Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА I. Генетическая организацш Pseudomoms Putim
1.1. Генетическая структура Pseudomonas putida
1.1.1. Особенности расположения генов, детерминирующих биосинтетические и катаболические функции на хромосоме Pseudomonas putida
1.2. Половые факторы Pseudomonas putida
1.3. Плазмиды биодеградации P.putida
1.3.1. Плазмида САМ
1.3.2. Плазмида ОСТ
1.3.3. Катаболизм ароматических углеводородов
1.3.4. Плазмиды TOL и XYL
1.3.5. Плазмида SAL
1.3.6. Плазмиды, детерминирующие утилизацию нафталина
1.3.7. Плазмида NIC
1.4. Трансдуцирующие фаги P.putida
1.4.1. Фаг PPI
1.4.2. Фаг pfl6
1.4.3. Фаг pf20
1.4.4. Фаги af, tf, РВД, специфичные к P.putida PpGl
1.4.5. Дефектный фаг pfdm
ГЛАВА II Некоторые особенности взаимодействия умеренных фагов с бактериальной клеткой
2 1. Интеграция фагового генома с бактериальной хромосомой 41
2.2. Мл -подобные фаги, специфичные в отношении бактерий Pseudomonas aeruginosa 45
2.3. Сулериммунитет. Лизогенная конверсия 47
Экспериментальная часть
ГЛАВА III. Материалы и методы 50
4.1. Получение ауксотрофных мутантов у штамма PpGl 64
4.2. Трансдукционный перенос хромосомных генов и плазмид с помощью фага PFL6 65
4.3. Изучение устойчивых к pfl6 трансдуктантов 68
4.4. Способность His+pfl6-r и Ilv+ pfl6-r трансдуктантов адсорбировать фаг pfl6 72
4.5. Обработка устойчивых к pfl6 His+ и Hv+ трансдуктантов митомицином С 74
ГЛАВА V. Мутанты бактерий, отобранные прямой селекцией на устойчивость к ФАІУ PFI6 77
5.1. Отбор и изучение устойчивых к pfl6 мутантов 77
5.2. Способность фагоустойчивых штаммов адсорбировать фаг pfl6 80
5.3. Вторичная адсорбция фага pfi6 на клетках штамма PpGl инфицированных фагом pfi6 81
5.4. Обработка фагоустойчивых штаммов митомицином С 82
ГЛАВА VI. Сравнительное изучение фага PFL6 и фагов, вьщеленных из штаммов ДА25 и дазо 83
6.1. Определение спектра литического действия 83
6.2. Серологический анализ фагов 83
6.3. Морфология негативных колоний 83
6.4. Определение ОЦР фагов 84
6.5. Трансдуцирующая способность фагов 85
6.6. Электронно-микроскопические наблюдения 85
Обсуждение 92
Выводы 97
Список литературы 98
- Особенности расположения генов, детерминирующих биосинтетические и катаболические функции на хромосоме Pseudomonas putida
- Катаболизм ароматических углеводородов
- Интеграция фагового генома с бактериальной хромосомой
- Трансдукционный перенос хромосомных генов и плазмид с помощью фага PFL6
Введение к работе
Актуальность темы. Большое количество видов, разнообразие ареалов их распространения и биохимическое многообразие делают род Pseudomonas привлекательным как для теоретических исследований, так и для прикладной микробиологии.
На данном этапе развития микробиологической промышленности остро стоит вопрос изыскания сравнительно дешевого и не имеющего пищевую или кормовую ценность сырья. Бактерии вида Pseudomonas putida, благодаря своей способности использовать в качестве источников углерода и энергии большое разнообразие органических соединений, являются перспективными для использования в микробиологической промышленности. Показано, что генетические детерминанты, которые контролируют пути диссимиляции органических соединений, используемых в качестве источника углерода, локализованы на плазмидах, названных плазмидами биодеградации {«heelis, 1975; Chakrabarty, 1976).
У P.putida открыты системы переноса генетическогобматериа-ла, осуществлякмые как с помощью половых факторов, так и бактериофагов, в частности фага pf 16,
Учитывая проблему фаголизиса в микробиологическом производстве, большую актуальность представляет изучение взаимодействия фагов с промышленными микроорганизмами, в том числе фага pfl6 с бактериями р,putida.
