Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1 Клинико-иммунологическая характеристика процедуры сепарации и клеток продукта афереза (обзор литературы) 12
1.1 Краткие сведения о показаниях к аутологичной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток и её эффективности при гемобластозах.. 12
1.2 Иммунологические аспекты мобилизации и сепарации гемопоэтических стволовых клеток . 13
1.2.1 Влияние Г-КСФ на иммунокомпетентные клетки и их функциональную активность 14
1.2.2 Биологические эффекты препаратов Г-КСФ в зависимости от лекарственной формы 16
1.3 Иммунокомпетентные клетки продукта афереза и их влияние на исходы АТГСК 18
1.3.1 Клиническая характеристика сепарируемых CD34+ клеток 18
1.3.2 Нейтрофилы в продукте афереза 21
1.3.3 Влияние мононуклеарных клеток продукта сепарации на исходы АТГСК 22
1.3.4 Характеристика клеток с супрессорной активностью в составе продукта афереза 25
ГЛАВА 2 Материалы и методы исследования 32
2.1 Дизайн исследования, характеристика больных 32
2.2 Методы лабораторных исследований 36
2.2.1 Определение количества лейкоцитов и лейкоцитарной формулы 37
2.2.2 Определение субпопуляций клеток методом проточной цитометрии 37
2.2.3 Определение клеточного цикла в CD34+-клетках 38
2.2.4 Оценка секреторной активности МНК продукта сепарации 40
2.3 Статистическая обработка полученных результатов 40
ГЛАВА 3 Результаты собственных исследований... 42
3.1 Влияние процедуры сепарации периферической крови на
субпопуляционный состав продукта афереза у больных гемобластозами 42
3.2 Исследование зависимости субпопуляционного состава и цитокин продуцирующей функции продукта афереза от уровня клеток с
регуляторной активностью 48
3.3 Сравнительная характеристика субпопуляционного состава и цитокин-продуцирующей функции клеток продукта сепарации больных лимфомами, множественной миеломой и острыми лейкозами 58
3.4 Влияние препаратов Г-КСФ на субпопуляционный состав и продукцию цитокинов клетками продукта сепарации больных лимфомами и множественной миеломой 65
3.5 Влияние субпопуляционного состава и продукции цитокинов клетками продукта сепарации больных гемобластозами на исходы аутологичной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток 72
Обсуждение 87 Выводы 94
Практические рекомендации 96
Список сокращений и условных обозначений 97
Список литературы
- Иммунологические аспекты мобилизации и сепарации гемопоэтических стволовых клеток
- Нейтрофилы в продукте афереза
- Определение субпопуляций клеток методом проточной цитометрии
- Сравнительная характеристика субпопуляционного состава и цитокин-продуцирующей функции клеток продукта сепарации больных лимфомами, множественной миеломой и острыми лейкозами
Иммунологические аспекты мобилизации и сепарации гемопоэтических стволовых клеток
ВДХТ с АТГСК используются в лечении следующих вариантов гемобластозов: неходжкинские лимфомы (НХЛ), ЛХ, ММ, острый миелобластный лейкоз (ОМЛ) и острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ).
В настоящее время в Европе и мире 99 % АТГСК проводятся с использованием мобилизованных и сепарированных ГСК [111; 112]. В 90 % случаев показанием для АТГСК являются лимфопролиферативные заболевания (НХЛ, ЛХ и ММ), доля ОЛ – около 6 % [58; 112].
На долю НХЛ приходится около 40 % всех АТГСК. Трансплантация при лимфомах показана при наличии неблагоприятных факторов прогноза: величина международного прогностического индекса (IPI, international prognostic index) 1, большой объем опухолевой массы, число курсов химиотерапии (ХТ), гистологический вариант НХЛ [1]. ВДХТ с АТГСК является стандартом лечения пациентов моложе 60 лет с химиочувствительным рецидивом или первично резистентным течением агрессивных НХЛ. В нескольких исследованиях показано увеличение показателей выживаемости при использовании АТГСК в качестве I линии терапии диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы (ДКБКЛ), однако в ряде других не выявлено различий с контрольной группой [16]. По данным Центра международных исследований по трансплантации крови и костного мозга (CIBMTR), 3-летняя общая выживаемость 10 490 пациентов с ДБККЛ, перенесших АТГСК в 2001–2011 гг., составила 62 % ± 1 % и 40 % ± 2 % для химиочувствительного и химиорезистентного варианта, соответственно [111].
