Введение к работе
Актуальность
Большие успехи в конце прошлого столетия были достигнуты в диагностике заболевания Глютенчувствительная целиакия (ГЦ). До 80-х годов прошлого века ГЦ считалась редким заболеванием, распространенность ее составляла от 1 : 1000 до 1 : 3000 в общей популяции (Парфенов А.И., 2007). В настоящее время частота заболеваемости в Европе составляет около 0,4 - 1% населения (Catassi С, 1996; Not Т., 1998; Baldas V., 2000; Peter Н. R. Green, M.D., 2007). Частота заболеваемости в различных странах закономерно возрастает с увеличением настороженности врачей по отношению к ГЦ, улучшением диагностики, применением скрининговых программ (Dickey W., 2005; Distefano R., 2010).
Известно, что более 5% населения имеет генетическую предрасположеігность к ГЦ. Механизм наследования ГЦ относится к аутосомно-доминантному типу с неполной пенетрантностью (Парфенов А.И., 2007; Зарецкая Ю.М., 2008). В настоящее время выявлена ассоциация заболевания с антигенами главного комплекса гистосовместимости человека HLA-DQ2 (DQAP0501, DQB1*0201) и HLA-DQ8 (DQA1*0301, DQB1*0302) (Peter Н. R. Green, 2003; Kim C.Y., 2004; Парфенов А.И., 2007; Зарецкая Ю.М., 2008). Гетеродимер DQ2 обнаруживается приблизительно у 90-95% больных ГЦ (Kim C.Y., 2004; Парфенов А.И., 2007). Он сформирован бетта-цепочкой, кодируемой аллелями DQB 1*0201 или DQB 1*0202, и альфа-цепочкой, кодируемой DQA1*05. Однако, аллель HLA-DQ2 является распространенным в популяции, он определяется приблизительно у 30% белых европейцев без всяких признаков заболевания ГЦ (Ludvig М, 2000; Парфенов А.И., 2007; Зарецкая Ю.М., 2008). Гетеродимер DQ8, связанный с ГЦ, присутствует у 5 - 10% больных. Он также сформирован альфа- и бета-цепочками, кодируемыми DQA1*03 и DQB1*0302 соответственно (Зарецкая Ю.М., 2008; Malamut G., 2009; Distefano R., 2010). Некоторые исследователи отмечают ассоциацию ГЦ с антигенами В8 и DR3 (Зарецкая Ю.М., 2008).
Накоплено значительное количество данных о том, что при возникновении ГЦ важную роль играет наличие определенных антигенов и комбинация генов HLA I и II классов - гаплотипов (Louca A.S., 2003; Karell Kati, 2003; Malamut G., 2009). Во многих исследованиях отмечается, что именно комбинация гаплотипов дает более сильную ассоциацию с ГЦ (Lopez-Vazquez А., 2004). Однако, суммарная роль HLA-гаплотипов в определении клинических результатов ГЦ остается до сих пор не изученной.
Стратегия применения новых молекулярно-генетических диагностических методов исследования до сих пор еще не ясна. До настоящего времени предпринимались лишь немногочисленные попытки изучения генетической предрасположенности и риска возникновения заболевания целиакия с учетом иммуногенетических характеристик. Не охарактеризованы: частота встречаемости генетических факторов, связь их с клиническими формами, с возрастом и полом развития заболевания ГЦ у взрослой и детской популяции. Исходя из вышеизложенного, настоящее исследование представляется актуальным.
Цель и задачи исследования
Цель исследования: изучить генетическую предрасположенность развития ГЦ с учетом иммуногенетических характеристик и клинических форм у взрослых и детей.
Задачи исследования
-
Проанализировать частоту встречаемости всех групп аллелей (специфичностей) генов HLA-системы у больных ГЦ и здоровой популяции московского населения.
-
Выявить HLA - маркеры диагностики заболевания у пациентов с ГЦ.
-
Выявить сочетания HLA - маркеров ГЦ в генотипе у детей и взрослых пациентов.
-
Установить ассоциации между HLA-специфичностями главного комплекса гистосовместимости и клиническими формами, возрастом и полом у пациентов, больных ГЦ.
-
Обосновать необходимость использования современных молекулярно-гснетических методов исследования в качестве дополнительных при диагностике заболевания ГЦ.