Для изучения взаимодействия фага и бактериальной клетки особый интерес представляют умеренные фаги. Однако, до настояще— ге времени умеренные фаги Р,putida не обнаружены. Литературные данные относительно природы фага pfl6 противоречивы. Так, некоторые авторы считают pf 16 вирулентным фагом (Benedik et al., 1977), другие рассматривают его как нелизогенизирующий (Holloway and Krishnapillai, 1975) или вирулентный (Chakrabarty and Gun-salus, 1969) мутант умеренного фага. Отсутствие умеренных фагов у вида P.putida либо свидетельствует о том, что такие бактериофаги крайне редки или не существуют вовсе, либо указывают, что бактерии вида P.putida не способны находиться в лизогенном состоянии. Таким образом, изучение взаимоотношений фага pfl6 с бактериями P.putida представляет не только практический, но и теоретический интерес.
Цель настоящей работы заключалась в изучении некоторых аспектов взаимодействия фага pfl6 с бактериями P.putida, Соответственно были поставлены следующие основные задачи.
1. У штаммов P.putida выделить варианты, устойчивые к фагу pfl6.
2. Проверить способность полученных фагоустойчивых вариантов продуцировать жизнеспособные фаговые частицы.
3. Провести сравнительное изучение фага pfl6 и фаговых частиц, продуцирующих фагоустойчивыми вариантами.
4. Провести электронномикросколическое исследование фага pfl6 и его ДНК.
Научная новизна и практическое значение. Получены устойчивые к фагу pfl6 трансдуктанты, которые оказались нестабильными как по селектируемому признаку, так и по фагоустойчивости. 30 % трансдуктантов приобрели по одному дополнительному признаку.
При прямой селекции по устойчивости к фагу pfl6 были отобраны варианты штаммов P.putida как стабильно наследующие признак фагоустойчивости и ауксотрофность по гистидину, так и нестабильные по данным признакам. У" штаммов, выщепляющих .чувствительные к pfl6 варианты,-выделены жизнеспособные фаги pf11 и pfl2. Показано, что ,:.эти фаги не отличаются от фага pf 16 по морфологии фаговых частиц и негативных колоний, серологии, физио логии, трансдуцирующей способности и кругу хозяев. Установлено, что устойчивость к фагу pfl6 у отобранных фагорезистентных производных штаммов P.putida обусловлена нарушением адсорбции фага. Такое же нарушение адсорбции суперинфицирующего гомологичного фага наблюдается при литическом цикле фага pfl6.
Полученные данные указывают на то, что фаг pfl6 обладает мутагенным действием на бактерии P.putida, а также способен ли-зогенизировать их.
В электронномикроскопических исследованиях определены длина и молекулярный вес ДНК фага pfl6.
Полученные данные о способности фага pfl6 при внутриклеточном развитии предотвращать адсорбцию суперинфицирующего гомологичного фага, а также возможность лизогенизации бактерий P.putida фагом pfl6, могут сыграть важную роль в выяснении генетической природы фага pf!6 и позволят расширить возможности генетического анализа бактерий P.putida.
В связи с промышленным использованием штаммов P.putida изучение природы фагоустойчивости позволит найти эффективные способы борьбы с фаголизисом в производстве.
Особенности расположения генов, детерминирующих биосинтетические и катаболические функции на хромосоме Pseudomonas putida
В настоящее время у P.putida обнаружены половые факторы, способные инициировать перенос хромосомных генов из одной клетки в другую. По крайней мере, 4 вида плазмид способны осуществлять эту функцию (Ghacrabarty, 1976). Однако, частота хромосомного переноса обычна низкая (10) (Chakrabarty and Gunsalus, 1969; Shaham et al., 1973). В этом отношении исключением является фактор К. Клетки, несущие фактор К, способны передавать хро-мосомные гены 1С реципиентам с частотой 10 - 10 (Chakrabarty and Friello, 1974).
Одним ИЗ первых был ОПИСан ПОЛОВОЙ фактор pfdm (Chakrabarty and Gunsalus, 1969). Это автономно реплицирующаяся гибридная структура, полученная в результате замещения части генома фага pfl6 участком бактериальной хромосомы, несущим гены, ответственные за усвоение манделата в качестве единственного источника углерода И энергии (Chakrabarty and Gunsalus, 1969).