Современная ХТ и лучевая терапия позволяют добиться излечения примерно 80 % случаев ЛХ [1; 16]. ВДХТ с АТГСК показана при III–IV стадии болезни, отсутствии ремиссии, развитии рецидива или первичной резистентности. 3-летняя общая выживаемость, в зависимости от течения болезни и чувствительности к ХТ, составляет 55–85 % [1; 111].
Несмотря на успехи современной медицины, ММ остается инкурабельным заболеванием. Около 40 % всех АТГСК проводится больным ММ, при отсутствии противопоказаний и активном течении болезни независимо от стадии. При этом не во всех исследованиях показано значимое улучшение показателей выживаемости. По данным CIBMTR, 3-летняя общая выживаемость составляет 72 % ± 1 % [108; 111].
АТГСК при ОМЛ рассматривается как этап консолидации в терапии заболевания с помощью проведения ВДХТ. При этом до настоящего времени не выявлено значимого улучшения общей выживаемости по сравнению со стандартной химиотерапией, однако в исследовании Европейской организации по исследованию и лечению рака показано увеличение безрецидивной выживаемости [70; 174]. При выполнении АТГСК в полную ремиссию 3-летняя общая выживаемость составляет 35–55 % [1; 70].
Применение АТГСК для консолидации ремиссии при ОЛЛ оправдано в случае Т-клеточных ОЛЛ [7]. 3-летняя общая выживаемость составляет 33–44 % [1].
Для аутологичной трансплантации ГСК получают из крови больного путем аппаратного лейкофереза после мобилизации ГСК в ПК с помощью химиотерапевтических препаратов и/или гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (Г-КСФ).
Использование периферических гемопоэтических стволовых клеток по сравнению с костным мозгом, помимо удобства для пациентов и медперсонала, имеет ряд таких преимуществ, как более быстрое восстановление всех ростков гемопоэза и уменьшение контаминации трансплантата малигнизированными клетками.
Мобилизацию аутологичных ГСК обычно проводят с использованием протоколов химиотерапии, вызывающих выраженную кратковременную цитопению, за счет чего происходит стимуляция гемопоэза. Механизмы действия Г-КСФ, вводимого в период цитопении после окончания ХТ, в настоящее время продолжают изучаться. Помимо опосредованного действия через активацию гранулоцитов, сообщается о влиянии препаратов Г-КСФ на функциональную активность Т-клеток, экспансию Трег и дендритных клеток (ДК) [20; 23; 69; 136].
Современные клеточные фракционаторы позволяют эффективно сепарировать и концентрировать мононуклеарные клетки (МНК), среди которых в дальнейшем оценивается доля CD34+ ГСК. Продукт сепарации ГСК, по сравнению с костным мозгом (КМ), содержит большое количество Т-лимофцитов, моноцитов и ДК [1, 20]. Katipamula с соавт. продемонстрировали влияние марки аппарата для лейкофереза на показатели выживаемости 127 больных НХЛ, при проведении многофакторного анализа было показано прогностическое значение большего количества сепарированных лимфоцитов [71].
Таким образом, все перечисленные этапы, помимо мобилизации собственно ГСК, неизбежно оказывают значительное влияние на субпопуляционный состав и функциональную активность иммунокомпетентных клеток ПК, часть из которых в дальнейшем будет изолирована, криоконсервирована и реинфузирована совместно с CD34+ клетками.
Г-КСФ человека является основным цитокином, регулирующим созревание, пролиферацию и функциональную активность нейтрофилов всех стадий. В организме секретируется моноцитами, макрофагами, стромальными клетками КМ, фибробластами и эндотелиальными клетками, выраженное усиление его продукции наблюдается при инфекциях и цитопении. Высокоафинные рецепторы к Г-КСФ экспрессируются на миелоидных предшественниках и зрелых нейтрофилах, с наибольшей частотой на клетках поздних стадий созревания. По некоторым данным, наиболее чувствительны к его действию комиттированные предшественники нейтрофилов (миелобласты, промиелоциты и миелоциты) [110].
Основной механизм мобилизации ГСК основан на активации гранулоцитов, вырабатывающих ферменты-протеазы (эластаза, матриксная металлопротеиназа-2 и -9, катепсин G и др.), повреждающие молекулы адгезии и хемокиновые рецепторы гемопоэтических предшественников (c-kit, VCAM-1, VLA-4, CXCR4, SDF-1) [106; 163]. Вследствие этого нарушается связь ГСК со стромой костного мозга и усиление их выхода в периферическое русло, повреждение хемокиновых рецепторов замедляет обратный хоминг в КМ. При этом мобилизуются в основном CD34+-клетки, находящиеся в G0/G1 фазе клеточного цикла (покоящиеся), т.к. клетки в S,G2/M-фазе клеточного цикла значительно интенсивнее экспрессируют молекулы адгезии [52; 171].
