Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ
Трансфузии донорских тромбоцитов применяются у
онкогематологических пациентов с тромбоцитопенией, индуцированной проведением интенсивной химиотерапии, с целью профилактики жизнеугрожающих геморрагических осложнений у контингента с высоким риском их развития, а также для осуществления гемостатического эффекта у пациентов с уже имеющимся геморрагическим синдромом [Apelseth Т.О., 2010; Perrotta P.L., 2007; Stanworth S.J., 2004; McClelland В., 2001].
Важной задачей трансфузионной медицины является совершенствование системы обеспечения безопасности компонентов крови, в том числе донорских тромбоцитов. Проводимые на сегодняшний день мероприятия по селекции доноров, лабораторному скринингу, методикам заготовки компонентов крови не гарантируют полной защиты реципиента от различных, ассоциированных с гемотрансфузиями, осложнений.
Гемотрансфузионные осложнения разделяют на неиммунологические и иммунологические [McCullough J., 2005]. Основная группа неиммунологических осложнений представлена гемотрансмиссивными инфекциями (вирусными, бактериальными, протозойными).
К иммунологическим осложнениям относятся гемолитические реакции
(острые и отсроченные), аллергические реакции различной степени тяжести,
а также широкий спектр эффектов, обусловленных контаминацией
компонентов крови аллогенными лейкоцитами. Лейкоцитассоциированными
иммунологическими осложнениями являются: фебрильные
негемолитические трансфузионные реакции (ФНТР), HLA-аллоиммунизация и формирование рефрактерности к трансфузиям тромбоцитов, реакция трансплантат против хозяина, ассоциированная с трансфузиями (РТПХ-АТ), отторжение трансплантата и иммуномодуляция. Также с присутствием лейкоцитов в компонентах крови связана передача внутриклеточных лимфотропных вирусов (цитомегаловируса - CMV, Эпштейн-Барр вируса -
EBV, Т-лимфотропного вируса человека типа 1 — HTLV-1) [McCullough J., 2005; Popovsky М., ed. 2001; Husebekk A., 2009].
В этой связи актуален поиск оптимальной технологии обработки компонентов крови с целью минимизации риска гемотрансфузионных реакций.
На сегодняшний день в России стала доступна технология фотохимической обработки (ФХО) с применением ультрафиолета (УФ) в сочетании с. фотосенсибилизатором для тромбоцитсодержащих сред, при использовании которой происходит неизбирательная «сшивка» цепей ДНК или РНК. Реализация подобного эффекта открывает новые перспективы в достижении большей безопасности гемотрансфузий - инактивацию патогенов различной природы и устранение вероятности развития реакций, связанных с аллогенными лейкоцитами за счет блока генетического материала резидуальных лейкоцитов в компонентах крови [Popovsky М., ed. 2001]. Новая технология может быть альтернативой гамма-облучению компонентов крови, которое много лет было «золотым стандартом» для профилактики РТПХ-АТ.
Поскольку тромбоциты являются чрезвычайно чувствительными к своему микроокружению, представляют интерес исследования индукции их апоптоза и активации в результате физико-химических воздействий. Технологии физико-химической обработки компонентов крови наряду с эффективной инактивацией патогенов должны обеспечивать максимальное сохранение функциональных свойств целевых клеток крови при трансфузиях. Поэтому необходимо оценить клиническую эффективность концентратов тромбоцитов, обработанных различными методами.
Изучить возможности применения физико-химических методов обработки донорских тромбоконцентратов (ТК) для оптимизации гемотрансфузионной терапии в онкогематологии.
-
Изучить динамику экспрессии маркеров активации и апоптоза донорских тромбоцитов в результате процесса заготовки.
-
Изучить влияние ФХО и гамма-облучения в дозе 25 Гр на экспрессию маркеров активации и апоптоза тромбоцитов в ТК на разных сроках хранения.
-
Изучить эффекты воздействия ФХО и гамма-облучения в дозе 25 Гр на контаминирующие ТК лимфоциты: динамику экспрессии маркера апоптоза лимфоцитов и их субпопуляционной структуры на разных сроках хранения.