Представителями второй группы плазмид, способных мобилизовать перенос хромосомных генов, являются плазмиды САМ и Т0І (Chakrabarty, 1976; Chakrabarty et al., 1978). Плазмида CAM мобилизует перенос донорной ДНК в САМ"" реципиентные клетки с часто —8 той равной 10 , которая может быть повышена в результате обработки донорной культуры УФ лучами ( Shaham et al,, 1973). В ИС следованиях с использованием бактериальных гее мутантов было показано, что для переноса хромосомных генов с помощью САМ плаз-миды необходима ее интеграция в хромосому бактерии ( Hermann et al., 1979). Низкая частота переноса хромосомных генов, по-видимому, обусловлена тем, что интеграция СМ плазмиды в хромосому является редким событием ( Shaham et al,, 1973). Повышение частоты переноса хромосомных генов после УФ-облучения, очевидно, является следствием увеличения частоты интеграции САМ в бактериальную хромосому ( Arber, I960; Benzinger and Hartman , 1962). Следует отметить, что перенос хромосомы, осуществляемый С ПОМО-. щьюСАМ плазмиды, зависит от бактериальной рекомбинационной системы и имеет определенный градиент частот переноса хромосомных маркеров. Последнее указывает на то, что перенос начинается с определенной ТОЧКИ (Hermann et al., 1979).
Наличие плазмиды САМ в реципиентах сильно понижает частоту переноса хромосомных генов (Shaham et al., 1973). Негативное взаимодействие между плазмидами - явление не необычное и может быть сравнено с иммунностью бактериальной клетки к суперинфекции гомологичным фагом (Watanahle et al,, 1964; Meynell, 1969). Такая плазмидная иммунность может быть обусловлена либо явлением поверхностного исключения, что не связано ни с пилеобразованием, ни с плазмидной несовместимостью (Achtman, 1971; Wiiietts, 1972), либо недостаточной степенью сохранения и установления донорной , плазмиды в реципиентной клетке даже в том случае, когда устранены припятствия на пути ее введения (Dubnau and Mass, 1968; No-vick, 1969).
К третьей группе плазмид, способных мобилизовать перенос хромосомных генов относится R факторы (chakrabarty, 1976).
К четвертой группе плазмид, осуществляющих хромосомный перенос, относятся половые факторы. Половой фактор К (или Р) впер вые был обнаружен в штамме PpGi, у которого ОСТ плазмида диссоциирует на 3 отдельных репликона: ОСТ, МЕР и фактор К (Chakrabary and Friello, 1974; Chakrabarty, 1974; Hermann et al., 1979). ПОМИМО переноса хромосомных генов (Chakrabarty and Friello, 1974), половой фактор К способен осуществить также перенос нетрансмис-СИбельных плазмид OCT (Chakrabarty, 1974; Chakrabarty and Friello, 1974) и XYL (Friello et al., 1976). В отличие от фактора F перенос хромосомных генов с помощью фактора К происходит без интеграции последнего С ХРОМОСОМОЙ (Chakrabarty and Friello, 1974). Перенос плазмиды ОСТ также осуществляется без физического связывания полового фактора с плазмидой ОСТ. Однако, при переносе плазмиды XYL образуется рекомбинантная плазмида XYlr-K ( Myiroie et al,, 1977). В отличие от плазмиды САМ, перенос хромосомных генов, осуществляемый с помощью фактора К, не зависит от бактериальной рекомбинационной системы (Chakrabarty and Friello, 1974; Hermann et al., 1979). Можно предположить, что фактор К имеет свою собственную систему рекомбинации, подобно некоторым другим Известным плазмидам ( Clowes and Moody, 1966; Moody and Hayes, 1972; Rubens et al., 1976).
Было показано, что перенос хромосомных генов фактором К происходит с определенной точки и переносимые гены расположены ориентированно ( Myiroie et al., 1977). Благодаря этим -свойствам половой фактор К был использован в опытах с прерыванием конъюгации для картирования хромосомы P.putida (Myiroie et al., 1977).
Данные, полученные с помощью электронно-микроскопических исследований фактора К, показали, что он является ковалентно замкнутой дуплексной молекулой ДІЖ с контурной длиной равной 31 MKM, ЧТО соответствует М.В. В 64 мегадальтон ( Chakrabarty, 1976; Palchaudhuri, 1977).