Нейтрофилы в продукте афереза
Клиническое значение реинфузируемых мононуклеарных клеток было продемонстрировано в ряде исследований, посвященных эффективности трансплантации продукта афереза, из которого были удалены лимфоциты для предотвращения контаминации опухолевыми клетками. Использование такого «обогащенного» CD34+-клетками аутотрансплантата приводило к увеличению риска развития вирусных инфекций в посттрансплантационном периоде [36; 51; 95; 103]. Holmberg с соавт. обнаружили более высокие показатели летальности, ассоциированной с цитомегаловирусной инфекцией, среди пациентов, которым были реинфузированы аутологичные CD34+-клетки, полученные с помощью магнитной селекции, по сравнению с больными, которым были трансплантированы интактные продукты сепарации [66]. В исследовании Crippa с соавт. также было показано значимо более частое развитие вирусных (локальная и диссеминированная Varicella zoster-инфекция), а также бактериальных инфекций среди больных, которым был реинфузирован обогащенный аутологичными CD34+-клетками продукт сепарации, по сравнению с пациентами, получившими аутотрансплантат без предварительных манипуляций [36].
Во многих из описанных исследований была выявлена ассоциация между развитием инфекционных осложнений в посттрансплантационном периоде и отсроченным восстановлением абсолютного количества лимфоцитов после трансфузии CD34+-обогащенного продукта афереза. Bomberger с соавт. представлены данные, что при удалении лимфоцитов из продукта сепарации путем магнитной селекции в особенности страдает восстановление количества CD4+ Т-хелперов [24]. При этом ассоциация между реинфузией опухолевых клеток в составе продукта сепарации и развитием рецидива после АТГСК в настоящее время остается спорной, по крайней мере, для больных лимфопролиферативными заболеваниями [21; 149], что ставит под сомнение необходимость селекции CD34+ ГСК.
В дальнейшем несколько исследовательских групп независимо друг от друга описали связь между абсолютным числом лимфоцитов, реинфузируемых в составе продукта афереза и сроками восстановления этих клеток после АТГСК, а также показателями выживаемости при лимфопролиферативных заболеваниях [64; 118; 121].
В большом количестве ретроспективных наблюдений за течением заболеваний после аллогенной и аутологичной ТГСК была выявлена ассоциация между быстрым выходом из посттрансплантационной лимфопении и лучшими показателями общей и безрецидивной выживаемости [57; 75; 107; 113; 122]. Porrata с соавт. в ряде публикаций описали значимое улучшение прогноза течения болезни после АТГСК у больных лимфопролиферативными заболеваниями, ОМЛ, раке молочной железы, амилоидозе, связанное с абсолютным числом лимфоцитов ПК 500 клеток/мкл не позднее 15-го дня после трансплантации [122].
Помимо абсолютного количества лимфоцитов, установлена значимость в прогнозе течения посттрансплантационного периода при гемобластозах повышенного содержания в продукте афереза некоторых субпопуляций – CD4+ Т-лимфоцитов-хелперов, цитотоксических CD8+ Т-лимфоцитов, NK-клеток [15; 74; 117; 140]. Ускоренного выхода из лимфопении после ВДХТ можно достичь путем трансфузии сепарированных аутологичных лимфоцитов [39; 124], что также доказывает значение гомеостатической пролиферации трансплантируемых зрелых Т-клеток в процессе восстановления лимфоцитарного пула. В настоящее время отдельными исследователями рассматривается возможность так называемой «иммунологической мобилизации», когда параллельно с препаратом Г-КСФ вводится ИЛ-2 с целью увеличения количества лимфоцитов для их дальнейшей сепарации и реинфузии совместно с ГСК [89; 154].
В других наблюдениях, однако, не выявлено значимых различий показателей выживаемости в группах пациентов с относительно более высоким или низким абсолютным лимфоцитозом продукта афереза [115].
