часто встречаемая коагулопатия, которой в гетерозиготном состоянии страдают от 3 до 10% европейцев [102, 198].
Ряд исследователей отмечают, что беременные, страдающие гестозом, имеют повышенный уровень гомоцистеина в плазме крови [8, 9, 114]. Вне беременности гипергомоцистеинемия является фактором риска развития тромбоэмболических осложнений [60, 68, 98].
В группе высокого риска развития гестоза находятся женщины -гетерозиготные носители генов, отвечающих за расстройства бета-оксидации. По данным современной литературы, из всех расстройств бета-оксидации наиболее изучен дефицит длинной цепочки 3-гидроксиацил-коэнзим А дегидрогеназы [134, 187, 240]. В данном случае существует высокий риск развития гестоза и острого жирового гепатоза беременных, а также риск развития синдрома HELLP (hemolyses, elevated liver enzymes, low platelets) [90, 128].
Определение эндогенных дигоксиноподобных факторов в плазме крови беременных
В основе фармакологической коррекции действия ЭДФ, в частности, маринобуфагенина и оуабаина лежит метод иммунологической нейтрализации с использованием поликлональных антител, способных связывать не только циркулирующие, но и связанные с рецепторами Na/K-АТФазы эндогенные дигоксиноподобные факторы. In vitro мы определяли по ранее описанной методике активность Na/K-АТФазы в эритроцитах у пациенток первой группы (с преэклампсией средней степени тяжести), в присутствии поликлональных антител к маринобуфагенину, оуабаину и дигоксину («Диджибайнд»). Для этого, помимо инкубации исследуемых эритроцитов в стандартных условиях (состав инкубационной среды в мМ: NaCl - 100; КС1 - 10; Трис-HCl (рН 7,6 при температуре 37 С) - 50; АТФ2Ш - 2; ЭДТА - 0,5), проводили преинкубацию эритроцитов (в течение 60 минут при температуре 22-24 С) с вышеуказанными антителами, не изменяя состава остальных компонентов.
Антитела к маринобуфагенину и оуабаину использовали в концентрации, реверсирующей 75% угнетенной Na/K АТФазы из мозгового вещества почек крыс линии Sprage-Dawley (альфа-1 изоформа) маринобуфагенином, и Na/K-АТФазы из коры больших полушарий новорожденных крыс линии Sprage-Dawley (альфа-3 изоформа) оуабаином [202]. Поликлональные антитела к маринобуфагенину (сыворотка anti-MBG-Р) и оуабаину (сыворотка anti-ouabain-SPB-05) были получены при иммунизации кроликов маринобуфагенином, конъюгированным с бычьим сывороточным альбумином производства фирмы Sigma Chemicals (США). Препарат «Диджибайнд» был получен на коммерческой основе (фирма Glaxo Smith Kline, Великобритания), он утвержден и зарегистрирован Комиссией по контролю качества лекарственных препаратов и продуктов питания (США). В эксперименте препарат использовался in vitro, в концентрациях 1 мкл/мл и 10 мкл/мл - в диапазоне тех концентраций, которые применялись при лечении беременных с преэклампсией по данным литературы [168].
В отдельной серии экспериментов мы оценивали фармакологический эффект «Диджибайнд». Для этого вызывали угнетение активности Na/K-АТФазы (в пробах крови беременных второй группы) добавлением маринобуфагенина и оуабаина (в концентрации 1 и 10 нмоль/л) и определяли активность Na/K-АТФазы после преинкубации исследуемых эритроцитов с препаратом «Диджибайнд» (60 минут при температуре 22-24 С) по методикам, указанным выше. Содержание маринобуфагенина и оуабаина в плазме крови у беременных обследуемых групп оценивали по ранее описанному методу определения эндогенных дигоксиноподобных факторов в плазме крови.