Катаболизм ароматических углеводородов
Бактерии рода Pseudomonas способны катаболизировать обширный круг ароматических углеводородов (Chakrabarty, 1976). Было показано, что деградация таких ароматических соединений как нафталин, салицилат, т- и р-толуаты, т-и р-ксилены детерминируются генами, локализованными на плазмидах (Chakrabarty, 1972; Dunn and Gunsalus, 1973; Ifcng and Dunn, 1974; Williams and ЭДлг-ray, 1974; Friello et al., 1976). При окислении всех указанных соединений образуется одно и то же промежуточное вещество -катехол (Dagley et al., 1960; Williams et al., 1975; Austen and Dunn, 1977). Известны два ферментативных пути окисления ка-техола:. -кетоадипиновый и ( -кетокислотный. При -кетоадипи-новом пути окисления происходит разрыв бензойного кольца между соседними гидроксильными группами при участии катехо-1,2-оксяге-назы. Этот путь распада называется орто-путем (Ornston, 1971) и контролируется генами, локализованными на хромосоме. Второй путь окисления катехола ( jt -кетокислотный), при котором разрыв ароматического кольца происходит с одной стороны от двух соседних гидроксильных групп с помощью катехол-2,3-оксигеназы, называется мета-путем (Gibson, 1968; Salarepat and Evans, 1971).
Гены, детерминирующие мета-путь окисления катехола, локализованы на плазмидах S&l (diakrabarty, 1972), мн ( Dunn and Gunsalus, 1973), ТОЇ («bng and Dunn, 1974; Williams and Mirray, 1974) и XYl ( Friello et al., 1976). Ферменты мета-пути окисления индуцируются, как правило, предшественниками катехола. Однако, сам катехол не является индуктором ферментативных систем мета-пути распада ароматических соединений у Pseudomonas putida (Davies and Evans, 1964).
Показано, ЧТО рост штамма P.putida (arvilla ) mt-2 (Murray et al., 1972) на бензоате и m- и р-толуатах в качестве единственных источников углерода и энергии с последующим распадом катехола по мета-ферментативному пути контролируется набором генов, локализованных на трансмиссибельной плазмиде тої ( №ong and Dunn, 1974; Williams and Щггау, 1974), позднее названной РШО ( Worsey et al., 1978). Помимо конъюгационного переноса, доказательством в пользу существования плазмиды тої является также способность к элиминации (спонтанной или под воздействием митомицина С). Плазмида тої переносится также трансдук-ционным способом с помощью фага pfi6.
Псевдомонадные бактерии способны расти также на ш- и р-кси-ленах. Деградация этих соединений происходит посредством образования промежуточных соединений, соответственно т- и р-толуатов ( Omori et al., 1967; Davis et al., 1968; Omori and Yamada, 1969; Davey and Gibson, 1974). Позднее была обнаружена новая функция плазмиды тої - детерминировать деградацию ксиленов ( Worsey and Williams, 1975).
Было проведено генетическое изучение плазмиды рщо с помощью транспозиционного мутагенеза и клонирования генов. Катаболит -ные гены локализовались в двух кластерах, разделенных сегментом ДНК размером 14000 нуклеотидных пар. Гены первого кластера ответ-ствены за реакции превращения углеводородов в карбоновую кислоту, а гены второго кластера - за превращение карбоновых кислот в кислоты трикарбонового ряда (Franklin et al., 1981).
При изучении механизмов регуляции активности генов плазмиды PWO в клетках P.putida mt-2 было обнаружено два регуляторних гена xylR и xyis, которые являются позитивными регуляторами активности ТО 1г-генов ( Franklin and Williams, 1980; Inouye et al., 1981; Franklin et al., 1983).
Рост бактерий на m- и р-ксиленах определяется не только генами, локализованными на плазмиде TOL НО также другой группой сцепления, обозначенной плазмидой XYL (Friello et al., 1976). Плазмида XYL была обнаружена у штамма АС142 Pseudomonas Рху ( Dave у and Gibson, 1974). Была показана спонтанная элиминация плазмиды XYL частота которой увеличивалась после обработки культуры митомицином С. Плазмида XYL является нетрансмиссибель-ной. Однако с помощью полового фактора К она может быть перенесена в бесплазмидный штамм PpGl, При переносе образуется реком-бинантная плазмида XYL-K, что было показано в электронно-микроскопических исследованиях ДНК, выделенной из эксконъюгантов XYL K ( Myiroie et al., 1977), а также по характеристике XYL+ трансдуктантов и трансформантов (Friello et al», 1976). Изучение плазмидной ДНК, выделенной из XYL+K эксконъюгантов, показало, что молекулярному весу она больше ДШС, выделенной как из XYb ir, так и из XYITK эксконъюгантов.