Следует также помнить, что гомеостатическая пролиферация Т-клеток памяти в условиях лимфопении, восполняя дефицит лимфоцитов в раннем посттрансплантационном периоде, приводит к увеличению количества предсуществовавших до сепарации клонов клеток с ограниченным репертуаром Т-клеточных рецепторов, не способных развивать иммунный ответ против новых антигенов, в том числе опухолевых.
Антигенпрезентирующие клетки играют определяющую роль в развитии полноценного иммунного ответа. Однако содержащимся в продукте сепарации ДК и моноцитам посвящено относительно небольшое число наблюдений. Эти клетки также сепарируют и реинфузируют в составе продукта афереза. После реинфузии обогащенного CD34+ клетками продукта сепарации восстановление их количества до исходного предтрансплантационного уровня происходит значительно медленнее, чем при использовании интактного трансплантата [38; 41]. Это может означать сохранение некоторого количества жизнеспособных ДК в продукте афереза, продолжающих функционировать после ТГСК, либо их генерацию из реинфузиремых моноцитов. Dean с соавт. также отметили улучшение показателей выживаемости в группе из 53 пациентов с диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомой у больных с более высоким уровнем ДК в раннем посттрансплантационном периоде [41].
Определение субпопуляций клеток методом проточной цитометрии
Вариации в содержании различных популяций клеток с регуляторной активностью ассоциировались с различиями в субпопуляционной структуре клеток сепарата и их цитокин-секреторной активности. Более высокое относительное количество CD4+FOXP3+ клеток, отражающих содержание нескольких субпопуляций регуляторных Т-клеток с различными поверхностными маркерами, было ассоциировано со сниженным содержанием NK-клеток и моноцитов. Клетки продуктов сепарации с более высоким содержанием CD4+CD25+CD127- Трег отличались снижением ЛПС-стимулированной продукции ИЛ-5, цитокина, поддерживающего пролиферацию и дифференцировку В-клеток, а также продукцию антител. Более высокое содержание промиелоцитов и миелоцитов ассоциировалось с более низким содержанием CD3+ Т-лимфоцитов в целом, CD4+ клеток и моноцитов.
Сравнительная характеристика субпопуляционного состава и цитокин-продуцирующей функции клеток продукта сепарации больных лимфомами, множественной миеломой и острыми лейкозами
Высокодозная химиотерапия с АТГСК является методом лечения онкологических, гематологических и аутоиммунных заболеваний. Несмотря на идентичность мобилизации и сепарации ГСК, не изучены возможные различия в субпопуляционном составе и функциональной активности клеток продуктов сепарации у больных лимфомами, множественной миеломой и лейкозами, связанные с патогенезом данных болезней и различными режимами химиотерапии. При этом значение фенотипически одинаковых (при рутинном анализе) субпопуляций клеток при разных заболеваниях может оказывать противоположное действие. Например, по данным ряда авторов высокие дозы трансплантированных CD34+ ГСК ассоциированы с продолжительными ремиссиями при лимфомах и ММ [21; 22; 125], однако, по данным EBMT, могут быть связаны с повышенной частотой рецидивов у пациентов с ОМЛ [56].
Острые лейкозы и ММ по сравнению с лимфомами отличаются более агрессивным течением с меньшим ответом на проводимую терапию и остаются нерешенной проблемой современной медицины. Одной из задач настоящей работы стала сравнительная оценка субпопуляционного состава и цитокинового профиля клеток продукта афереза больных в зависимости от заболевания.
В исследование было включено 55 больных, из них 27 человек с НХЛ и ЛХ, 11 – с ОЛ, 17 – с ММ. Сравниваемые группы больных лимфомами и ОЛ значимо не различались по возрасту, полу, режимам мобилизации и количеству сепарированных ГСК. Группа больных ММ была значимо старше пациентов с лимфомами и ОЛ (таблица 3.3.1).
Примечания:1. – значимость различий по U-критерию Манна-Уитни (PU) и точному методуФишера (РТМФ).2. РЛ - ММ – различия между группами лимфом и ММ, РОЛ - ММ – между ОЛ и ММ.3. Показатели в группах лимфом и ОЛ значимо не отличались.