Научная новизна
Впервые в московском регионе проведено HLA - генотипирование детей и взрослых, больных ГЦ, современным молекулярно-генетическим методом ГЩР.
Впервые изучен профиль распределения генов HLA класса I и II у взрослого и детского населения с ГЦ московской популяции.
Впервые выявлены генетические маркеры заболевания ГЦ HLA-B*08, HLA-DRB1*03, HLA-DRB1*07 и HLA-DQB1*02 у взрослого и детского населения московской популяции, определяющие риск возникновения заболевания.
Впервые выявлены сочетания генетических маркеров заболевания ГЦ у детей и взрослых HLA-B*08; HLA-DRB1*03; HLA-DQB1*02 и HLA-DRB1*07; HLA-DQB1*02/HLADQB1*03, определяющие риск возникновения заболевания.
Выявлены отрицательные ассоциации с заболеванием ГЦ по группам аллелей HLA-DQB1 *05 и HLA-DQB 1*06.
Научно-практическая значимость
В результате исследования на основе тестирования с помощью молекулярно-генетического метода HLA-типирования полиморфных HLA-генов были выявлены маркеры диагностики ГЦ HLA-B*08, HLA-DRB1*03, HLA-DRB1*07 и HLA-' DQB1*02 у детей и взрослых московской популяции. Показаны сочетания генетических маркеров заболевания ГЦ у детей и взрослых HLA-B*08; HLA-DRB1*03; HLA-DQB1*02 и HLA-DRB1*07; HLA-DQB1*02/HLADQB1*03, каждое из которых можно рассматривать как генетический маркер. Вероятное прогнозирование риска развития ГЦ на основе анализа полиморфных HLA-генов позволит верифицировать диагноз на начальных этапах её развития.
Данные о генетических маркерах заболевания ГЦ позволяют врачам-гастроэнтерологам, терапевтам и педиатрам своевременно диапюстировать заболевание, выявлять группу риска и проводить генетическое прогнозирование в семьях больных ГЦ, что имеет большую практическую значимость. Результаты выполненной работы создают дополнительную базу для создания регистра
больных ГЦ. Практическое значение работы подтверждает качество использованного молекулярного метода HLA-типирования. Использование этого метода позволяет изучить характер распределения и частоту встречаемости генов HLA-системы среди детей и взрослых, больных ГЦ, и здорового детского населения московской популяции.
Положения, выносимые на защиту
-
Полиморфизм генов и их белковых продуктов МНС позволяет изучить характер распределения специфичностей HLA-системы у детей и взрослых, больных ГЦ.
-
Изучение иммуногснетических особенностей у детей и взрослых, больных ГЦ, позволяет обнаружить маркеры HLA-B*08, HLA-DRB1*03, HLA-DRB1*07 и HLA-DQB1*02, определяющие риск возникновения заболевания.
-
Изучение отдельных HLA - специфичностей и сочетаний генетических маркеров заболевания ГЦ HLA-B*08; HLA-DRB1*03; HLA-DQB1*02 и HLA-DRB1*07; HLA-DQB1*02/HLADQB1*03 позволяет использовать их как дополнительный диагностический и прогностический признак у детей и взрослых.
-
Выявленные отрицательные ассоциации по группам аллелей HLA-DQB1*05 и HLA-DQB1*06 свидетельствуют об устойчивости к заболеванию.
Внедрение результатов в практику
Результаты исследования внедрены в практику работы Государственного учреждения здравоохранения «Банка стволовых клеток Департамента здравоохранения г. Москвы».
По материалам диссертации опубликовано 13 печатных работ в России и за рубежом.
Материалы диссертации доложены на: XIV конгрессе педиатров России с международным участием «Актуальные проблемы педиатрии» (Москва, 2010г.), 5-й иммуногенетической международной конференции «East-West Immunogenetics Conference» (Пилсен, 2010г.), 36-м Международном симпозиуме Европейской группы ЕВМТ (Вена, 2010г.), III научно-практической конференции «Современные технологии и методы диагностики различных групп заболеваний, лабораторный анализ» (Москва, 2010г.), 24-й Европейской конференции по иммуногенетике и гистосовместимости (European Immunogenetics and Histocompatibility Conference, EFI and 17th the Italian Society for Immunogenetics and Transplantation, AIBT) (Флоренция, 2010г.).
Структура и объем диссертации