Лабораторные исследования по определению активности Na/K-АТФазы проводились автором лично в лаборатории сравнительной биохимии ферментов Института эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова РАН (зав. лаб. - докт. биол. наук профессор М.Н. Маслова). Автор выражает глубокую благодарность ведущему научному сотруднику Института эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова РАН, доктору медицинских наук Алексею Яковлевичу Багрову, под руководством которого проводились вес лабораторные исследования.
Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием методов параметрической и непараметрической статистики. Методы описательной (дескриптивной) статистики включали в себя оценку среднего арифметического (М), ошибки среднего значения (т) - для признаков, имеющих непрерывное распределение; а также частоты встречаемости признаков с дискретными значениями.
Для оценки межгрупповых различий значений признаков, имеющих непрерывное распределение, применяли t-критерий Стьюдента, ранговый U-критерий Вилкоксона-Манна-Уитни, а при сравнении частотных величин -% -критерий Пирсона и точный метод Фишера (ТМФ). Использовали также методы множественных межгрупповых различий: Н-критерий Краскела-Уоллиса, факторный дисперсионный анализ (ANOVA). При сравнении парных (сопряженных) выборок использовали парный td-критерий (Стьюдента). Анализ зависимости между признаками проводили с помощью r-критерия Пирсона, г3-критерия Спирмена и % -критерия Пирсона.
Статистическая обработка материала выполнялась на ЭВМ с использованием стандартного пакета программ прикладного статистического анализа (Statistica for Windows v. 6.0).
Нами были обследованы 83 беременные женщины. Пациентки, беременность которых осложнилась развитием гестоза, составили первую группу - 43 беременные женщины. Во вторую группу вошли 40 женщин, которые имели физиологическое течение беременности.
Возраст беременных первой группы находился в пределах от 18 до 38 лет и составил в среднем 26,3±1,0 год. Возраст беременных второй группы был в пределах от 18 до 37 лет (в среднем 26,9±1,0 год; t=0,42; р 0,10) .
Концентрация маринобуфагенина в плазме крови при физиологической беременности и при гестозе
В основе фармакологической коррекции действия эндогенных дигоксиноподобных факторов лежит метод иммунонейтрализации с использованием поликлональных антител к маринобуфагенину, оуабаину и дигоксину. По данным литературы, описано более 15 случаев успешного использования препарата «Диджибайнд» в акушерских клиниках США при лечении преэклампсии у беременных [168]. «Диджибайнд» представляет собой смесь фаб-фрагментов очищенных поликлональных антител к дигоксину и, вследствие своей перекрестной иммунореактивности с эндогенными дигоксиноподобными факторами, способен связывать не только циркулирующие, но и связанные с рецепторами Na/K-АТФазы кардиотонические стероиды.
Проведено две серии экспериментов. В первой серии экспериментов была определена активность Na/K-АТФазы в эритроцитах беременных первой группы после добавления в эритроцитарную взвесь различных концентраций маринобуфагенина и оуабаина. Далее мы определили динамику активности Na/K-АТФазы после воздействия поликлональных антител к маринобуфагенину, оуабаину и дигоксину («Диджибайнд») и оценили эффект поликлональных антител и «Диджибайнд».
В результате проведенного исследования обнаружено, что активность Na/K-АТФазы после добавления маринобуфагенина и оуабаина в концентрациях 1 и 10 нмоль/л достоверно различается. Как следует из таблицы 5.1, добавление к интактным эритроцитам беременных первой группы маринобуфагенина в концентрациях 1 и 10 нмоль/л вызывает снижение активности Na/K-АТФазы до 2,31±0,13 и 1,44±0,12 мкмоль Фн/мл эр./час соответственно, добавление оуабаина в концентрации 1 и 10 нмоль/л вызывает снижение активности Na/K-АТФазы до 2,73±0,11 и 2,01±0,16 мкмоль Фн/мл эр./час. Таблица 5.1 Активность Na/K-АТФазы в эритроцитах у беременных второй группы после добавления маринобуфагенина (МБГ) и оуабаина (ОУ) (п=40), (по сравнению с активностью в интактных эритроцитах). В скобках приведены значения снижения активности, выраженные в процентах относительно уровня активности в контроле (III триместр, вторая группа беременных)
Таким образом, маринобуфагенин в концентрациях 1 и 10 нмоль/л вызывает торможение активности фермента на 25,7% и 53,7%, оуабаин в тех же концентрациях проявляет меньшую активность и снижает активность фермента только на 12,2% и 35,4% (см. табл. 5.1).