Для изучения особенностей клеточного состава продуктов сепарации при исследуемых заболеваниях проведена оценка значимости различий по методу Крускала-Уоллиса и медианным тестом. По методу Крускала-Уоллиса для трёх исследуемых групп выявлены значимые различия по относительному содержанию CD19+ B-лимфоцитов (р = 0,0088), юных нейтрофилов (р = 0,030) и гранулоцитов в целом (р = 0,0095). По медианному тесту также обнаружены различия по количеству наивных CD4+ (р = 0,035) и CD8+ (р = 0,025) клеток, CD4+CD25hi (р = 0,015) и CD4+FOXP3+ (р = 0,016) Трег. Затем все субпопуляции клеток также были исследованы попарно между группами (лимфомы-ОЛ, лимфомы-ММ, ОЛ-ММ), с оценкой значимости различий по критерию Манна-Уитни. Продукты афереза, полученные от больных ОЛ, характеризовались более высоким относительным количеством наивных СD4+ лимфоцитов относительно группы больных лимфомами (в виде тенденции, pU = 0,067), значимо не отличаясь от больных ММ (р = 0,14). Также в сепаратах пациентов с ОЛ было незначимо выше содержание моноцитов по сравнению с больными ММ (pU = 0,055).
Нейтрофилов на ранних стадиях созревания (миелоциты, юные), а также гранулоцитов в целом было больше в продуктах афереза больных ММ (таблица 3.3.2) по сравнению с сепаратами пациентов с ОЛ. Также в группе больных ММ отмечено наиболее высокое относительное содержание CD19+ B-клеток, значимо отличаясь от показателей пациентов с лимфомами и ОЛ (таблица 3.3.2).
Анализ содержания Трег показал, что относительное количество CD4+CD25+CD127- Т-клеток в продуктах афереза больных не различалось. Количество CD4+CD25hi Tрег было выше в группе ОЛ (таблица 3.3.2), а CD4+FOXP3+ клеток – в сепаратах больных лимфомами по сравнению с пациентами с ММ (в виде тенденции, pU = 0,089).
Сравнительная характеристика субпопуляционного состава и цитокин-продуцирующей функции клеток продукта сепарации больных лимфомами, множественной миеломой и острыми лейкозами
Аутологичная ТГСК после ВДХТ, используемая в лечении гемобластозов, во многом более удобна, чем аллогенная ТГСК. Это обусловлено отсутствием необохдимости подбирать совместимого донора ГСК, а также относительной безопасностью: летальность, ассоциированная с процедурой трансплантации, по разным данным, может составлять до 20–50 % при аллогенной ТГСК по сравнению с 3 % при аутологичной [12; 65]. Однако высокая вероятность развития рецидива после АТГСК вынужденно способствует продолжению поиска и изучения факторов, способных повысить эффективность данного метода лечения. Поэтому привлекают особое внимание исследования последнего десятилетия, в которых показана способность негемопоэтических клеток продукта сепарации оказывать влияние на общую и безрецидивную выживаемость после АТГСК у пациентов с гематологическими и онкологическими заболеваниями.
Учитывая интенсивное фармакологическое и инструментальное воздействие на иммунокомпетентые клетки в процессе мобилизации и сепарации, на первом этапе работы была дана фенотипическая характеристика субпопуляционного состава аутотрансплантата по сравнению с ПК.
Выявлено более высокое относительное содержание CD3+ Т-лимфоцитов, CD14+HLA-DR+ моноцитов и меньшее количество CD19+ В-лимфоцитов в аутологичном продукте сепарации по сравнению с ПК, что объясняется некоторой избирательностью клеточного фракционатора в отношении мононуклеарных клеток, к которым морфологически относятся и ГСК.
При сравнительном исследовании субпопуляций Т-клеток в продукте сепарации обнаружено более высокое относительное содержание CD4+ лимфоцитов за счет CD4+CD45RO+ клеток памяти, количество CD4+CD45RA+ не отличалось от содержания в ПК. Количество CD8+ клеток в продукте афереза и ПК было одинаковым, при этом содержание CD8+CD45RA+ наивных клеток в продукте афереза было значимо ниже, а CD8+CD45RО+ клеток памяти – выше. Соотношение наивных клеток к клеткам памяти в обеих субпопуляциях – CD4+ и CD8+ – в продукте сепарации было значимо ниже, чем в ПК. Это можно объяснить тем, что наивные Т-клетки более чувствительны к повреждающим воздействиям, безусловно возникающим при мобилизации и сепарации, и быстрее уходят в апоптоз [166].
Нужно отметить, что преимущественное накопление клеток памяти, помимо восстановления количества лимфоцитов в 1-й год после ТГСК путем гомеостатической пролиферации в дальнейшем может привести к обеднению репертуара Т-клеточных рецепторов и неполноценному иммунному ответу. В связи с этим в дальнейшем может быть интересна более детальная оценка взаимосвязи количества клеток памяти и показателей выживаемости.