Интеграция фагового генома с бактериальной хромосомой
В основе современных представлений о связи между профагом и бактериальной хромосомой лежит модель, предложенная Кэмпбел-лом (Campbel, 1962). Основные положения этой модели заключаются в следующем: I) инфицирующая ДНК фага из линейной молекулы превращается в кольцевую путем соединения липких концов, 2) образованная кольцевая молекула включается в бактериальную хромосому в результате реципрокной рекомбинации в специфических локусах каждой из ДНК. Эти локусы называются att сайтами (att сайт на хромосоме фага обозначен Р.Р , а на бактериальной хромосоме -В.В . Исключение ДНК фага представляет собой процесс обратный интеграции.
Образование липких концов и их соединение в молекулах ДНК фага Л включает разрывы цепей ДНК и их последующее воссоединение под действием бактериальной полинуклеотидлигазы (Geilert, 1967). Структура липких концов была полностью установлена в результате анализа нуклеотидной последовательности. Было показано, что у Я -ДНК 12 нуклеотидов левого конца комплементарны такому же количеству нуклеотидов правого конца. У фага Р22, молекула ДНК которого по своей нуклеотидной последовательности представляет циклические перестановки с двухцепочечными повторами, кольцевая форма образуется путем рекомбинации между участками концевых повторений (Botstein and Matz, 1970; Susskind and Botstein, 1978). Для интеграции профита этот этап имеет существенное значение. Фаговая ДНК, имеющая только один липкий конец (фаг jldocR) (Готтесман и Вейсберг, 1975) и, следовательно неспособная к образованию кольцевой формы, не способна также к образованию стабильного лизогенного состояния.
Таким образом, в фаговом геноме для интеграции существуют две специализированные области. Первая включает концы молекул ДНК с комплементарными последовательностями, соединение которых приводит к образованию кольцевой формы ДНК. Вторая - сайт прикрепления фаговой ДНК (attP ), который взаимодействует с областью прикрепления бактериальной хромосомы (attB ).
Интеграция и исключение профага - процессы очень эффективные. Почти все клетки, сохранившие жизнеспособность после инфицирования фагом Л , способны к образованию лизогенных клонов и почти все лизогенные клетки могут быть индуцированы с высвобождением фаговых частиц. Изучение фаговых мутантов A int" лишенных способности к интеграции, показало, что интеграция и исключение детерминированы фагом (Gottesman and Yarmolinsky, 2968). Исследование ts и амбер-мутантов по гену ±п показало, что ПрОДукТОМ ЭТОГО гена ЯВЛЯеТСЯ белок (2issler and Campbell, 1969) с м.в. равным 42000 дальтон (Готтесман и Вейсберг, 1975; Nash, 1974). Было показано, что для интегративной рекомбинации фага Л кроме int белка необходимы также два бактериальных белка (Mizu-uchi and Mizuuchi, 1979).
Гарнерогом И ЭХОЛСОМ (Guarneros and Echols, 1970; Kaiser and Maeuda, 1970) были получены мутанты, дефектные по способности к исключению ( xis ). Ген xis ответственный за исключение профага, расположен рядом С геном int (Campbell, 1965; Guarneros and Echols, 1970).
Таким образом тонкая структура фагового и бактериального att сайтов наряду с функционированием int белка и, по крайней мере, двух бактериальных белков обеспечивают специфичность интеграции фагового генома.
Сигнером с соавторами (Signer et ai., 1969), а также Кайзером и By ( Kaiser and Ш, 1968) была предложена модель включения профага. Согласно этой модели сайты прикрепления на ДНК фага и бактериальной хромосоме имеют общее "ядро" ( core), то есть участок с гомологичной последовательностью нуклеотидных пар. Согласно этой модели первый этап рекомбинации сводится к узнаванию int белком негомологичных последовательностей, расположенных по соседству с "ядрами". Затем, под действием эндонукле-азы происходит две пары одноцепочечных разрывов, расположенных уступом (staggered ) по обе стороны от "ядер" на противоположных от каждого "ядра" цепях. Из всех предложенных моделей этой модели было отдано предпочтение, так как ее предсказания хорошо согласуются с экспериментальными данными. Были выделены мутанты фага Л , подавляющие сайт-специфическую рекомбинацию (Shulman and Gottesman, 1973).