-
Провести сравнительную оценку клинической эффективности трансфузий ТК, обработанных фотохимическим методом, гамма-облученных и не подвергавшихся воздействиям.
5) Исследовать частоту возникновения постгрансфузионных реакций при
использовании донорских концентратов тромбоцитов, фотохимически
обработанных, гамма-облученных и не подвергавшихся обработке.
6) Оценить значение метода проточной цитометрии в исследовании
донорских ТК.
Впервые в России было проведено сравнительное исследование, посвященное оценке влияния двух высокотехнологичных методик обработки донорских тромбоцитов - фотохимической и радиационной на in vitro показатели активации (Р-селектин) и апоптоза (Annexin V) тромбоцитов, а также на клинико-лабораторные показатели эффективности их трансфузии пациентам с онкогематологическими заболеваниями.
Впервые выполнено экспериментальное исследование, посвященное изучению и сравнению влияния ФХО и гамма-облучения ТК на контаминирующие аллогенные лейкоциты.
Впервые в нашей стране был использован метод проточной цитометрии для оценки влияния физико-химических факторов предтрансфузионной обработки на донорские ТК.
НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ
При изучении маркеров активации и апоптоза тромбоцитов, как предикторов посттрансфузионной эффективности, было установлено, что ФХО не оказывает негативного воздействия на донорские ТК. Клинические исследования показали, что фотохимически обработанные аферезные тромбоконцентраты (ФХО АТК) сохраняют лечебный потенциал и по эффективности не уступают гамма-облученным и необработанным ТК. Таким образом, полученные результаты проведенного исследования формируют дополнительные возможности для оптимизации гемостатической терапии в онкогематологии.
Оценка маркеров активации и апоптоза тромбоцитов с помощью проточной цитометрии может быть использована как дополнительный критерий контроля качества ТК, предназначенных для трансфузии.
1) ФХО АТК равноценны гамма-облученным и необработанным аферезным
тромбоконцентратам (АТК), как на основании in vitro маркеров
жизнеспособности и функциональности тромбоцитов, так и на основании
показателей их клинической эффективности, и могут применяться для
адекватной гемостатической терапии онкогематологических пациентов.
2) ФХО и гамма-облучение ТК в дозе 25 Гр не приводят к индукции апоптоза
CD45+ клеток в течение 5 суток хранения ТК и не оказывают существенного
влияния на субпопуляционную структуру контаминирующих лимфоцитов.
Наиболее чувствительными к действию физико-химической обработки
являются NK-клетки.
3) Изменения in vitro показателей функциональности и жизнеспособности тромбоцитов происходят как в результате процессов заготовки, так и в течение хранения, и наиболее выражены на 5-е сутки.
Материалы работы доложены на симпозиумах и конференциях: Конференция «Лабораторное обеспечение стандартов медицинской помощи», 29-30 марта 2010 г., Москва.
15th Congress of the European Hematology Association, 10-13 июня, 2010 г., Барселона, Испания.
37 Annual Meeting of the European Group for Blood and Marrow Transplantation, 3-6 апреля 2011 г., Париж, Франция.
21st Regional Congress of the International Society of Blood Transfusion, 18-22 июня, 2011 г., Лиссабон, Португалия. Конгресс гематологов России, 2-4 июля 2012 г., Москва 32nd International Congress of the International Society of Blood Transfusion, 7-12 июля, 2012 г., Канкун, Мексика
По теме диссертационной работы опубликовано 3 статьи и 10 тезисов, 6 из которых в иностранных изданиях.
СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ
![Оптимизация получения лейкофильтрованных эритроцитных гемокомпонентов и их применения в трансфузионной терапии операционной кровопотери [Электронный ресурс]](/i/i/4498/200249.png "Оптимизация получения лейкофильтрованных эритроцитных гемокомпонентов и их применения в трансфузионной терапии операционной кровопотери [Электронный ресурс] Пугина Наталья Вячеславовна")