Значительное количество незрелых форм нейтрофилов в продукте афереза связано с использованием Г-КСФ, к действию которого наиболее чувствительны миелобласты, промиелоциты и миелоциты [110].
В настоящей работе не выявлено селективного накопления Трег в продукте афереза, ранее отмеченного Condomines с соавт. [34], однако показано, что их содержание в ПК больных, и соответственно, в трансплантате было значимо выше, чем в группе здоровых доноров. Нужно заметить, что в имеющейся литературе не представлено сравнения относительного количества Трег в продукте афереза и ПК, а описывается лишь возможность увеличения их количества на фоне ХТ и мобилизации с использованием Г-КСФ [34; 100; 136; 161]. При этом в наблюдениях при аллогенной ТГСК сравнение проводилось с интактной ПК здоровых доноров, у которых содержание Трег, действительно, ниже, чем у гематологических больных. Кроме того, мобилизация аллогенных ГСК проводится с использованием Г-КСФ без предшествующей ХТ. Таким образом, полученные данные не противоречат литературным источникам, но дополняют их.
Популяция Трег после ТГСК восстанавливается преимущественно за счет экспансии реинфузируемых клеток [88]. Выявленное в ходе работы отсутствие значимого увеличения Трег в продукте сепарации, вероятно, является положительным фактором, ввиду способности этих клеток сдерживать пролиферативную активность лейкоцитов и негативно влиять на иммунный ответ.
Подтверждением этому может служить описанная в работе взаимосвязь между повышенным содержанием отдельных популяций клеток с супрессорной активностью (CD4+FOXP3+ Трег, незрелых миелоидных клеток) и снижением количества CD16+ NK-клеток, CD3+, CD4+ Т-клеток и CD14+HLA-DR+ моноцитов. Ингибирующее действие исследуемых клеток известно, однако связь со сниженным содержанием эффекторных клеток в продукте сепарации описана впервые.
При сравнительной характеристике состава и функциональной активности аутологичных продуктов афереза в зависимости от диагноза заболевания было показано, что продукты сепарации больных ОЛ отличались более высоким содержанием CD4+CD25hi Трег, более низким количеством гранулоцитов, наиболее высокой продукцией провоспалительных цитокинов (ИЛ-1, ИЛ-4, ИЛ-6, Г-КСФ, ФНО-, IFN-, MIP-1b) и меньшим относительным содержанием покоящихся CD34+ клеток по сравнению с трансплантатами больных ММ. Продукты сепарации больных ММ содержали более высокое количество CD19+ В-лимфоцитов и незрелых миелоидных клеток, отличались более низкой продукцией провоспалительных цитокинов и более высоким относительным содержанием покоящихся CD34+ клеток. Продукты сепарации больных лимфомами по содержанию клеточных субпопуляций занимали, в целом, промежуточное положение. Сопоставимых литературных данных обнаружить не удалось, в немногочисленных публикациях, посвященных составу продукта афереза, разделения групп по диагнозам не проводилось [15; 117], либо исследования проводились при какой-либо одной нозологической форме [64; 119; 120].
Выявленные различия в кинетике клеточного цикла CD34+ клеток у пациентов с ОЛ и ММ могут быть связаны с содержанием разных субпопуляций ГСК. Более высокое относительное количество покоящихся CD34+ клеток может отражать содержание длительно репопулирующих КМ ГСК, что является благоприятным фактором, обеспечивающим длительное самообновение и поддержку кроветворения.
С другой стороны, более высокое содержание пролиферирующих CD34+ клеток в продуктах сепарации больных при ОЛ может отражать контаминацию опухолевыми клетками, которые также способны экспрессировать на своей поверхности этот маркер незрелых клеток [80; 162].
В работе описано более высокое количество CD19+ В-клеток в продуктах афереза больных ММ. В задачи исследования не входило, а методический уровень работы не позволял достоверно подтвердить или исключить принадлежность этих клеток к малигнизированным клонам, либо нормальным В-клеткам. Для плазматических клеток, составляющих опухолевый субстрат при этой нозологии, конститутивная экспрессия CD19 не так характерна, как, например, для клеток моноклональных гаммапатий неясного генеза [68; 164], однако возможна [18; 134]. В комбинации с другими поверхностными маркерами (CD20, CD27, CD33, CD56, CD117) определение CD19 по данным недавних испытаний позволяет идентифицировать клетки множественной миеломы [31; 130].