Трансдукционный перенос хромосомных генов и плазмид с помощью фага PFL6
Для проведения настоящей работы необходимо было широко применять методы трансдукционного и коныогационного переносов плаз-мвд и хромосомных генов. Среди штаммов Pseudomonas putida, имеющихся в нашей коллекции, наиболее подходящим реципиентом в трансдукционных и конъюгационных скрещиваниях являлся штамм PpGl, поскольку он чувствителен к инфекции фагом pfl6 и не содержит плазмид. Недостатком штамма PpGl как реципиента является его прототрофность. Поэтому, для обеспечения условий отбора в скре-щиваниях с использованием штамма PpGl, необходимо было получить у него контрселектируемые маркеры, что было осуществлено путем обработки культуры І-метил-3-нитро-І-нитрозогуанидином (НГ).
В результате этих опытов были получены два ауксотрофных мутанта, нуждающихся в гистидине (PpGl his ) и изолейцине и валине (PpGl iiv ) и сохранившие родительский признак чувствительности к фагу pfl6 (табл. 4). Эти мутанты обозначены соответственно ДА14 и ДА.7. У мутанта ДА.7 была получена также спонтанная мутация устойчивости к стрептомицину (str-r ). Последний мутант- обозначен ДАВ,
Помимо штамма PpGi в работе широко используется прототроф-ный штамм PpG7, несущий ПАН плазмиду (содержит гены, контролирующие деградацию нафталина) и устойчивый к фагу pfl6. Плазмида NAH хорошо переносится в конъюгационных скрещиваниях. Для получения у штамма PpG7 контреелектируемых меток, которые необходимы в опытах по конъюгационному переносу ПАН плазмиды, культура была обработана НГ. Результаты этих опытов представлены в табл.4.
Как видно из табл. 4, из 5 полученных у штамма PpG7 ауксо-трофов лишь один (ДА.9) сохранил способность к росту на нафталине в качестве единственного источника углерода и энергии. Конъюга-ционный перенос ЖАН плазмиды из мутанта ДА.9 в штамм PpGi осуществляется с частотой 1 х 10 , что в 1000 раз превышает известную из литературных данных (Dunn and Gunsalus, 1973) частоту конъюгационного переноса мн плазмиды.
Штамм ДА.9, а также штаммы ДА.8 и ДА.14 были отобраны для дальнейших исследований.
Была определена частота транедукционного переноса хромосомных маркеров trp, met, thr, his и цу, а также плазмид SAL и NAH с помощью фага pfi6.
Как видно из результатов этих опытов, приведенных в табл. 5, транедукция маркеров trp, met и thr осуществляется с частотой 10 . Такая же частота переноса указанных маркеров с помощью фага pfl6 была обнаружена в работе (Chakrabarty et al, 1968).
Между тем, частота образования His и llv+ трансдуктантов в некоторых опытах была снижена на два порядка. О такой вариабельности частоты трансдукции фагом pfl6 было отмечено также в работе Бенедика с соавторами (Benedik et al., 1977).
В опытах по трансдукционному переносу маркеров his и ilv в качестве доноров были использованы штаммы АС4 и ДА.І0, а реципиентами служили полученные нами ауксотрофные штаммы ДА.14Мв и J3 8ilv. Результаты этих опытов приведены в табл. 6. В ряде скрещиваний частота образования His и 11 v+ трансдуктантов со-ставляла 10 , а в других же подобных скрещиваниях НІВ+ И iiv+ о трансдуктанты образовывались с частотой 10 . Следует отметить, что условия опытов в том и в другом случаях были полностью идентичны. Варьирование частоты образования трансдуктантов наблюдалось и тогда, когда в скрещиваниях использовались независимо полученные фаговые штоки. На частоту трансдукции не влияла также доза УФ-облучения фага pfl6, которое проводилось с целью подавления его лизирующей способности (см. "Материалы и методы"). На основании выше приведенных результатов можно сделать вывод, что исход трансдукции, по крайней мере, генов his и ilv непредсказуем.
Похожие диссертации на Изучение взаимоотношений фага pf16 с бактериями Pseudomonas Putida