После инкубации эритроцитов с поликлоиальными антителами и «Диджибайнд» было обнаружено изменение активности Na/K-АТФазы (табл. 5.2).
Как следует из таблицы 5.2, после добавления специфических антител к оуабаину и препарата «Диджибайнд» в концентрации 10 мкл/мл наблюдается статистически значимое увеличение активности Na/K-АТФазы, по сравнению с активностью, ингибированной оуабаином в концентрации 10 нмоль/л, активность Na/K-АТФазы после добавления «Диджибайнд»1 в концентрации 10 мкл/мл и специфических антител к оуабаину достоверно не отличается от активности фермента в контроле (t2=0,84; р 0,10 и t3=0,25;
Примечание: - t=2,07; p=0,042; 2 - t=3,10; p 0,003;3 - t=4,19; p 0,001 (по сравнению с активностью, ингибированной добавлением 10 нмоль/л ОУ). Добавление 1 мкл dgb не приводило к повышению активности Na/K-АТФазы до уровня, наблюдаемого в интактных эритроцитах (ti=3,22; р 0,002)
Условные обозначения: Контроль - активность Na/K-АТФазы в интактных эритроцитах в фетьем триместре у беременных с физиологическим течением беременности, ОУ (10 нмоль/л) - активность Na/K-АТФазы после ингибирования 10 нмоль/л оуабаином,
Активность Na/K-АТФазы в эритроцитах при физиологической беременности и при гестозе
Результаты наших исследований показали, что при активности Na/K-АТФазы ниже 2,24 мкмоль Фн/мл эр./час можно заподозрить развитие у беременной плацентарной недостаточности и предположить наличие хронической внутриутробной гипоксии плода. Поскольку наиболее низкая активность фермента выявлена у беременных с преэклампсией, сопровождающимся гемодинамическими нарушениями и задержкой внутриутробного развития плода, это позволяет отнести динамику активности Na/K-АТФазы к группе факторов, характеризующих состояние фетоплацентарной системы.
Таким образом, полученные нами данные свидетельствуют о том, что при развитии гестоза у беременных наблюдается нарастание содержания маринобуфагенина в плазме крови, которое сопровождается достоверным снижением активности Na/K-АТФазы в эритроцитах, динамика активности фермента существенно зависит от основных показателей, характеризующих степень тяжести гестоза. Вследствие выявленных изменений, активность Na/K-АТФазы можно отнести не только к маркерам, но и к показателям, свидетельствующим о тяжести состояния у беременной.
С нашей точки зрения, при беременности, осложнившейся развитием гестоза, действие ЭДФ, маринобуфагенина является примером мальадаптации. Так как чрезмерная продукция маринобуфагенина при гестозе вызывает угнетение Na/K-АТФазы в мембране гладкомышечных клеток сосудов, это ведет к увеличению внутриклеточной концентрации ионов натрия, активации натрий-кальциевого обмена, поступлению внутрь гладкомышечных клеток ионов кальция. Перечисленные нарушения ионного гомеостаза вызывают вазоконстрикцию, которая становится существенным элементом порочного круга, лежащего в основе гипертензивного синдрома при гестозе. В связи с ранее доказанными фактами об участии ЭДФ, марииобуфагенина в патогенезе гестоза, значительный научный интерес представляет изучение возможности использования специфических антител к маринобуфагенину для восстановления активности Na/K-АТФазы при лечении гестоза. Основываясь на опубликованных сведениях других авторов об успешном применении препарата «Диджибайнд» у беременных при лечении гестоза, мы провели серию экспериментов, в которых впервые, in vitro, оценили эффект поликлоиальных антител, способных взаимодействовать с различными ЭДФ и «Диджибайнд».
В серии экспериментов на интактных эритроцитах беременных первой группы, после добавления различных концентраций оуабаина и марииобуфагенина, мы обнаружили, что активность Na/K-ЛТФазы в обоих случаях различается. Торможение Na/K-АТФазы, индуцированное маринобуфагенином, существенно выше, по сравнению с эффектом аналогичных концентраций оуабаина (р 0,05). При оценке фармакологического эффекта препарата «Диджибайнд» мы выявили, что в концентрации 1 мкл/мл восстановления активности Na/K-АТФазы не наблюдается, в концентрации 10 мкл/мл «Диджибайнд» вызывает увеличение активности фермента, которое достоверно отличается от активности, ингибированной 10 нмоль/л маринобуфагенином и оуабаином. Препарат «Диджибайнд» в концентрации 10 мкл/мл и специфические антитела к маринобуфагенину и оуабаину вызывали восстановление активности Na/K-АТФазы до значений, которые достоверно не отличаются от активности фермента в контроле. Проведенная серия экспериментов согласуется с ранее опубликованными исследованиями, согласно которым «Диджибайнд», вследствие своей перекрестной иммунореактивности с эндогенными дигоксииоподобными факторами, способен восстанавливать активность Na/K-АТФазы, и этот эффект является дозозависимым [55]. В нашем эксперименте впервые показано, что поликлональные антитела к маринобуфагенину и оуабаину, вследствие своей высокой чувствительности и специфичности, вызывают восстановление активности Na/K-АТФазы Во второй серии экспериментов мы оценили способность поликлональных антител восстанавливать активность Na/K-АТФазы у беременных при гестозс, а также сравнили эффект поликлональных антител и препарата «Диджибайнд». Результаты наших исследований показали, что активность Na/K-АТФазы после взаимодействия со специфическими антителами была существенно выше, по сравнению с исходной активностью у беременных с гестозом. Но при сравнении величин полученных эффектов с активностью фермента у здоровых беременных мы выявили, что антитела к оуабаину не вызывают повышения активности фермента до значений, свойственных здоровым беременным (р 0,002). Активность Na/K-АТФазы после воздействия «Диджибайнд» и антител к маринобуфагенину не отличается от значений, свойственных здоровым беременным (р 0,10). Активность фермента после воздействия препарата «Диджибайнд составляет 81,4% от значений контроля (здоровые беременные), а добавление антител к маринобуфагенину вызывает повышение активности Na/K-АТФазы до значений, соответствующих активности фермента у здоровых беременных. Эти результаты в целом согласуются с ранее опубликованными исследованиями на лабораторных животных, где показано, что введение беременным крысам с экспериментальной артериальной гипертензией антител к маринобуфагенину вызывает понижение артериального давления [190].
Результаты проведенных исследований подтверждают, что снижение активности Na/K-АТФазы у беременных с гестозом индуцировано маринобуфагенином, а связывание циркулирующего маринобуфагенина специфическими антителами может быть одним из перспективных подходов к патогенетически обоснованному лечению гестоза у беременных.
Таким образом, определение активности Na/K-АТФазы в эритроцитах у беременных, наряду с другими биохимическими исследованиями, является надежным тестом в диагностике и оценке степени тяжести гестоза. Снижение активности Na/K-АТФазы в эритроцитах у беременных с гестозом свидетельствует о нарастании плазменной концентрации ингибитора этого фермента, маринобуфагенина, который вовлечен в патогенез развития гипертензивного синдрома при гестозе. Сама методика определения активности Na/K-АТФазы не требует сложного технического оборудования, специального обучения сотрудников и может быть выполнена в условиях обычной клинической лаборатории лечебного учреждения.
![Объемный кровоток плаценты в третьем триместре беременности и его значение для исхода родов [Электронный ресурс]](/i/i/4295/195864.png "Объемный кровоток плаценты в третьем триместре беременности и его значение для исхода родов [Электронный ресурс] Леонова Виктория Юрьевна")
